Parte 2:Extratos de Cistanche Deserticola podem antagonizar a imunossenescência e prolongar a vida útil em camundongos com senescência acelerada 8 (SAM-P8)
Mar 12, 2022
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3.5. Extrai dfCistanche deserticola(ECD) Promover.
Apoptose e inibir a necrose de linfócitos em camundongos SAM-P8. Os níveis de necrose e apoptose nas populações de linfócitos do sangue foram analisados por dupla coloração com Anexina V-FITC V/PI. Isso revelou que a proporção de linfócitos necróticos em SAM-P8mic foi significativamente maior do que em animais controle SAM-R1, enquanto a proporção de linfócitos apoptóticos foi menor (Figura 7). A suplementação da dieta de camundongos SAM-P8 com três doses diferentes de ECD foi capaz de inibir os níveis de necrose observados em populações de linfócitos periféricos, enquanto apenas os dois níveis mais altos de suplementação de ECD produziram alteração significativa no nível de linfócitos apoptóticos (Figura 7).
3.6. Extratos deCistanche deserticola(ECD) Diminuir a citocina pró-inflamatória IL-6 em camundongos SAM-P8.
Como um indicador adicional da capacidade do ECD de influenciar as mudanças relacionadas à idade no sistema imunológico, o efeito da suplementação da dieta ECD no nível de várias citocinas (IFN-, TNF-, IL-2.IL{{4 }}.IL-10, GM-CSF e IL-3) foi analisado usando análise de matriz de esferas citométrica (CBA), que envolve a coloração com anticorpos marcados com corante fluorescente acoplados a esferas citométricas de captura. Os resultados (Figura 8) mostraram que a citocina inflamatória IL-6 não foi aumentada em camundongos SAM-P8 de 8-meses de idade em comparação com camundongos SAM-R1 controle da mesma idade, mas foi significativamente aumentada quando em comparação com6-camundongos SAM-R1 de um mês (resultados não mostrados). No entanto, a suplementação dietética com altas e médias doses de ECD foi capaz de produzir uma diminuição estatisticamente significativa no nível plasmático de IL-6(Figuras 8(a) e 8(b),<>
(IFN-,TNF-,IL-2,IL-10, GM-CSF e IL-3) não mostraram variações significativas entre os grupos de camundongos tratados com SAM-P8, SAM-R1 e ECD (dados não mostrado).
4. Discussão
A defesa imunológica contra microorganismos recém-invasivos ou células tumorais endógenas depende da diversidade do repertório de células T, que por sua vez depende da geração e manutenção de células T virgens [19]. Durante o processo de envelhecimento, a diversidade do repertório de células T diminuiu drasticamente devido à depleção progressiva de células T virgens no pool de reserva periférico. Acredita-se que essa escassez de células T virgens responsivas seja responsável pela suscetibilidade de idosos a infecções, câncer e resultados ruins após a vacinação [20]. Várias intervenções, incluindo restrição calórica [7], exercício [21] e suplementação de vitamina E [8], foram usadas para repor com sucesso as células T virgens e, assim, prolongar a vida útil e reduzir o aparecimento de infecções e câncer entre os idosos. Neste estudo, demonstramos que o ECD é capaz de aumentar o nível de células T virgens no pool periférico e houve uma concomitante extensão do tempo de vida e redução na frequência de formação de tumores em camundongos acelerados pela senescência (grupo terapêutico ECD versus SAM-P8 ,0 versus 1/6). Portanto, parece razoável concluir que a capacidade do ECD de reverter a depleção dependente da idade de células T virgens periféricas pode contribuir para seus efeitos conhecidos na redução de doenças relacionadas à idade que derivam de observações clínicas de longo prazo.
5. Materiais e Métodos
5.1.Materiais.
