Estudo sobre a otimização da tecnologia de extração e da atividade antioxidante dos polissacarídeos das flores de Yunnan Coffea arabica

Resumo: Otimizar a tecnologia de extração e estudar aantioxidanteatividade depolissacarídeosda flor de café (ACP), temperatura ultrassônica, tempo ultrassônico, relação fluido-sólido, potência ultrassônica, tempo de imersão da amostra e porcentagem em volume de etanol foram investigados usando o rendimento da extração polissacarídica como indicador. Em seguida, a temperatura ultrassônica, o tempo ultrassônico e a potência ultrassônica foram usados ​​principalmente como fatores de influência, a tecnologia de extração foi otimizada pelo método de superfície de resposta.Antioxidantea atividade de ACP foi investigada pelos efeitos de eliminação de DPPH· e ABTS plus· e ensaios de FRAP. Os resultados demonstraram que as condições tecnológicas ótimas de extração ultrassônica foram: temperatura ultrassônica 69,5 graus, tempo ultrassônico 93 min, potência ultrassônica 175 W, relação fluido-sólido 10:1 mL/g, tempo de imersão da amostra 3{{ 17}} min, e porcentagem de volume de etanol 80 por cento. Sob o rendimento de polissacarídeos foi de 2,292 por cento. Os resultados indicaram que o valor de IC50 com base no efeito de eliminação de DPPH· de ACP foi de 3,844 mg·mL−1, o ABTS mais · atividade de eliminação foi de 0,921 mmol Trolox/g ACP. Os valores de FRAP de ACP pelo ensaio de FRAP foram 0,0565 mmol Fe2 mais /g ACP, o que mostrou que ACP tinha fracoantioxidanteatividade. Este estudo forneceria uma base teórica para a utilização e desenvolvimento abrangentes de subprodutos do café.

Palavras-chave:flores de café;polissacarídeo;extração;atividade antioxidante

Caféé uma planta do gênero Rubiaceae (Coffea), distribuída principalmente em países como América do Sul, América Central, África e Ásia, sendo cultivada em mais de 80 países ao redor do mundo [1]. De acordo com a "Matéria Médica Chinesa", o café tem efeitos refrescantes, diuréticos e estomacais, sendo usado principalmente para fadiga mental e perda de apetite. É frequentemente usado como um remédio refrescante, diurético e estomacal. A pesquisa moderna mostrou que o café contém uma variedade de ingredientes ativos, como alcaloides, ácidos fenólicos, flavonoides e terpenos, que possuem várias atividades farmacológicas, como proteção hepática, neuroproteção,antioxidante, e antidiabético [2-3]. o meu paíscaféo cultivo é dominado pelo café de grãos pequenos, e mais de 99% dele é distribuído em Yunnan. O café de grão pequeno de Yunnan é rico em substâncias, além de cafeína, ácido clorogênico, trigonelina e outros componentes, também contém ascarósidos

I~II[4], paniculósido VI[4], cofarilosídeo I[4], villanovano I[4], caffarolidas A~H[5], caffruenol AB[6], cafruonas AD[6] e caffruolide AB[7] e alguns novos terpenóides. Entre eles, os caffarolidos C, D e F têm sido confirmados como tendo uma certa atividade de ativação da agregação plaquetária in vitro [5]; caffruenol AB e caffruolide AB têm o efeito de inibir a produção de NO induzida por lipopolissacarídeo em macrófagos 264.7 [7]. Com o estudo aprofundado do café, o valor agregado do café continua a aumentar. Nos últimos anos, os subprodutos do café são ricos em ácidos fenólicos, flavonoides, terpenos, alcaloides e outros compostos biológicos.

