5.2. Análise de óleo essencial

O isolamento dos óleos essenciais por hidrodestilação foi realizado em um aparelho do tipo Clevenger por 3 h [64].

O glicosídeo de cistanche também pode aumentar a atividade de SOD nos tecidos do coração e do fígado e reduzir significativamente o conteúdo de lipofuscina e MDA em cada tecido, eliminando efetivamente vários radicais reativos de oxigênio (OH-, H₂O₂, etc.) e protegendo contra danos ao DNA causados por radicais OH. Os glicosídeos feniletanóides cistanche têm uma forte capacidade de eliminação de radicais livres, uma capacidade redutora maior do que a vitamina C, melhoram a atividade de SOD na suspensão de esperma, reduzem o conteúdo de MDA e têm um certo efeito protetor na função da membrana espermática. Os polissacarídeos Cistanche podem aumentar a atividade de SOD e GSH-Px em eritrócitos e tecidos pulmonares de camundongos experimentalmente senescentes causados ​​por D-galactose, bem como reduzir o conteúdo de MDA e colágeno no pulmão e no plasma e aumentar o conteúdo de elastina, têm um bom efeito de eliminação no DPPH, prolongar o tempo de hipóxia em camundongos senescentes, melhorar a atividade de SOD no soro e retardar a degeneração fisiológica do pulmão em camundongos experimentalmente senescentes Com degeneração morfológica celular, experimentos mostraram que Cistanche tem boa capacidade antioxidante e tem potencial para ser um medicamento para prevenir e tratar doenças de envelhecimento da pele. Ao mesmo tempo, o echinacoside em Cistanche tem uma capacidade significativa de eliminar os radicais livres DPPH e pode eliminar espécies reativas de oxigênio, prevenir a degradação do colágeno induzida por radicais livres e também tem um bom efeito de reparo nos danos causados ​​pelos radicais livres da timina.

Clique em Suplemento Cistanche Tubulosa

【Para mais informações: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

As análises dos óleos foram realizadas por cromatografia gasosa (GC) e cromatografia gasosa/espectrometria de massa (GC/MS). As análises de GC foram realizadas usando um cromatógrafo a gás (Agilent 7890A, Palo Alto, CA, EUA), equipado com um 30 m × 0,25 mm id com 0,25 µm estacionário espessura do filme coluna capilar HP-5 (Agilent J&W, Santa Clara, CA, EUA). O seguinte programa de temperatura foi usado: de 60 ◦C a 246 ◦C a uma taxa de 3 ◦C min−1 e então mantido a 246 ◦C por 20 min (tempo total de análise 82 min). Outras condições operacionais foram as seguintes: gás de arraste hélio (pureza maior ou igual a 99,9999 por cento — Air Liquide, Milão, Itália); vazão, 1,0 mL.min−1; temperatura do injetor, 250 ◦C; temperatura do detector, 300 ◦C. A injeção de 1 µL de amostra diluída (1:100 em n-hexano, p/p) foi realizada com proporção de divisão de 1:20, usando um amostrador automático (Agilent, Modelo 7683B, Santa Clara, CA, EUA).

As análises GC-MS foram realizadas usando um cromatógrafo a gás (Agilent 6890N, Santa Clara, CA, EUA) equipado com um diâmetro interno de 30 m × 0,25 mm com espessura de filme estacionário de 0,25 µm HP{ coluna capilar {7}}ms (Agilent J&W, Santa Clara, CA, EUA) acoplada a um detector seletivo de massa com um dispositivo de ionização de elétrons, EI e um analisador quadrupolo (Agilent 5973, Santa Clara, CA, EUA). O programa de temperatura e as condições de operação cromatográfica (exceto o detector) foram as mesmas usadas para GC-FID. As condições do MS foram as seguintes: temperatura da linha de transferência do MS 240 ◦C; Temperatura da fonte de íons EI, 200 ◦C com energia de ionização de 70 eV; temperatura do quadrupolo 150 ◦C; taxa de varredura, 3,2 varreduras.s-1 na faixa de varredura m/z, (30 a 480). Para manipular e processar cromatogramas e espectros de massa foi utilizado o software MSD ChemStation (Agilent, rev. E.01.00.237, Santa Clara, CA, EUA). Os compostos foram identificados por comparação de seus espectros de massa com os dados da biblioteca NIST02 do sistema GC/MS e bibliotecas Adams [32,33]. Os resultados foram ainda confirmados pela comparação da ordem de eluição dos compostos com seus índices de retenção em fases semipolares relatados na literatura [32]. Os índices de retenção dos componentes foram determinados em relação aos tempos de retenção de uma série de n-alcanos (duas misturas padrão C8–C20 e C21–C40) com interpolação linear [65]. A porcentagem de componentes individuais foi calculada com base nas áreas de pico de GC sem correção do fator de resposta FID. Os resultados são apresentados como a porcentagem de picos individuais ± desvio padrão de duas execuções cromatográficas independentes.

