Estudo comparativo do teste de limite microbiano e critérios de peças de decocção de TCM entre a farmacopeia dos Estados Unidos, farmacopeia européia, farmacopeia japonesa e farmacopeia chinesa ⅱ ⅱ

2 Bactérias de controle inspeção

A inspeção de bactérias de controle é um item importante na inspeção deMedicamentos de ervas chineses. Os itens de inspeção de bactérias de controle comumente estipulados nas quatro farmacopeias incluem bactérias gram-negativas resistentes à bile, Escherichia coli e Salmonella [10-13]. A comparação de seus métodos de inspeção é mostrada na Tabela 2. Deve-se ressaltar que o USP43 classifica as bactérias gram-negativas resistentes à biliar na inspeção da contagem microbiana "2 0 21". Além disso, o método de inspeção de Staphylococcus aureus foi adicionado ao USP43 e JP17; O USP43 também complementou o método de inspeção de Clostridium e foi o primeiro a propor o conceito de avaliação de risco microbiana inaceitável. Além disso, o USP43 introduziu apenas o princípio do teste de adequação do meio de cultura no método de inspeção de bactérias de controle dos medicamentos à base de plantas chineses e não esclareceu o método de operação específico, nem exigiu a conduta do teste de adequação do método; Enquanto Ep10.0, JP17 e CHP2020 deram uma introdução relativamente detalhada ao teste de adequação do meio de cultura e teste de adequação do método.

Um extrato de erva de medicina chinesa Lable que usou no mercado dos EUA

 

2.1 Bactérias Gram-negativas resistentes à bile

No pré -tratamento, diferentemente de outras farmacopeias que usam meio TSB como diluente, o USP43 adiciona pH 7,2 PBS como diluente. Embora os requisitos para o tempo de recuperação da amostra sejam ligeiramente diferentes em cada farmacopeia, todos eles exigem recuperação por pelo menos 2 h. No estágio de enriquecimento bacteriano, Ep1 0. 0 usa 4 concentrações de inoculação de amostra de teste de 0. 1, 0. 0 1, 0,001 e 0. Bactérias Gram-negativas resistentes a biliares que podem ser detectadas por esse método atinge 1 × 104 UFC/g (ou CFU/ml).
Comparado com o método de outros farmacopeias usando 3 concentrações de inoculação de amostra de teste de 0. 1, 0. 0 1 e {0}. 001 g (ou ml), o limite de detecção do método ep10.0 é aumentado por 1 ordem da magnitude. Os métodos utilizados na separação seletiva de vários farmacopeias são consistentes e o meio VRBGA é usado para identificar colônias suspeitas, mas a temperatura da cultura e o tempo de cultura são ligeiramente diferentes.

 

Lista de especificações do Cistanche

 

2.2 Escherichia coli

Ep1 0. 0 e JP17 estipulam respectivamente os métodos de teste qualitativos e quantitativos para Escherichia coli, enquanto USP43 e CHP2 0 2 0 estipulam apenas os métodos de teste qualitativos. No método de teste qualitativo, os princípios de detecção de cada farmacopeia são consistentes. A solução de teste é enriquecida com meio TSB, inoculado em meio de caldo MacConkey e depois separado com meio seletivo. Entre eles, o USP43 usa o meio de ágar MacConkey para separação e cultura por 18 a 24 horas, e o meio EMB pode ser usado para identificação de Escherichia coli; Os outros três farmacopeias requerem o uso de meio de ágar MacConkey para separação e cultura por 18 a 72 horas, e as bactérias alvo são determinadas por métodos de identificação apropriados. O JP17 pode adicionalmente usar o meio de ágar cromogênico de Escherichia coli em vez do meio de ágar MacConkey para separar e cultivar amostras. No método de teste quantitativo, ambos EP1 0}. 0 e JP17 usam o método MPN com três concentrações de inoculação de amostra de teste de 0,1, 0,01 e 0,001 g (ou ml) para verificar a escherichia coli em amostras, fornecendo mais opções de método para inspeção de bactérias de controle.

 

2.3 Salmonella

Em termos de volume de amostragem, exceto EP1 0. 0, que requer 25 g (ou 25 ml) da amostra a ser cultivada em 225 ml de peptona tamponada a aquosas, a outra mídia. No estágio de enriquecimento bacteriano seletivo, USP43, EP1 0. 0 e CHP2020 usam meio RV em 30-35 grau, enquanto o JP17 aumenta a temperatura da cultura para (42 ± 0,5) para aumentar a seletividade. No estágio de separação, o método USP43 pode selecionar um ou mais de BGA, XLD ou He Medium; Ep10.0 e CHP2020 exigem apenas o uso de meio XLD, e o JP17 também pode usar o meio de ágar cromogênico de Salmonella. Na identificação de microorganismos suspeitos, o USP43 exibe as bactérias alvo através do teste de ferro de três açúcar; Ep10.0 e JP17 usam métodos apropriados para julgar; O CHP2020 integra os dois métodos de identificação acima, que são mais flexíveis e razoáveis.