Ingredientes ativos, que podem ser usados ​​como fontes naturais e sustentáveis ​​de ingredientes ativos, comoantioxidantes, proteção do fígado e proteção dos nervos, tornaram a pesquisa de subprodutos do café cada vez mais preocupada pelos pesquisadores [8-10]. Campa et ai. relatou que as folhas de café contêm compostos fenólicos [11]; Chen revisou os ricos constituintes químicos de alcalóides, flavonóides, ácidos fenólicos, terpenos, etc. nas folhas de café e suas atividades farmacológicas como antioxidante, anti-inflamatória e antibacteriana. [12], e estudaram os efeitos dos métodos de processamento da folha de café e da idade da folha em sua composição química e atividade [13].

Além disso, Fu Xiaoping et al. [14-15] descobriram que o extrato bruto da pequena casca de café de Yunnan tem um certo efeito protetor e de recuperação nas células endoteliais danificadas da veia umbilical humana e também tem potencialantioxidanteefeitos, e descobriu que a flor principal As cianidinas são cianidina-3-glicosídeo e cianidina-3-rutinosídeo.

As flores de café são muitas vezes descartadas como um importante subproduto na indústria cafeeira. No entanto, estudos existentes descobriram que as flores do café são ricas em componentes químicos. Stashenko et ai. [16] usaram GC-MS para analisar os componentes voláteis e semivoláteis em pequenas flores de café, e os resultados determinaram um total de 150 compostos, com teor de n-pentadecano. O mais alto, seguido pelo geraniol. Além disso, Nguyen et al. [17] estudaram os ingredientes ativos em flores de café e descobriram que as flores de café possuem alto teor de compostos fenólicos, portanto, as flores de café podem ser usadas como matérias-primas para a obtenção de nutrientes naturais.antioxidanteingredientes ativos. Além disso, as flores de café também contêm cafeína e trigonelina. A cafeína está associada a um risco reduzido de doenças neurodegenerativas [18-19]

A trigonelina pode prevenir diabetes e danos nos rins, e também tem o efeito de tratar doenças neurodegenerativas [20-21]. Pinheiro e cols. [22] analisaram os teores de quatro componentes ativos de trigonelina, ácido clorogênico, ácido gálico e cafeína em flores de café submetidas a diferentes métodos de secagem e extração por HPLC, dentre os quais cafeína e trigonelina apresentaram os maiores teores; A atividade antioxidante foi avaliada pelos experimentos ABTS e DPPH, que confirmaram que a flor do café possui atividade antioxidante e pode ser utilizada como potencial matéria-prima para a fabricação de bebidas à base de chá. Atualmente, existem poucos relatórios de pesquisa sobre flores de café, mas pode ser visto pelos relatórios existentes que as flores de café têm amplas perspectivas de aplicação como uma fonte potencial de compostos bioativos.

Polissacarídeossão compostos macromoleculares compostos por mais de 10 monossacarídeos ligados por ligações glicosídicas, e são amplamente encontrados em animais, plantas e microrganismos. Os polissacarídeos são estruturalmente complexos, com diferentes conformações e massas moleculares relativas, bem como estruturas secundárias de ligações de hidrogênio intracadeias e intercadeias. Estudos modernos mostraram que os polissacarídeos têm atividades farmacológicas como antioxidante [23-24], antienvelhecimento [25], regulação imunológica [26], anti-inflamatória [27] e antitumoral [28]. A atividade biológica dos polissacarídeos está relacionada à sua pureza, estrutura química, solubilidade, etc. Nos últimos anos, a atividade biológica dos polissacarídeos tornou-se um foco de pesquisa de medicamentos naturais e também um canal para descobrir novos medicamentos e desenvolver alimentos funcionais . Portanto, os polissacarídeos desempenham um papel importante no campo da medicina e da alimentação. o Yunnan do meu país é a principal área de produção para o plantio de café, e as flores do café têm valor potencial de desenvolvimento, mas há poucas pesquisas sobre o desenvolvimento das flores do café Yunnan, e o valor potencial das flores do café não foi explorado. Portanto, este artigo toma as flores de café de grão pequeno de Yunnan como objeto de pesquisa para realizar pesquisas sobre seus polissacarídeos ativos, com o objetivo de explorar profundamente o valor de utilização abrangente do café de grão pequeno de Yunnan.