5.3. Atividade antifúngica

A atividade antifúngica do óleo essencial de S. cacaliifolia foi avaliada contra fungos filamentosos e leveduras. Três cepas clínicas de dermatófitos isoladas de unhas e pele (Epidermophyton floccosum FF9, Trichophyton mentagrophytes FF7 e Microsporum canis FF1) e quatro cepas de dermatófitos da Coleção Espanhola de Cultivos Tipo (T. mentagrophytes var. interdigital CECT 2958, T. rubrum CECT 2794, T. verrucosum CECT 2992 e M. gypseum CECT 2908), uma cepa do tipo Cryptococcus neoformans (C. neoformans YPO186), duas cepas clínicas de Candida isoladas de casos recorrentes de vulvovaginal (C. krusei LF33, C. guillermondii MAT23) e três cepas do tipo Candida (C. albicans ATCC 10231, C. tropicalis YPO128 e C. parafimose ATCC 90018). Todas as cepas foram armazenadas em caldo Sabouraud dextrose com 20 por cento de glicerol a -80 ◦C e subcultivadas em Sabouraud dextrose agar (SDA) ou Potato dextrose agar (PDA) antes de cada teste, para garantir condições ideais de crescimento e pureza.

Um método de caldo de microdiluição foi usado para determinar as concentrações inibitórias mínimas (MIC) e a concentração letal mínima (MLC) do óleo de acordo com o protocolo de referência do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) M38-A2 [66] ou M27-A3 [67] para fungos filamentosos e leveduras, respectivamente. A MIC foi a menor concentração em que não foi observado crescimento nos tubos de ensaio inoculados, enquanto a MLC foi a menor concentração em que não foi observado crescimento após a inoculação em SDA de todos os tubos negativos. Um controle negativo (meio não inoculado) e um positivo (meio inoculado com 1 por cento de DMSO) também foram incluídos.

5.4. Atividade anti-inflamatória

RAW 264.7, uma linha celular de macrófagos leucêmicos de camundongo obtida da American Type Culture Collection (ATCC TIB-71), foi cultivada conforme relatado anteriormente por nosso grupo [22].

A produção de NO foi medida pela quantificação do acúmulo de nitritos nos sobrenadantes da cultura, usando o reagente de Griess [68]. As células (0.6 × 106 células/poço) foram cultivadas em placas de cultura de 48-poços. Após uma estabilização durante a noite, os macrófagos foram pré-tratados por 1 h com o óleo essencial (0.08–1,25 µL/mL) diluído em DMSO e então ativados com 50 ng/mL de LPS para 24h. Foram realizados controles positivos (macrófagos estimulados por LPS) e negativos (macrófagos não tratados). Após este período de incubação, volumes iguais de sobrenadantes de cultura e reagente de Griess [1:1 de 0,1 por cento (p/v) dicloridrato de N-(1-naftil) etilenodiamina e 1 por cento (p/v) sulfanilamida contendo 5 por cento ( w/v) H3PO4] foram misturados e incubados por 30 min, no escuro. A absorbância em 550 nm foi registrada em um leitor automático de placas (Agilent, Santa Clara, CA, EUA) e a concentração de nitrito foi determinada a partir de uma curva padrão de nitrito de sódio. O DMSO na concentração máxima utilizada (0,4 por cento ) já foi demonstrado por nosso grupo como desprovido de efeitos anti-inflamatórios e citotóxicos (dados não apresentados).

RAW 264.7 (1,2 × 106 células/poço) foi cultivado em placas de 6-poços e deixado estabilizar por 12 h. Em seguida, as células foram incubadas com o óleo essencial (0,64 µL/mL) por 1 h, seguido de ativação do LPS (50 ng/mL) por 24 h. Um controle negativo (células não tratadas) e um controle positivo (células tratadas apenas com LPS) foram considerados. Os lisados ​​celulares foram preparados conforme descrito anteriormente por Zuzarte et al. [22].

A análise de Western blot foi realizada para medir os níveis de proteína de óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e ciclooxigenase{{0}} (COX-2). As proteínas foram separadas por eletroforese em SDS-poliacrilamida 10 por cento (v/v), a 130 V por 1,5 h, e transferidas para membranas de fluoreto de polivinilideno (previamente ativadas com metanol) a 400 mA por 3 h. Após o bloqueio de IgGs não específicos com 5 por cento (p/v) de leite em TBS-T por 1 h em temperatura ambiente, as membranas foram incubadas com anticorpos específicos contra iNOS (1:500; R & D Systems) ou COX{{15} } (1:5000; Abcam, Cambridge, Reino Unido) durante a noite, a 4 ◦C. Em seguida, as membranas foram lavadas por 30 min com TBS-T (10 min, 3 vezes) e incubadas em temperatura ambiente, por 1 h, com anticorpos secundários (1:40,000; Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX , EUA) conjugado com peroxidase de rábano. Os imunocomplexos foram detectados usando um scanner de quimioluminescência (Image Quant LAS 500, GE, Boston, MA, EUA). As membranas foram sondadas com um anticorpo anti-tubulina (1:20.000; Sigma) para garantir que uma quantidade equivalente de proteína foi carregada. A quantificação de proteínas foi realizada usando ImageLab versão 6.1.0 (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, EUA).

