Cistanche dietético aliviou danos agudos no íleo de patos Ⅱ

3.1. Morfologia Intestinal

Neste estudo, o exame patológico superior (H&E) e a instrução da microestrutura avaliada por uma ultraestrutura do íleo foram demonstrados na Figura 1. Comparado ao T0 grupo, o íleo no T0mais o grupo AFB1 mostra redução da espessura epitelial, danos na estrutura das vilosidades einflamatórioagregação celular e destruição da microestrutura, como um grande número de microvilosidades severamente quebradas e mi-mitocôndrias dilatadas e retraídas. O dano no íleo de patos contendo destruição de vilosidades e microvilosidades após a administração de AFB1 induziu o aparecimento de inflamatórioestresse de oxidação. Como esperado,cistanche dietéticotinha a capacidade deproteger o íleo contra danos agudos induzidos por AFB1administração, incluindo algumas vilosidades do íleo quebradas,célula inflamatóriareunidos e um pouco de dano do íleo avaliado estruturalmente por H&E, e diminuindo o número de microvilosidades quebradas, reduzindo mitocondrial inchaço e eliminação da idade do encolhimento das mitocôndrias avaliada pela estrutura anular mostrada na diferença de estrutura entre o T500mais o grupo AFB1 e o T0mais grupo AFB1.

grupo; T500 mais AFB1: grupo cistanche mais AFB1

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3.2. Níveis de AFB1-Adutos de DNA no plasma

AFB1-Adutos de DNA no plasma de patos foram medidos por ELISA competitivo indireto e mostrados na Figura2. Comparado com o T0 grupo, a administração de AFB1 aumentou significativamente o conteúdo de AFB1-Adutos de DNA (p < 0.001) in the plasma. As expected, cistanche dietéticoAFB reduzido1-DNA adiciona conteúdo (p = 0.001) no plasma de patos no grupo T500 mais AFB1 em relação ao grupo T0 mais o grupo AFB1.

mais AFB1: cistanche maisGrupo AFB1. Os valores são expressos como média± SEM (n= 15), ** significa < 0.01.

3.3. Capacidade Antioxidante no Plasma e Íleo

A capacidade antioxidante do plasma foi mostrada na Figura3. A exposição de AFB1 levou ao estresse oxidativo, manifestando que o T-SOD (p = 0.073), GSH-PX (p = 0.034) e GSH-ST (p = 0.003) as atividades no plasma diminuíram no T0 mais grupo AFB1 do que aqueles no grupo T0 grupo. No entanto, o T-SOD (p = 0.039), GSH-PX (p = 0.009) e GSH-ST (p = 0.003) as atividades foram significativamente melhoradas no T500 mais grupo AFB1 do que aqueles no grupo T0 mais o grupo AFB1. A concentração de MDA (p = 0.028) no plasma foi aumentado no T0 mais grupo AFB1 do que no grupo T0 grupo, e a concentração de MDA (p < 0.001) in the plasma was decreased in the T500 mais grupo AFB1 do que aqueles no grupo T0 mais AFB1. 

3.4. Expressão de genes relacionados à via de sinalização Nrf2-ARE no íleoA administração de AFB1 induziu o estresse oxidativo celular e resultou ainda em alterações de expressão de genes, incluindo Keap1, Nrf2, CAT, SOD1, GPX, GST, NQO-1, HO-1, GCLC e GCLM no íleo de patos. Como mostrado na figura4, a administração de AFB1 aumentou significativamente o mRNA (p = 0.001) nível do gene Keap1 e inibiu os níveis de mRNA de genes, incluindo Nrf2 (p = 0.171), CAT (p = 0.166), SOD1 (p = 0.121), GPX (p = 0.065), GST (p = 0.008), NQO-1 (p = 0.061), HO-1 (p = 0.068), GCLC (p = 0.800) e GCLM (p = 00,090) e teor de proteína Nrf2 (p = 0.001) no íleo de patos no T0 mais grupo AFB1 em relação aos do grupo T0 grupo. Como esperado, a adição de cistanche em patos alimentados com dieta por 70 dias diminuiu significativamente o mRNA (p = 0.012) expressão do gene Keap1 no íleo, aumentou significativamente o nível de mRNA de genes incluindo Nrf2 (p = 0.042), SOD1 (p = 0.038), HO-1 (p = 0.041), NQO-1 (p = 0.047) e GCLC (p = 00,043) e melhorou o nível de mRNA de genes, incluindo CAT (p = 0.229), GPX (p = 0.568), GST (p = 0.454) e GCLM (p = 0.860) e proteína Nrf2 (p = 0.005) em íleo de patos no T500 mais grupo AFB1 em relação aos do grupo T0 mais o grupo AFB1.