Neste papel, opolissacarideoO rendimento foi usado como índice de avaliação para otimizar o processo de extração de polissacarídeos e a capacidade antioxidante das flores de café coletadas na cidade de Baoshan, província de Yunnan, para fornecer dados básicos para o desenvolvimento posterior de polissacarídeos biologicamente ativos. E fornecer referência para estudar o café de grãos pequenos de Yunnan e melhorar seu valor agregado.

1 Materiais e métodos

1.1 Materiais e Instrumentos

Caféflor Baoshan City, província de Yunnan; Álcool anidro Tianjin Chemical Reagent Co., Ltd.; Pureza da antrona 98,0 por cento , Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.; ácido sulfúrico concentrado, ácido clorídrico Chongqing Chuandong Chemical Co., Ltd.; 1,1-difenil-2- Trinitrofenilhidrazina (DPPH), 2,2'-Diaza-bis-3-etilbenzotiazolina{{1{15}}}}ácido sulfônico (ABTS), 2, 4,6-Tripiridiltriazina (TPTZ), Rutina pureza 98.0 por cento, Shanghai Ruiyong Biotechnology Co., Ltd.; pureza da vitamina E solúvel em água 98,0 por cento, Hefei Bomei Biotechnology Co., Ltd.; cloreto férrico hexahidratado analiticamente puro, Western

Long Science Co., Ltd.; Grau analítico de persulfato de potássio, fábrica de reagentes químicos de Tianjin Damao; Tampão PBS, tampão acetato de sódio Xiamen Haibiao Technology Co., Ltd.

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Balança Eletrônica FA2104N, 722-Espectrofotômetro Shanghai Qinghua Technology Co., Ltd.; KQ-250DB Instrumento ultrassônico, SHZ-D (Ⅲ) Bomba de vácuo de água circulante Gongyi Yuhua Instrument Co., Ltd.; Moedor multifuncional Xuman 1000Y Yongkang City Boou Hardware Products Co., Ltd.; 800 Centrífuga Elétrica Jintan Fuhua Instrument Co., Ltd.; VFD-3000 Liofilizador a vácuo Beijing Bo Yikang Experimental Instrument Co., Ltd.

1.2 Método experimental

1.2.1 Extração da flor do cafépolissacarídeosConsulte o método de Zheng Tingting et al. [29] com modificações. As flores de café coletadas na cidade de Baoshan, província de Yunnan, foram secas à sombra em temperatura ambiente, pulverizadas com um pulverizador e passadas por uma 80-peneira de malha para uso. Pesar 2,0 g de pó de flor de café, adicionar 20,0 mL de água pura, deixar de molho por 30 min,

Ultrassônico a 100 W por 30 min a 40 graus, resfriado à temperatura ambiente e o filtrado foi retido após filtração a vácuo. Etanol foi adicionado ao filtrado a uma concentração de 80% para precipitação e deixado em repouso por 12 h. Após centrifugação a 4000 r/min por 10 min, o sobrenadante foi descartado e o precipitado foi dissolvido em água e liofilizado a -80 graus para obter o polissacarídeo bruto.

Preparar solução de polissacarídeo de flor de café 5 mg·mL−1 e reservar.