5.5. Migração celular

NIH 3T3, uma linha celular de fibroblastos embrionários de camundongos (ATCC CRL-1658), foi cultivada conforme descrito anteriormente em nosso grupo [69].

5.5.2. Ensaio de migração celular

A migração celular foi realizada usando o ensaio de ferida raspada conforme relatado por Martinotti e colegas [70] com pequenas modificações. Resumidamente, os fibroblastos NIH 3T3 foram semeados a 2,5 × 105 células/mL em 12-placas de poços. Após 24 horas de crescimento, uma raspagem foi realizada na monocamada de células usando uma ponta de pipeta de 20-200 µL. As células destacadas foram removidas lavando as células com PBS 1x estéril. DMEM com 2 por cento de soro foi adicionado a todas as placas, na presença ou ausência do óleo essencial. Usando um microscópio de contrato de fase, as imagens foram adquiridas 0, 12 e 18 h após o arranhão, e a área da ferida foi medida usando o software ImageJ/Fiji. Os resultados apresentados foram obtidos usando a seguinte equação

5.6. Viabilidade celular

O efeito de diferentes concentrações do óleo essencial na viabilidade de macrófagos e fibroblastos foi realizado usando o ensaio de redução de resazurina. Resumidamente, macrófagos ({{0}},6 × 106 células/mL) ou fibroblastos (1,25 × 105 células/mL) foram semeados em 48-placas de poços. Após estabilização durante a noite, diferentes concentrações do óleo essencial (0,08–1,25 µL/mL) diluídas em DMSO foram adicionadas por 24 horas. Ao final do experimento, o meio foi removido e adicionado meio fresco contendo resazurina (1:10) por 1 h ou 4 h, para macrófagos e fibroblastos, respectivamente. A absorbância em 570 nm com filtro de referência de 620 nm foi registrada em leitora automática de placas (Agilent, Santa Clara, CA, EUA). A viabilidade celular foi determinada usando a seguinte equação:

onde AbsExp é a absorbância (diferença entre 570 e 620 nm) nas diferentes condições experimentais e AbsCT é a absorbância nas células controle (sem óleo essencial).

5.7. Senescência Induzida por Etoposídeo 

A senescência foi avaliada usando um kit de coloração de beta-galactosidase disponível comercialmente de acordo com o protocolo do fabricante (Cell Signaling Technology). Resumidamente, 2,5 × 104 fibroblastos foram semeados em placas de poços 12- e permitiram a adesão durante a noite. Em seguida, a senescência foi induzida pela incubação das células com 12,5 µM de etoposídeo por 24 h. O etoposido foi removido e as células foram lavadas com PBS 1x. Em seguida, as células foram recuperadas por 72 h em DMEM na ausência ou na presença de óleo essencial de S. cacaliifolia, e as mudanças na morfologia foram avaliadas diariamente. Após 72 h, as células foram fixadas por 15 min usando solução fixadora 1x (fornecida no kit comercial), seguidas de lavagens com PBS e incubadas durante a noite com uma solução de coloração de beta-galactosidase em uma incubadora seca a 37 ◦C sem fornecimento de CO2. Diferentes campos foram vistos em um microscópio para o desenvolvimento da cor azul e foram fotografados para análise de imagem (8 imagens por condição). Uma coloração azul distinta foi indicativa da atividade da beta-galactosidase. A análise quantitativa foi realizada usando ImageJ, e a porcentagem de células senescentes para o total de células foi calculada.

5.8. Análise estatística

Os resultados são apresentados como valores médios ± SEM (erro padrão da média) de pelo menos três experimentos independentes realizados em duplicata. A significância estatística para os ensaios anti-inflamatórios, de viabilidade celular e de senescência foi determinada usando análise de variância (ANOVA) de uma via seguida pelo teste post-hoc de Dunnett usando GraphPad Prism versão 9.3.0 (GraphPad Software, San Diego, CA, EUA). Para ensaios de migração celular, a significância estatística foi determinada por ANOVA de duas vias seguida pelo teste de comparação múltipla de Sydák. Um valor de p < 0,05 foi considerado para representar diferenças significativas.

Contribuições do autor:Conceituação, LS e AM; validação, AS, MJG, MTC e SP; análise formal, JMA-S., MJG, AP e DF; investigação, JMA-S., AM e AP; recursos, AM, EC, MTC e LS; curadoria de dados, AP; redação—preparação do rascunho original, JMA-S., AP e AM; redação — revisão e edição, MTC, LS e AM; visualização, JMA-S.; supervisão, LS e AM; administração de projetos, LS; aquisição de financiamento, LS e MTC Todos os autores leram e concordaram com a versão publicada do manuscrito.

