Efeito de redução do ácido úrico e mecanismo de acteosídeo e equinacosídeo extraído de Cistanche Tubulosa

Resumo:Procure explorar os efeitos e mecanismos de abaixamento do ácido úrico do acteosídeo (AS) e equinacósido (ECH) extraídos deCistanche Tubulosa.

MétodosO modelo de rato hiperuricemia (Hua) foi estabelecido usando oxonato de potássio (1,5 g · kg -1 · d -1) combinado com adenina (100 mg · kg -1 · d -1). Os ratos do modelo Hua foram divididos aleatoriamente em um grupo de controle de modelo, um grupo alopurinol (30 mg · kg -1 · d -1), como baixo e alto (50, 100 mg · kg -1 · d -1) grupos de dose, e 12 {13}), e 100 mg · kg {12}} · d -1) mg · kg -1 · d -1) grupos de dose. Um grupo de controle normal foi estabelecido anteriormente. Após quatro semanas de administração, o analisador de bioquímica do sangue foi usado para detectar os níveis de sura, Crea, adenosina desaminase (ADA) e ácido úrico (UUA) na urina. O ensaio imunossorvente ligado à enzima foi usado para detectar níveis de detecção de xantina oxidase (XOD) no soro. O tecido renal foi coletado e o coeficiente renal foi pesado e calculado. A coloração da hematoxilina (HE) foi usada para observar alterações patológicas renais. A imuno -histoquímica (IHC) e a PCR em tempo real foram usadas para detectar os níveis de expressão de proteínas e mRNA do transportador de urato 1 (URAT1), transportador de glicose 9 (GLUT9), transportador de ânions orgânico 1 (OAT1) e transportador de ânions orgânico 3 (OAT3) no tecido renal. Os resultados como e a CEC podem melhorar a função renal em ratos modelos de Hua, reduzir os níveis de ácido úrico no sangue, promover a excreção do ácido úrico, regulamentar negativamente os níveis séricos de ADA e XOD e regulam a expressão de proteínas e mRNA da proteína e o mRNA de URAT1 e GLUT9 no tecido renal, enquanto a expressão da proteína e do mRNA de OAT1 e OTRAT3 na regulamentação.

Conclusões Os glicosídeos feniletanóides As e a ECH da cistanche tubulosa podem exercer efeitos de abaixamento do ácido úrico, melhorando a função renal em ratos modelo Hua, reduzindo os níveis de ADA e XOD e regulando a expressão de Urat1, GLUT9, OAT1 e OAT3.

Palavras -chave: Cistanche Tubulosa; Acteoside; equinacosídeo; hiperuricemia; redução do ácido úrico; mecanismo

 

 

 

Extrato de Cistanche Tubulosa com 16% de Acteoside

Entre em contato conosco agora

 

 

 

A hiperuricemia (Hua) é uma doença metabólica causada pelo metabolismo da purina desordenada no corpo humano, levando a níveis elevados de ácido úrico no sangue [1]. Normalmente é diagnosticado quando os níveis de ácido úrico no sangue excedem 7. 0 mg · dl⁻¹ (416. 0 μmol⁻ l) em homens e 6. 0 mg · dl⁻uo (357. O desenvolvimento da hiperuricemia está principalmente relacionado a fatores como dietas de alta purina, consumo crônico de álcool, uso de medicamentos e hipotireoidismo. Não apenas aumenta o risco de doenças cardiovasculares, diabetes e hipertensão [{11}}], mas também afeta significativamente a saúde dos pacientes.

Atualmente, os tratamentos clínicos para hiperuricemia incluem principalmente medicamentos que inibem a produção de ácido úrico e promovem a excreção do ácido úrico. No entanto, esses tratamentos têm certas limitações para pacientes com função de fígado ou renal prejudicada [5-6]. Portanto, explorar medicamentos eficazes com baixos efeitos colaterais é de grande importância para a prevenção e tratamento da hiperuricemia.

Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, comumente usada na medicina tradicional chinesa como uma erva de tonificação para rins, é empregada para tratar condições como impotência, infertilidade, deficiência de essência e sangue, fraqueza na região lombar e joelhos, fraqueza muscular e constipação devido à secura intestinal [7]. Estudos mostraram queCistanche TubulosaPossui efeitos neuroprotetores [8], anti-inflamatórios [9], regulamentação do metabolismo ósseo [10] e efeitos que aumentam a eficácia na quimioterapia para pacientes com câncer [11]. Entre seus vários componentes ativos, os glicosídeos feniletanóides são os mais abundantes.