1.2.2 Preparação da curva padrão de polissacarídeos e determinação do teor de polissacarídeos em flores de café A curva padrão de glicose foi traçada com referência ao método antrona-ácido sulfúrico [30]. Prepare 0.0, 25.{{10}}, 50.0, 100.{{23} }, 150,0 e 200,0 ug/mL soluções padrão de glicose, respectivamente. Pipete com precisão 1,00 mL da solução padrão de glicose acima com diferentes concentrações, adicione 1,00 mL de água pura e coloque-a em um tubo de ensaio de 25 mL com rolha. Adicione 5,0 mL de solução de 2,1 mg·mL−1 de ácido antrona-sulfúrico, agite bem, resfrie em banho de água gelada, aqueça em banho de água fervente por 7 min e resfrie rapidamente até a temperatura ambiente em banho de água gelada. Usando água deionizada como um controle em branco,

A absorvância A foi medida colorimetricamente a 625 nm. Tomando o conteúdo de glicose anidra como abscissa (0.0, 25.0, 50.0, 1{{1{{12} }}}0.0, 150.0, 200.0 ug), e o valor de absorbância como a ordenada, desenhe uma curva padrão, e a equação da curva padrão é: Y=0.0051X−0.0092 ( R2=0.9970) (onde: Y é o valor de absorbância, X é a quantidade de glicose, ug).

Pipete com precisão um certo volume da solução de polissacarídeo de flor de café 5 mg/mL preparada acima em um tubo de ensaio de 25 mL com uma rolha e adicione água pura para perfazer até 2.00 mL. Adicione 5.0 mL de solução de ácido antrona-sulfúrico 2,1 mg·mL−1, agite bem, resfrie em banho de água gelada, aqueça em banho-maria fervente por 7 min e resfrie rapidamente até a temperatura ambiente em um banho de água gelada. A absorvância A foi medida colorimetricamente a 625 nm usando água desionizada como controle em branco. O rendimento do polissacarídeo de flor de café foi calculado de acordo com a equação da curva padrão da glicose, e cada amostra foi repetida 3 vezes. Os resultados foram expressos como o valor médio, e a fórmula de cálculo foi a seguinte:

Rendimento de polissacarídeos de flor de café (porcentagem) =X×m1×10−35×V×ms×100

Na fórmula: X é o teor de polissacarídeo no V volume da solução de polissacarídeo de flor de café, ug; V é o volume medido da solução de polissacarídeo, mL; 5 é a concentração da solução preparada de polissacarídeo de flor de café, 5 mg·mL−1; m1 é a flor de café liofilizada Massa total do polissacarídeo, g; ms é a massa da amostra de flor de café, g.

1.2.3 Experimento de um fator

No processo de extração assistida por ultrassom do polissacarídeo da flor de café, os fatores importantes que afetam o rendimento do polissacarídeo incluem principalmente temperatura ultrassônica, tempo ultrassônico, relação líquido-material, potência ultrassônica, tempo de imersão e concentração de precipitação de álcool. Cinco níveis de temperatura ultrassônica foram selecionados: 40, 50, 60, 70 e 80 graus; cinco níveis de tempo ultrassônico foram selecionados: 30, 60, 90, 120 e 150 min; : 1, 30: 1 mL/g cinco níveis; a potência ultrassônica seleciona cinco níveis de 100, 125, 150, 175, 200 W; o tempo de imersão seleciona cinco níveis de 30, 60, 90, 120, 150 min; concentração de etanol seleciona cinco níveis 75 por cento, 80 por cento, 85 por cento, 90 por cento, 95 por cento cinco níveis, respectivamente, experimento de fator único. Ao filtrar por um dos parâmetros

, os outros fatores são: temperatura ultrassônica 40 graus, tempo ultrassônico 30 min,

Proporção de líquido para material 10:1 mL/g, potência ultrassônica 100 W, tempo de imersão 30 min

e concentração de precipitação de álcool de 80 por cento.

1.2.4 Experimento de otimização da superfície de resposta De acordo com o princípio de planejamento experimental de Box-Benhnken, com o rendimento do polissacarídeo de flor de café como variável de resposta, três fatores que têm maior influência no rendimento de polissacarídeo de flor de café foram selecionados a partir do fator único resultados do teste, conforme mostrado na Tabela 1. Otimização da temperatura ultrassônica com o rendimento do polissacarídeo de flor de café como grau índice, tempo ultrassônico e potência ultrassônica.