Financiamento:Este trabalho foi financiado pelo COMPETE 2020—Programa Operacional para a Competitividade e Internacionalização e fundos nacionais portugueses através da FCT—Fundação para a Ciência e a Tecnologia, no âmbito dos projetos UIDB/04539/2020, UIDP/04539/2020 e LA/P/0058/2020.

Declaração de Disponibilidade de Dados:Os dados estarão disponíveis mediante solicitação.

Conflitos de interesse:Os autores declaram não haver conflito de interesses.

Referências

1. Bongomin, F.; Gago, S.; Oladele, R.; Denning, D. Prevalência global e multinacional de doenças fúngicas — Precisão estimada. J. Fungi 2017, 3, 57. [CrossRef] [PubMed]

2. Campoy, S.; Adrio, JL Antifúngicos. Bioquim. farm. 2017, 133, 86–96. [CrossRef] [PubMed]

3. Gupta, AK; Cooper, EA Update in Antifungal Therapy of Dermatophytosis. Mycopathologia 2008, 166, 353–367. [CruzRef]

4. Matiz, C.; Friedlander, SF Infecções e Abscessos do Tecido Subcutâneo. Em Princípios e Prática de Doenças Infecciosas Pediátricas; Elsevier: Amsterdã, Holanda, 2012; pp. 454–462.e3.

5. de Oliveira, CB; Vasconcelos, C.; Sakai-Valente, NY; Sotto, MN; Luiz, FG; Belda Júnior, W.; de Sousa, MdGT; Benard, G.; Criado, PR Expressão dos Receptores Toll-like (TLR) 2 e 4 de Queratinócitos de Pacientes com Dermatofitose Localizada e Disseminada. Rev. Inst. Med. Trop. São Paulo 2015, 57, 57–61. [CrossRef] [PubMed]

6. Celestrino, GA; Reis, APC; Criado, PR; Benard, G.; Sousa, MGT Trichophyton Rubrum provoca respostas fagocíticas e pró-inflamatórias em monócitos humanos por meio do receptor Toll-Like 2. Front. Microbiol. 2019, 10, 2589. [CrossRef]

7. Sol, S.-C. A via não canônica do NF-B na imunidade e na inflamação. Nat. Rev. Immunol. 2017, 17, 545–558. [CrossRef] [PubMed]

8. Sharma, A.; Gupta, S. Manifestação Protetora de Herbonanocêuticos como Antifúngicos: Um Possível Candidato a Droga para Infecção Dermatofítica. Ciências da Saúde. Rep. 2022, 5. [CrossRef]

9. Guo, S.; DiPietro, LA Fatores que afetam a cicatrização de feridas. J. Dent. Res. 2010, 89, 219–229. [CruzRef]

10. Zuzarte, M.; Gonçalves, MJ; Cavaleiro, C.; Canhoto, J.; Vale-Silva, L.; Silva, MJ; Pinto, E.; Salgueiro, L. Composição Química e Atividade Antifúngica dos Óleos Essenciais de Lavandula Viridis LHér. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 612–618. [CruzRef]

11. Martinez-Rossi, NM; Bitencourt, TA; Peres, NTA; Lang, EAS; Gomes, EV; Quaresemin, NR; Martins, MP; Lopes, L.; Rossi, A. Resistência de Dermatófitos a Drogas Antifúngicas: Mecanismos e Prospecto. Frente. Microbiol. 2018, 9, 1108. [CrossRef]

12. Mourad, A.; Perfeito, JR A guerra contra a criptococose: uma revisão do arsenal antifúngico. Mem. Inst. Oswaldo. Cruz. 2018, 113, e170391. [CrossRef] [PubMed]

13. McCarthy, MW; Kontoyiannis, DP; Cornely, OA; Perfeito, JR; Walsh, TJ Novos agentes e alvos de drogas para enfrentar os desafios dos fungos resistentes. J. Infectar. Dis. 2017, 216, S474–S483. [CrossRef] [PubMed]

14. Vonkeman, HE; van de Laar, MAFJ Nonsteroidal Anti-Inflammatory Drugs: Adverse Effects and Their Prevention. Semin. Artrite. Reuma. 2010, 39, 294–312. [CrossRef] [PubMed]

15. Bakkali, F.; Averbeck, S.; Averbeck, D.; Idaomar, M. Efeitos Biológicos dos Óleos Essenciais Uma Revisão. Química Alimentar. Tóxico. 2008, 46, 446-475. [CrossRef] [PubMed]

16. Christaki, E.; Bonos, E.; Giannenas, I.; Florou-Paneri, P. Plantas aromáticas como fonte de compostos bioativos. Agricultura 2012, 2, 228–243. [CruzRef]

17. Edris, AE Potencial farmacêutico e terapêutico dos óleos essenciais e seus constituintes voláteis: uma revisão. Fitoter. Res. 2007, 21, 308–323. [CrossRef] [PubMed]