Acteosídeo (AS) e Echinacosídeo (ECH), dois glicosídeos feniletanóides com alto conteúdo emCistanche Tubulosa, exibem forte atividade biológica e possuem potencial significativo para desenvolvimento e aplicação. Consequentemente, nosso grupo de pesquisa selecionou como e a ECH para estudos posteriores. Através de previsões de farmacologia de rede e pré-experiências em camundongos, descobrimos que extratos de glicosídeo feniletanóide deCistanche Tubulosapode ter um certo efeito de abate a ácido úrico. No entanto, os caminhos e mecanismos desses efeitos permanecem incertos.

Assim, usando os mecanismos da produção de ácido úrico e suas vias primárias de excreção como foco da pesquisa, investigamos os efeitos de abate a ácido úrico dos extratos de glicosídeo feniletanóide como e a ECH. Este estudo tem como objetivo elucidar as vias e mecanismos através dos quais a AS e a ECH exercem seus efeitos de abate a ácido úrico.

1 materiais

1.1 Animais experimentais

Setenta ratos machos Spf-Grad-Dawley (SD), pesando 150-180 g, foram adquiridos no centro de animais experimentais da Universidade Médica Xinjiang. Número da licença de produção animal: SCXK (xin) 2023-0001. Este experimento foi aprovado pelo Comitê de Ética Animal do Instituto de Pesquisa da Região Autônoma de Xinjiang Uygur, com o número de aprovação da ética animal: Iacuc- (Zhun) -2024-009.

1.2 drogas e reagentes

Extratos de glicosídeo feniletanóide (AS e ECH)deCistanche Tubulosa (purity >98%, verificados por cromatografia líquida de alta eficiência) foram extraídos, purificados e preparados pelo principal laboratório da ciência da formulação uygur, o instituto de pesquisa da região autônoma de Xinjiang Uygur. Números em lote: 20220617 (AS) e 20220526 (ECH).

Comprimidos de alopurinol, Número do lote: 62208726, fabricado por Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.

Oxonato de potássioeadenina, números em lote: i2130050 e c2202255, adquiridos da Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.

Crea (creatinina), UA (ácido úrico), uréia e ADA (adenosina desaminase) kits, números de lote: 141123010, 141223004, 141323008 e 043624005, adquiridos da Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.

Xod (xantina oxidase) kit de ensaio de atividade, Número do lote: Y10001219, comprado da Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.

Anticorpos (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), números de lote: 3i5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2I44618, adquiridos da Affinity Biosciences.

IgG anti-coelho de cabra marcada com HRP, Número do lote: 245440113, adquirido da ZSGB-BIO.

Solução de coloração com hematoxilina, Número do lote: 24135741h, comprado da Pequim Lanjieke Technology Co., Ltd.

Kit de reagente cromogênico DAB, Número do lote: 240010512, adquirido da ZSGB-BIO.

DEPC (dietil pirocarbonato), número do catálogo: d 60029-500 ml, comprado da Amresco (EUA).

Marcador de DNA DL2000 Hiclear M5 Hiclear, Número do catálogo: MF025, comprado da Pequim Genomics Biotechnology Co., Ltd.

Reagente TRIZOL ™, Número do catálogo: 15596026, comprado da Thermo Fisher Scientific (EUA).

5x all-in-one rt mastermixeEvagreen Express 2 × QPCR MasterMix-Low Rox, números de catálogo: G492 e G891, ambos adquiridos da Applied Biological Materials Inc. (ABM).

2 métodos

2.1 Estabelecimento e agrupamento de modelos

Setenta ratos machos Sprague-Dawley (SD) foram aclimatados e divididos em dois grupos: um grupo de controle normal (1 0 ratos) e um grupo de controle de modelo (60 ratos). O grupo controle normal foi administrado a 0,5% CMC-NA via gavage. O grupo de controle do modelo foi administrado oxonato de potássio (1,5 g · kg⁻uo) combinado com adenina (100 mg · kg⁻¹) na dose de 10 ml · kg⁻ped, uma vez ao dia por 14 dias consecutivos. O modelo foi considerado estabelecido com sucesso quando os níveis de uréia, Crea e SUA aumentaram significativamente, conforme medido por um analisador bioquímico.

Os ratos do modelo de hiperuricemia foram divididos nos grupos a seguir, com base nos níveis de SUA, uréia e CREA: grupo de controle de modelos, grupo de alopurinol (3 0 mg · kg⁻uo), baixa dose como grupo (50 mg · kg⁻uo), grupo de dose (100 mg · k⁻cial), kg⁻uo), grupo de dose (100 mg · k⁻cial), kg⁻uo), grupo de dose (100 mg · k⁻j), kg · kg⁻⁻), grupo de dose (100 mg · k⁻d), · kg⁻uo), grupo de dose (100 mg · k ⁻⁻) Grupo ECH (100 mg · kg⁻ju), com 10 ratos em cada grupo. Para manter hiperuricemia estável, todos os grupos, exceto o grupo controle normal, receberam oxonato de potássio (500 mg · kg⁻uo) combinado com adenina (100 mg · kg⁻uo) via gavagem pela manhã, seguida pela administração dos respectivos medicamentos em cada grupo de tratamento à tarde. O grupo de controle normal recebeu solução de CMC-NA a 0,5% pela manhã e a água potável à tarde, com uma dose de 10 ml · kg⁻ped, uma vez ao dia por 14 dias consecutivos. Posteriormente, a administração de agentes de modelagem foi interrompida e os respectivos medicamentos foram administrados continuamente diariamente por mais 14 dias.