* significap < 0.05, ** meansp < 0.01

3.5. Expressão de Genes Relacionados a NF-κVia de sinalização B no íleo

A expressão de genes inflamatórios foi mostrada na Figura5. Comparado com o T0 grupo, a administração de AFB1 aumentou o nível de mRNA de alguns genes, como TLR4 (p = 0.037), NF-κB (p <0.001), TNF- (p = 0.025), IL-6 (p = 0.072), TXNIP (p = 0.007), NLRP3 (p <0.001) e IL-18 (p = 0.478) no íleo de patos no T0 mais o grupo AFB1. Como esperado,cistanche dietéticosuprimiu significativamente a superexpressão de genes, incluindo TLR4 (p <0.001), NF-κB (p = 0.001), TNF- (p = 0.012), IL-6 (p = 0.007), TXNIP (p = 0.001), NLRP3 (p = 0.001) e IL-18 (p <0.001) no íleo de patos no T500 mais grupo AFB1 em relação aos do grupo T0 mais o grupo AFB1. Além disso, o conteúdo da PP 65 (p = 0.004) no íleo aumentado no T0 mais o grupo AFB1 em relação ao grupo T0 grupo. Como esperado,cistanche dietéticoPP 65 significativamente suprimido (p = 00,015) teor de proteína.

intensidade da proteína alvo para a referência interna (GAPDH). Os valores foram expressos como média± SEM (n = 15) e* significap < 0.05, ** means p < 0.01

4. Discussão

A morfologia intestinal é um dos marcadores comportamentais para avaliar a inflamação e o estresse oxidativo do intestino induzido pela administração de AFB1. A literatura sobre os efeitos da administração de AFB1 na morfologia do íleo de patos é escassa. Yan et ai. (2020) relataram que a administração de AFB1 levou a danos patológicos cardíacos em ratos Sprague-Dawley, infiltração de células inflamatórias e maior degeneração de cardiomiócitos [29]. A enterite catarral com infiltrações de células inflamatórias no intestino de frangos de corte induzidas por AFB1 destruiu a estrutura do intestino [12]. Luzi e cols. (2002) relataram contrações agudas do íleo induzidas pela administração de AFB1 [30]. Os resultados deste estudo demonstraram que a cistanche dietética é um potente agente protetor do íleo contra a inibição da inflamação, o que pode ser que a cistanche tenha a capacidade de inibir o anti-inflamatório em vários distúrbios inflamatórios em camundongos [31–33]. O dano ao DNA causado pelo estresse oxidativo destruirá a estabilidade do DNA, o que pode promover a formação de vários adutos de DNA.34]. AFB1-Aduto de DNA é um biomarcador para avaliar o grau de lesão do corpo que foi induzido por AFB1. A síntese e enriquecimento de AFB1-Adutos de DNA destruíram a estrutura dos tecidos, resultando em desenvolvimento cancerígeno [35]. O AFB1 seria metabolizado pelas isoenzimas do citocromo P450 em AFB1-8,9-epóxido (AFBO) e produziria adutos relacionados [36] e aumentar o dano tecidual, estresse oxidativo e dano ao DNA por ROS [37]. AFB1-Os adutos de DNA podem se ligar às nucleoproteínas e aos ácidos nucleicos, induzindo danos ao DNA e às células e diminuindo o nível de enzimas antioxidantes e a síntese de proteínas [38]. Zhang et ai. (2016) relataram que a suplementação com cistanche inibiu o dano hepático induzido por AFB1, aumentando a atividade antioxidante de enzimas antioxidantes (GPx, SOD, CAT e GST) e inibindo a produção de AFB1-DNA [39]. Neste estudo, a administração de AFB1 aumentou o conteúdo de adutos AFB1-DNA no plasma. A cistanche dietética diminuiu significativamente esse fenômeno, os resultados demonstraram que a cistanche dietética tinha o potencial de proteger o íleo neste modelo de administração aguda de AFB1, o que pode ser explicado pelo efeito antioxidante da cistanche que melhorou a capacidade de antioxidação do corpo [40,41]. O estresse oxidativo ocorreu quando o desequilíbrio de oxidação e antioxidante nos corpos é induzido pela diminuição das atividades das enzimas antioxidantes e pelo aumento nos níveis de peroxidação lipídica. O sistema enzimático antioxidante, incluindo CAT, GSH-Px e SOD, é a primeira linha de defesa celular contra radicais livres e espécies reativas de oxigênio (ROS) e é indispensável em toda a estratégia de defesa dos antioxidantes no organismo.42]. 

