Parte 2 Efeitos do Cistanche Deserticola Feniletanosídeo na Expressão da Proteína -amilóide no Hipocampo de Camundongos Transgênicos APP/PS1

Parte 2 Os ingredientes eficazes de Cistanche: o efeito terapêutico do totalglicosídeos feniletanoidese Acteosídeos na Doença de Alzheimer

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4 . Conclusão

doença de Alzheimerocorre principalmente no sistema nervoso central e é induzida por múltiplos fatores. Até agora, sua patogênese ainda não está clara, mas o núcleo da pesquisa ainda está em torno de A . Como os principais peptídeos secretados pela APP no cérebro, a deposição anormal de A 1-42 e A 1-40 não pode causar diretamente degeneração neuronal. Do ponto de vista da etiologia, são os ADDLs oligômeros solúveis produzidos por A 1-42 que causam no cérebro a verdadeira causa da degeneração neuronal. No entanto, a investigação da expressão dessas duas proteínas também pode refletir a extensão das lesões cerebrais da DA em tempo real, mostrar indiretamente a expressão de ADDLs oligômeros solúveis e, então, monitorar dinamicamente o dano neuronal no cérebro a partir da fonte, fornecendo uma referência para prevenção e tratamento de doenças. Diante disso, A 1-42 e A 1-40 tornaram-se alvos chave no estudo da patogênese da DA. O hipocampo é a parte principal do cérebro para avaliar a capacidade de aprendizagem e memória. O dano de seus neurônios é a principal causa de disfunção cognitiva na DA. A área CA1 do hipocampo é uma das principais partes do dano patológico da DA. Esta parte do experimento usa HE O método de coloração mostrou que os neurônios na área CA1 do hipocampo do grupo normal estavam organizados de forma ordenada e firme, distribuídos de forma mais uniforme e tinham camadas claras. No grupo modelo, a área CA1 do hipocampo do camundongo apresentou alterações degenerativas, como apoptose de células neuronais devido a lesão. Após a intervenção de diferentes doses de grupos glicosídeos de álcool fenetílico Cistanche, a morfologia celular da área CA1 do hipocampo

Todos apresentam diferentes graus de melhora, sugerindo queGlicosídeos feniletanoides Cistanchepode ter o efeito de proteger os neurônios e inibir sua apoptose, mas como a coloração HE não é específica para apoptose celular e perda de neurônios, ainda é necessário direcionar moléculas específicas da apoptose no estágio posterior. Detecção relevante de marcadores.

O pré-tratamento do tecido a ser testado está diretamente relacionado ao resultado da coloração. No experimento, o autor descobriu que, como o hipocampo dos camundongos transgênicos está localizado na parte interna profunda do lobo temporal do telencéfalo, é pequeno em tamanho e difícil de separar o tecido. Um pouco de descuido causará danos mecânicos a ele, de modo que as alterações patológicas não podem ser observadas efetivamente. Ao mesmo tempo, como os camundongos geneticamente modificados são caros e o ciclo de dosagem experimental é longo, a perda de amostras pode afetar o andamento geral da pesquisa. Portanto, quando o camundongo completa a perfusão cardíaca, todo o cérebro é retirado e fixado com paraformaldeído, a lâmina do bisturi é usada para remover o bulbo olfatório e o restante do tecido cerebral é desidratado e incorporado. A espessura da fatia é controlada em 3 a 5 μm para garantir que o hipocampo esteja intacto. Sob a premissa de otimizar o processo de operação, a eficiência da pesquisa é aprimorada. Na detecção de Western-blot, o autor descobriu que devido ao pequeno peso molecular das proteínas A 1-42 e A 1-40, as bandas de expressão não são fáceis de blot, por isso é necessário rastrear suas SDS -PAGE concentração de gel, tempo de eletroforese e tempo de transferência. Se a concentração do gel de separação for muito pequena, as pistas de eletroforese migrarão e a ativação da proteína será incompleta; muito longo o tempo de eletroforese fará com que a banda se desloque para fora da camada de gel; o tempo de transferência correspondente tornará o Western blot borrado, afetando assim a incubação do anticorpo primário Combine com anticorpos secundários. Diante disso, este estudo passou por experimentos preliminares, e finalmente selecionou 15 por cento de gel de separação, eletroforese e membrana transferida por 2 horas para realizar Western blotting em A 1-42 e A 1-40 para investigar sua expressão .

Dentre os métodos técnicos atualmente utilizados para regulação de proteínas, o método Western-blot é utilizado principalmente para quantificação para investigar a expressão específica de proteínas relacionadas. O método imuno-histoquímico parte do ponto de vista qualitativo. Por um lado, pode mostrar de forma mais intuitiva o grau de ligação específica de proteína e anticorpo e, por outro lado, pode apoiar os resultados quantitativos. Como a imuno-histoquímica é para detectar a expressão de proteínas ligando anticorpos a sítios antigênicos em cortes histopatológicos, a preparação de cortes histopatológicos é particularmente importante. A seção não é fácil de ser muito grossa. Após a conclusão da seção, deve-se ter o cuidado de salvá-la para evitar danos externos à seção de tecido; a desparafinização adequada deve ser realizada antes do processamento e o tempo não deve ser inferior a 2 horas; escolha um tampão de ácido cítrico com condições suaves e menos danos acidentais ao antígeno Execute o reparo, remova a catalase, exponha totalmente o sítio antigênico e faça com que o anticorpo primário se encaixe completamente no sítio. Os dois métodos acima, como métodos de detecção comumente usados ​​em biologia molecular, complementam-se e fornecem suporte técnico para a pesquisa de regulação de proteínas.

Este estudo usou HE e outros métodos para investigar as lesões do hipocampo e a expressão de proteínas relacionadas a A no cérebro. Os resultados mostraram que após a intervenção deCistanchefeniletanoide , a morfologia celular da área CA1 do hipocampo no cérebro de camundongos modelo AD melhorou em vários graus. Os níveis de expressão de A 1-42 e A 1-40 foram significativamente regulados para baixo. Além disso, verificou-se que o efeito protetor do neurônio do grupo de intervenção verbascoside foi melhor do que o do grupo total.glicosídeos feniletanoidesgrupo. Os glicosídeos totais deGlicosídeos feniletanoides Cistanchetêm grande potencial para melhorar as alterações patológicas na área do cérebro de camundongos modelo AD e, em seguida, desempenham um efeito antagônico na AD. O mecanismo de ação específico precisa ser mais estudado no futuro. Este estudo completa os dados de pesquisa sobre o mecanismo deCistancheantagonizando AD a partir da perspectiva de A e, ao mesmo tempo, estabelece as bases da pesquisa para elucidar ainda mais o mecanismo dos componentes efetivos ou monômeros ativos deCistanchecontra AD no período posterior.