As atividades antidepressivas e de melhoria cognitiva da erva tradicional chinesa Cistanche Ⅰ
Jun 23, 2022
Abstrato
Mais de dez por cento das pessoas sofrem de pelo menos um episódio de depressão e transtornos mentais relacionados ao longo da vida, e a depressão e os transtornos mentais relacionados são um dos maiores problemas de saúde pública do mundo. Uma teoria de múltiplos sistemas sustenta que a desregulação dos múltiplos sistemas está subjacente à patogênese da depressão e transtornos mentais relacionados, e novas terapias baseadas na teoria da desregulação de múltiplos sistemas são urgentemente necessárias. Neste estudo, o efeito antidepressivo da decocção da ervaCistanche deserticolaYCMa eCistanche tubulosafoi examinado. ErvaCistanchea decocção reduziu significativamente o período de imobilidade no teste de suspensão da cauda do camundongo. Camundongos tratados com decocção de ervas mostraram uma capacidade aprimorada de aprendizado espacial e memória no teste do labirinto aquático de Morris. Os grupos tratados com decocção de ervas exibiram uma atividade da monoamina oxidase (MAO) regulada negativamente; a concentração de dopamina (DA) no cérebro foi aumentada, indicando ervaCistanchea decocção melhorou a excitabilidade do nervo; a concentração sérica de corticosterona (CORT) foi regulada negativamente, mostrando que os camundongos se beneficiaram de um nível de estresse reduzido. Assim, a eficácia antidepressiva e o mecanismo deerva tradicional chinesaCistancheforam explorados neste estudo. ErvaCistanchemostrou potencial a ser desenvolvido como terapia complementar e alternativa para a depressão.
1. Introdução
Depressão e transtornos de humor relacionados, com uma estimativa de 12 a 17% da população experimentando pelo menos um episódio na vida, estão entre as principais causas de deficiências mentais e são considerados um dos maiores problemas de saúde pública do mundo. De particular relevância, uma proporção significativa de pacientes com depressão sofre de perda de memória, problemas de concentração, diminuição de energia ou fadiga, perda de interesse ou prazer em hobbies e atividades e dificuldade em dormir, despertar de manhã cedo ou dormir demais. Embora os substratos neurais para anormalidade na depressão e síndromes relacionadas não sejam claros, é geralmente aceito que o comprometimento da neuroplasticidade e da resiliência celular dá origem à fisiopatologia da depressão e o sucesso do tratamento pode depender da intervenção do nível do neurotransmissor. A abordagem da medicação para depressão baseia-se basicamente na hipótese clássica do sistema de monoaminas, que afirma que a desregulação das monoaminas especialmente serotonina (5-HT) e norepinefrina (NE) contribui para a patogênese da depressão, e intervenção do sistema neurotransmissor com dopamina agonistas e moduladores dopamina-noradrenérgicos aliviariam os sintomas do transtorno de depressão maior. Embora amplamente prescritos, a eficácia curativa dos antidepressivos é questionável e o efeito colateral não pode ser ignorado, pois uma proporção significativa dos pacientes não responde à manipulação do sistema monoamina. Recentemente, novas teorias da patogênese da depressão indicam que múltiplos sistemas, incluindo vias inflamatórias, via do estresse oxidativo, eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HPA), sistema metabólico e bioenergético, vias neurotróficas, sistema glutamato, sistema opióide e do sistema colinérgico, estão intimamente associados à ocorrência de depressão. Evidências mostram que a intervenção de múltiplos alvos produziu melhor eficácia do que uma única intervenção de alvo. Novas terapias baseadas na teoria da desregulação de múltiplos sistemas são urgentemente necessárias.
