Efeitos de um nutracêutico à base de frutas e vegetais sobre biomarcadores de inflamação e estado oxidativo no plasma de uma população saudável: um ensaio clínico randomizado, duplo-cego e controlado por placebo

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Abstrato: Há evidências científicas do efeito positivo dapolifenóisde alimentos vegetais eminflamação eoxidativostatus. O objetivo do presente estudo foi investigar se o tratamento com um nutracêutico de alto teor de polifenóis reduz a concentração plasmática de certosoxidativoeinflamatóriobiomarcadores em uma população saudável. Cento e oito indivíduos foram selecionados e estratificados por sexo no grupo intervenção (n {{0}}) e no grupo placebo (n=55). Noventa e dois indivíduos completaram o estudo após dois 16-períodos de tratamento separados por um período de washout de quatro semanas. Os resultados revelaram diferenças estatisticamente significativas em indivíduos tratados com o extrato polifenólico em comparação com o placebo: uma diminuição na homocisteína, lipoproteína de baixa densidade oxidada (OxLDL), TNF-, sTNFR1 e proteína C-reativa (PCR). A diminuição mais significativa foi observada para OxLDL (de 78,98 ± 24,48 para 69,52 ± 15,64; p < 0.05)="" e="" pcr="" (de="" 1,50="" ±="" 0).="" 33="" a="" 1,39="" ±="" 0,37;="" p="">< 0,05),="" ambos="" apresentando="" diferenças="" significativas="" em="" relação="" ao="" placebo="" (p="">< 0,001).="" além="" disso,="" as="" catecolaminas="" aumentaram="" após="" a="" administração="" do="" produto="" investigado,="" principalmente="" no="" caso="" da="" dopamina="" (de="" 15,43="" ±="" 2,66="" para="" 19,61="" ±="" 5,73;="" p="">< 0,05).="" portanto,="" o="" consumo="" de="" um="" nutracêutico="" à="" base="" de="" frutas="" e="" hortaliças="" com="" alto="" teor="" de="" polifenóis="" parece="" melhorar="" os="" parâmetros="" relacionados="" aos="" benefícios="" à="">oxidativoeinflamatóriobiomarcadores), incluindo mudanças notáveis ​​na expressão de catecolaminas.

Palavras-chave: polifenol; biomarcadores; estresse oxidativo; fruta; vegetal; nutracêutico

1. Introdução

A literatura científica tem documentado o papel da dieta na prevenção de doenças não transmissíveis como obesidade, doenças cardiovasculares, câncer e todas as causas de morte, principalmente por meio do consumo de frutas e hortaliças por seu alto teor de compostos bioativos, principalmente polifenóis. ,2]. Existe uma relação inversa entre a dieta mediterrânea, caracterizada pelo alto consumo de produtos ricos em polifenóis, por meio do consumo de alimentos e bebidas ricos em polifenóis, como frutas, verduras, cacau, chá e café, e o risco de todas as causas mortalidade [3,4]. Apesar de ter sido demonstrado que o consumo de 800 g/dia de frutas e hortaliças reduz o risco de doenças cardiovasculares e mortalidade por todas as causas, e 600 g/dia reduz o risco de câncer, a OMS e várias diretrizes alimentares ainda recomendar 400 g/dia [5]. No entanto, a maioria da população não atinge sequer o mínimo estabelecido pelas autoridades de saúde, que equivale a cinco porções de frutas e hortaliças por dia [6,7]. Os benefícios relacionados a um estilo de vida saudável são conhecidos mundialmente, com o surgimento de novos produtos que oferecem a possibilidade de incorporar os compostos bioativos citados por meio de suplementos/nutracêuticos, o que auxilia no alcance das recomendações nutricionais [8].

Além disso, devido ao envelhecimento progressivo da população, entre outros fatores como alimentação e estilo de vida, há um aumento acelerado das doenças neurodegenerativas, tendo como principal expoente a DA, cuja prevalência dobra a cada 20 anos. Devido ao impacto e custo social que gera, muitos estudos têm sido realizados sobre a relação entre o consumo de frutas e hortaliças como aporte de antioxidantes que reduzemoxidativodanos ao nível do cérebro [9].

