Cistanche total glicoside tem efeitos sobre o olfativo?

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O efeito de cistanche total glicosídeos em células ensheathing olfativas de ratos e sua secreção de fatores neurotróficos

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Lesão medular (SCI) é uma lesão grave da centralsistema nervoso, representando 0,2%— 0,5% do trauma total. Nas fraturas na coluna vertebral, 16% — 40% são complicados por lesão medular, muitas vezes deixando incapacidade grave, levando a dificuldades no cotidiano que afetam a qualidade de vida dos pacientes e causando um grande fardo para a família e a sociedade.Olfatórioas células ensheathing (OECs) são um tipo especial de cola nervosa. Células plasmáticas podem migrar para o cérebro comolfatórioaxônios nervosos e pode segregar muitos fatores de crescimento como NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptide-Y e S-100. Devido a essas características deolfatórioensheathing células, OECs são considerados uma das células sementes promissoras para transplante de células para reparar SCI. Atualmente, o tratamento da SCI no campo da medicina de reabilitação baseia-se principalmente na reabilitação abrangente. Para encontrar um método mais eficaz, a pesquisa a seguir foi realizada sobre o efeito decistanchetotalGlicosídeosem OECs:

Cistanche total glicosside para células ensheathing olfativas

1 Material e métodos

1.1 Materiais experimentais

Rato Wistar (fornecido pelo Centro Animal da Universidade da Mongólia Interior);cistanchetotalGlicosídeos, MMEM/F12 médio, soro de bezerro fetal (FCS), poli-D-lysine, arabinoside (Ara-C), trypsin, solução D-Hanks, coelhinho anti-p75NGFR (Santa Cruz), kit ELISA (Promega), incubadora de células (Thermo-HEPA Classe 100), microscópio de contraste de fase invertido (Olympus CKX41, Japão), bancada ultra-limpa (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) A empresa, SW-CJ-2FD), analisador de etiquetas enzimás (Wellscan MKH), citômetro de fluxo, etc.

1.2 Métodos de pesquisa

1.2.1 Cultura, purificação e identificação dos OECs: ratos Wistar foram sacrificados pela decapitação e encharcados de vinho por 5 minutos. O crânio anterior foi aberto para expor oolfatóriolâmpada. Os doisolfatóriolâmpadas foram completamente removidas sob um microscópio dissecando. Lavar na solução D-Hanks; cortar oolfatóriolâmpada com tesoura microcirúrgica, adicione 2ml de 0,25% de pancreatina e incuba a 37°C por 20 minutos; adicionar D MEM/F12 cultura meio contendo 10% de soro de bezerro a um tubo de centrífugas de 2ml A digestão foi encerrada no meio; a pipeta de ônibus aspirava o tecido incompleto digerido a 800 rpm e centrifusada por 5 min, descartada a supernasal; finalmente utilizou o meio condicionado (20% FCS + 20|i, mol/LForskolin + 20|ig/mlBPE + DMEM /F12) Faça-o em suspensão de célula única lx 107ml, inocula-o em um frasco de cultura celular revestido de polilise, coloque-o em uma incubadora de 37°C, 5% CO2 e, em seguida, adicione Ara-c Purificação foi realizada a 36h. Use anticorpo secundário de anti-p75E e fitc com rótulo fitc para identificação de células imunohistoquímicas e observação de microscópio de fluorescência.

1.2.2 Use MTT e citometria de fluxo para determinar o efeito decistanche total gllicosidesemolfatórioensheathing células: inocular o cultivado e purificadoolfatórioensheathing células em uma placa de 96 poços em 1X106, e adicionarcistanche total gllicosides(as concentrações de ação são Ijig/ml, 10mg/ml, 100mg/ml), medir o valor do OD e medir a citometria de fluxo celular após 24h de ação. Configurar o grupo controle eCistanche total gllicosidesdiferentes grupos de concentração: Grupo A (Grupo controle): O meio de cultura que contém soro é usado como controle negativo; Grupo B (cistanche total gllicosidesgrupo de baixa concentração: llig/ml); Grupo C (cistanche total glycosides medium concentration Group: L10jxg/MK); Grupo D (cistanche total gllicosidesgrupo de alta concentração: 100|xg/mlo): 15 ratos em cada grupo.

1.2.3 Determinação do conteúdo do fator neurotrófico no supernante por ELISA: inocular os cultos e purificadosolfatórioensheathing células em uma placa de 6 poços em 1x106, adicionarcistanche total gllicosides(a mesma concentração acima) após 24 horas e agir por 24 horas, e coletar o supernatante separadamente, Salvo em -80 Long. O teor de fatores de crescimento nervoso no fluido foi determinado pelo método ELISA.

1.3 Análise estatística

Os dados deste estudo são tratados como dados de medição, e os dados obtidos são expressos como ± desvio padrão médio, e o software estatístico SPSS 11.0 é utilizado para análise estatística. Os dados obtidos são analisados por análise de variância, e P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Resultados

2.1 O efeito decistancheglicosides total emolfatórioensheathing células

2.1.1 Método de determinação de tetrazol de metila oxazolyl (MT): Grupo A: 0,617±0.149; Grupo B: 0,589±0.147; Grupo C: 0,761±0.138; Grupo D: 0,732±0.234. Comparação entreCistanche total gllicosidesgrupo (B) e Grupo controle (A), P>0,05, a diferença não foi significativa;Cistanche total gllicosides10mg/ml, grupo de concentração de 100mg/ml (C, D) em comparação com o grupo controle (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 O resultado da determinação da citometria de fluxo é mostrado na Figura 1. Comparado com o grupo controle, ocistanche total gllicosidesgrupo foi maior do que o grupo Controle, e o percentual de células apoptóticas foi menor do que o grupo Controle.

