Como Cistanche Prevenir Doenças Hepáticas

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Abstrato

Investigar as caracterizações preliminares, atividade antioxidante e hepatoprotetora de polissacarídeos deCistanche deserticola (CDPs), três frações de polissacarídeos, CDP-A, CDP-B e CDP-C, foram obtidas por filtração sucessiva por membrana (microfiltração, ultrafiltração e nanofiltração). Pesos moleculares, composições de monossacarídeos, purezas e espectros de IR das três frações foram analisados. Os resultados mostraram que CDP-C continha uma proporção maior de ácido galacturônico (GalUA) do que CDP-B e CDP-A. As atividades antioxidantes também foram analisadas e os resultados revelaram que o CDP-C possuía a maior atividade. Assim, a atividade hepatoprotetora de CDP-C foi mais estudada. Pesquisas in vitro, o CDP-C promoveu a viabilidade das células HepG2. Pesquisa in vivo, a CDP-C melhorou as alterações induzidas pelo álcool, incluindo índices sorológicos (alanina transaminase, fosfatase ácida, -glutamil transpeptidase e triglicerídeos) e indicadores hepáticos (superóxido dismutase, malondialdeído, glutationa S-transferase e triglicerídeos) no modelo animais. A esteatose microvesicular proeminente e necrose leve na histopatologia hepática de animais modelo também foram atenuadas pela administração de CDP-C. Esses achados indicaram que o CDP-C possui atividade hepatoprotetora contra lesão hepática crônica induzida pelo álcool. O mecanismo subjacente pode ser que o CDP-C pode reduzir o conteúdo de MDA e TG e modular as atividades da enzima relativa. Esta propriedade pode associar-se com GalUA em CDP-C.

Palavra-chave: Cistanche deserticola; Polissacarídeos; Caracterizações preliminares; Antioxidante; Atividade hepatoprotetora.

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1. Introdução

Cistanche é um holoparasita perene e é distribuído principalmente na região desértica do noroeste da China [1, 2]. O caule da espécie Cistanche (Orobanchaceae) foi registrado pela primeira vez na Matéria Médica Chinesa de Shen Nong. Cistanche tem sido usado como um medicamento tradicional à base de plantas para o tratamento de deficiência renal, impotência, constipação senil, dor e fraqueza da cintura e joelhos e deficiência de sangue [3, 4]. Pesquisas farmacológicas revelaram que Cistanche tem atividade anti-inflamatória [5, 6], atividade anti-osteoporose [7, 8], efeito sedativo [9], atividade antifadiga [10], efeito neuroprotetor [11]. Além disso, os polissacarídeos de Cistanche deserticola (CDPs) têm efeitos anti-hiperglicêmicos e hipolipidêmicos [12], atividade imunológica [13] e efeito de proliferação em linfócitos [14].

O álcool, uma bebida consumida em todo o mundo, e aditivo alimentar induziu quase 2,5 milhões de mortes a cada ano no mundo [15, 16]. Essas mortes estão relacionadas principalmente à doença hepática induzida pelo abuso de álcool [17, 18]. A doença hepática induzida pelo álcool é uma progressão crônica complexa de várias etapas, normalmente evoluindo da esteatose alcoólica para a hepatite alcoólica e, finalmente, para a cirrose alcoólica [19]. Assim, identificar produtos naturais ativos para esses consumidores de álcool para prevenir ou retardar a progressão da lesão hepática alcoólica no estágio inicial é uma estratégia de gerenciamento benéfica.

Cistanche deserticola YC Ma e Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight são duas espécies medicinais registradas na Farmacopeia Chinesa [3]. Muitos trabalhos elucidaram as atividades hepatoprotetoras de C. tubulosa [20-24] e C. deserticola [25, 26]. Mas essas pesquisas hepatoprotetoras sempre visaram a lesão hepática aguda induzida por tetracloreto de carbono (CCl4) ou D-galactosamina e lipopolissacarídeo, mas não se preocuparam com a lesão hepática crônica relacionada ao abuso de álcool. Além disso, esses relatórios foram focados principalmente no mecanismo dos glicosídeos feniletanoides (PhGs) em vez dos CDPs. Portanto, no presente estudo, foram investigadas as caracterizações preliminares de CDPs e suas atividades antioxidantes (in vitro). Além disso, o modelo de lesão hepática de camundongos ICR induzido por vinho branco foi estabelecido para examinar a atividade hepatoprotetora de CDPs contra lesão hepática crônica induzida por álcool.

