Xinjiang Cistanche Deserticola Polissacarídeo Eliminando Radicais Livres de Oxigênio Ativo

Wang Guowei Zhao Fang

(Faculdade de Química e Engenharia Química, Shihezi University, 832000, Beisi Road, Shihezi City, Xinjiang)

abstrato

A atividade antioxidante do polissacarídeo Cistanche deserticola in vitro foi estudada. Tomando o ácido ascórbico como controle, tomando a reação do tipo Fenton para produzir radicais hidroxila, a reação de auto-oxidação da dopamina para produzir radicais de ânion superóxido, a reação de hipoclorito de sódio com peróxido de hidrogênio para produzir oxigênio singlete, radicais de hidrazina amargos de difenil como modelo experimental , os efeitos dos polissacarídeos Cistanche deserticola nos radicais ânion superóxido, radicais hidroxila DPPH · radical livre (radical hidrazina amargo difenil), o efeito de eliminação do oxigênio singleto. Os resultados mostraram que os polissacarídeos de Cistanche deserticola tiveram efeitos de eliminação óbvios nos radicais livres acima, e o efeito de eliminação foi positivamente correlacionado com a concentração de polissacarídeos.

Palavras-chave :Cistanche deserticola; Polissacarideo; Radicais livres

1. Introdução

O corpo produz continuamente vários radicais livres de oxigênio (ROS) reativos no processo de metabolismo oxidativo das atividades da vida, que é o produto intermediário da reação de oxidação-redução do metabolismo aeróbico.A pesquisa descobriu que o excesso de radicais livres atacará as macromoléculas da vida e várias organelas, causando vários danos no nível molecular, celular, tecidual e orgânico, acelerando o processo de envelhecimento do corpo e induzindo doenças como trombose, diabetes, aterosclerose, tumores, etc. [1]. Devido à toxicidade dos antioxidantes sintetizados quimicamente para o corpo humano, a busca por antioxidantes naturais com alta eficiência e baixa toxicidade que possam remover os radicais livres de oxigênio tornou-se um tópico de pesquisa importante nas áreas de medicina, alimentos, engenharia química e outras áreas da anos recentes.

Cistanche deserticola(YCMa.)é uma rara medicina tradicional chinesa e é conhecida como "ginseng do deserto" [2]. Cistanche deserticola mapolissacarídeo é um dos principais componentes bioativos da Cistanche deserticola, mas não há nenhum relatório sobre se o polissacarídeo Cistanche deserticola tem o efeito de eliminar os radicais livres. Neste artigo, os efeitos de eliminação do polissacarídeo Cistanche deserticola no radical ânion superóxido, radical hidroxila, radical livre DPPH · e oxigênio singleto foram determinados por análise espectral, para avaliar sua atividade antioxidante e fornecer uma base científica para o pleno desenvolvimento e utilização de este recurso natural.

erva chinesa cistanche

2. Parte experimental

2.1 Instrumentos e reagentes

Espectrofotômetro UV-2401 UV-visível (Shimadzu, Japão); LumatLB9507 luminômetro de tubo ultrassensível (Alemanha

Berthold Technologies); Evaporador rotativo RE-52CS (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); HW-SY banho-maria termostático eletrônico (Fábrica de Instrumentos Jintan Xinhang); Medidor de pH PHS-3C (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 forno de secagem a vácuo (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: adquirido da Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, EUA), dopamina (China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products), FeSO4, EDTA, vitamina C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3, etc. são todos reagentes analíticos domésticos. A água experimental é água destilada de troca iônica.

