PARTE 1 Extratos Aquosos de Herba Cistanche Promoveram Motilidade Intestinal em Ratos de Constipação Induzida por Loperamida Melhorando as Células Intersticiais de Cajal

Shuai Yan,1,2 Yin-zi Yue,1 Xiao-peng Wang,1 Hong-li Dong,1 Shu-guang Zhen,1 Ben-sheng Wu,1 e Hai-hua Qian3

1 Hospital Suzhou deMedicina Chinesa Tradicional,Suzhou, Jiangsu 215009, China

2Universidade de Nanquim deMedicina Chinesa Tradicional, Nanquim, Jiangsu 210023, China

3Departamento de Cirurgia Anorretal, Hospital Provincial de Jiangsu deMedicina Chinesa Tradicional, Nanquim, Jiangsu 210029, China

Correspondence should be addressed to Hai-Hua Qian; haihuaqian@126.com

Recebido em 24 de maio de 2017; Revisado em 5 de outubro de 2017; Aceito em 25 de outubro de 2017; Publicado em 28 de dezembro de 2017

Editor Acadêmico: Samra Bashir

Copyright © 2017 Shuai Yan et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob a Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente citado.

Medicina Chinesa Tradicionalfoi relatado para ter bons efeitos no tratamento da constipação funcional. Este trabalho tentou provar os efeitos de extratos aquosos de Herba Cistanche (AEHC) no tratamento de STC e determinar os possíveis mecanismos por um modelo de constipação por trânsito lento (STC) induzida por loperamida. A HPLC foi realizada para identificação e confirmação dos componentes bioativos no AEHC. Verificou-se que o AEHC atenuou as respostas do STC com base no aumento da quantidade fecal, teor de umidade e taxa de trânsito intestinal, bem como nos níveis séricos de GAS, MTL, SS e CGRP. Os níveis de proteína e mRNA de c-kit, marcação de células intersticiais de Cajal (ICC), também aumentaram. Enquanto isso, apenas o nível de proteína de SCF, um ligante ofc-kit, aumentou. A análise de nossos dados sugeriu que o AEHC poderia obviamente melhorar a função do ICC por meio de uma via de sinalização envolvendo PI3K, SCF e c-kit e aumentar os índices de motilidade colônica, como GAS, MTL, SS e CGRP. É interessante notar que o AEHC parece ser eficaz na constipação, portanto, mais experimentos são necessários para esclarecer os mecanismos exatos envolvidos.

Para mais informações por favor entre em contato:Joanna.jia@wecistanche.com

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1. Introdução

A constipação é uma doença gastrointestinal funcional comum e um problema de saúde pública, caracterizada por defecação continuamente difícil, infrequente ou incompleta. A prevalência de constipação varia de 0,7 por cento a 81 por cento em todo o mundo, especialmente em idosos [2, 3]. Constipação por trânsito lento (STC) é uma queixa gastrointestinal comum entre 13% a 37% dos pacientes com constipação crônica resistente ao tratamento [4, 5]. Dados epidemiológicos indicam maior incidência deSTCentre as mulheres jovens do que os homens [6].STCcausa constipação intratável, apresentando pouca resposta ao tratamento conservador e tendência a distúrbios neurodegenerativos. Não tão simples quanto uma doença funcional, requer tratamento invasivo e agressivo [7].

Várias drogas químicas atuais, como laxantes osmóticos ou secretores e agentes de volume, são universalmente usadas para

tratar a constipação [8], embora suas aplicações sejam limitadas devido aos altos gastos e efeitos colaterais abdominais, como dor, cólicas e inchaço [9]. Atualmente, a regulação do trato gastrointestinal é o foco principal das terapias de constipação. A cisaprida foi inicialmente gerada como agente de promoção para o tratamento de doenças gástricas, mas posteriormente foi retirada devido ao risco de arritmias cardíacas [10].