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2. Materiais e métodos

2.1. Materiais

As hastes de C. deserticola foram coletadas da Liga Alashan, Mongólia Interior da China,e identificado pelo Prof. Xiaodong Wang (Divisão de Engenharia de Biorrefinaria, Instituto de Engenharia de Processos, Academia Chinesa de Ciências, Pequim, PR China).

Dimetilsulfóxido (DMSO), 2, 2-azino-bis (3-etilbenztiazolina-6-ácido sulfônico) (ABTS), 3-(4, 5-dimetiltiazol{ {8}}il)-2, 5-brometo de difeniltetrazólio (MTT) e 1, 1-difenil-2-picril-hidrazil (DPPH) foram adquiridos da Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, EUA). O Meio de Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) e o soro fetal de bovino (FBS) foram adquiridos à Invitrogen, Inc. O espírito branco Er Guo-tou foi adquirido à Beijing Red Star Co., LTD. O biciclol foi adquirido da Beijing Union Pharmaceutical Factory. As soluções aquosas foram preparadas com água ultrapura de um sistema de purificação de água Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, EUA). Todos os outros reagentes foram de grau analítico.

2.2. Extração de CDPs e filtração fracionada

Os CDPs brutos foram preparados de acordo com o método relatado anteriormente pelo nosso grupo [27] com ligeira modificação. Resumidamente, o pó (40 mesh) de C. deserticola (50 kg) foi extraído por ultra-som (40 kHz e 6 kW) com 1000 L de solução aquosa de etanol (50 por cento, v/v) a 60 ◦C por 120 min. Os polissacarídeos foram separados do extrato com resina macroporosa (HPD 300). A solução de polissacarídeo foi concentrada sob pressão reduzida, desproteinizada usando o método de Sevag [28], e liofilizado o produto foi chamado de CDPs brutos.

Em seguida, 50 g dos CDPs brutos foram dissolvidos em 2,5 L de água ultrapura e separados sucessivamente com a microfiltração, ultrafiltração e nanofiltração (os pontos de corte do peso molecular nominal foram 300 kDa, 10 kDa e 200 Da. Membrana efetiva área foi de 0,625 m2). A solução retida de microfiltração foi liofilizada e denominada CDP-A. A solução permeada de microfiltração foi filtrada com ultrafiltração, enquanto a solução retida foi liofilizada e denominada CDP-B. A solução permeada de ultrafiltração foi filtrada com nanofiltração, a solução retida foi liofilizada e denominada CDP-C.

2.3. Caracterizações preliminares de CDPs

Os tamanhos moleculares de CDPs foram avaliados de acordo com o método relatado anteriormente denosso grupo [29]. As composições de monossacarídeos foram analisadas usando o método descrito por P. Zhang et al [30]. As purezas foram determinadas de acordo com o método fenol-ácido sulfúrico [31]. Os teores de proteína foram determinados usando o método mencionado por Bradford e Maja Kozarski [32, 33]. Os espectros de FT-IR de CDPs foram capturados com um espectrômetro de infravermelho de transformada de Fourier (FT/IR-660 Plus, JASCO) na faixa de 400~4000 cm-1.

2.4. Atividades antioxidantes

Os efeitos de eliminação dos CDPs nos radicais hidroxila, ânion superóxido, DPPH e ABTS foram avaliados de acordo com os métodos descritos por Sun [34], Wang [35], Yap [36] e Fatiha [37], respectivamente.

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2.5. Atividade hepatoprotetora de CDP-C in vitro

Com base nos resultados do ensaio antioxidante, o CDP-C foi selecionado para estudar a atividade hepatoprotetora. As células HepG2 (compradas do China Center for Type Culture Collection, Pequim, China) foram cultivadas em DMEM contendo FBS inativado pelo calor (10 por cento), estreptomicina (0,1 ug/mL), penicilina (100 UI/mL) e aminoácido não essencial. As células foram incubadas em uma atmosfera umidificada de 5 por cento de CO2 a 37 graus, colhidas na fase de crescimento exponencial, semeadas em 96-placas de poço (4×104 células por poço, 100 μL) e incubado por 24 h. As células do grupo negativo foram tratadas com álcool (a concentração final foi de 3,5 por cento, v/v) enquanto o grupo ingênuo foi tratado com água. As células do grupo positivo foram tratadas com álcool e biciclol (a concentração final foi de 200ug/mL). As células dos quatro grupos de teste foram tratadas com álcool e CDP-C (a concentração final de CDP-C foi 0,11, 0,3333, 1,00 e 3,00 mg/mL). Todas as células foram cultivadas por mais 48 h.