 

2.2 Coleção de amostras

Após a dose final, os ratos foram jejuados durante a noite (a água não foi restrita). A urina de cada grupo foi coletada para teste de ácido úrico. O peso corporal foi medido após o jejum e as amostras de sangue foram coletadas sob anestesia. O soro foi separado por centrifugação e armazenado para uso futuro. Os tecidos renais foram coletados e pesados. Um rim foi fixado em solução de paraformaldeído a 4%, enquanto o outro foi congelado em nitrogênio líquido para análise posterior.

 

2.3 Medição do ácido úrico na urina de rato

As amostras de urina de cada grupo foram centrifugadas (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, raio centrífugo 14 cm) e o sobrenadante foi coletado. As amostras de urina foram diluídas 1: 9 com solução salina e analisadas para o teor de ácido úrico usando um analisador bioquímico.

2.4 Medição de ADA, Urea, Crea e SUA em soro de rato

Amostras de sangue de cada grupo foram centrifugadas (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, raio centrífugo 14 cm) e o soro foi coletado. Os níveis de ADA, Urea, Crea e SUA no soro foram medidos usando um analisador bioquímico.

 

2.5 Medição de Xod no soro de rato

As alterações nos níveis de Xod no soro de ratos foram medidas usando um ensaio enzimático de acordo com as instruções do fabricante. A absorvância inicial (A₁) e a absorvância final (A₂) a 290 nm foram registradas e ΔA (ΔA=a₂ - a₁) foi calculado. ΔA foi substituído na fórmula:
Xod (nmol⁻uo · min⁻¹ · ml⁻¹)=[ΔA × Sistema de reação Volume total ÷ (coeficiente de extinção molar de ácido úrico × comprimento do caminho óptico) × 10⁹] ÷ Volume da amostra ÷ tempo=4262} × δA,
Para calcular a quantidade de ácido úrico catalisado por minuto por mililitro do soro.

 

2.6 Medição do coeficiente de rim

Os tecidos renais foram coletados, lavados com solução salina e o excesso de água foi removido. O peso do órgão foi medido com precisão e o coeficiente renal foi calculado da seguinte forma:
Coeficiente de rim=peso renal (mg) / peso corporal (g).

 

2.7 Observação histopatológica do tecido renal por ele manchando

Os tecidos renais fixados em solução de paraformaldeído a 4% foram desidratados com concentrações de etanol graduadas, limpas com xileno, incorporadas em parafina e seccionadas em fatias 4- μm. As seções foram desparafinizadas com xileno, hidratadas com etanol graduado, coradas com hematoxilina e eosina (HE) e seladas com gengiva neutra. As alterações morfológicas no tecido renal foram observadas sob um microscópio leve e as imagens foram capturadas a 400 × ampliação.

 

2.8 Detecção de expressão de proteína URAT1, GLUT9, OAT1 e OAT3 no tecido renal por IHC

Os tecidos renais fixados em solução de paraformaldeído a 4% foram desidratados com concentrações de etanol graduadas, limpas com xileno, incorporadas em parafina e seccionadas. A recuperação de antígenos e o bloqueio de soro de cabras foram realizados. Os anticorpos primários (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) foram adicionados a uma diluição de 1: 200 e incubados durante a noite a 4 graus. No dia seguinte, as seções foram lavadas com PBS, secas ao ar e incubadas com IgG anti-coelho de cabra marcada com biotina a 37 graus por 30 minutos. As seções foram lavadas com PBS e incubadas com reagente cromogênico DAB por 10 minutos, seguido de enxaguamento de PBS, coloração com hematoxilina por 3 minutos, diferenciação com solução de etanol de ácido clorídrico, azul de carbonato de lítio, dehidratação com etanol de graduação, limpeza com xileno e vedação com selagem neutra.

Para cada rato, foram selecionados dois campos aleatórios 4 0 0 × campos das seções renais. A coloração positiva (amarelo-marrom) foi analisada e a densidade óptica integrada (IOD) de cada campo foi medida usando a imagem-Pro mais 6.0 para análise estatística.