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Os produtos à base de plantas consumiram mais da metade da população dos EUA; O interesse e a demanda por ervas ou produtos fitoterápicos como forma complementar de tratamento da depressão estão crescendo em todo o mundo. Várias plantas medicinais são encontradas para demonstrar efeito benéfico no alívio da depressão. Ervas que são relatadas como tendo o efeito de suprimir a depressão e melhorar a função cognitiva incluem espinheiro marítimo,Ginkgo biloba,Piper nigrum,Hypericum perforatum,Griffonia simplicifolia. Uma administração combinada de ácido ferúlico e piperina exibiu um efeito sinérgico do tipo antidepressivo em camundongos, manipulando o sistema monoaminérgico. A albiflorina foi caracterizada por uma alta afinidade seletiva para os receptores e transportadores de neurotransmissores e aumentou significativamente as concentrações extracelulares de 5-HT e NE no hipotálamo de ratos em movimento livre. Uma erva medicinalMelissa officinalisL. aliviou o comportamento depressivo de camundongos exercendo a influência no nível do neurotransmissor serotoninérgico. Essas ervas ou decocções, desenvolvidas como remédios alternativos para a depressão, ajudam a aliviar os sintomas da depressão e fornecem uma nova fonte para o desenvolvimento da droga antidepressiva. ErvaCistancheespécies, distribuídas em terras áridas e desertos da parte norte da China, são ervas da medicina tradicional chinesa e amplamente utilizadas no tratamento de várias doenças há mais de 1,000 anos na China. A eficácia múltipla da ervaCistanchedecocção varia entre o afrodisíaco [14], imuno-promotora [15], antioxidante [16] e hepatoprotetora [17] propriedades.C. deserticoladecocções induzem as enzimas esteroidogênicas testiculares.18], promovem a resposta erétil do pênis e encurtam o período de latência da reação erétil em ratos castrados.19]. ErvaCistanchetem sido relatado para inibir as atividades de neurônios dopaminérgicos, regulando os genes inibitórios da apoptose e fatores neurotróficos.20].C. tubulosadecocções alteraram a disfunção cognitiva causada por A 1-42 através do bloqueio da deposição de amiloide e reviveu a função neuronal dopaminérgica colinérgica e hipocampal [21]. A propriedade neuroprotetora das ervasCistancheimplica o potencial terapêutico nas doenças cognitivas. A depressão é um modo misto comum de reações emocionais com esquecimento e declínio cognitivo como sintomas comuns.22]. ErvaCistancheera comumente usado como medicina tradicional chinesa para tratar o esquecimento; além disso, um relatório recente mostra que uma administração precoce de fubá suplementado comC. tubulosaé benéfico para a promoção da longevidade e aprendizado associado ao olfato e melhora da memória em não vertebradosDrosophilamodelo [23]. Esses fatos indicam a propriedade de melhoria cognitiva da ervaCistanche; aqui nesta pesquisa, pela primeira vez, caracterizamos a propriedade antidepressiva e sua relação com as atividades de melhoria cognitiva no modelo mamífero, regulando o sistema monoamina e o eixo HPA. Iluminando a propriedade antidepressiva e o mecanismo preliminar da ervaCistanchepoderia expandir o espectro de aplicação da ervaCistanche, que poderia ser desenvolvido como um remédio alternativo para a depressão.
2. Materiais e Métodos de Função Antidepressiva de Cistanche
2.1. Material Vegetal e Preparação de Decocção de Cistanche
C. deserticolaYCMa foi obtido da Região Autônoma de Nei Mongol, China;C. tubulosafoi obtido da Região Autônoma Uigur de Xinjiang, China. Antes da decocção, a erva (C. deserticolaYCMa ouC. tubulosa) foi inspecionado para detectar o conteúdo de echinacoside e verbascoside usando HPLC (cromatografia líquida de alta eficiência) (Milford, MA, Waters, EUA), e o produto elegível (de acordo com a Farmacopeia da República Popular da China) foi usado para os experimentos com animais . A decocção foi adquirida com base no método de vapor d'água desenvolvido pelo Centro de Pesquisa em Engenharia de Alimentos e Saúde do Ministério da Educação do Estado da Universidade Sun Yat-sen. SecoCistanche deserticolaYCMa de 125 g foi esmagado e peneirado por 120-mesh screen e, em seguida, o pó foi dissolvido em 3 L de água ultrapura, aquecido a 100 graus por 2 h, depois resfriado à temperatura ambiente e peneirado ; o sobrenadante foi reciclado. O sedimento foi então dissolvido em 2 L de água ultrapura e então aquecido por 1,5 h e resfriado como mencionado acima para reciclar o sobrenadante; o sedimento foi então usado para reciclar o sobrenadante. O conteúdo de todo o sobrenadante foi enriquecido por evaporadores rotativos a vácuo a 60 graus; finalmente, a concentração bruta do fármaco foi fixada em 0,5 g/ml e o produto foi armazenado a -20 graus.
2.2. Ensaio de Echinacoside e Verbascoside por Análise de HPLC
HPLC (cromatografia líquida de alta eficiência) foi usado para medir o ensaio qualitativo e quantitativo de echinacoside e verbascoside; verbascoside (pureza > 93 por cento) e echinacoside (pureza > 93 por cento) foram adquiridos dos Institutos Nacionais de Controle de Alimentos e Medicamentos (Pequim, China) e utilizados como controle padrão.
2.3. O Cuidado Animal e a Conduta Experimental em Cistanche
Os sujeitos eram camundongos Kunming machos SPF (livres de patógenos específicos) pesando 21~25 gramas, fornecidos pelo Medical Experimental Animal Center da Província de Guangdong. Os animais foram alojados em gaiolas plásticas (dez por gaiola); a condição do ambiente foi definida da seguinte forma: umidade 40 ~ 70 por cento, temperatura ambiente 21 ± 1 grau e um período de 12 h: 12 h claro-escuro. Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Universidade Sun Yat-sen.