A viabilidade das células HepG2 foi determinada pelo método de ensaio MTT mencionado por J. Tong et al [38] com ligeira modificação. Resumidamente, MTT (5 mg/mL, 20 μL por poço) foi adicionado às placas de poço 96-semeadas por células e as células foram incubadas por 4 h. As soluções foram removidas e DMSO (150 μL/poço) foi adicionado. A absorbância de cada poço foi medida a 492 nm usando um 96-leitor de placas de poços (Thermo Scientific, America). A viabilidade celular foi calculada usando a seguinte fórmula:

Viabilidade celular ( por cento )=(A amostra- Ablank) ×100/ (A ingênuo- Ablank)

Onde A amostra foi a absorbância do grupo experimental; Um ingênuo foi a absorbância do grupo controle sem amostra; Um branco foi a absorbância do meio de cultura sem nenhuma amostra e célula semeada.

2.6. Atividade hepatoprotetora de CDP-C in vivo

2.6.1. Animais

Camundongos ICR fêmeas adultas (22-25 g, adquiridos do Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd. O número de licença do animal era 11400700128) foram utilizados. Os animais foram alojados em uma sala ambientalmente controlada com ração e água ad libitum (umidade relativa foi de 40-60 por cento, 22-26 graus), ventilação do ar foi de 12-18 vezes/h e condição de irradiação de luz foi um ciclo claro/escuro de 12 h de 150-300 lux. Os camundongos foram aclimatados às condições da sala dos animais por 7 dias antes dos experimentos. Todos os procedimentos envolvendo animais ao longo dos experimentos foram conduzidos em estrita conformidade com as regras de Uso de Animais de Laboratório, conforme adotadas e promulgadas pelos Institutos Nacionais de Saúde dos Estados Unidos.

2.6.2. Design experimental

Os camundongos ICR foram divididos aleatoriamente em seis grupos (grupo ingênuo, grupo controle negativo, grupo controle positivo e três grupos de teste) com 10 animais em cada grupo. O grupo naive foi administrado por via oral com água destilada. O grupo controle negativo foi administrado por via oral com álcool (Er Guo-tou white spirit, 56 por cento, 6 mL/kg). O grupo controle positivo foi administrado oralmente com biciclol (300 mg/kg) e 5 horas depois com álcool. Três grupos de teste foram administrados oralmente com CDP-C na dose de 200, 600, 1800 mg/kg e 5 horas depois com álcool. Todos os camundongos foram administrados por 31 dias consecutivos.

2.6.3. Determinação de índices sorológicos

Cerca de 4 h após o último tratamento alcoólico, o sangue foi coletado da cavidade ocular e centrifugado a 3000 g por 15 min. Após a separação do soro, as atividades enzimáticas da alanina transaminase (ALT), fosfatase ácida (ACP), -glutamil transpeptidase (-GTP) e triglicerídeos (TG) foram determinadas usando kits de diagnóstico.
2.6.4. Determinação de indicadores hepáticos

Após a coleta de sangue, todos os camundongos foram executados. O fígado de cada camundongo foi imediatamente extirpado, lavado com soro fisiológico. Um pedaço de tecido hepático foi separado do lobo esquerdo. Em seguida, o tecido foi picado e homogeneizado com solução aquosa de cloreto de potássio (1,15 por cento, p/v) em um homogeneizador de vidro (Potter Elvehjem Teflon) por 60 segundos para fazer um homogeneizado de fígado (10 por cento p/v). As atividades enzimáticas da superóxido dismutase (SOD), malondialdeído (MDA), glutationa S-transferase (GST) e os teores de triglicerídeos (TG) foram medidos usando os kits de diagnóstico.

