Efeito protetor da panduratina A na apoptose induzida por cisplatina de células tubulares proximais renais humanas e lesão renal aguda em camundongos
Mar 18, 2022
Fundo:Cisplatina é quimioterapia eficaz, mas seu principal efeito colateral, agudolesão renal, limita seu uso. Pandurate A, um composto bioativo extraído da Besenbergia rotunda, mostra várias atividades biológicas, como efeitos antioxidantes. O presente estudo investigou o efeito nefroprotetor do pandurate A na cisplatina induzidalesão renal.Métodos: Investigamos o efeito do pandurate A sobre a toxicidade da cisplatina em camundongos e culturas de células renais humanas usando células RPTEC/TERT1. Resultados: Os resultados demonstraram que pandurate A ameliorates cisplatina induzida toxicidade renal em ambos os camundongos e células RPTEC/TERT1, reduzindo a apoptose. Camundongos tratados com uma única injeção intraperitoneal (i.p.) de cisplatina (20 mg/kg de peso corporal (BW)) exibidosrenallesão túbulo e prejudicadofunção renalcomo mostrado pelo exame histológico e aumento da creatinina sémica. Coadministração de pandurate A (50 mg/kg BW) melhorada oralmentefunção renale amenizaramrenallesão de túbulo de cisplatina inibindo a ativação da quinase extracelular regulada por sinal (ERK)1/2 e caspase 3. Nas células tubulares proximais renais humanas, apoptose celular induzida por cisplatina ativando proteínas propoptótesas (ERK1/2 e caspase 3), e reduzindo a proteína anti-apoptótica (Bcl-2). Esses efeitos foram significativamente amenizados pelo co-tratamento com pandurate A. Curiosamente, o pandurate A não alterou o acúmulo intracelular de cisplatina. Não alterou a eficácia anticâncular da cisplatina em linhas de células cancerígenas de pulmão humanas ou não pequenas células. Conclusões: O presente estudo destaca que o pandurate A tem um potencial efeito protetor sobre a nefrotoxicidade da cisplatina.
Keywords:quimioterapia; lesão renal aguda; panduratina A; túbulo proximal renal humano; anti-apoptose; renal; rim
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INTRODUÇÃO
A nefrotoxicidade induzida por drogas é um grande problema no cenário clínico porque o uso de drogas nefrotóxicas é muitas vezes inevitável. Nefrococoxicidade pode ser definida por lesões renais, incluindo danos glomerulares e lesões tubulares que levam ao comprometimento da função renal.1) Drogas comuns associadas alesão renalsão anti-inflamatórios, antibióticos e agentes quimioterápicos, como cisplatina.2-4) Cisplatina é um espectro amplo, Droga quimioterápica de alta potência.5) No entanto, aproximadamente um em cada três pacientes que recebem tratamento de cisplatina sofre de nefrotoxicidade6,7) e desequilíbrio eletrólito.8,9) Nefrotoxicidade induzida pela cisplatina é caracterizada por lesão proximal do túbulo, lesão vascular e inflamação.4) O acúmulo de ciplatsina em células renais induz múltiplas vias que promovem múltiplas vias morte celular. Espécies reativas de oxigênio (ROS) foram identificadas como um mediador-chave na nefrotoxicidade cisplatina.10,11) Além disso, ROS induz nefrotoxicidade através da ativação de quinases proteicas ativadas por mitogênio (MAPKs).10,12,13) Vários estudos relataram que a própria cisplatina pode estimular diretamente a quinase extracelular regulada por sinal (ERK)1/2 (membro da MAPKs) tanto in vitro quanto in vivo. 14,15)
Certos fitoquímicos amenizam nefrotoxicidade induzida pela cisplatina inibindo o acúmulo de ROS e apoptose.16-18) Embora os efeitos nefrorprotetores desses fitoquímicos tenham sido relatados em estudos pré-clínicos, ainda não há medicamentos aprovados de fitoquímicos para nefrocoxicidade da cisplatina (ver detalhes em revisão).19) A prática clínica atual só fornece tratamentos de apoio para recuperar a função renal.20) Portanto, ainda é importante procurar agentes eficazes para prevenir ou tratar nefrotoxicidade induzida por cisplatina. Pandurate A é um fitoquímico interessante. Trata-se de um chalcone ciclohexanol isolado da Besenbergia rotunda, uma planta usada na medicina tradicional e alimentos.21) Panduratin A tem sido mostrado para prevenir ou tratar o estresse oxidativo, inflamação e doença metabólica.22,23) A lesão de túbulos proximais renais causados pela cisplatina é mediada, pelo menos em parte, por aumento do estresse oxidativo e inflamação.11) Por isso, investigamos o efeito da pandurate A sobre a toxicidade da cisplatina em animais e culturas celulares usando RPTEC/TERT1 Células. Também testamos se o co-tratamento com pandurate A afeta a atividade anticâncer da cisplatina nas linhas celulares cancerígenas humanas.