2.2 Método experimental

2.2.1 Método de extração deCistanche deserticolapolissacarideo

Pegue 30g de Cistanche deserticola em pó e coloque em um frasco cônico de 500 mL. Mergulhe-o em éter de petróleo (60-90 grau ), éter e solução quente de etanol a 80 por cento (30 graus ) por 6 horas, respectivamente, e o resíduo é volatilizado para secar o solvente. Mergulhe o resíduo do filtro em água na proporção de 1 ∶ 10 por 24h, aqueça a 30 graus e extraia por 100min. Após a extração, centrifugar para obter o sobrenadante. Depois que o sobrenadante é concentrado sob pressão reduzida, ele é precipitado com 95 por cento de etanol de 3 vezes o volume. Deixa-se repousar durante 24 horas a 4 graus. Após a centrifugação, é coletado e precipitado. Após a secagem a vácuo, o polissacarídeo bruto de Cistanche deserticola pode ser obtido. Pesar 1,00g de polissacarídeo bruto, dissolver em água e colocar em balão volumétrico de 50 mL em espera.

Ginseng do deserto - Antioxidante

Clique aqui para ver os produtos em pó Cistanche

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

2.2.2 Teste sobre a capacidade de eliminação deCistanche deserticolapolissacarídeo para O-2 · radical livre

A capacidade de eliminação do polissacarídeo Cistanche deserticola para O{{0}} · foi testada pela produção de radicais livres superóxidos (O-2 ·) a partir da autoxidação da dopamina [3]. Adicione 3.0mL de {{1{11}}}}.1mmol/LpH=10.12 solução tampão de carbonato, 3.0mL de água e {{18 }}.5mL de solução de amostra de polissacarídeo de diferentes concentrações no tubo de ensaio de secagem com escala por sua vez. Após pré-aquecer em banho-maria a 30 graus por 5min, adicionar 1.0mL de 2,0mmol/L de dopamina pré-aquecida em banho-maria a 30 graus, misturar imediatamente e cronometrar, manter a reação a 30 graus por 5min, e imediatamente pare a reação com 2 gotas de HCl 10mol/L. Use a solução tampão como referência, meça a absorbância (amostra A) a 221 nm, substitua a amostra (branco A) por 0,5 mL de água no grupo branco e substitua a amostra por 0,5 mL de ácido ascórbico no grupo controle , meça cada amostra três vezes em paralelo e obtenha o valor médio. O-2 · taxa de liberação ( por cento )=(Um branco - Uma amostra)/Um branco × 100 por cento

2.2.3 Teste sobre a capacidade de eliminação deCistanche deserticolapolissacarídeo para · radical livre OH

Desert living cistanche—Antioxidante

O sistema EDTA-Fe (Ⅱ) - azul de metileno - H2O2 foi usado para testar a capacidade de eliminação do polissacarídeo Cistanche deserticola no radical hidroxila. O princípio é que o EDTA-Fe (Ⅱ) reage com peróxido de hidrogênio para produzir radicais livres · OH, o que reduz o pico de absorção característico da solução de azul de metileno a 660 nm.

Adicione 1.0mL de solução de 5mmol/L de LFeSO4, 1,2mL de solução de 5mmol/L de LEDTA, 2.0mL de 0.03mol/L de NaH2PO{ {12}}Solução tampão Na2HPO4 (pH=7.4) e 1,3mL de solução de peróxido de hidrogênio 20mmol/L em uma série de tubos de ensaio de 10mL com rolhas, agite bem, adicione 0,7mL de solução de azul de metileno 0,2mmol/L e, em seguida, adicione 1,0mL da solução a ser testada e vitamina C1.0 de diferentes concentrações, respectivamente, dilua a 10.00 mL com água, misture bem, mantenha a 37 graus por 30 minutos e meça o valor de absorbância de cada solução a 660 nm. O grupo em branco substituiu a solução da amostra por água. Cada amostra deve ser medida três vezes em paralelo, e o valor médio deve ser obtido. · Taxa de eliminação de radical OH da amostra ( por cento )=[(A2-A1)/(A0-A1) × Na fórmula de 100 por cento: Absorvância A0 -- valor do tubo intacto; A1 - valor de absorção do tubo danificado; A2 -- Valor fotométrico após adicionar a amostra.

