Preditores de doença renal crônica em adolescentes obesos Ⅲ

Biomarcadores

A excreção diária de megalina foi estimada usando o ensaio Human LRP2/Megalin ELISA (LS-F11978-1, BD BioSciences, Varsóvia, Polônia). As concentrações de NGAL, Gal-3, MMP12 e TIMP2 foram estimadas usando o kit Human Lipocalin-2/NGAL Quantikine ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN), Human LGALS3/Galectin-3 ELISA Kit (RAB0661, Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO), Kit MMP humano-12 ELISA (P39900, Invitrogen, Carlsbad, CA) e Kit TIM2 Human ELISA (P16035, ThermoFisher Scientific, Waltham, EUA-MA) , respectivamente.

Finalmente, a concentração sérica de adiponectina foi avaliada com o uso de um kit Human Adiponectina ELISA (ab99968, Abcam, Cambridge, UK).

Todas as amostras de pacientes e controles foram analisadas em duplicata. Os ensaios foram realizados de acordo com as instruções do fabricante. O valor da densidade óptica (DO) foi determinado duas vezes, utilizando um leitor de microplacas, ajustado para 450 nm e 540 nm como correção de comprimento de onda. As leituras a 540 nm foram subtraídas das leituras a 450 nm para corrigir imperfeições ópticas na placa. As concentrações de NGAL, Gal-3, MMP12, TIMP2 e adiponectina foramcalculado com base na curva padrão. Esses padrões também foram testados em duplicata.

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Análise estatística

Todas as variáveis ​​contínuas são expressas como média±DP. A análise estatística foi realizada através das seguintes etapas: (1) teste de Shapiro-Wilk foi utilizado para determinar a distribuição normal dos dados; (2) análise de variância unidirecional foi empregada para comparar indivíduos e controles de estudo com “TFG elevada”, “TFG normal” e “TFG diminuída”; (3) a correção de Bonferroni foi utilizada como ajuste alfa geral para todas as comparações múltiplas realizadas no estudo; (4) variáveis ​​contínuas não paramétricas foram comparadas pelo teste de Kruskal-Wallis; e (5) o teste χ2 de Pearson foi empregado para analisar dados nominais.

Os fatores independentes para o desenvolvimento da DRC foram determinados pelo teste exato de Fisher. Geralmente, na correlação de Pearson, um valor de r maior que {{0}}.7 foi considerado uma correlação forte. Qualquer valor entre 0,4 e 0,7 era uma correlação moderada, e qualquer valor inferior a 0,4 era considerado uma correlação fraca ou nenhuma correlação.

Os fatores que potencialmente afetam a taxa de filtração glomerular em adolescentes obesos ("concentração sérica de ácido úrico", "concentração sérica de triglicerídeos", "concentração sérica de colesterol", "concentração sérica de adiponectina", "albuminúria", "galectina urinária-3 concentração", "excreção diária de megalina na urina" e "concentração urinária de NGAL") foram avaliadas usando métodos de regressão linear utilizando análises univariadas e multivariadas. Os coeficientes de regressão ( ) e intervalo de confiança (IC) de 95% foram estimados para todos os modelos lineares. Os modelos de regressão foram ajustados para idade e sexo.

Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o pacote de software Statistica 13.3 PL (StatSoft, Polônia). Um valor de p<0.05 was considered statistically signifcant.

Resultados Características clínicas

Obese study participants (BMI z-score>2), no momento da entrada na análise, foram divididos em "TFG elevada" (n=42), "TFG normal" (n= 85) e "TFG diminuída" (n{{ 3}}) de acordo com os valores da TFG estimados pela fórmula de Filler. Em comparação aos controles, eles apresentaram albuminúria e tiveram concentração sérica de adiponectina significativamente menor (p=0,005) e maior concentração urinária de Gal-3 (p=0,004). Adolescentes obesos com "TFG diminuída" (em comparação com controles) também foram relatados com concentrações séricas significativamente mais altas de ácido úrico (p=00,004), triglicerídeos (p=00,037) e colesterol ( p=0.043), bem como concentração urinária de NGAL significativamente maior e excreção diária de megalina na urina (p=0.005).

Adolescentes obesos e controle não diferiram na pressão arterial (tanto no consultório quanto durante 24-h de monitoramento), morfologia do sangue periférico e parâmetros bioquímicos séricos (incluindo concentrações de creatinina, cistatina C, uréia, Na, K, Ca, Mg , glicemia de jejum, TSH, fT3, fT4, enzimas hepáticas, proteína total e PCR).