MATERIAIS E MÉTODOS
Produtos químicosBrometo de tetrazolium azul thiazolyl (MTT), 2′,7'-diclorofluorescetina diacetato (DCFH-DA), cisplatina e composto C (ampk)inibidor de proteína ativada ampk) foram comprados do inibidor Sigma-Aldrich (MO, EUA). 3 H-1-Metil-4-phenylpyridinium (3 H-MPP+) foi comprado da PerkinElmer, Inc. (Bangkok, Tailândia). O kit de detecção de apoptonato de apoptose de annexin V-fluoresceína (FITC) foi adquirido da BD Biosciences (CA, EUA). Anticorpos primários para p-ERK1/2 (Cat. No. 9102S), ERK1/2 (Cat. No. 9101S), Bcl-2 (Cat. No. 2872T), caspase-3 (Cat. No. 9662S), glicealdeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) (Gato). Nº 2118S), p-AMPKα (Gato. No.2531S), AMPKα (Cat. No. 5832S), Bax (Cat. No. 5023) e β-actin (Cat. No. 4970T) foram obtidos a partir de sinalização celular (MA, EUA) e anticorpo de lipocalina associada à gelatina anti-neutrófila (NGAL) (Cat. No. O STCSC-515876 foi adquirido da Santa Cruz Biotechnology (CA, EUA). Pandurate A > 98% de pureza determinada pelo HPLC foi isolada da Besenbergia rotunda, como descrito anteriormente pelo nosso grupo.24) Os rizomas de Boesenbergia rotunda foram coletados de Kanchanaburi, Tailândia. A planta foi identificada por Tuanta Sematong. O espécime de voucher (Não. BKF 68909) foi depositado no Forest Herbrium, Royal Forestry Department, Bangkok.
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AnimaisRatos C57BL/6 masculinos (8 semanas de idade) foram comprados da Nomura Siam International Co., Ltd. (Bangkok, Tailândia). Protocolo de Cuidados com Animais e Uso Nº. O MUSC61-063-464 foi aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais, o MUSC-IACUC. Os ratos foram autorizados a acessar livremente comida e água. Após uma semana de aclimatação, os camundongos foram divididos aleatoriamente e administrados tratamentos da seguinte forma: soro fisiológico normal por uma única injeção intraperitoneal (i.p.) no dia 4 (grupo controle); pandurate A (50 mg/kg de peso corporal (BW)) por gavage oral por 7 d (grupo pandurate A); cisplatina (20 mg/kg BW) por uma única injeção i.p. no dia 4 (grupo cisplatina); pandurate A (50 mg/kg BW/d) por gavage oral para 7 d e cisplatina (20 mg/kg BW) por uma única injeção i.p. no dia 4 (grupo de co-tratamento). No dia 7, os ratos foram profundamente anestesiados pelo sódio tiopental. O sangue foi retirado e centrifutado por 10 min às 3:00. Os supernantes coletados foram mantidos a −80 °C até ofunção renalfoi medido.Rinsforam coletados para a medição de expressões proteicas e estudos histopatológicos.
Determinação da Função Renal e Exame HistológicoA função renal foi determinada medindo creatinina sé serum usando Stanbio Creatinine Liquicolor (NY, EUA) e analisador de química sanguínea, Licenza (Roma, Itália). Para examinar danos tubulares renais induzidos por cisplatina, ratoRinsforam fixados em 4% de paraformaldeído. Orimas fatias foram manchadas com hematoxilina e eosina (H&E) fotografadas por um microscópio leve. Utilizou-se o percentual de lesão tubular para avaliar a lesão tubular renal: 0 = nenhuma lesão tubular 1=<10%; 2="10–25%;" 3="26–50%;" 4="51–75%;" 5="">75%. Slides foram cegamente pontuados por um patologista. A pontuação média para cada grupo de animais foi calculada contando 10 campos diferentes de um slide.
