Qual é a maneira que echinacoside, o ingrediente efetivo de Cistanche Deserticola, crescimento de células de adenocarcinoma pancreático?

Contato:joanna.jia@wecistanche.com

Echinacoside suprime o crescimento de células de adenocarcinoma pancreático induzindo apoptose através da via de quinase proteica ativada por mitogótico

WEI WANG, JINBIN LUO, YINGHUI LIANG E XINFENG LI

Abstrair.

A aplicação clínica de produtos naturais derivados da medicina tradicional chinesa tem ganhado atenção na quimioterapia do câncer.Echinacoside(ECH), um dos feniletanoides, isolado das hastes deCistanchesalsa (um medicamento à base de ervas chinesas) tem efeitos anti-apoptóticos protetores teciduais e anti-apoptóticos no sistema nervoso central. No entanto, permanece em grande parte evasivo seEchinacoside possui atividade supressiva de tumores. No presente estudo, foi demonstrado queEchinacosidepode inibir significativamente a proliferação de células de adenocarcinoma pancreático, induzindo a produção de espécies reativas de oxigênio e a perturbação do potencial da membrana mitocondrial e, assim, desencadeandoapoptose. Além disso, foi elucidado queEchinacosidereprime o crescimento das células tumorais através da modulação da atividade MAPK. Em conclusão, este estudo revela uma nova função da ECH na prevenção do desenvolvimento do câncer e implica que o uso deEchinacoside pode ser uma estratégia quimioterápico potencial para o câncer.

Echinacoside em cistanche para diminuircrescimento celular adenocarcinoma pancreático

Introdução

O câncer é uma doença que ameaça a vida e uma das principais causas de mortalidade em todo o mundo. Células cancerígenas são caracterizadas por inibidasapoptose, crescimento e proliferação descontroladas e metástase (1). O desenvolvimento do câncer, muitas vezes iniciado por alterações genéticas, é um processo complexo que envolve interações entre proteínas oncogênicas e supressores tumorais formando uma intrincada rede de sinalização. Por exemplo, o oncogene Myc tem sido amplificado ou superexpresso em vários tipos de câncer e a oncoproteína codificada por Myc pode promover a tumorigênese conduzindo a progressão do ciclo celular, estimulando o crescimento celular e induzindo a angiogênese (2). No entanto, os sinais oncogênicos acionados pelo Myc podem ativar a via supressora de tumor p53 através da indução do supressor do tumor, ARF que atenua o rato oncogênico E3-ligase de duplo minuto (MDM)2 mediado p53 degradação (3). Trata-se de um mecanismo autorregulado e autoprotetor que impede a transformação maligna das células. Notavelmente, o p53 pode reprimir a atividade myc ativando transcrição, por exemplo, o miR-145 que tem como alvo o Myc mRNA para silenciamento de tradução (4,5), formando assim um loop regulatório de feedback negativo.

A estratégia mais simples e eficaz para tratar o câncer é matar as células cancerosas. Os medicamentos anticancerígenos comumente utilizados, como cisplatina (6), actinomicina D (7) e adriamycina (8) são mostrados para inibir o crescimento do tumor, promovendo apoptose. Recentemente, evidências crescentes demonstraram que uma série de produtos naturais e derivados de plantas, particularmente de plantas medicinais usadas na medicina tradicional chinesa (TCM), exibem uma função supressiva de tumor induzindo a apoptose das células cancerosas e têm potencial para aplicação clínica na terapia do câncer (9). Por exemplo, o emodin anthraquinona natural isolado do TCM, Radix rizome Rhei, pode suprimir o crescimento de numerosos tipos de células cancerosas (10,11). Camptothecin, derivado da "árvore feliz" chinesa, Camptotheca acuminate, é um produto natural valioso que inibe a ligadura do DNA após quebras de fios mediadas pelo topo I (12). Em outro estudo retrospectivo de coorte de base populacional de um total de 729 pacientes com câncer de mama avançado, foi sugerido que a terapia TCM pode contribuir para o tratamento do câncer. Desta coorte, 115 pacientes eram usuários de TCM, enquanto 614 pacientes não usavam TCM. A análise multivariada demonstrou que, em comparação com os não usuários, o uso de TCM esteve associado a uma redução significativa do risco de mortalidade por todas as causas (13). Todos os achados citados indicaram que o TCM é uma importante medicina complementar e alternativa que pode ser utilizada no tratamento do câncer.