 

2.4 Outras bactérias de controle

JP17 e USP43 especificam o método de teste para Staphylococcus aureus, enquanto Ep1 0. 0 e CHP2020 não especificam este item. O JP17 estipula que, após a amostra de teste ser cultivada em meio TSB, ele precisa ser transferido para meio TSB contendo cloreto de sódio a 7,5% para a re-cultura para inibir as bactérias de fundo; O USP43 usa apenas meio TSB para enriquecimento bacteriano único. Ao separar o meio de cultura seletiva, JP17 e USP43 usam o meio VJ e o meio BP, além do meio de MS. Ao identificar colônias suspeitas, o USP43 usa o teste de coagulase plasmática, enquanto o JP17 pode usar métodos apropriados para identificação. Além disso, o USP43 também fornece um método de detecção de Clostridium, que é o mesmo que o método de inspeção microbiológica para produtos não estérils sob USP43 "62".

Um laboratório de teste de extrato de erva de medicina chinesa

 

3 padrões de limite microbiológico

3.1 Ep1 0. 0

Ep1 0. 0 "5.1.8" divide peças de medicina herbal chinesa e seus extratos em três categorias: amostras para tratamento de água em ebulição (A), amostras tratadas por outros processos (B) e amostras que não podem atender aos requisitos de B após outros processos (C) [10].
Para as amostras de classe A, o padrão limite para a contagem de TAMC é 1 × 107 CFU/g (ou UFC/ml) e o padrão limite para a contagem de TYMC é 1 × 105 CFU/g (ou UFC/ml); Ao mesmo tempo, os resultados máximos de contagem aceitável são definidos com base nessa base, expressos como um fator de 5. O padrão mais rigoroso para os itens de contagem de produtos são os produtos de classe B, cujos padrões limitados para a contagem de TAMC são 1 × 104 UFC/g (ou CFU/ml) e a contagem de TymC são 1 × 102 CFU/G (ou CFU/ML). Exceto para as amostras de classe A, que não precisam ser verificadas quanto a bactérias gram-negativas resistentes à bile, as amostras de classe B e classe C devem ser verificadas quanto à contagem de TAMC, TymC e bactérias gram-negativas resistentes à bile, Escherichia coli e Salmonella [10], consulte a Tabela 3 para obter detalhes.

 

3.2 JP17

O JP17 "G4" divide as peças de medicina de ervas chinesas e seus extratos em duas categorias: amostras tratadas com água fervente (classe I) e amostras usadas diretamente sem passar pelo processo de extração (classe II) [11]. Em comparação, os produtos da classe I no JP17 são equivalentes aos produtos da classe A no EP1 0. 0, e a classe II no JP17 é semelhante à classe C no ep1 0. 0. No entanto, o JP17 não especifica os padrões de limite para produtos de classe B em Ep10.0, consulte a Tabela 3 para obter detalhes.

 

3.3 USP43

Comparado com a classificação de peças de decocção em Ep1 0. 0 e JP17, o USP43 fez uma classificação mais detalhada de produtos contendo medicina chinesa (medicina vegetal) no padrão de limite microbiano "2023" para suplementos nutrientes e dietéticos não estéril. Existem 7 categorias, incluindo plantas secas ou terrestres, extratos de plantas terrestres, etc., como mostrado na Tabela 4. Entre elas, os requisitos para amostras de plantas secas ou moídas são contagem de TAMC menor ou igual a 1 × 105 UFC/G (ou CFU/ML), MEMC menos ou igual a 1 × 103 CFU/G (ou ° Cu) 10 g. Esse requisito é maior que os requisitos de Ep10.0 e JP17 para produtos da mesma classificação.

 

3.4 CHP2020

Baseado na edição 2 0 15, o CHP2020 "Regra Geral 1108" revisou os padrões de limite microbiano para medicamentos fitoterápicos chineses orais e embebidos em fito e adicionou as disposições para o TAMC, o TYMC contagens e a Escherichia coli. Exceto pelo requisito de contagem de TYMC de 1 × 103 UFC/g, o restante é o mesmo que os padrões de limite microbiano para amostras de classe C em Ep10.0 (consulte a Tabela 3). No entanto, o CHP2020 ainda não estabeleceu um padrão limite unificado para a inspeção de bactérias de controle dos extratos de medicina de ervas chineses. Pode -se observar que os requisitos do CHP2020 para os limites microbianos dos medicamentos à base de plantas chineses, seja a classificação de medicamentos chineses que precisam controlar microorganismos ou os padrões de limite microbiano, não são tão completos quanto os outros três farmacopeias.