2.6.5. Estudos histopatológicos

A parte residual do fígado foi fixada em fixador de Bouin por 24 h, após desidratação em solução aquosa de etanol (50-100 por cento, v/v), o tecido hepático foi clareado em xileno e incluído em parafina. Os cortes hepáticos (5 mm) foram corados com hematoxilina de alúmen e eosina (HE). Imagens de cortes hepáticos e alterações histopatológicas foram capturadas por um microscópio de luz (Nikon-DS-L1-5M).

2.7. Análise estatística

Os dados foram expressos como média ± erro padrão da média (SEM) de três (análise de composição química e ensaio antioxidante), cinco (viabilidade celular) ou dez (pesquisa in vivo) experimentos independentes. As significâncias estatísticas das diferenças entre os grupos foram analisadas por análise de variância unidirecional (ANOVA) seguida por um teste de intervalo múltiplo de Student-Newman-Keuls usando o software SPSS 19.0. Em todas as análises, p<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3 Resultados e discussão

3.1. Caracterização dos CDPs

Conforme mostrado na Fig. 1A, o CDP-A contém dois grupos, os pesos moleculares são 4000 kDa e 3946 kDa. Os pesos moleculares de CDP-B e CDP-C são 2400 kDa e 1300 kDa. As composições de monossacarídeos são mostradas na Fig. 1B. CDP-A, CDP-B e CDP-C contêm seis monossacarídeos essenciais com diferentes proporções, incluindo manose (Man), ramnose (Rha), ácido galacturônico (GalUA), glicose (Glc), galactose (Gal) e arabinose ( Ara). Além dos seis monossacarídeos mencionados acima, a xilose (Xil) também aparece no CDP-C. Além disso, o CDP-C contém uma proporção maior de GalUA do que as outras duas frações.

As purezas e teores de proteína de CDPs são exibidos na Tabela 1. A Tabela 1 mostra que CDP-A tem a pureza mais alta, que é 75,57 por cento, enquanto as purezas de CDP-B e CDP-C são 74,72 por cento e 68,92 por cento, respectivamente. Os teores de proteína de CDP-A, CDP-B e CDP-C são 1,27 por cento, 1,24 por cento e 1,05 por cento, respectivamente.

Tabela 1.Purezas e conteúdo proteico de CDPs. Os dados são as médias ± SEM de três réplicas.

Os espectros FT-IR de carboidratos são usados ​​para determinar suas características estruturais e são normalmente usados ​​para a análise qualitativa de grupos funcionais orgânicos, especialmente para OH, CO e C=O [39]. Os espectros FT-IR de CDPs são mostrados na Fig. 1C. Cada espectro mostra um pico de estiramento forte e amplo em torno de 3293 cm−1 para vibração de estiramento OH, bem como um pico de absorção fraco em 2939 cm−1 para vibração de estiramento CH. A banda de absorção em 1650 cm−1 é causada pela vibração de estiramento assimétrico C=O. A ampla banda de absorção em 1418cm−1 é atribuída à vibração deformante da ligação CH. Cada polissacarídeo em particular tem uma banda específica na região 1000-1200 cm−1, que é dominada pela vibração do anel sobreposta à vibração de alongamento dos grupos laterais (C-OH) e a vibração da banda glicosídica (COC). A absorção em 1036 cm−1 indica uma forma de açúcar piranose. Uma absorbância de aproximadamente 829 cm−1 sugere a ligação de -glicosídeos na estrutura molecular das CDPs. Conforme mostrado na Fig. 1 C, a banda de absorção de CDP-C em 1650 cm−1 é mais forte que CDP-A e CDP-B, o que significa que o conteúdo de C=O em CDP-C é maior que aqueles em CDP-A e CDP-B. Este resultado é consistente com os resultados da Fig. 1 A, que revela que a proporção de GalUA em CDP-C é maior do que em CDP-A e CDP-B.

3.2. Atividades antioxidantes de CDPs

3.2.1. Ensaio de radical hidroxila

Entre as espécies reativas de oxigênio, o radical hidroxila é o mais reativo e induz graves danos às biomoléculas adjacentes [40]. Para o radical hidroxila, existem dois tipos de mecanismos de antioxidação: um é a eliminação do radical hidroxila já gerado e outro é a supressão da geração do radical hidroxila. Para este último, o radical hidroxila é gerado pela reação do complexo Fe(II) com peróxido de hidrogênio. As atividades antioxidantes das CDPs podem ligar-se aos íons metálicos, que não reagem com H2O2 e produzem radical hidroxila, mas quelam com CDPs e formam o complexo metálico. O complexo de metal não pode reagir com H2O2 para dar radical hidroxila [41-43]. Portanto, os CDPs mostram os efeitos de eliminação do radical hidroxila.