Linhas celularesCélulas RPTEC/TERT1, células cancerígenas de cólon (HCT116) e células cancerígenas de pulmão de células não pequenas (A549) foram compradas da American Type Culture Collection (VA, EUA). Resumidamente, as células RPTEC/TERT1 foram cultivadas em células média/F-12 modificadas modificadas de Dulbecco (DMEM/F12) como descrito anteriormente.25) as células HCT116 e A549 foram cultivadas em meio DMEM/F12 e RPMI1640, respectivamente, suplementado com antibióticos de penicilina-estreptomicina e 10% de soro bovino fetal (FBS). As células foram cultivadas a 37 °C em uma atmosfera umidificada de 5% de CO2 e 95% de O2.
Ensaio de viabilidade celular e análise de apoptose celularA viabilidade celular foi determinada expondo as células RPTEC/TERT1 a 0,5mg/mL mL reagente por 1h a 37°CC. Os reagentes foram removidos, o sal formazan formado foi dissolvido em sulfóxido de dimetil (DMSO) e detectado pelo leitor de microplato EnVision a 570nm de absorção. A viabilidade celular foi relatada como uma porcentagem de controle. O iodeto de anexação V e propidium (análise PIstaining foi usado para determinar apoptose celular. Resumidamente, as células RPTEC/TERT1 foram destacadas por 0,25% de ácido trippsin-etilenodiaminetetraacético (EDTA). As suspensões celulares foram incubadas com Anexo V-FITC e PI no escuro a 4°C por 15min seguido de lavagem duas vezes com tampão de ligação. As células apoptóticas foram contadas por citômetro de fluxo e expressas como um percentual do total de células.
Avaliação do Acúmulo intracelular de ROSOs níveis de ROS foram determinados pelo ensaio DCFH-DA. As células RPTEC/TERT1 foram incubadas com 10uM DCFH-DA e incubadas por 30min a 37°C. Em seguida, o corante DCFH-DA foi removido e as células foram lavadas com soro fisiológico tamponado por fosfato (PBS). O nível ROS intracelular foi medido em comprimentos de onda de 485 e 530nm para excitação e emissão, respectivamente. O acúmulo de ROS intracelular é relatado como uma porcentagem da intensidade fluorescente em relação às células de controle.
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Análise de acumulação de platinaA platina acumulada foi medida em células RPTEC/TERT1 digeridas e no mouseRinspor UNICAM 989 QZ AA espectrômetro (Geleen, Países Baixos). Dez microliters de 1% Triton X-100 e 400uL de ácido nítrico de 1% foram adicionados a cada amostra de 100μL. As amostras foram então incubadas por pelo menos 1h. Antes da detecção de platina, cada amostra foi diluída 10:1 com ácido nítrico de 1%. A concentração de platina foi calculada utilizando-se regressão linear de uma curva padrão de platina preparada utilizando 2,5mg/mL de cisplatina diluída em ácido nítrico de 1%. A platina foi calculada como ng/número de célula ou ng/rimpeso.
Ensaio de absorção 3H-MMP*A absorção 3H-MPP+ em células RPTEC/TERT1 foi determinada usando nosso método anterior.25)Brevemente, as células foram lavadas com tampão de transporte quente e incubadas por 20min. As monocamadas celulares foram incubadas com H-MPP+(10nM), seguidas pela lavagem com tampão de transporte gelado. As amostras foram coletadas e a atividade radioativa de H-MPP+ foi medida utilizando-se um contador de cintilação líquida.
Análise de manchas ocidentaisExpressões proteicas foram processadas de acordo com nosso estudo anterior.26)Proteínas extraídas do camundongorime as células RPTEC/TERT1 foram centrifugadas a 12000rpm por 20min a 4°C. Quantidades iguais de proteínas isoladas das células e tecidos foram desnaturadas e separadas por 10-12% de sulfato de sódio-poliacrilamida eletroforese de gel (SDS-PAGE). As amostras foram transferidas para membranas de nitrocelulose seguidas de bloqueio de proteínas não específicas de 1h utilizando leite seco sem gordura (5%). As membranas foram incubadas com anticorpo primário por 24h e foram incubadas com anticorpo secundário por 1h. A intensidade da expressão proteica foi detectada utilizando-se substrato HRP quemiluminescente e quantificada pelo software ImageJ.