Na resposta imunológica normal, após a contenção e eliminação de um antígeno estranho, a maioria das células T expandidas clonalmente sofre apoptose com apenas uma pequena fração sendo retida como células T de memória. Consequentemente, à medida que o organismo imunocompetente envelhece, as células T de memória periféricas se acumulam como resultado de uma vida inteira de exposição a antígenos estranhos convertendo células T virgens em células de memória [22,23]. Vários estudos sugeriram que defeitos de apoptose de linfócitos em animais mais velhos e humanos também contribuem para o aumento do compartimento de células T de memória [24,25]. Além disso, um estudo recente mostrou que uma superabundância de células T de memória periféricas pode inibir a proliferação homeostática de células T virgens [26]. Esses estudos recentes também sugeriram que as células T de memória podem secretar altos níveis de citocinas pró-inflamatórias que podem contribuir para inflamações persistentes em vários tecidos dos idosos. Consequentemente, a redução do nível de células T de memória deve ser benéfica tanto para a proliferação homeostática de células T virgens quanto para aliviar o excesso de estado inflamatório observado em organismos mais velhos. Neste estudo, a suplementação dietética com ECD mostrou ser capaz de reduzir o nível de células T periféricas de memória e aumentar os níveis de células T virgens. Além disso, a suplementação de ECD aumentou o espaço de apoptose para novos linfócitos virgens. A necrose em linfócitos periféricos, que é induzida principalmente pelo estresse oxidativo em animais senis, também foi inibida.
Extensas evidências existem para indicar que o envelhecimento em um organismo não é apenas caracterizado por deficiência imunológica, mas também por um aumento na inflamação crônica [27. O estado pró-inflamatório é mais claramente manifestado no aumento, e IL-1, na circulação, juntamente com o aumento das frequências de doenças inflamatórias crônicas associadas ao envelhecimento, como doença de Alzheimer, doença de Parkinson e aterosclerose. Uma das citocineses inflamatórias mais proeminentes é a IL-6 e sua concentração plasmática aumenta com o envelhecimento e doenças relacionadas à idade [18,28,29], e estudos epidemiológicos sugerem que a IL-6 é um bom biomarcador de longevidade pois está intimamente relacionado à mortalidade em coortes de pacientes idosos [30,31]. Consistente com isso, várias intervenções terapêuticas que diminuem a concentração de IL{10}} são capazes de
Figura 6: Os efeitos da suplementação dietética de ECD no antígeno de células-tronco-1 (Sca-1) nos linfócitos do sangue periférico de camundongos SAM-P8. Camundongos machos SAM-P8 e controle SAM-RI com oito meses de idade foram divididos em 5 grupos. Os 3 grupos de tratamento de animais SAM-P8 foram alimentados por quatro semanas com dietas suplementadas com doses baixas (100mg/kg), médias 500mg/kg) e altas 250 mg/kg) de ECD e os dois grupos de animais controle foram alimentados no mesma dieta sem suplementação. Após jejum de 12 horas, o sangue periférico foi coletado de animais anestesiados e submetido à análise FACS, tudo conforme descrito na Seção 5. (a) Gráficos FACS representativos dos diferentes grupos de camundongos gerados por bloqueio no antígeno de células-tronco-1 (Sca{{ 20}})células positivas.(b) Histograma mostrando a porcentagem de células-tronco antigênicas-1 (Sca-1)células positivas no sangue periférico dos diferentes grupos de animais. As barras representam a carne SD(em cada grupo,{ {23}}).w*<0.01 sam-p8="" versus="" sam-r1;**=""><0.01 each="" treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">