Echinacoside(ECH) é um fenilethanoid isolado das hastes deCistanchessalsa, um medicamento à base de plantas chinesa, que é uma importante droga bruta usada como antissoro e antifatigue (14). Descobriu-se que vários fenilethanoides possuem propriedades radicais livres de escavação e protegem contra lesões tóxicas induzidas pelo estresse oxidativo (15). Além disso, mais propriedades biológicas deEchinacosidedesde então foram elucidados. Por exemplo, a ECH pode resgatar os níveis aumentados de citocinas inflamatórias e melhorar anormalidades histopatológicas pulmonares em camundongos com lesão pulmonar aguda (16,17). TambémEchinacoside tem mostrado ter efeitos protetores no tecido nervoso e melhorar os distúrbios comportamentais em modelos murinos da doença de Parkinson (18). Notavelmente, descobriu-se que a ECH promove a proliferação celular e inibeapoptosenas células epiteliais intestinais do camundongo MODE-K (19). Até agora, porém, tem sido dada menos atenção ao potencial papel da ECH na prevenção do câncer.

Neste estudo, foi explorado seEchinacoside tratamento afeta o crescimento e proliferação de células tumorais e seEchinacosideinduz apoptose, eleva a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e reduz o potencial da membrana mitocondrial (MMP) e, consequentemente, suprime o crescimento das células tumorais. Além disso, o presente estudo teve como objetivo identificar os mecanismos moleculares responsáveis pela inibição do crescimento celular mediado pelo ECH.

Materiais e métodos

Linha celular, reagente e anticorpos.

As células de adenocarcinoma pancreático SW1990 (ATCC, Manassas, VA, USA) foram cultivadas no meio eagle modificado de Dulbecco complementado com 10% de soro bovino fetal, 50 U/ml penicilina e 0,1 mg/ml de estreptomicina a 37°C em uma atmosfera umidóide CO2 de 5%.Echinacosidefoi comprado da Jrdun Biotechnology Corp. (Xangai, China). Anticorpos contra AKT, P-AKT, ERK, P-ERK, JNK, p-JNK, P38, p-P38 e GAPDH foram comprados da Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA); anti-Bax e anti-Bcl-2 foram comprados da Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, CA, EUA); e anti-Caspase-3 foi comprado da Abcam (Xangai, China).

Ensaio de viabilidade celular.

Para avaliar a taxa de crescimento das células tumorais, kit de contagem celular-8 (CCK-8; Dojindo Molecular Technologies, Rockville, MD, EUA) foi usado de acordo com as instruções do fabricante. As suspensões celulares foram semeadas em 5.000 células por poço com tratamento ECH para 0, 12, 24, 48 ou 72 h em placas de cultura de 96 poços. A inibição do crescimento celular foi determinada adicionando reagente WST-8 do kit CCK-8 em uma concentração final de 10% para cada poço, e a absorção das amostras foi medida em 450 nm usando um leitor de microplaca (Multiskan MK3; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, EUA).

Hoechst 33342 manchando.

As células (60% de confluência) foram tratadas com Hoechst 33342 (Instituto Beyotime de Biotecnologia, Haimen, China) em uma concentração final de 1 μg/ml, incubada em incubadora de 37°C por 15 minutos, lavada com soro fisiológico tamponado duas vezes, fixada em 4% de paraformaldeído por 30 minutos à temperatura ambiente, e montada em lâminas. As alterações morfológicas dos núcleos celulares foram observadas sob um microscópio de fluorescência (Olympus BX51, Melville, NY, EUA). Os núcleos normais eram redondos e manchados de azul claro, enquanto os núcleos apoptóticos eram encolhidos e manchados de azul brilhante.