Tegaserode é um antagonista seletivo do receptor de 5-hidroxitriptamina que pode estimular o peristaltismo e a secreção intestinal [11, 12]. A prucaloprida é um novo derivado dihidro benzofurano carboxamida e agonista do receptor 5-HT com alta seletividade e especificidade, que pode aumentar a motilidade gástrica, do intestino delgado e do cólon e funciona mais rapidamente na dinâmica [13-15]. Como um derivado da prostaglandina E1, a lubiprostona pode ativar seletivamente o canal CIC para promover a secreção gastrointestinal e aumentar os efeitos da transmissão intestinal [16].

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A motilidade na constipação é um problema generalizado, mas sua etiologia ainda não é clara. No entanto, evidências convincentes demonstraram a contribuição das células intersticiais de Cajal (ICC) na patogênese da constipação [17]. O ICC é encontrado entre as terminações nervosas e as células musculares lisas no trato gastrointestinal. O ICC é geralmente reconhecido como células marca-passo para a atividade gastrointestinal e como mediadores de transmissão neuromuscular [18]. Estudos indicaram que a densidade de CIC no cólon de pacientes com constipação por trânsito lento é notavelmente menor em comparação com pacientes normais [19]. Assim, um número decrescente de ICC pode levar a uma falta de atividade de ondas lentas, afetando assim a resposta contrátil e induzindo atraso no trânsito em pacientes com constipação de trânsito lento. Para este ponto, a melhoria do ICC usando produtos farmacêuticos pode ser crucial para curar a constipação por trânsito lento.

Vários medicamentos fitoterápicos e a fórmula tradicional chinesa Mula recentemente chamaram a atenção como novas terapêuticas para o tratamento da constipação crônica como resultado da produção de fezes melhorada [20, 21]. Herba Cistanche é um fitoterápico tradicional usado no tratamento de doença renal crônica, infertilidade feminina, menorragia profusa e impotência [22, 23]. Herba Cistanche previne a apoptose de neurônios cerebrais expressando fatores relacionados à apoptose e fatores neurotróficos em células MES23.5 [24]. Herba Cistanche também demonstrou potencial farmacêutico no tratamento da Síndrome de Deficiência de Yang-Qi do Rim-Yang. Um estudo recente demonstrou que Herba Cistanche aumenta a respiração mitocondrial e o status antioxidante da glutationa em cardiomiócitos H9c2 [25].

A MTC acredita que a constipação tem uma estreita relação com os rins. Abrindo-se na genitália externa e no ânus, o rim controla a micção e a defecação. O transporte dos resíduos depende da promoção do qi do rim e da nutrição do yin do rim. Se o yang do rim for deficiente ou o fogo da porta da vida se extinguir, a congestão fria do intestino grosso resultará na estagnação dos resíduos. A constipação também é causada pelo movimento intestinal seco, uma vez que a deficiência da essência do rim não gera fluido suficiente [26].

ErvaCistancheé uma erva unificadora comum, que é doce e salgada no sabor e quente na natureza. Atribuível aos meridianos do intestino grosso e do rim, pode tonificar o yang do rim e umedecer o intestino para aliviar a constipação. Esta única erva e seuschinêspreparações farmacêuticas têm sido amplamente utilizadas para tratar a constipação com notável eficácia [27].

Na China, os efeitos da HerbaCistancheraízes na constipação foram registradas [28, 29] e referidas na Matéria Médica Chinesa de Shen Nong como os "caules suculentos secos da espécie Cistanche" [30]; no entanto, até agora não existiam provas científicas sobre o efeito das raízes de Herba Cistanche na constipação, a dose clinicamente eficaz é de 20 g por dia emFarmacopeia Chinesa, e o efeito clínico não aumenta ainda mais com a dosagem.

Como Herba Cistanche é tão escasso [31], padronizando sua dosagem clínica para o tratamento deSTCpor estudo experimental não só previne a falha do tratamento devido à dosagem inadequada, mas também mantém os pacientes longe de perdas econômicas e até mesmo desventuras de medicação por uso excessivo. Esperamos

os resultados podem estabelecer uma base científica para novos medicamentos para a constipação. Portanto, é importante investigar a função de promoção intestinal do aquoso Herba Cistanche e sua ação na ICC no presente estudo.