1.2.5 Teste de capacidade antioxidante

1.2.5.1 Experiências de eliminação de radicais livres DPPH As experiências de eliminação de radicais livres DPPH foram realizadas conforme descrito na Ref. [31]. Pegue 3,9 mL de 0.075 mmol/L de solução de reação DPPH e misture com 100 μL de soluções de polissacarídeos de diferentes concentrações. A reação foi realizada à temperatura ambiente por 30 minutos no escuro, e os valores de absorbância foram medidos em 515 nm. Usando rutina como controle positivo, a taxa de eliminação de radicais livres de DPPH foi calculada como: 1 por cento =[(A0–As)/A0]×100 (em que: As é a absorbância da solução de amostra; A0 é a absorbância da solução sem amostra), e a atividade antioxidante é expressa como taxa de inibição de 50 por cento (IC50).

1.2.5.2 ABTS mais experimento de eliminação de radicais livres

ABTS mais experimentos de eliminação de radicais foram realizados usando o método descrito na Ref. [32]. Pegue 2 mL de solução de polissacarídeo e adicione a 2 mL de ABTS mais solução de radical livre, respectivamente, após mistura uniforme, reaja à temperatura ambiente por 6 min e meça a absorção de UV a 734 nm, e a rutina é o controle positivo. A fórmula de cálculo do ABTS mais a capacidade de eliminação de radicais livres é a seguinte: I( percent )=[(A0–As)/A0]×10{ {12}} (onde As é a absorbância da solução de amostra; A0 é a absorbância da solução sem amostra) A curva padrão é determinada medindo Desenho de soluções padrão Trolox com diferentes concentrações (I por cento =0.0247C −0.0046, R2=0.9937), o ABTS anti-

A atividade oxidativa é expressa em mmol Trolox/g.

1.2.5.3 Método FRAP

O método descrito na Ref. [33] foi utilizado para a determinação da capacidade antioxidante do FRAP. Tome 5.0 mL de TPTZ, 5.0 mL de 20 mmol/L FeCl3 e 50 mL de solução tampão de acetato de sódio (300

mmol/L, pH 3,6) para preparar a solução de trabalho FRAP; 100 amostra de μL foi misturada com 300 μL de água e 3,0 mL de solução de trabalho FRAP, colocada em banho-maria a 37 graus por 30 min; a absorvância foi medida a 595 nm. Uma curva padrão foi preparada com FeSO4 como substância padrão (A=0.572C0.008, R2=0.9974), e a rutina foi usada como controle positivo, de acordo com a curva padrão

Calcule o poder redutor em mmol FeSO4/g de polissacarídeo.

1.3 Processamento de dados

Todos os experimentos foram repetidos três vezes e o valor médio foi tomado. O software DesignExpert 8.0.6 foi usado para o projeto e análise de experimentos de superfície de resposta.

2 Resultados e análises

2.1 Resultados experimentais de fator único

Os resultados do experimento de fator único são mostrados na Fig. O efeito da temperatura ultrassônica no rendimento do polissacarídeo de flor de café: a temperatura ultrassônica foi de 40-80 graus e o rendimento do polissacarídeo foi de 1,0048 por cento -1.7982 por cento . Na faixa de 40-70 graus, o rendimento do polissacarídeo de flor de café aumentou gradualmente com o aumento da temperatura ultrassônica, atingiu o máximo em 70 graus e começou a diminuir após 70 graus. Isso pode ser devido ao rendimento reduzido de polissacarídeos devido à destruição da estrutura dos polissacarídeos da flor do café em condições de alta temperatura, o que também foi relatado na literatura [29,34-35]. A temperatura de sonicação foi escolhida para ser de 70 graus.