Análises de triagem celular ativada por fluorescência (FACS).

Para a avaliação deapoptose, o isothiocianato fluoresceína (FITC)-Anexo VApoptoseO kit de detecção (BD Biosciences, Xangai, China) foi usado de acordo com as instruções do fabricante. Resumidamente, as células 5x104 foram lavadas com PBS gelado, resuspended em tampão de ligação de 0,1 ml (Instituto Beyotime de Biotecnologia), e manchadas com 10 ml de Anexo conjugado FITC V (10 mg/ml) e 10 ml de iodeto de propídio (PI) (50 mg/ml). Após a incubação por 15 min à temperatura ambiente no escuro e a adição de 400 ml de tampão de ligação, as células foram analisadas por um citômetro de fluxo (C6; BD Biociências, Xangai, China).

Medição de espécies reativas de oxigênio (ROS).

Para avaliar a produção de ROS, o Kit de Ensaio reativo de espécies de oxigênio (Vigoroso Biotecnologia, Pequim, China) foi utilizado de acordo com as instruções do fabricante. Resumidamente, as células (80% de confluência) foram colhidas e lavadas com PBS antes da coloração com a solução de dihidroedicium (DHE). As células foram então analisadas por análises citométricas de fluxo.

Medição do potencial da membrana mitocondrial (MMP).

Um kit de ensaio de metilamina de tetrametil (TMRM) (ImunoChemistry Technologies, Bloomington, MN, USA) foi usado para detectar as alterações em MMP. Resumidamente, as células (80% de confluência) foram colhidas, lavadas com PBS e manchadas com TMRM por 15-20 min em uma incubadora de 37°C. As células foram então lavadas uma vez com PBS e submetidas a análises citométricas de fluxo.

Análises de imunoblotting.

As células (80% de confluência) foram colhidas e límpidas em tampão RIPA (Jrdun Biotechnology) constituída por 50 mM Tris-HCl, pH 7.4; 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% NP-40, 1% ácido desoxicólico de sódio e 0,1% SDS, e inibidores proteasome recém-adicionados. Foram utilizadas quantidades iguais de liseto celular claro para análise de imunoblotting, conforme descrito anteriormente (20).

Análise estatística.

Os dados quantitativos são expressos como o desvio padrão ± médio. As diferenças estatísticas foram avaliadas pelo teste t do aluno não remunerado utilizando o software estatístico SPSS 15.0. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Resultados

Echinacoside suprime o crescimento das células tumorais. Embora tenha sido relatado queEchinacoside exibe um papel protetor, inibindoapoptosee sinais inflamatórios em células somáticas, como células epiteliais neuronais e intestinais (16-19), permanece evasivo se a ECH controla o crescimento e a proliferação de células cancerígenas. Para testar isso, foi realizado um ensaio de sobrevivência celular tratando células SW1990, derivadas de um adenocarcinoma pancreático grau II, com doses tituladas de ECH como mostrado na Fig. 1. Notavelmente, foi demonstrado que a ECH retarda significativamente a proliferação de células tumorais de forma dependente de dose durante um período de cultura de 5 dias (Fig. 1).

Echinacoside desencadeia apoptose. Como perda deapoptoseé um dos principais mecanismos causadores subjacentes à proliferação descontrolada de células cancerígenas pancreáticas (21), o presente estudo realizou um conjunto de experimentos para determinar se o ECH desencadeia apoptose. Em primeiro lugar, ao colorar os núcleos das células tumorais com Hoechst 33342, foi demonstrado que o ECH resulta emapoptosede forma dependente de dose (Fig. 2A). Além disso, foram realizadas análises FACS utilizando-se manchas de Anexo V/PI para confirmar ainda mais o efeito apoptótico do tyEchinacoside (Fig. 2B). O percentual médio de células apoptóticas foi de 1,1% em condições normais de cultura, enquanto esse percentual aumentou significativamente para 10,6, 21,4 e 51,3% em resposta ao tratamento ECH de forma dependente de dose (Fig. 2C). Estes resultados, juntamente com o ensaio de viabilidade celular mostrado na Fig. 1, demonstram queEchinacosidetratamento suprime a proliferação de células tumorais desencadeandoapoptose.