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2. Materiais e métodos

2.1. Preparação de Extrato Aquoso de Herba Cistanche.

Todos os Herba Cistanche foram adquiridos de Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, China), que foram colhidos, coletados e processados ​​seguindo práticas etnobotânicas padrão das plantações na área de Sinkiang, na China. A identidade da planta foi verificada morfologicamente pelo professor Tu Lin Lu da Universidade de Medicina Chinesa de Nanjing, Nanjing, China. Um espécime de comprovante (NUCMCHS-2015628) foi depositado na Faculdade de Ciências da Saúde da Universidade de Medicina Chinesa de Nanjing, Nanjing, China.

Fatias de Herba Cistanche, pesando 500 g, foram pulverizadas em liquidificador elétrico e extraídas em 5000 ml de água destilada, após o que o extrato aquoso foi purificado a 100 C por 2 h usando um equipamento de extração circulante

poro da membrana (Millipore, Billerica, MA, EUA), e o resíduo obtido dos extratos foi dissolvido em 4000 ml de água. Após a extração por refluxo, os extratos foram coletados e evaporados para obter o produto final da amostra. Os extratos aquosos foram concentrados em pellets secos (1 g/ml) usando um

para uso posterior. Amostras sólidas foram reconstituídas em água destilada para dar as doses necessárias de 10, 20 e 40 mg/kg de peso corporal para o experimento.

2.2. Animais.

O protocolo experimental utilizado neste estudo foi revisado e aprovado com base em procedimentos éticos e cuidados científicos pelo Hospital Suzhou deMedicina Chinesa Tradicional-Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais, Suzhou, China (SHTCM-IACUC; número de aprovação: PNU- 2016-0003). Todos os ratos machos (estirpe Sprague Dawley) com ag foram adquiridos do Shanghai Laboratory Animal Research Center de acordo com as diretrizes do National Institutes of Health. Os animais tiveram livre acesso a uma dieta padrão (AIN-93 M) e água da torneira ad libitum e foram alojados individualmente em aço inoxidável com umidade relativa percentual e expostos a 12 h de luz natural e 12 h de escuro diariamente.

2.3 Desenho Experimental.

A loperamida foi usada para induzir constipação em ratos de acordo com estudos anteriores [32, 33]. Um total de 60 ratos foram divididos aleatoriamente em 5 grupos (por grupo): A: grupo normal (NG), B: grupo modelo (grupo tratado com Lop mais veículo), C: grupo de ratos constipados tratados com baixo extrato aquoso de Herba Cistanche (grupo tratado com Lop mais LAEHC), D: um grupo de ratos constipados tratados com extrato aquoso médio de Herba Cistanche (grupo tratado Lop mais MAEHC) e E: um grupo de ratos constipados tratados com extrato aquoso alto de Herba Cistanche (grupo tratado com Lop mais HAEHC). O grupo A foi tratado com soro fisiológico (10 ml/kg); O grupo B foi tratado com loperamida

(4 mg/kg); O grupo C foi tratado com loperamida (4 mg/kg) e extrato aquoso baixo de Herba Cistanche (1 g/kg); O Grupo D foi tratado com loperamida (4 mg/kg) e extrato aquoso médio de Herba Cistanche (2 g/kg), e o Grupo E foi tratado com loperamida (4 mg/kg) e extrato aquoso alto de Herba Cistanche (4 g/kg). kg). Todos os ratos do grupo normal foram injetados com 0,9 por cento de cloreto de sódio, enquanto os outros foram injetados com loperamida em 0,9 por cento de cloreto de sódio duas vezes ao dia por 3 dias consecutivos para induzir constipação. O extrato aquoso de Herba Cistanche foi suspenso em água e administrado oralmente uma vez ao dia do dia 4 ao dia 18 no Grupo C, Grupo D e Grupo E, enquanto os Grupos A e B receberam um volume consistente de água por gavagem.

2.4. Condição Cromatográfica.

O perfil de HPLC foi realizado no Sistema de Cromatografia Líquida Shimadzu (Tóquio, Japão), consistindo de uma bomba LC-20AT e um

foram monitorados a 330 nm a 30 C. A fase móvel isocrática consistiu em metanol 0,1 por cento de ácido fórmico (80: 20, v/v) e funcionou a uma taxa de fluxo de 1,0 ml/min . A separação cromatográfica foi

tamanho de partícula 5 m, Pequim Dikma Science and Technology Co., Ltd., Pequim, China).