18. Pinto, E.; Vale-Silva, L.; Cavaleiro, C.; Salgueiro, L. Atividade antifúngica do óleo essencial de cravo-da-índia de Syzygium Aromaticum sobre espécies de Candida, Aspergillus e dermatófitos. J. Med. Microbiol. 2009, 58, 1454-1462. [CruzRef]

19. Pinto, E.; Hrimpeng, K.; Lopes, G.; Vaz, S.; Gonçalves, MJ; Cavaleiro, C.; Salgueiro, L. Atividade Antifúngica do Óleo Essencial de Ferulago Capillaris contra Candida, Cryptococcus, Aspergillus e Espécies Dermatófitas. EUR. J. Clin. Microbiol. Infectar. Dis. 2013, 32, 1311–1320. [CruzRef]

20. Pinto, E.; Pina-Vaz, C.; Salgueiro, L.; Gonçalves, MJ; Costa-de-Oliveira, S.; Cavaleiro, C.; Palmeira, A.; Rodrigues, A.; Martinezde-Oliveira, J. Atividade Antifúngica do Óleo Essencial de Thymus Pulegioides sobre Candida, Aspergillus e Espécies Dermatófitas. J. Med. Microbiol. 2006, 55, 1367–1373. [CruzRef]

21. Valente, J.; Zuzarte, M.; Gonçalves, MJ; Lopes, MC; Cavaleiro, C.; Salgueiro, L.; Cruz, MT Atividades Antifúngicas, Antioxidantes e Antiinflamatórias do Óleo Essencial de Oenanthe Crocata L.. Química Alimentar. Tóxico. 2013, 62, 349–354. [CrossRef] [PubMed]

22. Zuzarte, M.; Alves-Silva, JM; Alves, M.; Cavaleiro, C.; Salgueiro, L.; Cruz, MT Novos insights sobre o potencial anti-inflamatório e o perfil de segurança dos óleos essenciais de timo carnoso e timo canforado e seus principais compostos. J. Ethnopharmacol. 2018, 225, 10–17. [CruzRef]

23. Walker, JB; Sytsma, KJ; Treutlein, J.; Wink, M. Salvia (Lamiaceae) não é monofilético: implicações para a sistemática, radiação e especializações ecológicas de Salvia e tribo Mentheae. Sou. J.Bot. 2004, 91, 1115–1125. [CrossRef] [PubMed]

24. Su, C.-Y.; Ming, Q.-L.; Rahman, K.; Han, T.; Qin, L.-P. Salvia Miltiorrhiza: Usos Medicinais Tradicionais, Química e Farmacologia. Queixo. J. Nat. Med. 2015, 13, 163–182. [CrossRef] [PubMed]

25. Ghorbani, A.; Esmaeilizadeh, M. Propriedades Farmacológicas da Salvia Officinalis e Seus Componentes. J. Tradit. Complemento. Med. 2017, 7, 433–440. [CruzRef]

26. Afonso, AF; Alves-Silva, JM; Pereira, OR; Cardoso, SM Efeitos Benéficos das Plantas de Sálvia: Correlação com Componentes Bioativos. No Progresso Recente em Plantas Medicinais Volume 44: Phytotherapeutics III; Govil, JN, Pathak, M., Eds.; Studium Press: Nova Deli, Índia, 2016; pp. 161–198.

27. Salimikia, I.; Aryanpour, M.; Abdollahi, M.; Abdolghaffari, A.; Samadi, N.; Monsef-Esfahani, H. Efeitos fitoquímicos e de cicatrização de feridas do extrato metanólico de Salvia Multicaulis Vahl. em Rato. Planta Med. 2016, 81, S1–S381. [CruzRef]

28. Gali-Muhtasib, H.; Hilan, C.; Khater, C. Usos tradicionais de Salvia Libanotica (East Mediterranean Sage) e os efeitos de seus óleos essenciais. J. Ethnopharmacol. 2000, 71, 513-520. [CrossRef] [PubMed]

29. Hamidpour, M.; Hamidpour, R.; Hamidpour, S.; Shahlari, M. Química, Farmacologia e Propriedades Medicinais da Sálvia (Sálvia) para Prevenir e Curar Doenças como Obesidade, Diabetes, Depressão, Demência, Lúpus, Autismo, Doenças Cardíacas e Câncer. J. Tradit. Complemento. Med. 2014, 4, 82–88. [CruzRef]

30. Askari, SF; Avan, R.; Tayarani-Najaran, Z.; Sahebkar, A.; Eghbali, S. Iranian Salvia Species: A Phytochemical and Pharmacological Update. Phytochemistry 2021, 183, 112619. [CrossRef]

31. Davidse, G.; Sousa Sánchez, M.; Knapp, SD; Chian Cabrera, F. Rubiaceae a Verbenaceae. 4(2): I–Xvi, 1–533. Na Flora Mesoamericana; Davidse, G., Sousa Sánchez, M., Knapp, SD, Chian Cabrera, F., Eds.; Jardim Botânico de Missouri: St. Louis, MO, EUA, 2012; pp. 402–403.