Echinacoside solicita a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS). Vários medicamentos quimioterápicos cancerígenos, como a doxorubicina e cisplatina, têm se mostrado geradores potentes de ROS, que são um papel crucial na indução da apoptose em condições fisiológicas e patológicas (22). Assim, foi investigado se o tratamento da ECH também poderia regular a produção de ROS. Para testar isso, a DHE, que pode ser oxidada para gerar ethidium que se intercala com DNA, foi utilizada neste estudo para avaliar a produção de ROS. Descobriu-se que, como outras drogas anticancerígenas,Echinacoside também estimula a produção de ROS de forma dependente de dose, como mostra a intensidade elevada da fluorescência no tratamento eCH (Fig. 3).

Echinacosidereduz mmp. A disfunção mitocondrial mostrou-se implicada na indução da apoptose. A abertura do poro de transição de permeabilidade mitocondrial foi demonstrada para induzir a despolarização do potencial transmembrano e a liberação de fatores pró-apoptóticos (23). Portanto, foi testado seEchinacoside poderia induzir a perda de MMP em células tumorais realizando um ensaio TMRM, que é uma abordagem bem estabelecida, já que a intensidade da fluorescência TMRM é proporcional ao potencial da membrana. Foi demonstrado queEchinacoside o tratamento reduz significativamente a MMP de forma dependente de doses (Fig. 4).

Echinacoside controla o crescimento de células tumorais através da quinase proteica ativada por mitogênio (MAPK), mas não a AKT, sinaliza. Para investigar melhor a base molecular deEchinacoside-morte celular tumoral mediada, a atividade de várias vias vitais de sinalização, como MAPK e AKT (24,25), que controlam a sobrevivência celular e a morte foram examinadas. Os MAPKs são evolutivamente conservados, proline-directed ser/Thr protein kinases, incluindo quinases extracelulares reguladas por sinal (ERKs), c-Jun NH2-terminal kinase (JNKs) e os membros da família p38 que são ativados através de cascatas de sinalização de quinase de três níveis (26,27). Neste estudo, foi avaliada a expressão de MAPKs e AKT, bem como suas formas fosforiladas ativadas, e foi revelado queEchinacoside suprime significativamente a atividade JNK e ERK1/2, mas melhora a atividade p38 (Fig. 5). Notavelmente, foi demonstrado que a atividade AKT, que também é criticamente importante para a proliferação celular, não é afetada pelo tratamento ECH (Fig. 5). Além disso, mostrou-se que o tratamento ECH eleva a expressão de Bax e Caspase-3, reduzindo a expressão Bcl-2 (Fig. 5), que é consistente com a Fig. 2. Assim, os resultados indicam queEchinacosideaciona a apoptose de células tumorais através da via MAPK.

cistancheechinacosideà anti-apoptose

Discussão

Até onde sabemos, este é o primeiro estudo a mostrar queEchinacoside tem uma função supressiva de tumor, desencadeandoapoptose(Fig. 2), promovendo a produção de ROS (Fig. 3) e induzindo a despolarização potencial da membrana mitocondrial (Fig. 4), levando, consequentemente, à inibição do crescimento das células tumorais (Fig. 1). Além disso, a base molecular da morte celular tumoral mediada pela ECH mostrou-se ocorrer regulando as vias de sinalização MAPK (Fig. 5). Esses achados demonstram uma nova função da ECH na prevenção da tumorigênese e, portanto, sugerem que pode ser um agente candidato para a terapia do câncer.