O efeito do tempo ultrassônico no rendimento do polissacarídeo de flor de café: o tempo ultrassônico foi 30-150 min, o rendimento do polissacarídeo foi de 1,0369 por cento -1,5853 por cento, o rendimento do polissacarídeo aumentou com o aumento do tempo ultrassônico, e atingiu o máximo em 90 min, , o rendimento começou a diminuir com o aumento do tempo de sonicação. Isso ocorre porque a extração ultrassônica de curto prazo não é propícia à dissolução completa dos polissacarídeos, enquanto a extração ultrassônica de longo prazo degrada os polissacarídeos e leva a uma diminuição no rendimento, o que também é relatado na literatura [29,34-35]. Portanto, o tempo de sonicação foi escolhido para ser 90 min.

Efeito da proporção líquido-sólido no rendimento do polissacarídeo flor de café: o efeito da relação sólido-líquido no rendimento do polissacarídeo é pequeno. O rendimento do polissacarídeo aumentou com o aumento da razão líquido/sólido, atingindo o máximo em 25:1 mL/g. Após 25:1 mL/g, o rendimento diminuiu com o aumento da razão líquido-sólido. Menos solvente levará à dissolução insuficiente do polissacarídeo, resultando em menor rendimento de polissacarídeo; mais solvente dissolverá o polissacarídeo e dificultará sua precipitação e, ao mesmo tempo, o rendimento será reduzido devido à absorção da radiação ultrassônica pelo solvente. 29,34-35] também têm relatos semelhantes. Considerando que a relação líquido/material tem pouco efeito no rendimento, para economizar a quantidade de reagentes, a relação líquido/material foi selecionada em 10:1 mL/g.

O efeito da potência ultrassônica no rendimento do polissacarídeo de flor de café: a potência ultrassônica foi selecionada como 100-200 W, e o rendimento do polissacarídeo foi de 1,1185 por cento -1,8583 por cento. Após W, o rendimento diminuiu com o aumento da potência ultrassônica. O aumento da potência ultrassônica pode efetivamente destruir células e tecidos para dissolver polissacarídeos no solvente, portanto, aumentar a potência ultrassônica é benéfico para a precipitação de polissacarídeos; no entanto, o efeito de fragmentação e o efeito térmico produzidos por ondas ultrassônicas maiores também aumentarão a dissolução de impurezas nas flores de café. , o efeito térmico destruirá os componentes do polissacarídeo e fará com que o rendimento do polissacarídeo diminua, o que também é relatado na literatura [36-37]. Portanto, a potência ultrassônica escolhida foi de 175 W.

O efeito do tempo de imersão no rendimento do polissacarídeo de flor de café: o efeito do tempo de imersão no rendimento do polissacarídeo foi pequeno, o tempo de imersão foi de 30-150 min e o rendimento do polissacarídeo foi de 1,1827 por cento -1. 4609 por cento. No intervalo de 30-90 min, o rendimento do polissacarídeo aumentou com o aumento do tempo de imersão, atingindo o máximo aos 90 min. Após 90 min, com o aumento do tempo de imersão, o rendimento diminuiu ligeiramente e tendeu a ser estável. Prolongar o tempo de imersão pode facilitar a precipitação de polissacarídeos durante a ultrasonicação e reduzir o consumo de energia. Mas a imersão muito longa não pode trazer maior rendimento, e a imersão muito longa também fará com que outros componentes sejam liberados e afetem o rendimento do polissacarídeo. Isso é semelhante ao relatado em [38]. Considerando que a influência do tempo de imersão é pequena, para economizar tempo, o tempo de imersão foi selecionado em 30 min.