Os polifenóis são produzidos como metabólitos secundários de plantas como mecanismo de defesa contra condições adversas (parasitas, clima ou poluição, entre outras) [10] e formam um amplo grupo de fitoquímicos bioativos, incluindo ácidos fenólicos, estilbenos, lignanas, álcoois fenólicos e flavonóides [11,12]. Proporcionam efeitos potenciais na prevenção e tratamento de diversas patologias, como doenças cardiovasculares, câncer, diabetes mellitus, envelhecimento e doenças neurodegenerativas [13] por meio de diversas bioatividades (atividade cardioprotetora, anti-inflamatórioatividade antienvelhecimento, atividade antioxidante, atividade anticancerígena, efeitos antimicrobianos, efeitos neuroprotetores, efeitos protetores pulmonares, efeitos protetores renais, prevenção da osteoporose e proteção contra irradiação UV) [14]. Os polifenóis atenuaminflamaçãosuprimindo pro-inflamatóriofatores de transcrição de interagir com as proteínas envolvidas na expressão gênica e sinalização celular [15]. A capacidade vasodilatadora, vasoprotetora, antitrombótica, antilipêmica, antiesclerótica, antiinflamatória e antiapoptótica dos polifenóis é consequência de suas propriedades saudáveis ​​[12], considerando que os polifenóis são a principal fonte de antioxidantes (10 vezes maior que a vitamina C e 100 vezes maior que a vitamina E e carotenóides) [16]. De fato, quercetina, miricetina e kaempferol são flavonóides, os flavonóides com maior capacidade de neutralização de radicais livres, pois sua estrutura de grupo fenólico é capaz de capturar os elétrons desemparelhados das ROS, gerando espécies reativas neutralizadas [17]. No entanto, a concentração de polifenóis no plasma é altamente dependente da estrutura química e da fonte alimentar, portanto, a ingestão a longo prazo é aconselhável para obter todos os benefícios relacionados [12].

O objetivo do presente ensaio clínico foi avaliar se o consumo a longo prazo de uma alta variedade de polifenóis através de um nutracêutico à base de frutas e vegetais é capaz de melhorar os biomarcadores relacionados àinflamaçãoeoxidativoem indivíduos saudáveis ​​que não consomem as quantidades recomendadas de frutas e vegetais. Além disso, a população não idosa saudável tem sido alvo de poucos estudos de intervenção que relacionam o consumo de frutas e hortaliças e os níveis de catecolaminas como variáveis ​​relacionadas à cognição [27,28,34].

2. Resultados

2.1. População do estudo

Um total de 108 sujeitos foram incluídos neste estudo (Tabela 1 mostra seus dados demográficos), divididos em dois grupos homogêneos (N1 e N2). Por fim, após cruzamento e perda de seguimento, 92 sujeitos (N1=48, N2=44) ​​completaram a intervenção e foram incluídos na análise estatística final, conforme ilustrado na Figura 1.

2.2. Biomarcadores Plasmáticos

As médias e desvios padrão de todos os biomarcadores analisados ​​em todos os indivíduos, tanto na linha de base quanto no final da intervenção após a ingestão de extrato polifenólico (EXT) ou ingestão de placebo (PLA), estão descritos na Tabela 2.

Em relação ao perfil lipídico, foi notável a variação do colesterol de lipoproteína de alta densidade (HDL) dependendo do tipo de produto consumido. Os valores de HDL reduziram significativamente após o consumo de PLA (∆4,52mg/dL;p<0.05),while increased="" significantly="" in="" the=""><0.05).additionally, the="" difference="" between="" both="" groups="" was="" also="" statistically="" significant="" at="" the="" end="" of="" the=""><0.05). finally,="" total="" cholesterol="" and="" triglycerides="" values="" did="" not="" show="" significant="" differences="" throughout="" the="" intervention="" after="" pla="" or="" ext="">
Regarding the vitamins analyzed, a slight increase in vitamin B12 was observed in both groups, as well as small non-significant variations in vitamin E values, as shown in Table2(p>0.05). Por exemplo, a vitamina B12 variou após o tratamento em ambos os grupos PLA e EXT; no entanto, não foram encontradas diferenças significativas (p=0,43 ep=0,20, respectivamente). No caso da vitamina E, os valores variaram nos grupos PLA(p=0,98) e EXT(p=0,91). diferenças significativas foram observadas para vitamina B12(p=0.205) ou vitamina E (p=0.974).