A maioria dos medicamentos anticancerígenos pode induzir apoptose de células tumorais, senescência e/ou parada do ciclo celular, o que leva à inibição do crescimento e proliferação de células tumorais. A detenção do ciclo celular é uma resposta celular a sinais de estresse leves que permitem que as células reparem DNA danificado antes de iniciar a síntese de DNA replicativo ou mitose, enquanto apoptose e senescência (prisão permanente do ciclo celular) ocorrem em resposta a sinais de estresse que eliminam células irreparáveis ou malignas (28,29). Portanto, apenas o efeito apoptótico deEchinacoside em células tumorais foi avaliado neste estudo, pois matar células cancerosas é um dos principais critérios para avaliar a potência de um agente anticâncer. Notavelmente, foi demonstrado que o ECH induz a expressão de Bax (Fig. 5), um gene pró-apoptótico, transcritivamente ativado pelo supressor de tumor p53 (30). Assim, vale a pena testar seEchinacoside pode ativar a via de sinalização p53. Se assim for, o ECH também pode ser capaz de provocar a prisão do ciclo celular dependente de p53, senescência, apoptose ou autofagia. Neste estudo, elucidada a função tumor-supressiva da ECH na linha celular adenocarcinoma pancreático de SW1990 foi elucidada. No entanto, mais estudos observando mais linhas de células cancerígenas do pâncreas são necessários. Tem sido demonstrado que mutações na proteína oncogênica RAS e no supressor de tumor p53 estão associadas ao desenvolvimento do câncer de pâncreas (31); no entanto, a linha celular SW1990 não abriga qualquer mutação p53, de acordo com o banco de dados IARC p53 Portanto, é importante investigar seEchinacoside pode afetar o crescimento e a proliferação de outras linhas de células cancerígenas pancreáticas com diferentes mutações p53. Além disso, seria interessante determinar se a ECH é capaz de promover apoptose e inibir o crescimento de outros tipos de tumores.

Elevação ros e redução de MMP, que foram causadas porEchinacoside tratamento, têm se mostrado essenciais emapoptoseindução (22). Além disso, verificou-se que a ROS pode induzir a oxidação dos poros mitocondriais contribuindo para a liberação do citocromo c, um intermediário em apoptose, devido ao rompimento do MMP (22). Assim, resta determinar se a ECH interrompe o MMP indiretamente através da indução da ROS. Além disso, o estresse oxidativo provocado pelo ROS também tem se mostrado envolvido na modulação de uma miríade de sinais de controle de crescimento celular, incluindo p53, NF-κB, HIFs e PI3K (32). Resta determinar se e, se for o caso, como a ECH regula essas importantes vias de sinalização. Notavelmente, o estresse oxidativo causa várias doenças neurodegenerativas devido ao alto consumo de oxigênio, sistemas antioxidativos fracos e características de diferenciação terminal do sistema nervoso central (33). No entanto, vários estudos têm mostrado queEchinacosidetem efeitos protetores e anti-apoptóticos no tecido nervoso. Nesse sentido, é razoável supor que o ECH pode reduzir a produção de ROS nas células neurais diferenciadas por terminais. Portanto, também resta determinar se a regulação da produção de ROS pela ECH depende do status de diferenciação celular. Assim, os resultados atuais, juntamente com outros estudos, revelam que o ECH, o TCM amplamente utilizado, pode ser uma importante estratégia quimioterápico não só para o tratamento de doenças neurodegenerativas, mas também para carcinomas malignos.

Recentemente, o uso de TCM na terapia contra o câncer tem ganhado cada vez mais atenção. O potencial dos produtos naturais provenientes de plantas medicinais utilizadas no TCM tem sido reconhecido pela comunidade científica mesmo no mundo ocidental (9). Esforços são necessários para elucidar os mecanismos subjacentes de ação desses produtos naturais, o que pode eventualmente levar ao desenvolvimento de medicamentos eficientes e seguros para a terapia do câncer.