2.2.4 Teste em DPPH · capacidade de eliminação deCistanche deserticolapolissacarideo

Pegue {{0}}.1mL de solução de polissacarídeo Cistanche deserticola e adicione-o em 5,0mLDPPH · solução, misture rapidamente e deixe em repouso por 10min em temperatura ambiente,

Determine sua variação de absorbância no comprimento de onda de 517 nm [4]. Cada amostra deve ser medida três vezes em paralelo, e o valor médio deve ser obtido. A taxa de depuração da amostra de DPPH · ( ​​percent )=1 - [(AB)/A0] × Na fórmula de 100 percent : A{{6} } valor de absorbância de DPPH · (1,9mLDPPH · mais 0,1mL50 por cento de etanol) sem amostra; A - valor de absorbância da amostra após reação com DPPH ·; B -- valor de absorbância da amostra em branco (amostra 0,1 mL mais 1,9 mL de etanol a 50 por cento).

2.2.5Cistanche deserticolateste de oxigênio singleto de eliminação de polissacarídeos 1O2

O oxigênio de linha única (1O2) é produzido pela reação química de NaClO e H2O2 a 37 graus [5]. A solução utilizada para a determinação de 1O2 é 100 μ L2,8mmol/L NaClO solução, 400 μ L5mmol/LNaOH solução, 300 μ L10mmol/LH2O2 solução, 50 μ L1mmol/Luminol solução. Durante a reação, a solução de reação é adicionada à solução de amostra e o instrumento de quimioluminescência registra automaticamente o processo de reação ao mesmo tempo. Tome NaClO-H2O2-NaOH-Luminol como controle em branco. Inicie a reação e adicione a solução de reação no tubo de amostra do frasco de armazenamento do instrumento de quimioluminescência de acordo com a quantidade definida pelo procedimento. Em seguida, a intensidade de quimioluminescência da mistura de reação é registrada no papel de registro a cada 5s, cada amostra é medida três vezes em paralelo e o valor médio é obtido.

A taxa de liberação é calculada de acordo com a seguinte fórmula: taxa de liberação ( por cento )=(intensidade luminosa de controle - intensidade luminosa de amostra)/intensidade luminosa de controle × 100 por cento

3 Resultados e discussão

3.1 Efeito de eliminação deCistanche deserticolapolissacarídeo em O-2 ·

Benefícios da cistanche tubulosa—Antiooxidante

A propriedade química do O-2 · é ativa, o que pode fazer com que os ácidos graxos no biofilme produzam peróxido e, em seguida, destruam as células [6]. Neste artigo, o método da dopamina foi usado para determinar a capacidade de eliminação de O-2 ·. A capacidade de eliminação de Cistanche deserticola para O-2 · é mostrada na Figura 1. Os resultados mostraram que o polissacarídeo Cistanche deserticola pode inibir o O-2 · produzido pela auto-oxidação da dopamina e aumentou com o aumento de concentração dentro da faixa de concentração medida (0-8mg/mL), mas a capacidade de eliminação foi menor do que a do ácido ascórbico.

3.2 Efeito de eliminação deCistanche deserticolapolissacarídeo · OH

·OH é um dos radicais livres de oxigênio mais ativos nas espécies de oxigênio ativo. Pode reagir com quase qualquer macromolécula biológica em células vivas e pode levar a processos bioquímicos como peroxidação lipídica, polimerização e despolimerização de proteínas, quebra de ácido nucléico, etc. no tecido corporal, causando doenças teciduais e celulares, levando à ocorrência de várias doenças e acelerando o envelhecimento do corpo [7]. A capacidade de eliminação do polissacarídeo Cistanche deserticola para · OH é mostrada na Figura 2. Os resultados mostraram que o polissacarídeo Cistanche deserticola teve um bom efeito de eliminação em · OH e aumentou com o aumento da concentração.