Em relação aos valores de catecolaminas, o principal achado foi o aumento significativo da dopamina (∆4,18pg/mL;p<0.001)after consumption="" of="" ext="" with="" respect="" to="" pla="" (p="0.22)," showing="" significant="" differences="" between="" groups="" at="" the="" end="" of="" the="" intervention=""><0.001). a="" significant="" increase="" in="" norepinephrine="" values="" was=""><0.05), with="" an="" increase="" of="" ∆="" 39.21="" pg/ml="" in="" the="" ext="" group,="" not="" observed="" in="" the="" pla="" group="" (p="0.72)." there="" was="" no="" signifificant="" difference="" between="" the="" groups="" at="" the="" end="" of="" the="" study.="" analyzing="" the="" cortisol="" and="" adrenaline="" values,="" no="" signifificant="" differences="" were="" observed="" in="" any="" group="" during="" the="" intervention,="" nor="" at="" the="" end="" of="" the="">

A função tireoidiana foi determinada pelos hormônios T3, T4 e TSH. Durante a intervenção, observou-se que os valores do hormônio T3 diminuíram significativamente em ambos os grupos (p < 0.05).="" os="" valores="" do="" hormônio="" t4="" variaram="" de="" maneiras="" diferentes,="" aumentando="" significativamente="" no="" grupo="" pla="" (∆="" 0,57="" mcg/l;="" p="">< 0,001)="" e="" diminuindo="" não="" significativamente="" no="" grupo="" ext="" (∆="" 0,47="" mcg="" u).="" enquanto="" isso,="" os="" valores="" do="" hormônio="" tsh="" permaneceram="" constantes="" após="" o="" consumo="" de="" ambos="" os="" produtos.="" comparando="" a="" evolução="" dos="" três="" hormônios="" entre="" os="" grupos="" ao="" final="" do="" estudo,="" não="" foram="" observadas="" diferenças="" significativas="" para="" t3="" (p="0.195)," t4="" (p="0.195)" ou="" tsh="" (p="">

Para determinar a segurança dos produtos sob investigação, as transaminases (GOT, GPT e GAMMA GT) foram analisadas para avaliar a função hepática dos sujeitos, não observando alterações significativas (p > 0,05) em nenhum das enzimas hepáticas acima mencionadas após o consumo do produto ou do placebo. Portanto, pode-se supor que a ingestão dos produtos é segura.

3. Discussão

Conforme comentado acima, os dados obtidos no presente manuscrito refletem algumas diferenças entre os tratamentos. No entanto, nas condições basais, não foram observadas diferenças significativas entre os grupos, o que reforça as mudanças significativas obtidas após o consumo do produto.

A homocisteína plasmática é considerada um indicador de risco cardiovascular que pode ser modificado por meio de exercícios e dieta. Além disso, seu alto efeito neuroprotetor é bem conhecido [35,36]. No entanto, parece que os alimentos fornecem um suprimento constante de nutrientes para manter o metabolismo ideal da homocisteína [37]. Em nosso estudo, a homocisteína diminuiu significativamente após o consumo do produto, como em estudos anteriores [22,38]. Portanto, o consumo de polifenóis em altas doses ajuda a reduzir a homocisteína, o que pode ser considerado como capacidade cardioprotetora. Por sua vez, o perfil lipídico, colesterol total e triglicerídeos não foram afetados ao longo da intervenção. No entanto, destacou-se que o colesterol HDL plasmático aumentou significativamente após o consumo do produto e diminuiu após o consumo do placebo. Essas alterações nas lipoproteínas plasmáticas reforçam a ideia da capacidade cardioprotetora do produto sob investigação.

