Contato: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Yu Lixin Chen Xueqiang Wu Qunfeng Dong Weiqin Guo Songhua Yu Jian Feng Wei Yang Lei Fu Yifeng Li Junjie Luo Cheng

1 O 98º Hospital do Exército de Libertação do Povo Chinês, Huzhou, Zhejiang 313000

2 Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Zhejiang, Hangzhou, Zhejiang 310053

3 Hospital de Ortopedia de Medicina Tradicional Chinesa de Fuyang, cidade de Hangzhou, província de Zhejiang, Hangzhou 311400, Zhejiang, China

Abstrato

Objetivo: Observar o efeito daCistancheextrato de águana cura deosteoporóticofraturas em ratos e explorar seu mecanismo. Métodos: Ratas SD de grau SPF foram divididas aleatoriamente em grupo controle, grupo modelo e grupo de tratamento, e modeladas de acordo com métodos relacionados. 24 horas após a modelagem da fratura, o grupo controle e o grupo modelo receberam gavagem salina normal, e o grupo de tratamento foi gavage comCistancheextrato de água uma vez por dia. Após 2 semanas e 6 semanas de intervenção, foi coletado sangue da aorta abdominal para detecção de interleucinas. Níveis de TP (IL-1 B) e fator de crescimento transformador-B l (TGF-8 1), coletar espécimes de fratura ao mesmo tempo, realizar micro-TC após a fixação, medir R0 I fração do volume ósseo do calo (BV/TV) e outros parâmetros relacionados Após a descalcificação, desidratação e inclusão, foi transformado em blocos de cera para uso. Resultados: 6 semanas após o estabelecimento do modelo de osteoporose, a densidade mineral óssea dos ratos do grupo modelo e do grupo de tratamento foi menor que a do grupo controle (P<0.05), but="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" treatment="" group="" and="" the="" model="" group.="" although="" the="" bone="" density="" of="" the="" treatment="" group="" is="" still="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" it="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" model="" group=""><0.05). micro-ct="" scan="" shows="" the="" treatment="" group="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" tb.="" n,="" tb.="" th,="" smi="" was="" better="" than="" the="" model="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks="" after="" the="" intervention,="" and="" the="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" smi="" parameters="" of="" the="" control="" group="" and="" the="" treatment="" group="" were="" not="" different="" from="" those="" of="" the="" treatment="" group.="" obviously,="" the="" micro-ct="" parameters="" of="" the="" model="" group="" at="" 2-time="" points="" were="" inferior="" to="" the="" control="" group.="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" comparing="" the="" serum="" ilt="" b="" and="" tgf-p="" 1="" levels="" of="" the="" 3="" groups,="" it="" was="" found="" that="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups="" at="" 2="" weeks.="" at="" 6="" weeks,="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups.="" the="" control="" group,="" but="" still="" significantly="" lower="" than="" the="" model="" group=""><0.05); in="" terms="" of="" tgf-b="" 1="" level,="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistical="" difference="" between="" the="" control="" group="" and="" the="" control="" group.="" significance.="" conclusion:="" according="" to="" the="" analysis="" of="" bone="" mineral="" density,="" micro-ct="" scan="" parameters,="" and="" serum="" il-1="" b="" and="" tgf-b="" 1="" levels,="" it="" is="" found="" that="" the="" aqueous="" extract="" of="">Cistanchepode promover a cura deosteoporóticofraturas, e seu mecanismo pode estar relacionado à inibiçãoosteoporóticofraturas. Após o soro de rato IL-1 B e promover a secreção de TGF-8 1, que pode melhorar a osteoporose e promover a cicatrização de fraturas.