2.5. Análise de exercício, ingestão de alimentos, ingestão de água, corpo

Goma arável (uma suspensão aquosa de 20 por cento de carvão e 10 por cento de goma arável) foi administrada oralmente em um volume de 25 ml/kg de cada animal. Após 30 min, os animais foram sacrificados humanamente por deslocamento cervical e dissecados. O intestino delgado do piloro ao ceco foi percorrido e a distância percorrida pela farinha de carvão e o comprimento total do intestino delgado foram medidos. Para um rato individual, a porcentagem de trânsito intestinal foi calculada como a porcentagem da distância percorrida pela farinha de carvão em relação ao comprimento total do intestino delgado. A seguinte equação calcula a taxa de trânsito intestinal ( por cento ): distância percorrida pelo carvão/distância do piloro ao ceco 100 por cento .

2.6. Amostra de Sangue e Coleta de Tecidos. Ao final do período experimental, os ratos foram submetidos a jejum de 12 horas, mas tiveram livre acesso à água. Todos os ratos foram então anestesiados 30 minutos depois por injeção intraperitoneal de pentobarbital sódico (50 mg/kg) e colocados em uma mesa com temperatura regulada. Amostras de sangue foram coletadas e centrifugadas a 3500 rpm por 15 minutos para obtenção do soro. O cólon foi dividido imediatamente e lavado com solução salina normal a 4°C e depois dividido em duas partes. Um fragmento foi fixado em formol a 10 por cento e processado em parafina dividida para posterior análise imuno-histoquímica (IHC), enquanto o outro foi Peso e Cabelo. Alterações no exercício, ingestão de alimentos, água

armazenados a 80 C até serem ensaiados. consumo, peso corporal e cabelo foram observados e registrados diariamente durante todo o período experimental. Observamos "alterações no exercício" seguindo os passos específicos: a caixa de confecção própria (60 cm de altura, 50 cm de comprimento e 80 cm de largura com parede periférica escura) é utilizada para teste de campo aberto; o fundo branco foi dividido em losangos (12 cm) pela linha preta em uma sala escura e silenciosa; uma lâmpada de 100 W pendurada 1 m acima do centro da caixa; os ratos foram colocados no centro da caixa no 4º, 6º, 12º e 18º dias de modelagem. O número de quadrados pelos quais os ratos passaram em 5 minutos foi usado como a pontuação do movimento horizontal e o tempo ereto dos ratos em 5 minutos foi usado como a pontuação do movimento vertical. As pontuações horizontais e de movimento mais as pontuações de movimento vertical indicam a quantidade de exercício dos ratos. Cada rato foi medido uma vez [34, 35].

Cistanchepode aliviarconstipação

2.7. Medição de parâmetros fecais.

No último dia da administração oral, pellets de fezes frescas de cada rato SD foram coletados em tubos de fundo redondo com tampa por 6 h, e os pesos totais de cada grupo foram registrados. Para determinar o teor de umidade fecal, utilizou-se uma balança elétrica para secar os pellets de fezes até atingir peso constante e mediu-se o peso seco. O teor de umidade

2.8. Avaliação de GAS, MTL, SS e CGRP.

As concentrações de gastrina (GAS), motilina (MTL), somatostatina (SS) e peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP) no soro foram estimadas por ELISA usando kits comercialmente disponíveis.

2.9. Análise Histológica.

Cólons transversais coletados de ratos SD foram fixados com formalina a 10 por cento por 12 h, incorporados

m fatias de espessura que foram coradas com hematoxilina e eosina (H&E, Sigma-Aldrich, MO, EUA). As características morfológicas desses cortes foram observadas sob microscopia de luz, após o que o comprimento das vilosidades, a espessura da cripta e a espessura do músculo foram medidos usando o Leica Application Suite (Leica Microsystems, Suíça).