O principal achado da presente pesquisa foi a diminuição significativa do OxLDL, juntamente com o aumento do colesterol HDL após o consumo crônico do extrato rico em polifenóis em relação ao placebo. Esses resultados estão de acordo com estudos anteriores que sustentam que os polifenóis apresentam proteção contra a aterosclerose, inibindo assim a proliferação do músculo liso vascular [12,39,40]. OxLDL é um dos poucos parâmetros reconhecidos pela Autoridade Europeia de Segurança Alimentar (EFSA), no âmbito das alegações de função, e parece ser uma variável de resultado apropriada para a fundamentação de alegações de saúde relacionadas à redução do dano oxidativo aos lipídios. 41,42]. Além disso, a OxLDL promove a adesão de monócitos às células endoteliais através de um mecanismo independente da expressão de ICAM-1 e VCAM-1, gerando células espumosas [43]. No entanto, isso não ocorre com LDL [44]. Essa ligação é realizada através de certos receptores, como o CD36. OxLDL é um ligante para PPAR e regula positivamente a expressão de CD36, favorecendo a captação de OxLDL para macrófagos [45] e consequentemente contribuindo para o desenvolvimento de aterosclerose através da ativação do sistema imunológico [46]. Curiosamente, OxLDL promove disfunção endotelial e aterosclerose, diminuindo assim o risco cardiovascular [47,48].

Por sua vez, o tratamento com o produto investigado levou à redução plasmática da PCR, uma proteína de fase aguda sintetizada no fígado, mediada por outras citocinas, principalmente IL-1 e IL-6 [49]. Níveis elevados de PCR estão correlacionados com um risco aumentado de eventos cardiovasculares, mesmo em indivíduos saudáveis ​​[50]. Vários estudos encontraram uma associação entre as concentrações de PCR e eventos cardiovasculares, como infarto agudo do miocárdio, acidente vascular cerebral e progressão da doença arterial obstrutiva periférica [51,52]. Embora os níveis obtidos na PCR estejam dentro da normalidade para uma pessoa saudável, a diminuição desses níveis mostra a validade dos polifenóis nesse aspecto.

Além disso, o marcador imuno-inflamatório TNF- foi significativamente reduzido após o consumo do extrato. O TNF- é uma citocina pró-inflamatória que é significativamente expressa no tecido adiposo, bem como em leucócitos, células endoteliais e células musculares [53], participando da desregulação endotelial, estimulando a migração de monócitos e macrófagos e induzindo a expressão de moléculas de adesão [54]. De fato, um aumento de TNF- pode ocorrer em uma dieta com baixa concentração de carotenos, o que pode explicar a redução observada nos níveis de TNF- [55]. Portanto, faz sentido que em nosso estudo diminua seu valor após o consumo do produto devido à alta presença de carotenos no produto.

O extrato polifenólico utilizado para a presente investigação foi testado em diversos estudos de intervenção, com diferentes tempos de consumo e em diferentes grupos populacionais, levando a resultados inconsistentes. Em uma intervenção de {{0}}semana em homens treinados pertencentes às forças especiais da polícia austríaca, foram relatadas reduções significativas (p < 0,001)="" na="" concentração="" de="" grupos="" carbonila="" em="" proteínas="" e="" tnf-="" na="" 16ª="" e="" 28ª="" semanas="" .="" uma="" diferença="" com="" o="" nosso="" estudo="" foi="" que="" em="" seu="" estudo="" as="" amostras="" foram="" obtidas="" nas="" semanas="" 4,="" 8,="" 16="" e="" 28.="" notavelmente,="" os="" valores="" aumentaram="" até="" a="" semana="" 8="" e="" diminuíram="" a="" partir="" da="" semana="" 16="" [56].="" em="" uma="" intervenção="" de="" oito="" semanas="" em="" indivíduos="" com="" sobrepeso="" e="" obesidade="" acima="" de="" 40="" anos,="" foram="" relatadas="" reduções="" significativas="" no="" colesterol="" total,="" colesterol="" ldl="" e="" tnf-,="" que="" não="" foram="" obtidas="" com="" o="" placebo;="" no="" entanto,="" não="" foram="" encontradas="" diferenças="" significativas="" na="" pcr,="" stnfr1="" ou="" oxldl="" [57].="" ambos="" os="" resultados="" parecem="" confirmar="" que="" a="" ingestão="" de="" polifenóis="" a="" longo="" prazo,="" como="" em="" nosso="" estudo="" (16="" semanas),="" está="" associada="" a="" uma="" maior="" eficácia="" contra="" a="" inflamação.="" em="" outra="" intervenção="" de="" oito="" semanas="" em="" mulheres="" obesas,="" melhorias="" significativas="" foram="" observadas="" em="" vários="" marcadores="" de="" oxidação="" de="" proteínas,="" como="" proteínas="" carboniladas,="" oxldl="" (p="0.015)" e="" oxidação="" lipídica="" total="" de="" todos="" os="" lipídios.="" em="" relação="">inflamatóriomarcadores, foram observadas reduções significativas em TNF- (p=0.011). Na linha de base, os valores de TNF- estavam acima do intervalo estabelecido nos grupos placebo e extrato; ao final da intervenção, eles permaneceram elevados no grupo placebo e diminuíram para valores normais no grupo que consumiu o produto [58]. Finalmente, a eficácia do extrato também foi testada em indivíduos não saudáveis, relatando uma redução no OxLDL após um período de consumo de três meses por fumantes pesados ​​[59].