Análise estatísticaOs dados são expressos como ± desvio padrão (SD). Os dados foram analisados pela ANOVA unidirecional usando os testes pós-doutorado de Tukey (GraphPad Prism 8.0). Uma significância é considerada quando o valor p é inferior a 0,05.
RESULTADOS Panduratin A Ameliorates Cisplatin-Induced Acute KidneyLesão Investigamos o efeito do pandurate A emlesão renalcausada por cisplatina em camundongos. Observou-se pela primeira vez a toxicidade geral medindo a mudança de peso corporal em camundongos após o tratamento com soro fisiológico normal, pandurado A (50 mg/kg BW), cisplatina (20 mg/kg BW) e cisplatina (20 mg/kg BW) e pandurate A (50 mg/kg BW). Uma significa- cant diminuição do peso corporal nos camundongos tratados com cisplatina foi encontrada. A perda de peso corporal foi atenuada pelo co-tratamento com pandurate A (Fig. 1A). Comparado com o controle,função renalque foi medido pelo nível de creatinina séum mostrou que o pandurate tratado com camundongos A sozinho não alterou o nível de creatinina sémica; enquanto os camundongos tratados com cisplatina apresentaram aumento significativo dos níveis de creatinina séum, indicando a função renal prejudicada. O nível de creatinina séum na coadministração do pandurate A foi significativamente reduzido em comparação com os camundongos tratados com cisplatina (Fig. 1B). Além disso, o acúmulo de platina emrimo tecido não foi significado- cantly diferente em camundongos tratados apenas com cisplatina em comparação com camundongos co-tratados com cisplatina e pandurato A (Fig. 1C). Esses dados indicam que o pandurado A não afetou o teor de cisplatina no tecido renal. ORinsobtidos de camundongos tratados com veículo ou pandurate A sozinho não apresentou alterações patológicas marcadas. No entanto, os camundongos tratados com cisplatina apresentaram mais danos tubulares em comparação com camundongos tratados com veículos, como mostrado pelo aumento da degeneração e desquamação, formação de moldes luminosos, infiltração de células mononucleares, karyomegaly, hemorragia inter-tubular e dilatação. Essas alterações patológicas foram significativamente atenuadas pela coadministração do pandurate A (Fig. 2A, Tabela 1). Foram determinados os níveis de expressão de NGAL (um biomarcador de nefrotoxicidade) e ERK1/2 e caspase 3 (proteínas pró-apoptóticas). Nosso estudo mostrou que os camundongos tratados com cisplatina aumentaram significativamente a expressão de NGAL, p-ERK1/2 e caspase 3 em comparação com camundongos tratados com veículos. Co-tratamento com pandurate A reduziu significativamente essas proteínas induzidas pelo tratamento de cisplatina (Fig. 2B).
Pandurate A previne citotoxicidade induzida por cisplatina em células tubulares proximais renais humanas inibindo caminhos de sinalização apoptóticaCisplatina (50 μM) significa- diminui a viabilidade das células RPTEC/TERT1 após a incubação de 72 h. Curiosamente, o co-tratamento com pandurate A (1 e 5 μM) aumentou significativamente a viabilidade celular (Fig.
3A). O efeito protetor de Panduratin A contra a citotoxicidade da cisplatina foi confirmado pela medição da apoptose celular. Como esperado, a exposição das células a 50 μM cisplatina por 48 h aumentou significativamente apoptose das células RPTEC/TERT1. Este efeito foi atenuado pelo pandurate A (Fig. 3B). Examinamos se o efeito do pandurate A na toxicidade da cisplatina exigia ativação da AMPK. Como mostrado na Fig. 3C, a expressão proteica de p-AMPK, uma forma ativa de AMPK, foi aumentada por pandurate A enquanto foi diminuída por cisplatina. Além disso, foi determinado o efeito protetor do pandurate A sob inibição ampk. Curiosamente, a incubação das células com composto C de 10 μM, um inibidor de AMPK, não atenuou o efeito protetor do pandurate A na viabilidade celular (Fig.3D). Esses resultados indicam que o efeito protetor do pandurate A pode ser mediado por mecanismos independentes da AMPK. Em seguida, examinamos o efeito do pandurate A em certas proteínas envolvidas na apoptose celular induzida pela cisplatina. Como mostrado na Fig. 4, a cisplatina aumentou significativamente as proteínas pró-apoptóticas p-ERK1/2 e caspase 3. A cisplatina diminuiu a expressão da proteína anti-apoptótica Bcl-2. Co-tratamento com pandurate A inverteu a expressão dessas proteínas. Uma vez que a ROS é um fator importante envolvido na apoptose das células renais induzida pela cisplatina,11,27) determinamos o efeito da panduratina A no acúmulo de ROS devido à cisplatina. Cisplatina aumentou significativamente os níveis intracelulares de ROS. Curiosamente, panduratina A reduziu significativamente o acúmulo de ROS induzido por cisplatina.