Palavras-chave: fratura osteoporótica, Cistanche, consolidação de fratura, rato

A osteoporose é uma doença na qual a densidade óssea é diminuída, a estrutura fina do tecido ósseo é destruída e a fragilidade do osso é aumentada. Os pacientes podem causar fraturas sob força externa leve na vida diária. É uma doença clínica comum e uma doença de ocorrência frequente. Além disso, esse tipo de fratura é majoritariamente de pacientes idosos, muitas vezes associada a outras doenças, e a maioria das fraturas são cominutivas, com pouca estabilidade, e às vezes ocorre lentidão ou não consolidação da fratura, e há uma alta taxa de incapacidade e letalidade. Atualmente, seu tratamento se dá principalmente por meio de cirurgia, restauração manual e tratamento anti-osteoporose. Há uma falta de medicamentos de tratamento direcionados para pacientes comosteoporóticofraturas. A medicina tradicional chinesa tem uma longa história de tratamento da osteoporose e tem um efeito positivo. Muitos medicamentos tradicionais chineses foram comprovados para melhorar os ossos. A pobreza também pode promover a cicatrização de fraturas. Rongrong é comumente usado como um medicamento representativo para nutrir o yang do rim e tem o efeito de nutrir o fígado e o rim. A medicina tradicional chinesa acredita que o rim rege o osso, e o tratamento das fraturas também é inseparável do rim e da essência. A farmacologia moderna descobriu que a cinza da carne também tem um certo efeito estrogênico. Este estudo pretende utilizar a medição da densidade óssea, Micro-CT e interleucina sérica-13 (IL-10), observação do nível do fator de crescimento transformante-P KTGF-P 1 e extrato aquoso da pasta de hérnia de carne na cura deosteoporóticofraturas em ratos

Cistanche

1Materiais e métodos

1.1 Animais experimentais e equipamentos reagentes: 52 ratos fêmeas SPF SD pesando 210~250g são criados no Centro de Experimentos Animais da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Zhejiang. Iodo complexo, Hangzhou Lonzo Medical Disinfectant Co., Ltd., lote número 20160720; Penicilina, North China Pharmaceutical Co., Ltd., número de lote F3117217; kit IL-18 (número do lote: 20160715), kit TGF-8 1 (número do lote: 20160722); Scanner de densidade óssea de raios X de dupla energia, 0STE0C0RE2; Micro-CT, Skyscan1176O

1.2 Extração deCistancheextrato de água: molhe o chãocistache(Fábrica Farmacêutica da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Zhejiang) 10 vezes água ultrapura por 0,5 horas, decocção de frigideira por 1,5 horas, repita a extração 2 vezes e o vaporizador rotativo líquido medicinal misturado Concentrar a uma concentração de 1,5 g /ml e guarde em geladeira a 4 graus para uso posterior.

1.3 Preparação da modelagem: Os pontos são os seguintes.

1.3. 1 Modelo de osteoporose: Os ratos foram criados adaptativamente por 1 semana antes da modelagem e divididos aleatoriamente em grupo controle, grupo modelo e grupo de tratamento, com 16 ratos, 18 ratos e 18 ratos, respectivamente, e cada grupo foi baseado no ponto de tempo de 2 semanas e 6 semanas. Cada um foi dividido em dois grupos. Tanto o grupo de tratamento quanto o grupo modelo foram anestesiados com 1% de pentobarbital sódico (0.4ml/100g), a pele foi anestesiada, desinfetada, coberta e cortada. Os ovários bilaterais da rata foram removidos. O grupo controle teve apenas uma incisão. Não faça

Remoção dos ovários

1.3. 2 Modelo de fratura: 6 semanas após a preparação do modelo de osteoporose, o modelo de fratura será preparado. Depois que os ratos em cada grupo são anestesiados, a densidade mineral óssea do fêmur médio é medida. , Incisão, fazer um modelo de fratura transversa do fêmur médio, fixá-lo com fio de Kirschner de 1mm, esterilizar e suturar a pele da incisão

1.4 Intervenção medicamentosa: A detecção de raios-X do fêmur foi realizada após a modelagem, os ratos que falharam na preparação do modelo foram eliminados e 80,000 unidades de penicilina foram injetadas por via intramuscular após a modelagem para prevenir a infecção. 24 horas após a operação, o grupo de tratamento recebeu o extrato aquoso de pasta de hérnia de carne (concentração 1,5g/ml, lg/kg, uma vez ao dia). O grupo controle e o grupo modelo receberam o mesmo volume de solução salina normal.

1.5 Coleta de amostras: Amostras de ratos foram coletadas 2 e 6 semanas após a intervenção. Após anestesia com pentobarbital sódico a 1%, 5-10ml de sangue foi coletado da aorta abdominal para preparação do soro e armazenado em geladeira -20B. poupar. Em seguida, os ratos foram sacrificados e as amostras de fratura do fêmur foram coletadas e colocadas em formaldeído neutro a 10% por 72 horas.

1.6 Indicadores de teste: Os pontos são os seguintes.

1.6. 1 Densidade mineral óssea: Todos os ratos após o modelo de osteoporose foram anestesiados antes do modelo de fratura e, em seguida, a densidade mineral óssea do fêmur médio foi medida. Os três grupos de ratos receberam amostras após 2 e 6 semanas de intervenção, e as amostras foram fixadas por 72 horas e então a densidade óssea foi medida novamente.