A GST é uma enzima crucial para regular negativamente as espécies reativas de oxigênio (ROS) e o estresse oxidativo, a fim de alcançar a desintoxicação dos corpos.43]. Como mostrado na figura3, o estresse oxidativo no plasma e no íleo de patos ocorreu durante o dano agudo do íleo induzido pela administração de AFB1. Como esperado, o cistanche dietético melhorou o estresse oxidativo dos corpos aumentando as atividades de T-SOD, GSH-PX e GSH-ST no plasma e íleo após a administração de AFB1. Os resultados deste estudo demonstraram que o cistanche é um potente agente antioxidante para patos alimentados com a administração de AFB1, o que pode ser explicado pela capacidade antioxidante através da supressão da oxidação lipídica e aumento da atividade enzimática antioxidante pelo cistanche suplementado [8,44,45]. Esses resultados estão de acordo com um relatório anterior que demonstrou que o cistanche melhorou AFB1-induziu alterações nas atividades de glutationa, SOD, CAT e MDA [8]. Isso pode ser devido à capacidade do cistanche de eliminar os radicais livres, restaurando as atividades das enzimas antioxidantes e aliviando o estresse oxidativo.15,46]. O equilíbrio entre oxidação e anti-oxidação in vivo foi regulado por T-SOD e GSH-Px [47]. O Nrf2 foi translocado para o núcleo da célula e combinado com o elemento t de resposta antioxidante (ARE) e regulou positivamente a transcrição dos genes da enzima antioxidante, incluindo SOD, CAT, GSH-Px, HO-1, NQO-1, GCLC e GCLM [47,48]. Além disso, o GST é regulado positivamente ativando a via de sinalização Nrf2 e como um tipo de enzima desintoxicante de fase II envolvida em várias desintoxicações in vivo para aliviar o estresse oxidativo.49,50]. O estresse oxidativo e a peroxidação lipídica foram biomarcadores para ratos induzidos pela administração de AFB1.51,52]. O estresse oxidativo foi diminuído pela expressão de genes de ativação sob as vias de sinalização Nrf2-ARE, como NQO-1, HO-1 e GCLC [40]. Numerosas pesquisas relataram que a expressão de genes induzidos suplementados com cistanche, incluindo HO-1, NQO-1, -GCLC, -GCLM, CAT e GPX via ativação Nrf2 em frangos de corte e ratos [40,41] e eliminou o dano hepático induzido pela administração de AFB1 [39,53]. 