32. Adams, RP Identification of Essential Oil Components by Gas Chromatography/Quadrupole Mass Spectroscopy, 4th ed.; Allured Publishing Corporation: Carol Stream, IL, EUA, 2007.

33. NIST/EPA/NIH Mass Spectral Library 2005.

34. Guijarro-Muñoz, I.; Compte, M.; Álvarez-Cienfuegos, A.; Álvarez-Vallina, L.; Sanz, L. Lipopolysaccharide ativa Toll-like Receptor 4 (TLR4)-Mediated NF-KB Signalway Pathway and Proinflamatório Response in Human Pericytes. J. Biol. Chem. 2014, 289, 2457–2468. [CruzRef]

35. Scrima, M.; Melito, C.; Merola, F.; Iório, A.; Vito, N.; Giori, AM; Ferravante, A. Avaliação da atividade cicatrizante do extrato hidroalcoólico da parte aérea da Salvia Haenkei em modelos experimentais in vitro e in vivo. Clin. Cosmet. Investigar. Derm. 2020, 13, 627–637. [CrossRef] [PubMed]

36. Farahpour, MR; Pirkhezr, E.; Ashrafian, A.; Sonboli, A. Cura acelerada pela administração tópica de óleo essencial de Salvia Officinalis em modelo de ferida infectada por Pseudomonas Aeruginosa e Staphylococcus Aureus. Biomed. Farmacêutico. 2020, 128, 110120. [CrossRef]

37. Matic, I.; Revandkar, A.; Chen, J.; Bísio, A.; Dall'Acqua, S.; Cocetta, V.; Brun, P.; Mancino, G.; Milanese, M.; Mattei, M.; e outros Identificação de Salvia Haenkei como Agente Gerossupressor Usando um Ensaio de Triagem Senes-science Integrado. Envelhecimento 2016, 8, 3223–3240. [CruzRef]

38. Parque, CH; Shin, SH; Lee, EK; Kim, DH; Kim, M.-J.; Roh, S.-S.; Yokozawa, T.; Chung, HY Magnésio Litospermato B de Salvia Miltiorrhiza BUNGE Melhora a Inflamação Renal Induzida pelo Envelhecimento e Senescência por meio da Geração Reativa de Oxigênio Mediada por NADPH Oxidase. Fitoter. Res. 2017, 31, 721–728. [CruzRef]

39. Najar, B.; Mecacci, G.; Nardi, V.; Cervelli, C.; Nardoni, S.; Mancianti, F.; Ebani, VV; Giannecchini, S.; Pistelli, L. Voláteis e atividade antifúngica-antibacteriana-antiviral da Salvia Spp sul-africana. Óleos essenciais cultivados em condições uniformes. Molecules 2021, 26, 2826. [CrossRef] [PubMed]

40. Abu-Darwish, MS; Cabral, C.; Ali, Z.; Wang, M.; Khan, SI; Jacob, MR; Jain, SK; Tekwani, BL; Zulfiqar, F.; Khan, AI; e outros Salvia Ceratophylla L. do sul da Jordânia: Novos insights sobre composição química e atividades biológicas. Nat. Prod. Bioprospect. 2020, 10, 307–316. [CrossRef] [PubMed]

41. Taarit, MB; Msaada, K.; Hosni, K.; Chahed, T.; Marzouk, B. Composição do Óleo Essencial de Salvia Verbenaca Crescente na Tunísia. J. Food Biochem. 2010, 34, 142–151. [CruzRef]

42. Viljoen, AM; Gono-Bwalya, A.; Kamatou, GPP; Ba¸ser, KHC; Demirci, B. A composição do óleo essencial e quimiotaxonomia de Salvia Stenophylla e seus aliados S. Repens e S. Runcinata. J. Essent. Res. de Petróleo 2006, 18, 37–45. [CruzRef]

43. Pinto, E.; Salgueiro, LR; Cavaleiro, C.; Palmeira, A.; Gonçalves, MJ Susceptibilidade In Vitro de Algumas Espécies de Leveduras e Fungos Filamentosos aos Óleos Essenciais de Salvia Officinalis. Colheita Ind. Prod. 2007, 26, 135–141. [CruzRef]

44. Tosun, A.; Khan, S.; Kim, Y.; Calín-Sánchez, A.; Hysenaj, X.; Carbonell-Barrachina, A. Composição do óleo essencial e atividade anti-inflamatória de Salvia officinalis L (Lamiaceae) em macrófagos Murin. Trop. J. Pharm. Res. 2014, 13, 937. [CrossRef]