Em relação às catecolaminas, foram observados aumentos significativos da norepinefrina e, principalmente, da dopamina após o consumo do produto investigado. No entanto, não foram observadas alterações significativas para cortisol e adrenalina em nenhum grupo. Apesar de alguns estudos anteriores terem relatado uma redução do cortisol no plasma [60] ou saliva [61] após a ingestão de polifenóis, isso não é usual, e os valores raramente mostram mudanças significativas [62-64] em relação à ingestão de polifenóis. O fato de que os valores de adrenalina e cortisol não aumentaram implica que não se desenvolveu uma resposta adrenérgica ligada ao consumo do produto. A noradrenalina e a dopamina também estão aumentadas em pacientes idosos com doenças neurodegenerativas [65,66] e estão relacionadas à ansiedade [67] e ao aprimoramento cognitivo [68]. Além disso, a norepinefrina está intimamente relacionada à atenção, bem como ao estado de alerta [69,70]. Os resultados obtidos no presente estudo em termos de dopamina e noradrenalina podem estar relacionados com as melhorias a nível cognitivo observadas em outra publicação [71]. Podemos afirmar que o consumo de polifenóis, portanto, aumenta os níveis de alerta e atenção, que se correlacionam com resultados ao nível dos testes de cognição [71]

Uma limitação do presente ensaio clínico, conforme descrito por Di Lorenzo et al. [10] em um estudo sistemático sobre a biodisponibilidade de polifenóis, é que a inclusão de indivíduos saudáveis ​​em ensaios clínicos dificulta a avaliação de diferenças significativas nos biomarcadores, que são alterados em condições patológicas. Outras limitações deste estudo incluem o fato de que os metabólitos dos compostos fenólicos no produto não foram determinados além do teor de vitamina E ou da resposta individual, o que poderia afetar a biodisponibilidade e a bioatividade dos polifenóis [72].

É importante lembrar que os voluntários do presente estudo são indivíduos saudáveis ​​e os biomarcadores de inflamação que determinamos estão entre os valores normais no plasma. Portanto, as diferenças observadas dentro da faixa de normalidade desses biomarcadores, apesar de estatisticamente significativas, não são marcantes do ponto de vista clínico. No entanto, se o produto em estudo alcançou alterações estatisticamente significativas em pessoas saudáveis, essas alterações podem ser ainda maiores em pacientes com valores anormais [73,74], uma vez que os polifenóis do produto ajudariam a combater pelo menos parcialmente o agente causador dessa perturbação do nível plasmático [75].

Portanto, pesquisas futuras poderiam se concentrar em considerar esses aspectos em populações saudáveis ​​e não saudáveis.

4. Materiais e Métodos

4.1. Projeto de teste

Este estudo consistiu em um ensaio clínico randomizado, cruzado, duplo-cego, estratificado por sexo e controlado por placebo para avaliar a eficácia do consumo diário de um nutracêutico encapsulado (Juice Plus plus Premium®, The Juice Plus plus Company, Collierville , TN, EUA) com base em diferentes frutas e vegetais nos biomarcadores do plasma sanguíneo de inflamação e estado oxidativo. A intervenção teve duração de 36 semanas – dois períodos de 16 semanas separados por um período de washout de 4 semanas. Durante a intervenção, os sujeitos compareceram ao laboratório quatro vezes (no início e no final de cada fase), obtendo amostras de sangue em jejum. No início de cada fase, o produto (EXT ou PLA) era entregue aos sujeitos e, ao final de cada fase, os sujeitos eram solicitados a devolver as embalagens para que os pesquisadores quantificassem os produtos restantes.