1.6. 2 Micro-CT: A micro-CT é realizada após a amostra ser fixada por 72 horas, com 200 fotos acima e abaixo da extremidade da fratura como a região de interesse (R01), ângulo de varredura de 360 ​​graus, corrente 555uA, voltagem 42kV, filtro Al 0,2mm, resolução 8,73um, após a finalização da reconstrução da imagem tridimensional e análise do calo. Os parâmetros de detecção são os seguintes: fração de volume ósseo BV/TV, fator de modelo trabecular ósseo (Tb. Pf); índice de modelo estrutural (SMI), etc."

1.6.3 Determinação de soro IL-1P e TGF-P1: Descongele o soro de rato da geladeira em -20 grau, e realize a detecção passo a passo de acordo com o IL-13 e instruções do kit TGF" 1.

1.7 Métodos estatísticos: utilizar o software de análise estatística SPSS.19 para processamento. Os dados experimentais são expressos em termos de média ± desvio padrão (G±s), e a densidade mineral óssea dos três grupos de ratos. Parâmetros de micro-CT JL-1 P JGF- P 1 níveis são calculados por análise de variância unidirecional, e comparações de pares entre grupos são usadas Inspeção, o nível de inspeção é P<0.>

2 resultados

2.1 Densidade óssea dos três grupos: ver Tabela 1.

Tabela 1 Resultados da densidade mineral óssea no fêmur médio de cada grupo de ratos (x±s, g/cm²)

Nota: Comparado com o grupo de modelos, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group.△=""><>

2.2 Corte bidimensional micro-CT: o corte transversal bidimensional sagital seleciona as imagens do eixo longitudinal do fêmur em cada ponto de tempo em cada grupo (ver Figura 1), e o corte transversal bidimensional horizontal a seção seleciona a 100ª foto abaixo da linha de fratura para comparação (Figura 2) ), pode-se observar na figura que o calo de cada grupo aumentou gradualmente ao longo do tempo, mas era plástico em diferentes graus 6 semanas após a fratura; ao mesmo tempo, pode-se ver que o calo no grupo controle era grande, e o córtex do calo era espesso e rastejava pela linha de fratura após 6 semanas, enquanto o calo no grupo modelo havia menos osso no calo em 2 semanas, e o córtex do calo estava solto após 6 semanas. Embora o volume do calo no grupo de tratamento não tenha sido grande em 2 semanas, a massa óssea no calo foi maior do que no grupo modelo. O calo estava melhor moldado após 6 semanas. E a linha de fratura não é óbvia.

Grupo de controle Grupo modelo Grupo de tratamento

Figura 1 O corte sagital do fêmur médio de cada grupo

Figura 2 Corte horizontal do fêmur médio de cada grupo

2.3 Reconstrução tridimensional com micro-TC: a reconstrução tridimensional do calo na extremidade fraturada do fêmur é mostrada na Figura 3. Pode-se observar na Figura 3 que o calo se formou ao longo do periósteo em ambas as extremidades da fratura linha 2 semanas após a fratura em cada grupo, os cordões de fratura em cada grupo ainda estavam claros, especialmente no grupo modelo e no grupo de tratamento, enquanto o calo no grupo controle era espesso e espesso, principalmente com placas 6 semanas após a fratura . Os ossos trabeculares foram predominantes e a linha de fratura desapareceu, enquanto o grupo modelo foi de ossos soltos e a linha de fratura foi difusa, mas o grupo de tratamento teve mais osso caloso, osso trabecular regular e espesso, e a linha de fratura não era óbvia.

Figura 3 Reconstrução tridimensional do calo R0I na extremidade fraturada

2.4 Parâmetros de micro-CT: Use o software para analisar o calo na extremidade fraturada. Consulte a Tabela 2 para obter os parâmetros relacionados.