Panduratina A não afeta o acúmulo celular de Cisplatin OCT2media o transporte de cisplatina para as células tubulares proximais renais humanas.289 Para examinar a possibilidade de panduratina A reduzindo o acúmulo de cisplatina, medimos a função de transporte de OCT2. Os resultados mostraram que a incubação de células com panduratina 5uM A para 10min e 24h não teve efeito no acúmulo celular de H-1-metil-4-phe-nylpyridinium (H-MPP+), um substrato de OCT2. Em seguida, foi confirmado o efeito da panduratina A no acúmulo celular de cisplatina. Panduratina A não teve efeito significativo no acúmulo de platina nas células renais humanas (Fig. 5).
O efeito protetor da panduratina A não afeta a atividade anticâncgena da CisplatinaO efeito de Panduratin A sobre a toxicidade da cisplatina nas linhas celulares cancerosas foi determinado. A viabilidade das células HCT116 e A549 que são linhas de células cancerígenas de cólon e pulmão, respectivamente, foi significativamente reduzida 72h após o tratamento com cisplatina (50μuM). O co-tratamento com panduratina A (5μM) não atenuou a citotoxicidade da cisplatina. Curiosamente, panduratina A por si só também reduziu o
DISCUSSÃO
O presente estudo revela que a panduratina A reduz a nefrotoxicidade cis-platin sem prejudicar a atividade anticâncer da cisplatina em linhas de células cancerígenas de cólon e células não pequenas. Mostramos que o co-tratamento com panduratina A atenua agudalesão renalem camundongos causados por cisplatina. Embora o presente estudo mostre o efeito protetor sobre cisplatina induzidalesão renal,o alvo principal da panduratina A não é identificado. Panduratina A poderia ativar ampk em células tubulares proximais renais (Fig. 3) e outros tipos de células.30-2)Parece improvável que o efeito protetor da panduratina A requer ativação de AMPK como evidência mostrou que a inibição de AMPK usando inibidores químicos não alterou o efeito protetor da classificação pandu A melhor função renal como mostrado pela redução da creatinina soro. A função renal com deficiência de cisplatina está correlacionada com lesões nos túbulos renais, como degeneração, formação de gesso luminal, hemorrhagia e dilatação. Os resultados da lesão do túbulo renal correlacionados bem com nossos dados mostrando a indução da expressão NGAL emrimtecido de camundongos tratados com cisplatina. Além disso, esta evidência é apoiada pelo estudo anterior mostrando que ngal é marcadamente expresso em túbulos renais após agudolesão renalinduzido por cisplatina.3)Curiosamente, co-tratamento dos camundongos com panduratina A atenuada lesão de túbulo renal induzida por cisplatina. A análise histológica mostrou que a cisplatina aumentou a infiltração de células mononucleares e esse efeito foi abolido pela panduratina A. Esses resultados implicam que a panduratina A, que é anteriormente mostrada uma anti-inflamação,24.3435) pode atenuar o efeito inflamatório da cisplatina no tecido renal. Ativação MAPK poderia induzir morte celular.2415)Nossos resultados mostraram que a cisplatina estimulou a ativação do ERK1/2 e do caspase 3. Expressões dessas proteínas foram atenuadas por panduratina A.