3.3 A capacidade de eliminação do polissacarídeo Cistanche deserticola para DPPH ·

DPPH · (difenil amargo radical hidrazina) é um radical livre estável, que é roxo em solvente orgânico e tem forte absorção perto de 517nm. Após a adição de antioxidantes, alguns radicais livres são removidos, o que enfraquece a absorção, o que pode ser utilizado para avaliar a atividade antioxidante dessa substância [8]. Consulte a Figura 3 para DPPH · capacidade de eliminação do polissacarídeo Cistanche deserticola. Os resultados experimentais mostraram que a capacidade de remoção do polissacarídeo Cistanche deserticola em DPPH · foi positivamente correlacionada com sua concentração, e a capacidade de remoção foi maior que a do ácido ascórbico.

3.4 Capacidade de eliminação do polissacarídeo Cistanche deserticola para 1O2

O oxigênio de linha única é oxigênio molecular excitado com propriedades químicas ativas. Como os elétrons desemparelhados têm a tendência de se emparelhar, os radicais livres apresentam propriedades químicas mais ativas [9]. A capacidade de eliminação do polissacarídeo Cistanche deserticola para 1O2 é mostrada na Figura 4. Os resultados experimentais mostraram que a capacidade de eliminação do polissacarídeo Cistanche deserticola foi menor do que a do ácido ascórbico na faixa de 0-4.0mg /mL, e a capacidade de eliminação do polissacarídeo Cistanche deserticola foi maior que a do ácido ascórbico quando a concentração foi maior que 4.0mg/mL.

4. Conclusão

A atividade antioxidante dos polissacarídeos Cistanche deserticola in vitro foi estudada em detalhes através de diferentes sistemas reativos de radicais livres de oxigênio.A partir dos resultados experimentais, pode-se ver que dentro da faixa de concentração experimental, o extrato polissacarídeo de Cistanche deserticola tem efeitos de eliminação em O-2 ·, · OH, DPPH · e 1O2, e os efeitos de eliminação são diferentes para diferentes sistemas.Os resultados mostraram queO polissacarídeo Cistanche deserticola é um antioxidante natural exógeno eficaz, que merece mais pesquisas, desenvolvimento e utilização abrangente.

Cistanche 200mg—Antiooxidante

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

referência

[1] Ling Guanting. Alimentos antioxidantes e saúde [M]. Pequim: Chemical Industry Press, 2004.1-58.

[2] Gao Ming, Tian Ziyu, Cai Hongmei e outros. Extração alcalina e análise química de polissacarídeo de Cistanche deserticola [J]. Ciência e Tecnologia Agrícola e Alimentar, 2008,2 (3): 32-34.

[3] Shi Shuangqun, Canção Xinfang. A auto-oxidação da dopamina [J]. Journal of Hebei Normal University, 1997,21 (4): 387-389.

[4] Zhang Zeqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Estudo da atividade antioxidante do polissacarídeo Fangfeng [J]. Medicina Chinesa, 2008,31 (2): 268-271.

[5] Li Haiping, Zhang Shuhai, Zhang Kunsheng. Estudo da atividade antioxidante do lentinan [J]. Pesquisa e Desenvolvimento de Alimentos, 2008,29 (4): 56-60.

[6] Mo Jian. Introdução à Biologia Médica de Radicais Livres [M]. Beijing: People's Health Publishing House, 1989.21-25.

[7]FrederickVL.FreeRadicals[J].ClinicalChemistry,1993,65(12):374—377.

[8]MatsudaM,NagahamaY,SatoTetal.DMY é um Gene de Domínio DM específico Necessário para o Desenvolvimento Masculino no Peixe Medaka[J].Nature, 2002, 30:559—563.

[9]KanofskyJR.SingletOxygenProductionbyLactoperoxidase[J].JournalofBiologicalChemistry,1983,258(10):5991—5993.