Em conclusão, o presente estudo demonstrou a função inibitória do tumor deEchinacoside e também elabora a base molecular deEchinacoside-supressão de tumor mediado, sugerindo assim a potencial aplicação clínica deEchinacoside na terapia contra o câncer.

echinacosideem cistanche

Confirmações

Este estudo foi financiado e apoiado pelo Programa-Chave de Pesquisa Científica da FMU (bolsa nº 09ZD014). Os autores gostariam de agradecer a Biomedworld (Xangai, China) pela ajuda na edição do manuscrito.

DeEchinacosidesuprime o crescimento celular do adenocarcinoma pancreático induzindoapoptoseatravés da via de quinase de proteína ativada por mitogênio por WEI WANG, JINBIN LUO, YING HUI LIANG e XINFENG LI

---MOLECULAR MEDICINE REPORTS 13: 2613-2618, 2016 DOI: 10.3892/mmr.2016.4867

Referências

1. Hanahan D e Weinberg RA: Marcas do câncer: A próxima geração. Célula 144: 646-674, 2011.

2. Alderton GK: Transcrição: Os efeitos transcricionais do MYC. Nat Rev Cancer 14: 513, 2014.

3. Zindy F, Eischen CM, Randle DH, Kamijo T, Cleveland JL, Sherr CJ e Roussel MF: A sinalização myc através do supressor de tumor ARF regula p53-dependenteapoptosee imortalização. Genes Dev 12: 2424-2433, 1998.

4. Sachdeva M, Zhu S, Wu F, Wu H, Walia V, Kumar S, Elble R, Watabe K e Mo YY: p53 reprime c-Myc através da indução do supressor de tumor miR-145. Proc Natl Acad Sci USA 106: 3207-3212, 2009.

5. Liao JM, Cao B, Zhou X e Lu H: Novos insights sobre as funções p53 através de seus microRNAs alvo. J Mol Cell Biol 6: 206-213, 2014.

6. Zamble DB e Lippard SJ: Cisplatina e reparação de DNA na quimioterapia do câncer. Tendências Biochem Sci 20: 435-439, 1995.

7. Kleeff J, Kornmann M, Sawhney H e Korc M: Actinomycin D induzapoptosee inibe o crescimento de células cancerígenas pancreáticas. Int J Câncer 86 399-407, 2000.

8. Tacar O, Sriamornsak P e Dass CR: Doxorubicin: Uma atualização sobre ação molecular anticancerígena, toxicidade e novos sistemas de entrega de drogas. J Pharm Pharmacol 65: 157-170, 2013.

9. Efferth T, Li PC, Konkimalla VS e Kaina B: Da medicina tradicional chinesa à terapia racional do câncer. Tendências Mol Med 13: 353-361, 2007.

10. Yim H, Lee YH, Lee CH e Lee SK: Emodin, um derivado de anthraquinona isolado dos rizomas de Rheum palmatum, inibe seletivamente a atividade da caseina quinase II como um inibidor competitivo. Planta Med 65: 13/9, 1999.

11. Zhang L, Chang CJ, Bacus SS e Hung MC: Transformação suprimida e diferenciação induzida de células cancerígenas de mama HER-2/neu-superexpressoras por emodin. Câncer Res 55: 3890-3896, 1995.

12. Pommier Y: Topoisomerase I inibidores: Camptothecins e além. Nat Rev Cancer 6: 789-802, 2006.

13. Lee YW, Chen TL, Shih YR, Tsai CL, Chang CC, Liang HH, Tseng SH, Chien SC, e Wang CC: A terapia tradicional de medicina chinesa adjuntiva melhora a sobrevida em pacientes com câncer de mama avançado: Um estudo de base populacional. Câncer 120: 1338-1344, 2014.

14. Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Namba T e Kadota S: Acteoside inibeapoptoseem D-galactosamina e lipopolisacarídeo induzido por lesão hepática. Life Sci 65: 421-430, 1999.