Várias vias que contribuem para a nefrotoxicidade induzida pela cisplatina (incluindo apoptose, estresse oxidativo e inflamação) foram relatadas.4 Usamos a linha celular RPTEC/TERT1 para identificar mecanismos de toxicidade amenizante da panduratina causada pela cisplatina nas células tubulares proximais renais humanas. As células RPTEC/TERT1 têm sido sugeridas como um modelo de célula renal para toxicidades induzidas por xenobióticos.36Panduratin A exibe um efeito protetor em relação à citotoxicidade cisplatina, como mostrado por uma diminuição na apoptose celular RPTEC/TERT1. Os mecanismos da toxicidade da cisplatina nas células tubulares proximais renais são complexos. Ativação de ERK1/2 e caspase 3 e esgotamento do Bcl-2 foram implicados na apoptose das células renais devido à cisplatina.373)Consistente com estudos anteriores, o presente estudo mostrou que a cisplatina aumenta a expressão de p-ERK1/2 e corta a expressão do Bcl-2. Nossos resultados indicam que a panduratina A suprime proteínas de sinalização apoptótica induzidas por cisplatina, p-ERK1/2 e caspase 3, e mantém proteína anti-apoptótica. Bcl-2. Além da ativação do ERK1/2 e do caspase 3, aumento do acúmulo intracelular ros é um fator-chave na apoptose das células renais devido à cisplatina.139Um estudo anterior relatou que a panduratina A protege contra danos oxidativos nos hepatócitos, reduzindo a formação ros intracelular causada por intermediários reativos.4A diminuição no acúmulo de ROS após o tratamento com panduratina A poderia ser mediada pela inibição da produção ros ou aumento da reação de limpeza ros. Relatamos que a panduratina A aumentou o nível de glutationa, uma molécula de limpeza ROS, que pode reduzir o acúmulo de ROS no tecido renal (ver materiais suplementares). No entanto, não descartamos que outros mecanismos estejam envolvidos na redução da ROS. Nossos resultados revelaram que a panduratina A reduz o acúmulo intracelular de ROS, o que contribui para o efeito protetor da panduratina A. O nível intracelular de cisplatina é o fator primário que afeta a gravidade da toxicidade induzida por cisplatina. Transportadores renais como OCT2, transportadores de cobre e transporte multidroug e extrusão de toxinas-1 (MATE1) foram relatados para contribuir para o transporte de cisplatina.4)No entanto, o transporte de cisplatina para as células tubulares proximais renais é mediado principalmente por OCT2. A inibição dos OCTs tem sido demonstrada para atenuar a toxicidade renal induzida pela cisplatina, tanto em células renais cultivadas quanto em animais.发9,42)No entanto, parece provável que a panduratina A não afete a função de transporte OCT2 ou o acúmulo de cisplatina sugerindo que o efeito protetor da panduratina A contra a toxicidade da cisplatina não seja mediado pela redução do transporte ou da cisplatina de acumulação.
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Panduratin A exibe efeitos reprotetores através da inibição da apoptose das células renais. Se a panduratina A também inibisse a apoptose celular cancerosa, reduziria a eficácia da quimioterapia. Testamos, portanto, se a panduratina A reduz a atividade anticancerígena da cisplatina. Significativamente, o co-tratamento com a classificação Pandu A não altera a atividade anticâncular da cisplatina em células cancerígenas de cólon ou não pequenas células pulmonares. Além disso, a panduratina A em si é tóxica para ambas as linhas celulares cancerosas. Os resultados indicam que o efeito da panduratina A é seletivo, afetando células renais normais e células cancerígenas de forma diferente. Embora a duração pan-A possa ser um bom agente para prevenir nefrotoxicidade induzida por cisplatina, as informações relativas aos efeitos farmacológicos da panduratina A sob clinicamente relevantes no modelo de xenoenxerto devem ser investigadas no futuro.
CONCLUSÃO
Nosso presente estudo demonstrou que a panduratina A fornece um efeito protetor acentuado na nefrotoxicidade da cisplatina, reduzindo o estresse oxidativo e inibindo as ativações ERK1/2 e caspase 3. O efeito protetor da panduratina A não alterou a atividade anticâncular da cisplatina nas células cancerosas. Embora bloquear alguns eventos prejudiciais possa ter apenas efeitos reprotetores parciais, a panduratina A pode ser um bom agente candidato para aliviar a nefrotoxicidade da cisplatina porque reduz a toxicidade da cisplatina através de múltiplos mecanismos.