2.4. Teste de Suspensão da Cauda em Cistanche
O teste de suspensão da cauda foi feito de acordo com o protocolo descrito por Cryan et al. [24] com mudanças modestas. Resumidamente, no dia 21, os camundongos foram suspensos pela cauda utilizando forca metálica amarrada por cateter de náilon, com a cabeça na altura de 50 mm do chão. Os camundongos foram pendurados no gancho em fitas adesivas a 10~20 mm da extremidade de sua cauda e foram isolados acusticamente e visualmente por ripas. Os movimentos do corpo do camundongo foram registrados e os movimentos respiratórios foram ignorados. Antes do dia do experimento, os camundongos foram suspensos por 8 minutos para adaptação.
2.5. O teste do labirinto aquático de Morris em Cistanche
O teste do labirinto aquático foi feito de acordo com a descrição de Vorhees et al. [25–27] usando o dispositivo desenvolvido pela Academia Chinesa de Ciências Médicas. Foi utilizada uma piscina circular (150 cm de diâmetro) cheia de água (26 ± 1 grau; altura da borda (distância da superfície da água à borda da parede): 10 cm), plataforma de resgate circular (diâmetro: 11 cm; distância entre o ponto central da plataforma e a piscina parede: 27 cm) foi submerso 1–1,5 cm abaixo da superfície da água, e a área de teste foi iluminada com iluminação indireta (50 ± 10 lux) para evitar reflexos. Quatro locais de início foram usados, N, S, E e W. Para o teste de aprendizagem espacial, os animais foram treinados diariamente nos dias 9-11 no local de início fixo. O período de latência de fuga é medido para exibir a memória espacial e a capacidade de aprendizado dos camundongos. Se os camundongos não conseguissem encontrar ou subir na plataforma, os camundongos seriam conduzidos até a plataforma e permaneceriam por 10 s. Após um descanso de 60 s, a próxima sessão de treinamento seria iniciada. Os dados obtidos no último teste de aprendizagem espacial foram utilizados como valor base para a moldagem. Nos dias 23-28, foram realizados o teste de navegação no local e a sonda espacial. O teste de navegação no local durou 6 dias e foi realizado às 13h, os animais foram colocados na água com a cabeça voltada para a parede da piscina no sentido horário, e o período de latência (dentro de 2 min) foi registrado. Após a realização do teste de navegação no local, a plataforma foi removida. Os camundongos foram colocados na água com a cabeça voltada para a parede da piscina em um local aleatório, e a trilha de movimento e a frequência com que os camundongos nadaram onde a plataforma estava dentro de 2 minutos foram registradas. A trilha de movimento foi registrada por gravador autônomo multifuncional de movimento de camundongos (YLS-1A, Yiyan Technology, Jinan, China).
2.6. Detecção da atividade MAO
A atividade da MAO foi medida usando o kit de detecção de MAO (A034, Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China) e a detecção foi feita de acordo com o protocolo do fabricante. Obteve-se homogenato de tecido cerebral; 500μEu fui misturado com 300μl do Agente 1 e 300μl de Agente 2, incubado por 3 h a 37 graus, e então adicionado sucessivamente com 300μ1, de Agente 3, 3 ml de Agente 4 e vortex por 2 min. A mistura de reação foi centrifugada a 3,000 rpm por 10 min, e a densidade óptica do sobrenadante foi determinada por espectrofotômetro de espectro ultravioleta e visível (Lambda 25, PerkinElmer, EUA) usando luz de excitação de 242 nm.
2.7. Ensaio de imunoabsorção enzimática de neurotransmissores e ACTH e CORT
O kit de detecção de Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) para dopamina (DA), norepinefrina (NE) e 5-hidroxitriptamina (5-HT) foi comprado da BLUE GENE, Xangai. Os kits de detecção ELISA foram adquiridos da Qiyun Biotech, Guangzhou.
Os procedimentos são os seguintes: a experiência foi conduzida à temperatura ambiente. Revestir os poços de uma placa de microtitulação de PVC com o anticorpo de captura em 1-10μconcentração g/mL em tampão carbonato/bicarbonato (pH 9,6). Selar a placa e incubar durante a noite 4 graus; lave a placa com PBS/tween 3 vezes, e os sítios de ligação não específicos são bloqueados pela Solução de Bloco; em seguida, lave a placa com PBS/tween 3 vezes. Padrões e amostras são diluídos em solução de bloqueio e 100μl é adicionado no poço da placa, e a placa é selada e incubada a 37 graus por 1 h. Adicionar 100μl anticorpo de detecção diluído e incubar a placa a 37 graus por 1 h; lave a placa com PBS/Tween 3 vezes. Adicionar 50μl solução reveladora de cor e manter a placa afastada da luz e incubar em temperatura ambiente por 15 min; 50μl tampão de parada é adicionado para parar a reação. Meça a densidade óptica (OD) para cada poço com um leitor de microplacas definido para 405 nm em 30 min.
2.8. Análise estatística
Todos os dados foram representados como média ± SEM (erro padrão da média), a diferença significativa foi analisada por t-teste ou ANOVA unidirecional seguido pelo teste de vários intervalos de Duncan usando SPSS 16.0 e diferenças entre grupos comP< 0,05 foram considerados estatisticamente significativos.