2.10. Análise imunohistoquímica.

Seguimos os métodos de Zhu et al. (2016) [36]; seções de 5 m não coradas foram

corado com anti-c-kit de coelho (1: 100) a 4 C durante a noite. O anticorpo secundário e o método do complexo avidina-biotina-peroxidase foram utilizados de acordo com as instruções do fabricante. Um controle negativo para imunoglobulina foi usado para eliminar a ligação não específica. Níveis de expressão do c-kit

2.11. Análise da Taxa de Trânsito Intestinal.

A razão de trânsito intestinal foi conduzida de acordo com protocolos previamente relatados [36]; brevemente, após 14 dias de tratamento, todos os ratos SD foram submetidos a 12 h de jejum, mas tiveram livre acesso à água.

Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real. Os níveis de expressão gênica de mRNAs de c-kit, SCF e PI3K no cólon foram determinados usando um kit de extração de RNA total (TIANGEN Biotech,

Pequim, China) de acordo com os protocolos do fabricante. Real-time PCR foi realizado com ABI StepOnePlus Real-Time PCR System (ABI). SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Japão) foi usado para detectar produtos de PCR. As reações foram realizadas em corridas em triplicado. Subsequentemente, tecido fresco de cólon de rato pesando 0,5 g foi homólogo

l) foi extraído de acordo com as instruções do fabricante usando o reagente TRIzol (Invitrogen, EUA). Um kit de transcrição reversa-PCR (Takara Biotechnology Co., Inc.) foi usado para sintetizar a primeira fita de cDNA de acordo com o protocolo do fabricante. Todos os parâmetros alvo são mostrados na Tabela 1. O protocolo de ciclagem foi sob as seguintes condições: 95 C por 5 min (desnaturação do DNA), seguido por 40 ciclos de 95 C por 15 s, 60 C por 20 s e 72 C por 40 s. Uma análise da curva de fusão foi realizada no final dos ciclos de amplificação.

2.12. Análise de Western Blot.

Os teores de proteína de c-kit e SCF em homogeneizados de amostras de cólon foram avaliados por Western blot. Em resumo, as proteínas totais dos homogenatos foram determinadas usando um ensaio de ácido bicinconínico (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, EUA). O gel de dodecil sulfato de sódio-poliacrilamida (SDS-PAGE) foi usado para separar as proteínas no sistema de eletroforese BioRad (BioRad Laboratories, Hercules, CA, EUA). As proteínas foram então transferidas para membranas de difluoreto de polivinilideno (PVDF). Após 2 h de tratamento com tampão de bloqueio em TBS contendo 5% de leite desnatado à temperatura ambiente, as membranas de PVDF foram incubadas durante a noite com anti-c-kit diluído 1:1000 (Santa Cruz, CA, EUA), anti-c-kit diluído 1:500 SCF (Sigma, MO,

Os EUA) e 1: 8.000 anticorpos anti-actina diluídos (Kangchen, Xangai, China), respectivamente. A ligação do anticorpo primário foi detectada usando o anticorpo secundário conjugado com HRP correspondente (Beyotime, Jiangsu, China). Um kit de quimioluminescência aprimorado (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, EUA) e o Odyssey Infrared Imaging System (Gene Company Ltd., Hong Kong) foram usados ​​para detecção de quimioluminescência. A prolactina de limpeza foi usada como controle de carga. A quantidade de expressão da proteína é apresentada em relação aos níveis de actina.

2.13. Análise Estatística.

Os dados de medição foram relatados como o erro padrão médio da média (SEM) e analisados ​​pelo SPSS

16.0 software (SPSS, Chicago, IL, EUA). A análise de variância unidirecional (ANOVA) seguida de testes de múltiplas faixas de Duncan foi usada para determinar diferenças significativas em todos os parâmetros. Os valores foram considerados estatisticamente significativos em

Cistanchedecocção é um bom remédio para tratarconstipação

3. Resultados

3.1. Composição e Componentes Funcionais da Herba Cistanche.

Conforme mostrado na Figura 1, as raízes da Herba Cistanche contêm altas concentrações de vários componentes bioativos relacionados aos efeitos laxativos. As concentrações de echinacoside total e verbascoside total foram 0,64 mg/ge 0,16 mg/g, respectivamente. Dois picos indicando níveis elevados de echinacoside e verbascoside foram detectados no LP em um tempo de retenção apropriado por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC).