Cada sujeito assinou um termo de consentimento informado e foi atribuído um código numérico por ordem de chegada; posteriormente, um pesquisador externo realizou a randomização usando um gerador computadorizado (Epidat v4.1 Epi-dat, Espanha) atribuindo os sujeitos a um dos grupos. Nem os pesquisadores nem os sujeitos sabiam a quais grupos os sujeitos pertenciam. Tanto o produto quanto o placebo foram marcados com códigos fornecidos pela empresa distribuidora e classificados em A e B, e somente ao final do estudo os pesquisadores foram notificados de qual código correspondia ao produto e qual ao placebo. O protocolo foi aprovado pelo Comitê de Revisão Institucional da Universidade Católica San Antonio de Múrcia (UCAM) (data: 24 de novembro de 2017; código: CE111072). Este estudo foi realizado seguindo as Normas de Boas Práticas Clínicas e foi conduzido de acordo com a Declaração de Helsinque. O estudo foi registrado em www.clinicaltrials.gov (acessado em 11 de junho de 2020) (identificador CFE/JU/44-17). O estudo foi realizado no Departamento de Farmácia da Faculdade de Ciências da Saúde da Universidade Católica de San António de Múrcia (UCAM). Foi cumprida a legislação europeia em vigor em matéria de proteção de dados pessoais (Regulamento (UE)2016/679).

4.2. Participantes

Os sujeitos deveriam preencher todos os critérios de inclusão (assinar o termo de consentimento livre e esclarecido, IMC entre 18,5 e 35 kg/m2, não ter doença crônica, não consumir mais de três porções de frutas e hortaliças por dia e idade entre 18 e 65 anos) e não preencher nenhum dos critérios de exclusão (estar em uso de medicação ou tratamento farmacológico, tomar multivitamínicos, ser alérgico a frutas ou vegetais, estar em regime alimentar, ser vegetariano ou vegano, fumar, consumir mais de 3 copos de álcool ( vinho ou cerveja) por dia, estar grávida, ter feito cirurgia de grande porte nos últimos três meses, ter problemas de sono e ter doado 0,5 L de sangue nos últimos três meses). Após verificação dos critérios de inclusão/exclusão, um total de 108 sujeitos de ambos os sexos iniciaram o estudo. A verificação foi realizada para garantir que os indivíduos continuassem a atender aos critérios ao longo de todas as visitas à unidade por meio de uma pesquisa do índice de estilo de vida mediterrâneo (MEDLIFE) para avaliar hábitos alimentares e atividade física [76]. Durante a intervenção, 16 sujeitos foram perdidos no seguimento, de modo que o

o número de sujeitos que completaram o estudo foi de 92, cujos dados demográficos são apresentados na Tabela 1.

4.3. Suplemento de teste

O produto sob investigação e o placebo tinham as mesmas características, e ambos foram fabricados e fornecidos pela The Juice Plus plus Company, Collierville, TN, EUA. A apresentação foi na forma de produtos farmacêuticos encapsulados brancos, fornecidos em frascos diferenciados apenas por um código. Uma vez que o estudo foi concluído, os investigadores foram informados sobre qual código pertencia ao produto e qual ao placebo. As diferenças no produto comercial eram que ele consistia na ingestão de três tipos diferentes de cápsulas por dia – duas de frutas vermelhas, duas de frutas e duas de vegetais misturados, cada uma fornecida em uma garrafa separada. Por esta razão, e para poder fabricar um produto similar e placebo, optou-se por fabricar cápsulas contendo uma mistura das três cápsulas acima mencionadas (frutas, frutas e legumes), sendo o consumo diário para este estudo de seis cápsulas — três antes do café da manhã e três no meio da tarde, acompanhadas de água.