45. Abu-Darwish, MS; Cabral, C.; Ferreira, IV; Gonçalves, MJ; Cavaleiro, C.; Cruz, MT; Al-bdour, TH; Sal-gueiro, L. Óleo Essencial de Sálvia Comum (Salvia Officinalis L.) da Jordânia: Avaliação da Segurança em Células de Mamíferos e Seu Potencial Antifúngico e Antiinflamatório. Biomed. Res. Int. 2013, 2013, 1–9. [CruzRef]

46. ​​Leporini, M.; Bonesi, M.; Loizzo, MR; Passalacqua, NG; Tundis, R. O óleo essencial de Salvia Rosmarinus Spenn. da Itália como fonte de compostos promotores da saúde: perfil químico e atividade antioxidante e inibidora da colinesterase. Plants 2020, 9, 798. [CrossRef]

47. Choi, JK; Oh, H.-M.; Lee, S.; Kwon, TK; Shin, T.-Y.; Rho, M.-C.; Kim, S.-H. A Salvia Plebeia suprime as lesões cutâneas semelhantes à dermatite atópica. Sou. J. Chin. Med. 2014, 42, 967–985. [CruzRef]

48. Fahed, L.; Stien, D.; Ouaini, N.; Eparvier, V.; el Beyrouthy, M. Diversidade química e atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de Salvia multicaulis Vahl. Chem. Biodivers. 2016, 13, 591–595. [CruzRef]

49. Juliano, C.; Marchetti, M.; Campagna, P.; Usai, M. Atividade antimicrobiana e composição química do óleo essencial de Helichrysum Microphyllum Cambess. Subsp. Tyrrhenicum Bacch., Brullo & Giusso Coletados no sudoeste da Sardenha. saudita. J. Biol. ciência 2019, 26, 897–905. [CrossRef] [PubMed]

50. Ele, X.; Zhang, L.; Chen, J.; Sui, J.; Yi, G.; Wu, J.; Ma, Y. Correlação entre composição química e atividade antifúngica do óleo essencial de Clausena Lansium contra Candida spp. Molecules 2019, 24, 1394. [CrossRef]

51. Ruiz-Vásquez, L.; Ruiz Mesia, L.; Caballero Ceferino, HD; Ruiz Mesia, W.; Andrés, MF; Diaz, CE; Gonza-lez-Coloma, A. Potencial antifúngico e herbicida dos óleos essenciais de Piper da Amazônia peruana. Plants 2022, 11, 1793. [CrossRef] [PubMed]

52. Fontenelle, ROS; Morais, SM; Brito, EHS; Brilhante, RSN; Cordeiro, RA; Nascimento, NRF; Kerntopf, MR; Sidrim, JJC; Rocha, MFG Atividade Antifúngica de Óleos Essenciais de Espécies Croton do Bioma Caatinga Brasileiro. J. Appl. Microbiol. 2008, 104, 1383-1390. [CrossRef] [PubMed]

53. Mathela, C.; Joshi, S. Atividades antioxidantes e antibacterianas do óleo essencial da folha e seus constituintes Furanodienone e Curzerenone de Lindera Pulcherrima (Nees.) Benth. Ex Gancho. f. Farmacognosia. Res. 2012, 4, 80. [CrossRef]

54. Serra, E.; Hidalgo-Bastida, L.; Verran, J.; Williams, D.; Malic, S. Atividade antifúngica de óleos essenciais comerciais e biocidas contra Candida Albicans. Patógenos 2018, 7, 15. [CrossRef]

55. Burstein, VL; Beccacece, I.; Guasconi, L.; Mena, CJ; Cervi, L.; Chiapello, LS Imunidade da pele a dermatófitos: de modelos experimentais de infecção a doenças humanas. Frente. imunol. 2020, 11, 605644. [CrossRef]

56. Genˇcí´c, MS; Aksi´c, JM; Živkovi´c Stoši´c, MZ; Randjelovic, PJ; Stojanovic, NM; Stojanovi´c-Radi´c, ZZ; Radulovi´c, NS Ligando os efeitos antimicrobianos e anti-inflamatórios do óleo essencial de Immortelle com sua composição química — a interação entre os constituintes principais e secundários. Química Alimentar. Tóxico. 2021, 158, 112666. [CrossRef] [PubMed]

57. A´cimovi´c, M.; Ljuji´c, J.; Vulic, J.; Zheljazkov, VD; Pezo, L.; Varga, A.; Tumbas Šaponjac, V. Helichrysum Ital-icum (Roth) G. Don Óleo Essencial da Sérvia: Composição Química, Classificação e Atividade Biológica — Pode Ser uma Nova Cultura Adequada para a Sérvia? Agronomia 2021, 11, 1282. [CrossRef] See More

58. Amorim, JL; Simas, DLR; Pinheiro, MMG; Moreno, DSA; Alviano, CS; da Silva, AJR; Dias Fernandes, P. Propriedades antiinflamatórias e caracterização química dos óleos essenciais de quatro espécies cítricas. PLoS ONE 2016, 11, e0153643. [CruzRef]