Nenhum dos adolescentes examinados apresentava MMP12 na urina e as concentrações de TIMP2 foram comparáveis ​​em todos os participantes do estudo. As características clínicas de todos os adolescentes estão resumidas na Tabela 1.

Correlações e análise multivariada

Conforme mencionado acima, o grupo de adolescentes obesos não era homogêneo. Era composto por pacientes com “TFG elevada”, “TFG normal” e “TFG diminuída”. Portanto, análises separadas foram realizadas para cada um dos 3 subgrupos mencionados acima.

Nos participantes obesos do estudo com "TFG elevada", notamos uma correlação positiva moderada entre "concentração de galectina-3 urinária" e "albuminúria" (r=0,528) e uma correlação negativa moderada entre "concentração urinária de galectina" concentração de galectina-3" e "concentração sérica de adiponectina".

O grupo de pacientes obesos com "TFG normal" apresentou uma forte correlação entre a "concentração de galectina-3 na urina" e a "concentração de NGAL na urina" (r=00,706). Nos adolescentes obesos com “TFG diminuída”, foram relatadas três correlações moderadas positivas. O primeiro entre "concentração sérica de ácido úrico" e "concentração urinária de NGAL" (r=0.474), o próximo entre "concentração urinária de NGAL" e "excreção urinária de megalina" (r=0). 524), e o último entre "concentração sérica de ácido úrico e excreção urinária de megalina" (r=0.511). Esses resultados são apresentados na Tabela 2.

As estimativas dos modelos de regressão linear nos participantes do estudo são mostradas na Tabela 3. Fatores associadosdanos renais relacionados à obesidadeno período de hiperfiltração incluiu diminuição da concentração sérica de adiponectina, albuminúria e aumento da concentração urinária de Gal-3. Fatores associados adanos renais relacionados à obesidadeem adolescentes obesos com TFG normal foram albuminúria, aumento da concentração urinária de Gal-3, elevação da concentração sérica de colesterol e aumento da concentração urinária de NGAL. Finalmente,danos renais relacionados à obesidadeseguido de diminuição da TFG foi associado ao aumento da concentração urinária de NGAL, aumento da concentração sérica de ácido úrico e aumento da excreção diária de megalina na urina (Tabela 4).

Tabela 2 Correlações moderadas e fortes nos participantes do estudo

Desenvolvimento de DRC em participantes do estudo

Durante o período de acompanhamento, que variou de 6 a 30 meses, 39 adolescentes obesos do grupo de estudo desenvolveram DRC (27,5%). Onze deles foram inicialmente designados como indivíduos com “TFG aumentada” (26,2%), 16 como participantes do estudo com “TFG normal” (18,9%) e 12 foram inicialmente reconhecidos com TFG diminuída (80%).

Os participantes obesos do estudo com "TFG elevada", que desenvolveram DRC durante o período de acompanhamento, não diferiram na morfologia do sangue periférico, creatinina sérica, cistatina C, ácido úrico, uréia, Na, K, Ca, Mg, colesterol total, triglicerídeos, HDL, glicemia de jejum, TSH, fT3, fT4, enzimas hepáticas, proteína total, PCR, adiponectina, bem como valores de albumina, Gal{4}}, megalina, NGAL ou TIMP2 na urina de 24 horas de seus pares que não desenvolveram DRC.

A maioria dos participantes obesos do estudo com "TFG normal" que desenvolveram DRC foram inicialmente encontrados com concentrações aumentadas de ácido úrico sérico (5,9±0,6 mg/dL; n=14; 87,5%), colesterol (194±5,8 mg/dL; n=15; 93,8%), e triglicerídeos (172±4,9 mg/dL; n=10; 62,5%), bem como concentração urinária de NGAL (9,8± 3,5 ng/ml; n=13; 81,2%), em comparação com adolescentes obesos com "TFG normal" que não desenvolveram DRC.

Finalmente, adolescentes obesos com "TFG diminuída" que não desenvolveram DRC dentro do período de observação (n{{0}}) apresentaram inicialmente concentração sérica de ácido úrico normal (4,1±0,3 mg/dL) em comparação com seus pares que desenvolveram DRC. Usando o teste exato de Fisher, foi determinado que adolescentes obesos com “TFG normal”, que inicialmente apresentavam concentração sérica elevada de ácido úrico (p<0.0001), serum triglycerides concentration (p=0.0006), serum cholesterol concentration (p<0.0001), and urine NGAL concentration (p=0.0003), developed CKD over a follow-up period of 6 to 30 months. "Decreased GFR" obese study participants who continue to have normal values of serum uric acid concentration are at lower risk of CKD development (p=0.0088).