Figura 7: Os efeitos da suplementação dietética de ECD na apoptose e necrose de linfócitos em camundongos SAM-P8 envelhecidos. Camundongos machos SAM-P8 e controle SAM-RI com oito meses de idade foram divididos em 5 grupos. Os 3 grupos de tratamento de animais SAM-P8 foram alimentados por quatro semanas com dietas suplementadas com doses baixas (100mg/kg), médias (500mg/kg) e altas (2500mg/kg) de ECD e os dois grupos de animais controle foram alimentados com a mesma dieta sem suplementação. Após jejum de 12 horas, o sangue periférico foi coletado de animais anestesiados e submetido à análise FACS, conforme descrito na Seção 5. (a) Gráficos FACS representativos dos diferentes grupos de camundongos gerados por gating em linfócitos sanguíneos duplamente corados com anexina V-FITC /PI. (b) Histograma mostrando a porcentagem de linfócitos apoptóticos (células positivas para anexina V-FITC) no sangue periférico dos diferentes grupos de animais. (c) Histograma mostrando a porcentagem de linfócitos necróticos (células PI-positivas) no sangue periférico dos diferentes grupos de animais. As barras representam o SD médio (em cada grupo,= 10)."<0.05 sam-p8=""><0.05each treated="" groupversussam-p8group(by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">
Figura 8: Efeitos da suplementação dietética de ECD no nível sérico de citocina pró-inflamatória L6 de camundongos SAM-P8. Camundongos SAM-P8 machos de oito meses de idade e camundongos controle SAM-RI foram divididos em 5 grupos. Os 3 grupos de tratamento de animais SAM-P8 foram alimentados por quatro semanas com dietas suplementadas com baixo (100mg/kg), médio kg) e altas (2500mg/kg) doses de ECD, e os dois grupos de animais controle foram alimentados com a mesma dieta sem suplementação. Após jejum de 12 horas, os plasmas foram coletados e as citocinas plasmáticas nos diferentes grupos de animais foram determinadas por imunoensaio de matriz de esferas citométricas, tudo conforme descrito na Seção 5.(a) EACSplots representativos dos diferentes grupos de camundongos gerados por gatingonIL-6 matriz de contas citométricas. (b) Histograma mostrando as concentrações da citocina IL6 no plasma dos diferentes grupos de animais. As barras representam a média±DP(em cada grupo,= 10).<0.001each treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">
aliviar as doenças relacionadas com a idade [18]. Nesse contexto, foi significativo que, neste estudo, a suplementação dietética com ECD foi capaz de reduzir as concentrações periféricas de IL-6, com a implicação de que esse efeito pode contribuir para os mecanismos subjacentes de redução da frequência de doenças relacionadas à idade que foram obtidos através do uso a longo prazo do ECD na prática clínica.
Juntamente com as mudanças na resposta imune adaptativa que ocorrem com a idade, há também grandes mudanças na imunidade inata à medida que o organismo envelhece. Entre estas, as mudanças nas células natural killer [18], a primeira linha de componentes celulares para fornecer lise citotóxica direta de células tumorais e células infectadas por vírus, têm sido extensas, uma vez que os idosos mostram maior suscetibilidade ao desenvolvimento de tumores e infecções por vírus [32]. ]. Este estudo indicou que as células CD3 mais Ly49 mais NK estavam presentes em níveis significativamente mais baixos em camundongos senis SAM-P8 em comparação com animais controle SAM-R1, o que pode ser outro fator subjacente responsável pelo aumento da suscetibilidade de camundongos idosos ao câncer e à infecção por vírus. O aumento no nível de células NK observado neste estudo após a suplementação dietética com ECD pode, portanto, ser benéfico para organismos idosos em termos de maior resistência ao desenvolvimento de tumores e infecção por vírus. No entanto, mais estudos são necessários para esclarecer o papel do efeito do ECD nas células NK em organismos envelhecidos.
Em conclusão, este estudo mostrou que o tratamento da subcepa propensa a camundongos acelerada pela senescência, SAM-P8, com ECD pode induzir uma reversão significativa das alterações de imunossenescência relacionadas à idade. As deficiências nas populações de células T periféricas e do baço de células T virgens e células NK foram reduzidas, enquanto os níveis de células de memória redundantes também foram reduzidos. Além disso, a suplementação dietética com ECD foi capaz de suprimir tanto necroses em linfócitos periféricos quanto os níveis da citocina pró-inflamatória, IL-6. Finalmente, além de provocar mudanças no sistema imunológico senil, a suplementação dietética de ECD prolongou significativamente a vida útil do microfone senileSAM-P8.
Referências
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