O efeito da concentração de precipitação de álcool no rendimento de polissacarídeos de flor de café: a concentração de precipitação de álcool tem pouco efeito no rendimento de polissacarídeos, a concentração de precipitação de álcool é de 75 por cento ~ 95 por cento, o rendimento de polissacarídeo é 0,9703 por cento ~1,2806 por cento. O rendimento de polissacarídeo aumentou com o aumento da concentração de etanol e atingiu o máximo em 85 por cento. Após 85 por cento, o rendimento diminuiu com o aumento da concentração de etanol. Extração de água e precipitação de álcool é o uso de polissacarídeo insolúvel em álcool para fazê-lo precipitar. Quando a quantidade de etanol adicionado aumenta, o polissacarídeo é insolúvel em etanol e precipita, e o rendimento aumenta. Quando a concentração de precipitação de álcool excede 85%, o rendimento do polissacarídeo não pode ser melhorado, mas os reagentes são desperdiçados. Isso é semelhante ao relatado em [38]. A fim de simplificar a operação, este trabalho adota o método de adição direta de etanol para ajustar a concentração de álcool para a precipitação. Ao mesmo tempo, como o rendimento de 80% e 85% de polissacarídeo não é muito diferente, ele pode economizar reagentes e reduzir o desperdício. Portanto, a concentração de precipitação de álcool foi escolhida para ser 80 por cento.

2.2 Resultados do teste de superfície de resposta

2.2.1 Resultados do teste de superfície de resposta A temperatura ultrassônica, o tempo ultrassônico e a potência ultrassônica têm grande influência. Portanto, com base nos experimentos de fator único acima, o método de superfície de resposta é otimizado para as três condições de temperatura ultrassônica, tempo ultrassônico e potência ultrassônica. Os resultados são apresentados na Tabela 2. .

Tomando o rendimento do polissacarídeo (Y) como índice de resposta, um modelo de regressão foi estabelecido com os três fatores de temperatura ultrassônica, tempo ultrassônico e potência ultrassônica, e a equação de regressão quadrática foi obtida:

Y{{0}}.29−0.067A mais 0.{{10}}54B−0. 019C mais 0,34AB mais 0,083AC mais 0,011BC−0,40A2

−0.19B2−0.27C2

2.2.2 Teste de significância de variância

Os resultados do teste são mostrados na Tabela 3.

De acordo com os resultados da análise de variância na Tabela 3, o modelo total foi significativo (P<0.0001), and the model reached a very significant level, indicating that the difference between different factors was significant; according to the absolute value of the linear coefficient of the regression equation, it can be seen that each factor has a significant effect on the total polysaccharide yield. The order of influence is: A>B>C, that is, ultrasonic temperature> ultrasonic time> ultrasonic power. Lack of fit item P=0.5764>00,05, o teste de falta de ajuste do item não é significativo, indicando que fatores desconhecidos têm pouca influência nos resultados do teste, e o item residual é causado principalmente por erros aleatórios, indicando que a seleção do modelo é apropriada e correta . A influência de AB foi significativa (P<0.05), and the influence of A2, B2, and C2 was extremely significant (P<0.01). In the whole model, the adjustment coefficient R2Adj=0.9277 in the model, indicating that 92.77% of the response value changes can be carried out through the model. Explanation, the coefficient of determination R2 = 0.9684, indicating that the model is highly reliable, and the model fits well with the experiment, and this model can be used for analysis and prediction [39−42].

2.2.3 Superfícies de resposta e contornos

O diagrama de superfície de resposta da interação de vários fatores no rendimento do polissacarídeo de flor de café é mostrado na Figura 2. A interação entre temperatura ultrassônica e tempo ultrassônico mostrou que a interação entre os dois foi significativa; quando a temperatura ultrassônica permaneceu inalterada, o rendimento de polissacarídeos de flor de café primeiro aumentou e depois diminuiu com o aumento do tempo ultrassônico; quando o tempo ultrassônico permaneceu inalterado, café O rendimento do polissacarídeo da flor primeiro aumentou e depois diminuiu com o aumento da temperatura ultrassônica. Da interação entre temperatura ultrassônica e potência ultrassônica, pode-se observar que, quando a temperatura ultrassônica é constante, o rendimento do polissacarídeo de flor de café primeiro aumenta e depois diminui com o aumento da potência ultrassônica; quando a potência ultrassônica permanece inalterada, o rendimento do polissacarídeo de flor de café aumenta com a onda ultrassônica. O aumento de temperatura primeiro aumenta e depois diminui. Da interação entre o tempo ultrassônico e a potência ultrassônica, pode-se observar que, quando o tempo ultrassônico é constante, o rendimento do polissacarídeo de flor de café primeiro aumenta e depois diminui com o aumento da potência ultrassônica; quando a potência ultrassônica é constante, o rendimento do polissacarídeo de flor de café aumenta com o aumento da potência ultrassônica. O aumento do tempo aumenta primeiro e depois diminui.