Os resultados deste estudo indicaram que a administração de AFB1 pode induzir dano por estresse oxidativo do íleo por meio da inibição da via de sinalização Nrf2. A cistanche dietética promoveu a expressão de genes a jusante do Nrf2, como genes antioxidantes (CAT, SOD1, GPX1, GST) e genes de enzimas desintoxicantes de fase II (NQO1, HO-1, GCLC, GCLM), o que demonstrou que a adição de cistanche na dieta para patos inibiram o dano agudo de oxidação do íleo induzido pela administração de AFB1 através da ativação da via de sinalização Nrf2-ARE. NF- ativado por estresse oxidativoκA via de sinalização B avaliou posteriormente a produção de citocinas inflamatórias [54]. Neste estudo, a lesão do íleo induzida pela administração de AFB1 pode ser decorrente de inflamação. A administração de AFB1 pode induzir danos ao íleo diretamente por meio do aumento da expressão de fatores inflamatórios e ativação direta da via de sinalização inflamatória. Existe uma relação positiva entre o estresse oxidativo e a inflamação nos tecidos.55]. Ko et ai. (2020) relataram que NF-ativado por estresse de oxidaçãoκVia de sinalização B, citocinas pró-inflamatórias superreguladas e inflamação causada em pulmão de ratos [56]. A NF-κA sinalização B pode ser ativada por AFB1 na linha celular 3D4/21 [57], resultando em uma série de reações inflamatórias [58]. Kumara et ai. (2020) descobriram que a administração de AFB1 induziu o inflamatório elevando os níveis de citocinas de fatores pró-inflamatórios, TNF- , IL-12 e IL-6 no soro de camundongos albinos [59]. A exposição dietética de AFB1 resultou na superexpressão gênica de TNF- , IL-1 e IL-6 no fígado de suínos, e os níveis de mRNA de fatores inflamatórios (TNF- , IL-12, IL-6) no fígado de porcos alimentados com dieta contendo 8 por cento de farinha de semente de uva e AFB1 retornaram aos níveis de controle [60]. Os níveis de TNF- , IL-6 e IL-1 no fígado de ratos com retardo de crescimento intra-uterino foram aumentados, o que no fígado de ratos IUGR alimentados com cistanche 400 mg kg−1 dieta voltou ao nível de controle de ratos com peso normal ao nascer [38]. A ativação da NF-κExpressão de genes regulados pela via de sinalização B (NLRP3 e Caspase-1), que promoveu IL-1 e IL-18 maturação e secreção e desencadeou uma resposta inflamatória [61]. Os resultados deste estudo demonstraram que a administração de AFB1 avaliou significativamente a expressão gênica de fatores de inflamação no íleo de patos, e a cistanche dietética inibiu a expressão desse gene, em linha com um estudo que a ativação da via de sinalização NLRP3 por AFB1 em ratos [40]. Resultados anteriores mostraram que o cistanche tinha a capacidade de inibir a expressão da proteína NLRP3 por meio da supressão da caspase-1 e IL-1 [29]. Assim, os resultados deste estudo revelaram que o cistanche pode ser um dos aditivos alimentares promissores para aliviar a inflamação no íleo e danos no íleo induzidos pela administração de AFB1, inibindo o NF-κvia de sinalização B

5. Conclusões

Em conclusão, a administração de AFB1 induziu lesão do íleo, estresse oxidativo e inflamação por meio da inibição da expressão de genes a jusante da via de sinalização Nrf2-ARE e ativação da expressão de genes a jusante do NF-κvia de sinalização B. No entanto, o cistanche dietético melhorou acentuadamente os danos no íleo, o estresse oxidativo e a inflamação de patos induzida pela administração de AFB1, possivelmente devido à ativação de Nrf2-ARE e inibição de NF-κVia de sinalização B (Figura6). Os resultados deste estudo forneceram evidências poderosas de que a cistanche dietética é um aditivo alimentar eficaz para proteger o íleo contra lesões agudas induzidas pela administração de AFB1 por meio da ativação de Nrf2-ARE e inibição de NF-κvia de sinalização B.