O produto sob investigação foi apresentado em cápsulas brancas opacas e continha suco de frutas, vegetais e bagas em pó e polpa de maçã, laranja, abacaxi, arando, pêssego, acerola, beterraba, ameixa, tâmara, manga, cenoura, salsa, couve, brócolis, repolho, espinafre, farelo de arroz, tomate, folhas de alcachofra, mirtilos, amoras, groselha preta, mirtilos, cranberries, uvas concord, sabugueiro, extrato de semente de uva, extrato de chá verde, raiz de gengibre, framboesas, cacau, romã, mistura natural de tocoferol ( , δ, , -tocoferóis, girassol -tocoferol), mistura de carotenóides naturais (luteína, -caroteno, licopeno, astaxantina), pectina cítrica, bioflavonóides cítricos, casca de limão, carbonato de cálcio, alho em pó, espirulina, mistura de enzimas naturais, dióxido de silício , estearato de magnésio de origem vegetal, tangeretina e Lactobacillus acidophilus. Uma dose diária de 6 cápsulas forneceu 2,91 mg de -caroteno, 18,7 mg de vitamina E, 159 mg de vitamina C, 318 µg de folato, 6,1 mg de gluteína, 1 mg de licopeno e 0,15 mg de astaxantina. O placebo consistiu em celulose microcristalina, amido de arroz, cápsula vegetal (celulose), estearato de magnésio e corantes artificiais (FD&C amarelo nº 6 e FD&C azul nº 1).

A caracterização polifenólica do produto foi realizada em estudo prévio de Bresciani et al. através de UHPLC-QqQ-MS, mostrando um total de 119 compostos polifenólicos de diferentes famílias fenólicas, incluindo flavonóis como kaempferol e quercetina, antocianinas e flavonas [77]. Em relação à biodisponibilidade, o conhecimento da quantidade biodisponível de polifenóis é mais interessante do que a quantidade total, pois, em muitas situações, os polifenóis mais abundantes não são os mais ativos para o organismo [78]. Por isso, Bresciani et al. avaliaram a biodisponibilidade do produto, constatando que das 92 moléculas monitoradas, apenas 20 metabólitos circulantes foram identificados no plasma, todos eles como restos de sulfato, glicuronídeo ou glicina, aparecendo em diferentes momentos no plasma dependendo do local de absorção no trato digestivo [79].

4.4. Variáveis ​​de estudo

Todas as variáveis ​​foram analisadas quatro vezes durante o estudo: No início e no final de cada fase de consumo do produto 16-semanal. Durante o estudo, os indivíduos não foram autorizados a iniciar ou modificar qualquer tratamento hormonal, nem fazer alterações significativas na dieta ou atividade física que pudessem afetar as variáveis ​​do estudo.

Medições de Amostras de Sangue

Os sujeitos tiveram que chegar após jejum de 12 h, permitindo apenas a ingestão de água nas 3 h anteriores. O exercício de intensidade moderada a alta não foi permitido 24 h antes da extração. Amostras de sangue foram coletadas da veia antecubital em um tubo de coleta de sangue k3E/K3EDTA (3 mL) e tubos de coleta de sangue de Gel de Soro e Ativador de Coágulo (5 mL) *3. Antes de serem enviados para o laboratório (Laboratorios MUNUERA SL Murcia, Espanha), apenas os tubos de coleta de sangue Gel de Soro e Ativador de Coágulo foram centrifugados (4500 rpm, 5 min, 4 ◦C). Os biomarcadores analisados ​​para cada variável foram: (a) Biomarcadores pró-inflamatórios: OxLDL (ng/mL) por ensaio ELISA em amostras de soro, TNF- (pg/mL) e sNTFR1 (ng/mL) por ELISA competitivo (marca de diagnóstico DRG), PCR (mg/L) por imunoensaio métrico turbidimétrico (PETIA) e homocisteína (pg/mL) em analisador BN ProSpec® (conforme protocolo fornecido no kit Siemens N Latex HCYOPAX 03); (b) vitaminas: Vitamina E (mcg/mL) por HPLC com um cromatógrafo JASCO (PU-980 IntelligentPLC-Plus) e uma coluna Betasil-C18 (tamanho de partícula 5 µm, 250 × 4,6 mm) conectada a uma fluorescência JASCO detector (FP-920 Intelligent Fluorescense Detector) e vitamina B12 (pg/mL) por quimioluminescência com imunoensaios comerciais usando equipamento automatizado Centaur XPSiemens Diagnostics (Siemens Healthcare SA); (c) catecolaminas:Cortisol (mcg/L) usando a técnica de quimiominescência com imunoensaio Immulite 2000 (DPC, Gwynedd, RU) e noradrenalina (pg/mL), adrenalina (pg/mL) e dopamina (pg/mL) por HPLC com vazão de 0,5mL/min, Tº de 35 ◦C, sensibilidade de 20, potencial de 0,7, uma fase móvel de acetonitrila-água e fase reversa de C18 usando n detector eletroquímico; (d) hormônios tireoidianos: T3 (mcg/L), T4 (mcg/L) e TSH (mU/l) utilizando equipamento automatizado CentaurXP Siemens Diagnostics (Siemens Healthcare SA); (e) estado imunológico: IgA (mg/L) pela técnica de turbidimetria com o teste Monolab. Como reagentes, tampão Tris (20 mmol/L), PEG 8000 e pH 8,3 foram usados ​​como diluente e soro de cabra, anti-IgA humana e pH 7,5 como anticorpo.