2.2 Resultados do ensaio imunosorbente ligado à enzima (ELISA)

Os resultados dos testes mostraram que o conteúdo do fator neurotrófico derivado da linha de células gliais (GDNF): antes da dosagem: 302,1±16,6 pg/ml, grupo A: 340,5±13,2pg/ml; grupo B: 333,2±23,6pg/ml; Grupo C: 355,2±17,6pg/ml; Grupo D; 379,2±15,3pg/ml. Em comparação com a pré-administração, o conteúdo do GDNF foi significativamente aumentado; em comparação com o grupo controle (A), o conteúdo GDNF doCistanche total gllicosidesO grupo de concentração de 100mg/ml (D) aumentou significativamente.

3 Discussão

A dificuldade na regeneração de axônios é uma das principais razões pelas quais é difícil se recuperar após lesão medular. Os OECs têm um papel na regeneração dos axônios neurônios centrais que outros tipos de células são difíceis de substituir. Nos últimos anos, a pesquisa deolfatórioensheathing células tornou-se um ponto quente.Olfatórioas células de ensheathing são um tipo especial de células gliais que têm as características das células e astrócitos schwann. Eles se originam doolfatóriomembrana porão e são amplamente distribuídos na superfície doolfatóriomucosaolfatórionervo, eolfatóriolâmpada. Ele tem a capacidade de dividir e regenerar para a vida e pode acompanhar oolfatórioaxônios nervosos para migrar para o cérebro. Os axônios doolfatórioo nervo pode passar pela junção entre o sistema nervoso periférico e o sistema nervoso central a cada 30-60 dias, voltar a crescer noolfatóriobaia e estabelecer conexões sinápticas4.Olfatórioas células ensheathing podem segregar muitos fatores de crescimento como NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptide-Y e S-100. Estudos têm demonstrado que o fator de crescimento nervoso (NGF) pode prevenir os neurônios do núcleo vermelho espinhal da atrofia e fortalecer o trato corticospinal Sprout e promover a regeneração da via nervosa medular do núcleo vermelho; tanto o fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) quanto a neurotropfina-3 (NT-3) podem prevenir a apoptose das células medular do núcleo vermelho em ratos adultos com lesão axotomizada e resgatar neurônios moribundos e promover a regeneração axonal P. Além dissoolfatórioas células de ensheathing também expressam outros fatores em suas membranas celulares, como o fator de adesão das células nervosas (N-CAM), que estão envolvidos na adesão celular e no crescimento do axônio. Devido a essas características deolfatórioensheathing células, OECs são considerados uma das células sementes promissoras para transplante de células para reparar SCI.

Os componentes químicos deCistancheincluem principalmente feniletanoides gllicosides, iridoides, componentes voláteis, lignans, polissacarídeos e alcaloides. O estudo descobriu queCistanchee seus componentes químicos têm efeitos neuroprotetores. Deng et al. estudaram o efeito da tubulosa B na apoptose de neurônios SH-SY5Y induzidos pelo fator de necrose tumoral α (TNFα). Os resultados mostraram que após 100μg/ Os neurônios SH-SY5Y após 36 horas de tratamento TNFα por L mostraram características típicas de apoptose, enquanto o tratamento da tubulina B por 2 horas poderia reduzir significativamente a apoptose induzida pelo TNFα. Além disso, estudos também mostraram que os glicosídeos feniletanoides podem inibir a apoptose das células de grânulo cerebelar de rato inibindo a caspase-3 e a caspase-8, e contra o preto do rato C57 causado pela tetrahidropyridina de fenil de metila (MPTP). O dano dos neurônios dopaminérgicos de qualidade tem um efeito protetor. Não só isso, mas.Cistanchetambém pode aliviar vários danos, como isquemia-reperfusão do sistema nervoso. O experimento de lesão de isquemia cerebral do camundongo mostra que a faixa de infarto de 24h e 48h após isquemia no grupo isquemia-reperfusão cerebral é de 72,98% e 60,45% em média. Em contraste, ocistancheGlicócuos totais de grandes, médios e baixos grupos de dose (250,0mg·kg/d; 125,0mg·kg/d; 62,5mg·kg/d) respectivamente podem fazer o cérebro de camundongos após isquemia-reper cerebral Incisão 24h O tamanho do infarto foi reduzido para 25,94%, 25,81% e 31,13%, e o tamanho do infarto cerebral foi reduzido para 22,14%, 20,06% e 22,27% após 48 horas. Houve uma diferença significativa entre os dois, mostrando um efeito inibidor significativo na apoptose neuronal.

Neste estudo, diferentes concentrações decistanche total gllicosidesforam aplicados aos OECs. O método MTT e a medição da citometria de fluxo confirmaram que 10mg/ml100mg/mlcistanche total gllicosidespode promover a proliferação deolfatóriocélulas de ensheathing. Os resultados da citometria de fluxo mostraram quecistanche total gllicosidespode promover a proliferação deolfatórioensheathing células Promove principalmente a proliferação do ciclo G1 deolfatóriocélulas espermatozoides e reduz significativamente as células apoptóticas. PortantoCistanche total gllicosidesnão pode apenas promover a proliferação deolfatórioenvolver células, mas também aumentar a atividade celular e inibir sua apoptose. Ensaio imunossorbente ligado à enzima prova queCistanche total gllicosidespode promover significativamente a secreção de GDNF porolfatóriocélulas de ensheathing. Os resultados acima fornecem uma base experimental para a aplicação clínica deCistanche total gllicosides.

Referências

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