Portanto, usando o rendimento do polissacarídeo como padrão de avaliação, os resultados de otimização do método de superfície de resposta para as três condições de tempo ultrassônico, temperatura ultrassônica e potência ultrassônica são: temperatura ultrassônica 69,56 graus, tempo ultrassônico 92,99 min e potência ultrassônica 174,01 W, é Prevê-se que nesta condição 2,290 por cento. De acordo com a situação real, a temperatura ultrassônica de 69,5 graus, o tempo ultrassônico de 93,00 min, a potência ultrassônica de 175 W, o tempo de imersão de 30 min, a relação líquido-material de 10: 1 mL/g e a concentração de etanol de 80 por cento foram selecionados para 4 testes paralelos.

O rendimento médio foi de 2,292 por cento ±0,061 por cento. Está basicamente próximo do valor teórico obtido pelo teste, indicando que existe um bom ajuste entre o valor previsto e o valor real, portanto os parâmetros otimizados do processo obtidos pela superfície de resposta neste estudo são precisos e confiáveis ​​[43].

2.3 Resultados experimentais da capacidade antioxidante

O teste DPPH é um modelo de avaliação eficiente e sensível para a capacidade antioxidante da planta. A capacidade de eliminação de radicais livres da amostra testada está relacionada à sua potencial capacidade de doação de prótons; O teste ABTS é amplamente utilizado para estimar a capacidade antioxidante de amostras de plantas, que podem testar amostras Atividade antioxidante de componentes lipofílicos e hidrofílicos no método FRAP; a capacidade de redução de produtos naturais foi avaliada reduzindo Fe3 mais -TPTZ para Fe2 mais -TPTZ [44-45]. Os resultados dos experimentos antioxidantes dos polissacarídeos da flor do café são mostrados na Tabela 4. Os polissacarídeos da flor do café têm certas atividades antioxidantes contra os radicais livres DPPH e ABTS mais radicais livres, mas sua atividade antioxidante é menor que a da rutina.

3 Conclusão

Neste experimento, a flor de café Yunnan de grão pequeno foi usada como matéria-prima, e opolissacarideode grãos pequenos de Yunnancaféflor foi extraída por ultrassom. Verificou-se que o tempo ultrassônico, a temperatura ultrassônica e a potência ultrassônica têm efeitos importantes na extração de polissacarídeos de flor de café. Em seguida, o tempo ultrassônico, a temperatura ultrassônica e a potência ultrassônica foram otimizados pela superfície de resposta, e as condições ideais de processo do polissacarídeo de flor de café foram determinadas da seguinte forma: temperatura ultrassônica 69,5 graus, tempo ultrassônico 93 min, potência ultrassônica 175 W, relação líquido-material 10:1 mL/g, o tempo de imersão foi de 30 min e a concentração de etanol foi de 80%. Nesta condição, o rendimento do polissacarídeo foi de 2,292 por cento ± 0,061 por cento. O método pode efetivamente melhorar o rendimento da flor de cafépolissacarideo, diminuindo o tempo de extração e reduzindo a quantidade de etanol utilizada. Os resultados dos experimentos antioxidantes mostraram que os polissacarídeos da flor do café apresentaram fraca capacidade antioxidante. Este estudo fornecerá uma referência para posterior separação e purificação da flor do cafépolissacarideoe pesquisa sobre sua atividade e função, e também fornecerá base teórica e suporte para o desenvolvimento e utilização do café.

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