A Fig. 2 A mostra as capacidades de eliminação de CDPs no radical hidroxil de uma maneira dependente da concentração. A taxa de eliminação de CDP-A, CDP-B e CDP-C é de 29,56%, 33,44% e 38,22%, respectivamente. CDP-C exibe maior atividade de eliminação de radicais hidroxila. Considerando que CDP-C contém uma proporção maior de GalUA do que CDP-A e CDP-B, os antioxidantes de CDPs podem estar relacionados não apenas à propriedade de ligação de íons metálicos, mas também aos conteúdos de GalUA, Ara e Gal [{{15 }}].

3.2.2. Ensaio de radical de ânion superóxido

O radical ânion superóxido é uma espécie tóxica que é gerada por inúmeras reações biológicas e fotoquímicas e, assim, induzindo dano tecidual [47]. Embora o ânion superóxido seja um oxidante relativamente fraco, ele desempenha um papel importante na formação de outras espécies oxidativas reativas mais fortes, como oxigênio singlete e radical hidroxila. A Fig. 2 B mostra a relação entre as concentrações e as capacidades de eliminação de CDPs em radicais de ânion superóxido. À medida que a concentração aumenta, CDP-C exibe maior capacidade de eliminação do que CDP-B e CDP-A.

3.2.3. Ensaio de radical DPPH

O DPPH, um dos compostos estáveis ​​centrados em nitrogênio que possui um radical livre de prótons com uma absorção característica em 517nm, diminui significativamente com a exposição a sequestradores de radicais de prótons, portanto, é amplamente utilizado para estimar as atividades de eliminação de radicais livres de antioxidantes. É bem aceito que o radical livre DPPH eliminado pelos antioxidantes é devido às suas habilidades de doação de hidrogênio. Os antioxidantes transferem elétrons ou átomos de hidrogênio para o radical DPPH e formam DPPH-H, que é uma formação não radical [49].

Os efeitos de eliminação de DPPH totais de todas as amostras foram testados e os resultados são apresentados na Fig. 2 C. As capacidades de eliminação de CDPs no radical DPPH apresentam uma forma dependente da concentração. À medida que a concentração aumenta de 1.0 para 5.0 mg/mL, as habilidades de eliminação de CDP-C aumentam de 52,5 por cento para 58,7 por cento , superior ao CDP-B (de 34,2 por cento para 56,8 percent ) e CDP-A (de 12,5 por cento para 52,8 por cento ). O efeito de eliminação de DPPH de CDP-C pode estar associado aos grupos carbonila em GalUA.

3.2.4. Ensaio de radical ABTS

O ensaio radical ABTS é frequentemente usado para medir o poder antioxidante total de um antioxidante potente das amostras de teste [50]. Os efeitos de eliminação de ABTS de todas as amostras são mostrados na Fig. 2 D. As habilidades de eliminação de CDPs em radicais ABTS exibem uma maneira dependente da dose. A IC50 de CDP-A, CDP-B e CDP-C são cerca de 4,0 mg/mL, 2,5 mg/mL e 1,2 mg/mL, respectivamente. Os resultados indicam que CDPs possuem atividade de eliminação de ABTS.

Em resumo, a atividade antioxidante de CDP-C foi maior que CDP-A e CDP-B. Relatou que algumas atividades farmacológicas de polissacarídeos estavam relacionadas ao seu GalUA[51]. Neste experimento, a proporção de GalUA em CDP-C foi maior do que em CDP-A e CDP-B, o CDP-C foi selecionado para investigar o efeito hepatoprotetor contra doença hepática crônica induzida pelo álcool.