15. Gao JJ, Igarashi K e Nukina M: Atividade radical de limpeza de glicos fenilpropanoides em Caryopteris incana. Biosci Biotechnol Biochem 63: 983-988, 1999.

16. Zhang Y, Xing J, Ai T, Wen T, Guan L, e Zhao J: Proteção deechinacosidecontra lesão pulmonar aguda causada por ácido oleico em ratos. Free Radic Res 41: 798-805, 2007.

17. Li X, Gou C, Yang H, Qiu J, Gu T e Wen T:Echinacosideameliotra D-galactosamina mais lipopolysacarídeo induzido por lesão hepática aguda em camundongos através da inibição deapoptosee inflamação. Scand J Gastroenterol 49: 993-1000, 2014.

18. Zhao Q, Gao J, Li W e Cai D: Efeitos neurotróficos e neurorescue deEchinacosideno modelo de camundongos MPTP subacute da doença de Parkinson. Brain Res 1346: 224-236, 2010.

19. Jia Y, Guan Q, Guo Y e Du C:Echinacosideestimula a proliferação celular e previne a apoptose celular nas células EPIteliais INtestinais MODE-K por meio da regulação da transformação do fator de crescimento-expressão β1. J Pharmacol Sci 118: 99-108, 2012.

20. Liao P, Wang W, Shen M, Pan W, Zhang K, Wang R, Chen T, Chen Y, Chen H, e Wang P: Um loop de feedback positivo entre EBP2 e c-Myc regula transcrição rDNA, proliferação celular e tumorigênese. Cell Death Dis 5: e1032, 2014.

21. Westphal S e Kalthoff H: Apoptosis: Alvos de câncer no pâncreas. Câncer de Mol 2: 6, 2003.

22. Simon HU, Haj-Yehia A e Levi-Schaffer F: Papel das espécies reativas de oxigênio (ROS) emapoptoseindução.Apoptose5: 415-418, 2000.

23. Ly JD, Grubb DR e Lawen A: O potencial da membrana mitocondrial (delta psi(m)) em apoptose; uma atualização.Apoptose8: 115-128, 2003.

24. Munshi A e Ramesh R: Cineases proteicas ativadas por mitogênio e seu papel na resposta à radiação. Genes Cancer 4: 401-408, 2013.

25. Abraham AG e O'Neill E: PI3K/Akt-mediado regulação do p53 em câncer. Biochem Soc Trans 42: 798-803, 2014.

26. Tournier C: As 2 Faces da Sinalização JNK em Câncer. Genes Cancer 4: 397-400, 2013.

27. Koul HK, Pal M e Koul S: Papel da transdução de sinal de quinase p38 MAP em tumores sólidos. Genes Cancer 4: 342-359, 2013.

28. Brady CA e Attardi LD: p53 de relance. J Cell Sci 123: 2527-2532, 2010.

29. Carvajal LA e Manfredi JJ: Outro garfo nas decisões de vida ou morte pelo supressor de tumor p53. REPRESENTANTE 14: 414-421, 2013.

30. Miyashita T e Reed JC: O supressor de tumor p53 é um ativador transcricional direto do gene Bax humano. Célula 80: 293-299, 1995.

31. Morton JP, Timpson P, Karim SA, Ridgway RA, Athineos D, Doyle B, Jamieson NB, Oien KA, Lowy AM, Brunton VG, et al: Mutant p53 impulsiona metástase e supera prisão de crescimento/senescência em câncer pancreático. Proc Natl Acad Sci USA 107: 246-251, 2010.

32. Schieber M e Chandel NS: função ROS em sinalização redox e estresse oxidativo. Curr Biol 24: R453-R462, 2014.

33. Li J, O W, Li W, Jiang ZG e Ghanbari HA: Estresse oxidativo e distúrbios neurodegenerativos. Int J Mol Sci 14: 24438-24475, 2013.