4.5. Análise estatística

As variáveis ​​contínuas são apresentadas como média ± desvio padrão (DP) na linha de base e em sua evolução, aplicando-se o teste de Kolmogorov-Smirnov para verificar a distribuição normal dos dados descontínuos. A análise foi realizada para todos os sujeitos que participaram do estudo, tanto no período de consumo do produto quanto do placebo. Para as variáveis ​​quantitativas, realizou-se a comparação do teste t de Student entre os dois ramos do estudo. Para analisar as diferenças entre os grupos (EXT e PLA) na evolução das diferentes variáveis, foi realizada uma análise de variância de medidas repetidas tendo o tempo como fator intrasujeito. Dessa forma, foram estabelecidas diferenças para cada variável analisada, considerando esses fatores. Um teste de Bonferroni foi realizado para a análise post-hoc. Diferenças significativas foram comparadas (com a opção de assumir ou não igualdade de variância). No conjunto de testes estatísticos, o nível de significância escolhido foi 0,05. A análise estatística foi realizada com o software SPSS 24 (SPSS, Inc., Chicago, IL, EUA).

5. Conclusões

Nossa pesquisa mostrou que o consumo crônico de um extrato polifenólico à base de bagas, frutas e vegetais em uma população saudável que não come as quantidades recomendadas de frutas e vegetais por dia melhora o estado oxidativo e a inflamação por meio de uma melhora em vários biomarcadores sanguíneos, especialmente OxLDL, PCR e HDL-colesterol, também melhorando os valores das catecolaminas – particularmente a dopamina.

Contribuições dos Autores: Captação de recursos, MPZ e JM; investigação, RA e JM; metodologia, RA, J.Á.C., RX-M., BC, DV, MPZ e JM; administração de projetos, JM; supervisão, JM; validação, JM; redação—revisão e edição, RA, J.Á.C. e JM Todos os autores leram e concordaram com a versão publicada do manuscrito.
Financiamento: Este estudo foi financiado pela Juice Plus Company. Em nenhum momento a empresa colaborou na concepção ou gestão dos dados obtidos.
Declaração do Conselho de Revisão Institucional: Este estudo foi conduzido de acordo com as diretrizes da Declaração de Helsinque, aprovada pelo Comitê de Ética da Universidade Católica San Antonio de Múrcia (UCAM) (data: 24 de novembro de 2017; código: CE111702).
Termo de Consentimento Livre e Esclarecido: O consentimento informado foi obtido de todos os sujeitos envolvidos no estudo.

Declaração de disponibilidade de dados: Não é necessário.
Agradecimentos: Os autores agradecem aos sujeitos pela participação no estudo, bem como à JuicePlus Company pelo apoio e promoção da pesquisa.
Conflitos de Interesse: Os autores declaram não ter nenhum conflito de interesse em relação ao presente manuscrito.
Disponibilidade da Amostra: Não aplicável.

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