3.3. Os efeitos do CDP-C na viabilidade das células HepG2

Medir a viabilidade celular é uma maneira comum de avaliar a eficácia de drogas naturais [52]. Com base nos resultados de que o CDP-C possui a maior atividade antioxidante, foram avaliados os efeitos do CDP-C na viabilidade das células HepG2. Os resultados são mostrados na Fig. 3. O tratamento alcoólico induziu marcada diminuição da viabilidade das células HepG2. Mas o CDP-C pode melhorar notavelmente as taxas de sobrevivência quando comparado com o grupo negativo. Conforme mostrado na Fig. 3, a viabilidade celular não exibe uma maneira dependente da concentração com precisão com CDP-C. Por outro lado, quando a concentração de CDP-C atinge 3,00 mg/mL, a viabilidade das células HepG2 diminui drasticamente. A razão para a diminuição da viabilidade celular pode ser que uma baixa concentração de CDP-C foi útil para a sobrevivência das células HepG2. No entanto, quando a concentração de polissacarídeos no meio de cultura foi alta o suficiente para alterar o microambiente das células, a viabilidade das células HepG2 foi inibida.

3.4. Efeitos farmacológicos do CDP-C

3.4.1. Os efeitos do CDP-C nos índices sorológicos

O abuso de álcool é responsável por quase 4% de todas as taxas de mortalidade, o que se tornou um grave problema social no mundo. No corpo humano, o álcool é metabolizado no fígado após ser absorvido pela mucosa gástrica e do intestino delgado [53-55]. As doenças hepáticas alcoólicas normalmente ocorrem após anos de abuso de álcool [56]. Condições comumente patológicas, como fígado gorduroso, hepatite, fibrose e cirrose [57], ou mesmo doenças cancerígenas, como carcinoma hepatocelular e câncer de cólon [58], são observadas em distúrbios hepáticos ligados ao álcool. Portanto, o álcool é um hepatotóxico típico e é amplamente utilizado como indutor de lesão hepática em pesquisas científicas [59]. Considerando que as doenças hepáticas induzidas pelo álcool são frequentemente causadas por bebidas alcoólicas e aditivos alimentares em vez de etanol industrial, o espírito branco Er Guo-tou foi usado para estabelecer um modelo de lesão hepática em camundongos ICR neste estudo. O biciclol é um agente comum usado para tratar uma lesão hepática crônica, por isso foi usado para definir um modelo de controle positivo.

As células hepáticas contêm maiores concentrações de ALT no citoplasma e nas mitocôndrias. Devido a vários danos nas células hepáticas, o vazamento de citosol causará um aumento de ALT no soro. Assim, a promoção de ALT é o indicador de vazamento celular e distúrbios funcionais do fígado [60]. Portanto, o nível sérico de ALT geralmente é definido como o indicador para avaliar a saúde do fígado [61]. Por razões semelhantes, -GTP, ACP e TG também são usados ​​como indicadores para avaliar a condição de saúde do fígado [62].

No presente estudo, a atividade hepatoprotetora do CDP-C foi avaliada pela determinação dos níveis de ALT, ACP, -GTP e TG. Os resultados são mostrados na Fig. 4 A, B, C e D. Quatro indicadores séricos drasticamente promovidos pelo tratamento alcoólico no grupo negativo. Mas o CDP-C pode atenuar essas alterações induzidas pela administração alcoólica. No entanto, nem todos os índices sorológicos exibem uma forma dose-dependente com CDP-C. Na Fig. 4 A e B, CDP-C em baixa concentração tem um efeito significativo na restauração de ALT e ACP, mas o efeito de CDP-C na concentração mais alta não foi significativo. De fato, muitos produtos naturais são benéficos à saúde em baixas doses, mas prejudiciais à saúde em altas doses [60]. A razão pode ser que a ingestão excessiva de polissacarídeos afetará o metabolismo normal dos organismos.prejudicar a saúde do corpo. No entanto, o mecanismo detalhado precisa ser mais pesquisado.

3.4.2. Os efeitos do CDP-C nos indicadores hepáticos

Organismos sujeitos ao estresse oxidativo geralmente desenvolveram um mecanismo de defesa antioxidante, e a SOD é um sistema antioxidante típico baseado em enzimas [63]. A SOD catalisa a dismutação do ânion superóxido em O2 e H2O2 [64]. GST, uma proteína solúvel localizada no citosol, também desempenha um papel importante na desintoxicação do fígado. Pelas razões mencionadas acima, SOD e GST tornam-se os indicadores da hepatotoxicidade induzida pelo álcool. MDA e TG no fígado também são usados ​​como indicadores de hepatotoxicidade [65].