59. Ascari, J.; de Oliveira, MS; Nunes, DS; Granato, D.; Scharf, DR; Simionatto, E.; Otuki, M.; Soley, B.; Heiden, G. Composição química, atividades antioxidantes e antiinflamatórias dos óleos essenciais de espécimes masculinos e femininos de Baccharis punctulata (Asteraceae). J. Ethnopharmacol. 2019, 234, 1–7. [CruzRef]

60. Singh, P.; Singh, S.; Kapoor, IPS; Singh, G.; Isidorov, V.; Szczepaniak, L. Composição química e atividades antioxidantes de óleo essencial e oleorresinas de rizomas de curcuma zedoaria, parte-74. Food Biosci. 2013, 3, 42–48. [CruzRef]

61. Jena, S.; Raio, A.; Banerjee, A.; Sahoo, A.; Nasim, N.; Sahoo, S.; Kar, B.; Patnaik, J.; Panda, PC; Nayak, S. Composição Química e Atividade Antioxidante do Óleo Essencial de Folhas e Rizomas de Curcuma Angustifolia Roxb. Nat. Prod. Res. 2017, 31, 2188–2191. [CruzRef]

62. Andji´c, M.; Božin, B.; Draginic, N.; Koˇcovi´c, A.; Jeremic, JN; Tomovic, M.; Milojevi´c Šamanovi´c, A.; Kladar, N.; ˇCapo, I.; Jakovljevi´c, V.; e outros Formulação e Avaliação de Formulações Tópicas à Base de Óleo Essencial de Helichrysum Italicum para Cicatrização de Feridas em Ratos Diabéticos. Pharmaceuticals 2021, 14, 813. [CrossRef]

63. Ahlina, FN; Nugraheni, N.; Salsábila, IA; Haryanti, S.; Da'i, M.; Meiyanto, E. Revelando o Efeito Reverso do Extrato de Galangal (Alpinia Galanga L.) Contra o Estresse Oxidativo em Células Metastáticas de Câncer de Mama e Células Fibroblásticas Normais Pretendido como Agente Coquimioterapêutico e Antienvelhecimento. Pac Asiático. J. Câncer Prev. 2020, 21, 107–117. [CruzRef]

64. Conselho da Europa. Farmacopeia Europeia, 7ª ed.; Direcção para a Qualidade dos Medicamentos e Cuidados de Saúde do Conselho da Europa: Estrasburgo, França, 2010; ISBN 978-92-871-6700-2.

65. van den Dool, H.; Kratz, PD Uma generalização do sistema de índice de retenção, incluindo cromatografia de partição líquida programada por temperatura linear. J. Chromatogr. 1963, 11, 463–471. [CruzRef]

66. Instituto de Padrões Clínicos e Laboratoriais. Método de Referência para Teste de Suscetibilidade Antifúngica por Diluição de Caldo de Fungos Filamentosos; Padrão Aprovado M38-A2, 2ª ed.; Instituto de Padrões Clínicos e Laboratoriais: Wayne, PA, EUA, 2008; ISBN 1-56238-668-9.

67. Instituto de Padrões Clínicos e Laboratoriais. Método de Referência para Teste de Suscetibilidade Antifúngica por Diluição em Caldo de Leveduras; Padrão Aprovado M27-A3, 3ª ed.; Instituto de Padrões Clínicos e Laboratoriais: Wayne, PA, EUA, 2008; ISBN 1-56238-666-2.

68. Verde, LC; Wagner, DA; Glogowski, J.; Capitão, PL; Wishnok, JS; Tannenbaum, SR Análise de Nitrato, Nitrito e [15N] Nitrato em Fluidos Biológicos. Anal. Bioquim. 1982, 126, 131–138. [CruzRef]

69. Piras, A.; Maccioni, A.; Falconieri, D.; Porcedda, S.; Gonçalves, MJ; Alves-Silva, JM; Silva, A.; Cruz, MT; Salgueiro, L.; Maxia, A. Composição Química e Atividade Biológica do Óleo Essencial de Teucrium Scordium L. Subsp. Scordioides (Schreb.) Arcang. (Lamiaceae) da Ilha da Sardenha (Itália). Nat. Prod. Res. 2021, 36, 5828–5835. [CrossRef] [PubMed]

70. Martinotti, S.; Ranzato, E. Ensaio de Cicatrização de Feridas por Arranhões. Em Células Epidérmicas: Métodos em Biologia Molecular; Turksen, K., Ed.; Humana: Nova York, NY, EUA, 2019; Volume 2109, pp. 225–229.

Isenção de responsabilidade/Nota do editor:As declarações, opiniões e dados contidos em todas as publicações são de responsabilidade exclusiva do(s) autor(es) e colaborador(es) e não do MDPI e/ou do(s) editor(es). O MDPI e/ou o(s) editor(es) se isentam de responsabilidade por qualquer dano a pessoas ou propriedade resultante de quaisquer ideias, métodos, instruções ou produtos referidos no conteúdo.