Tabela 2 Comparação dos parâmetros de Micro-CT de cada grupo (x±s)

Grupo de controle Grupo modelo Grupo de tratamento

Nota: Comparado com o grupo de modelos, *P<0. 05;="" compared="" with="" the="" control="" group.=""><0.>

2.5 Nível sérico de IL-1 P .TGF-P 1: consulte a Tabela 3.

Tabela 3 Comparação dos níveis de IL-1 P JGF-0 1 em cada grupo G±s, n=8)

Nota: Comparado com o grupo de modelos, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group,=""><0.05 0="" 3="">

Nos últimos anos, os medicamentos tradicionais chineses Yinyangdian, Drynaria fortune e seus compostos (pílulas de Qing, pílulas de Liuwei Dihuang, etc.) foram comprovados na prática clínica para melhorar significativamente a osteoporose. Este tipo de medicina chinesa e compostos são usados ​​principalmente para nutrir o fígado e os rins. Isso é consistente com o princípio de nutrir o rim e renovar os músculos nos estágios médio e final da fratura. "Dez dias. A pasta de membros carnudos foi publicada pela primeira vez na "Matéria Médica de Shen Nong". , Quente por natureza, tem as funções de nutrir o rim e fortalecer o yang, reabastecer a essência e a medula, nutrir o sangue e hidratar a secura e cor e cor agradáveis. prolongando a vida.

Neste estudo, a densidade mineral óssea do grupo de tratamento foi maior do que a do grupo modelo após 2 e 6 semanas de intervenção (P<0.05). micro-ct="" scan="" bv/tv="" parameters="" showed="" the="" results="" and="" bone="" mineral="" density="" of="" the="" treatment="" group="" at="" two="" time="" points="" after="" the="" intervention="" the="" measurement="" results="" are="" consistent,="" and="" bv/tv="" is="" an="" important="" indicator="" for="" the="" evaluation="" of="">osteoporóticocicatrização de fraturas. Ele reflete diretamente o conteúdo ósseo do calo. Isso mostra que Rouganrong pode ter o efeito de promover a osteogênese. A análise pode ser eficaz na pasta de hérnia de carne. Os ingredientes têm o efeito de regular positivamente o BMP2, e o BMP2 é um dos membros da família TGF-8. E este resultado também é confirmado por outros parâmetros do exame de Micro-CT (Tb. Spjb. N, Tb. Th. SMI). Tb. Sp e SMI refletem as propriedades biomecânicas do calo, e os valores no grupo de tratamento são significativamente melhores do que o grupo modelo, isso também sugere que Roudongrong tem o efeito de melhorar a perda óssea, promover a osteogênese e acelerar a cicatrização de fraturas.

Em termos de níveis séricos de IL-1B e JGF-P 1, após 2 semanas e 6 semanas de intervenção, verificou-se que o nível de IL-1P do grupo de tratamento foi inferior aos outros dois grupos em 2 semanas e em 6 semanas. Embora o nível de IL-1 B do grupo de tratamento tenha sido maior que o grupo controle, ainda significativamente menor que o grupo modelo (『<0.05); while="" the="" tgf-p="" 1="" level="" of="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" from="" the="" control="" group="" the="" level="" of="" il-1="" p="" directly="" affects="" the="" differentiation="" and="" activity="" of="" osteoclasts.="" an="" increase="" in="" its="" level="" will="" promote="" bone="" resorption="" and="" inhibit="" the="" proliferation="" and="" differentiation="" of="" osteoblasts.="" jhtgf-p="" 1="" is="" closely="" related="" to="" the="" proliferation,="" differentiation,="" and="" migration="" of="" osteoclasts.="" it="" has="" the="" effect="" of="" promoting="" cartilage="" and="" bone="" callus="" formation="" ⑵="" and="" accelerating="" the="" shaping="" of="" bone="" callus.="" this="" suggests="" that="">Cistanchepossomelhorar a perda óssea, promover a osteogênese e acelerar a cicatrização de fraturas. Pode reduzir o nível de IL-13 emosteoporóticofraturam ratos e inibem a fratura. A atividade das células ósseas é alcançada; Além disso, também pode estar relacionado ao fato de queCistanchepode aumentar o nível de TGF-B 1 em ratos fraturados, promover a diferenciação osteogênica e a maturação e modelagem do calo.

Em resumo, com base na análise da densidade mineral óssea, parâmetros de tomografia computadorizada e níveis séricos de IL-1 P, TGF"1, descobriu-se que o extrato aquoso deCistanchepossomelhorar a perda ósseaepromover a cicatrização de fraturas osteoporóticas. O mecanismo pode estar relacionado a isso. Pode inibir a secreção de soro ILT 8 e promover a secreção de TGF-B 1 em ratos apósosteoporóticofraturas, melhorando assim a osteoporose e promovendo a consolidação de fraturas.

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