No presente estudo, os efeitos da CDP-C na função hepática são mostrados na Fig. 5. As figuras A, B, C e D exibem os efeitos da CDP-C na SOD, MDA, GST e TG, respectivamente. Essas quatro imagens mostram que os camundongos tratados com álcool diminuem acentuadamente os níveis de SOD e GST e aumentam os níveis de MDA e TG, mas o CDP-C pode atenuar essa alteração evidentemente. Semelhante aos fenômenos descritos na seção 3.4.1, os indicadores hepáticos também não foram dependentes da dose com o CDP-C. A razão para isso pode ser semelhante ao mecanismo ilustrado na seção 3.4.1. Estudos anteriores relataram que os efeitos de polissacarídeos em SOD e catalase podem estar associados à indução de expressões gênicas de SOD e catalase [66]. No entanto, ainda são necessários mais estudos para elucidar o mecanismo hepatoprotetor da CDP-C e a relação entre sua estrutura e função.

3.5. Efeitos histopatológicos de CDP-C em camundongos induzidos por álcool

Com base nas observações histopatológicas dos cortes hepáticos, o grupo naive exibiu arquitetura celular normal com células hepáticas distintas e sem anormalidades histológicas (Fig. 6 A). Em comparação, a administração alcoólica causou sérios danos ao fígado em camundongos do grupo negativo. As secções do fígado mostraram deposição de gordura de hepatócitos, necrose e inchaço dos hepatócitos, formação de vacúolos nas células e os limites celulares também desapareceram (Fig. 6 B). As seções de fígado dos camundongos administrados com biciclol (Fig. 6 C), com doses variadas de CDP-C (Fig. 6 DF) exibiram evidentemente a restauração daquelas distorções que apareceram no grupo controle negativo. Esses resultados validaram que o álcool induziu certa distorção nos hepatócitos do grupo controle negativo. No entanto, o CDP-C restaurou essas alterações.

É bem aceito que o efeito hepatoprotetor dos polissacarídeos está associado à sua atividade antioxidante [67, 68]. O alto teor de ácido urônico provou ser benéfico para os efeitos antioxidantes dos polissacarídeos [44, 45]. Polissacarídeos ricos em Gal e Ara também foram verificados como possuindo maiores efeitos antioxidantes [46]. No entanto, é difícil para os grandes polissacarídeos moleculares entrarem diretamente nas células epiteliais intestinais. Para o CDP-C (com peso molecular de 1300kDa), não é fácil entrar diretamente no corpo e desempenhar o papel hepatoprotetor. Relatórios publicados revelaram que os pesos moleculares dos polissacarídeos diminuíram após a digestão gástrica e intestinal [69]. Assim, assumimos que o CDP-C pode ser degradado em polissacarídeos com baixo peso molecular e absorvido pelas células epiteliais intestinais. As extremidades redutoras dos polissacarídeos podem ser aumentadas devido à quebra das ligações glicosídicas [69, 70]. De acordo com a composição de monossacarídeos do CDP-C, os polissacarídeos degradados com baixo peso molecular devem conter GalUA, Ara e Gal. Portanto, esses polissacarídeos de baixo peso molecular, que possuem extremidades redutoras e contêm GalUA, Ara e Gal, podem desempenhar o papel de proteção do fígado no corpo. No entanto, o mecanismo detalhado precisa ser mais pesquisado.

4. Conclusões

De acordo com as análises de composição de monossacarídeos e espectros de FT-IR, todas as três frações de CDPs continham Man, Rha, GalUA, Glc, Gal e Ara. O CDP-C continha uma grande proporção de GalUA. CDP-C teve a maior atividade antioxidante. Os resultados da pesquisa in vitro e da Vivo ilustraram que o CDP-C possui atividade hepatoprotetora contra lesão hepática crônica induzida pelo álcool. O mecanismo subjacente estava relacionado à modulação das atividades enzimáticas relativas, reduzindo MDA e TG no fígado. A atividade fisiológica de CDP-C pode se associar com GalUA. Esses achados fornecem novos insights sobre os alvos farmacológicos de C. deserticola na prevenção da doença hepática alcoólica.

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