 

4 discussão

A edição 2 0 15 da farmacopeia chinesa incluiu alguns padrões de limite microbiano para fatias de medicamentos à base de plantas chineses, que desempenharam um papel positivo na orientação dos fabricantes de medicina chinesa a prestar atenção à contaminação microbiana e padronizar o processamento de fatias de medicina de ervas chinesas [15]. No entanto, o nível geral de produção e as condições técnicas das fatias de medicina fitoterápicas chinesas em meu país estão muito atrás das dos países desenvolvidos. A contaminação microbiana ainda é comum em produtos e os patógenos condicionais podem existir [16-18]. Embora a maioria das fatias de medicina herbal chinesa precise ser processada por decocção e outros processos antes do uso, ainda existem riscos potenciais no processo de medicação, e os microorganismos patogênicos residuais ainda podem causar danos aos pacientes [3-4}, 8, 17-19]. Atualmente, embora o CHP2020 tenha revisado os "padrões de limite microbiano para extratos de medicina herbal chinesa e fatias de medicina herbal chinesa", em comparação com USP43, EP10.0 e JP17, os regulamentos do CHP2020 sobre classificação de amostras, itens de inspeção e limitados de padrões precisam ser melhorados.

Os medicamentos fitoterápicos chineses são produtos processados ​​primários e um tipo especial de medicamento. A aplicabilidade de seus métodos de inspeção é um link importante no processo de configuração padrão [14]. A contaminação de fundo de medicamentos fitoterápicos chineses é alta, o que interfere muito na inspeção das bactérias de controle e tem o risco de detecção perdida [17]. Existem grandes diferenças nos efeitos de enriquecimento bacteriano e separação de diferentes métodos de inspeção. Tomando a inspeção do Staphylococcus aureus no JP17 como exemplo, o uso de meio TSB contendo cloreto de sódio a 7,5% para enriquecimento bacteriano pode ajudar a inibir o crescimento de microorganismos de fundo na amostra e melhorar a taxa de detecção de bactérias -alvo. USP43 e JP17 também adicionam o uso de uma variedade de meios de cultura colorimétricos, que também é um método eficaz para distinguir bactérias -alvo. In addition, all four pharmacopoeias allow the use of alternative microbial inspection methods, such as electrochemical methods, gas inspection methods, chemiluminescence methods, etc. Among them, the detection technology based on molecular biology has demonstrated the advantages of high sensitivity, high specificity and rapid inspection in the fields of medical inspection and food inspection, and can play a positive role in the microbial inspection of Chinese herbal medicines e melhorar a taxa de detecção de bactérias de controle em medicamentos à base de plantas [19-20]. Em termos de padrões limitados, o USP43 possui a classificação mais detalhada dos medicamentos chineses e requisitos relativamente rigorosos para os padrões de limite microbiano das fatias de medicina chinesa. Embora o USP43 não especifique os tipos de microorganismos inaceitáveis, exige que os fabricantes avaliem ativamente os microorganismos inaceitáveis ​​que podem existir nos produtos, especialmente para controlar os microorganismos que podem causar efeitos adversos nos produtos e levar a riscos de segurança [12]. Esse conceito de avaliação de riscos e gerenciamento de riscos vale a pena aprender e se referir ao meu país. Em resumo, este estudo comparou e analisou os métodos de enumeração microbiana, controlam métodos de inspeção de bactérias e padrões limitados relacionados a microbianos de fatias de medicina chinesa em quatro farmacopeias. De acordo com o status atual da contaminação microbiana e controle de fatias de medicina chinesa, é necessário melhorar ainda mais a inspeção microbiana e limitar os padrões de produtos relacionados à medicina chinesa na farmacopeia, continuam a coletar e organizar dados básicos de carga microbiana e orientar razoavelmente os fabricantes de medicina chinesa a fortalecer os produtos de contaminação microbiana e gestão e validade, e garantir a segurança dos produtos de segurança chinesa. Recomenda-se que, de acordo com o status atual da contaminação microbiana e controle de fatias de medicina chinesa, os métodos de inspeção microbiana e os padrões limitados dos produtos relacionados à medicina chinesa na farmacopeia sejam gradualmente melhorados, e os níveis limite microbianos dos produtos correspondentes devem ser razoavelmente refinados.

 

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