3.2. Observação geral.

Os ratos SP não morreram ao longo do experimento, indicando melhor segurança e operacionalidade do modelo animal. Em comparação com o Grupo A, os ratos do grupo modelo apresentaram pelo macio, lassidão, fezes secas e

piorou com a extensão do tempo de modelagem.

3.3. Efeito do AEHC no número de fezes e teor de umidade em ratos com constipação induzida por loperamida.

Em comparação com as fezes normais, as fezes dos Grupos B, C, D e E eram secas, pequenas, duras e sem polimento antes do tratamento.

afinal, os ratos foram injetados com loperamida (tratados com medicamentos aliviaram os sintomas como corpo e 3(b)).

o peso não diferiu significativamente entre todos os grupos experimentais, embora o Grupo E tenha apresentado peso corporal ligeiramente inferior aos demais grupos (Figura 2(a)). Além disso, os ratos SD com constipação ingeriram significativamente menos alimentos do que o Grupo A ( ), enquanto as diferenças entre os Grupos B, C, D e E (Figura 2(b)) não foram significativas. O consumo de água também não se alterou entre o Grupo A e o Grupo B. Além disso, não foi detectado aumento significativo no consumo de água no

que o tratamento com o AEHC não induziu qualquer alteração. Embora a taxa de trânsito intestinal nos Grupos C, D, e também tenha sido significativamente maiorOs grupos C, D e E tiveram proporções significativamente menores do que o Grupo A.

3.4. Efeito do AEHC na Taxa de Trânsito Intestinal Delgado em Ratos de Constipação Induzida por Loperamida.

Como visto na Figura 4, não foram detectadas diferenças no tempo de trânsito do intestino delgado da linha de base entre os cinco grupos. O Grupo B tem uma razão de propulsão de pó de carvão visivelmente mais baixa em comparação com o Grupo A (𝑃 < 0.01).="" embora="" a="" taxa="" de="" trânsito="" intestinal="" nos="" grupos="" c,="" d="" e="" e="" também="" tenha="" sido="" significativamente="" maior="" do="" que="" no="" grupo="" b="" (𝑃="">< 0,05),="" os="" grupos="" c,="" d="" e="" e="" tiveram="" proporções="" significativamente="" menores="" do="" que="" o="" grupo="">

3.5. A intervenção com AEHC melhora parcialmente a função do índice de motilidade colônica.

Os níveis séricos de GAS e MTL obtidos de ratos do Grupo B diminuíram significativamente em comparação com os do Grupo A (𝑃 < {{0}}.01,="" resp.).="" por="" outro="" lado,="" os="" grupos="" c,="" d="" e="" e="" (𝑃="">< 0.05,="" resp.)="" têm="" níveis="" efetivamente="" mais="" altos="" de="" gas="" e="" mtl="" da="" administração="" de="" extratos="" de="" herba="" cistanche="" em="" comparação="" com="" o="" grupo="" b="" .="" os="" valores="" de="" ss="" nos="" ratos="" do="" grupo="" b="" foram="" maiores="" em="" comparação="" com="" o="" grupo="" a="" (𝑃="">< 0,01);="" os="" grupos="" c,="" d="" e="" e="" têm="" níveis="" atenuados="" de="" ss="" (𝑃="">< 0,05)="" (figura="" 5).="" em="" comparação="" com="" ratos="" com="" constipação,="" os="" níveis="" de="" cgrp="" nos="" ratos="" normais="" do="" grupo="" a="" (𝑃="">< 0,01)="" e="" nos="" grupos="" c,="" d="" e="" e="" administrados="" com="" herba="" cistanche="" foram="" constantes="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Alteração Histológica do Cólon.

Para investigar se o tratamento com AEHC pode induzir alteração estrutural do tecido do cólon, o comprimento das vilosidades, a espessura da camada da cripta e a espessura do músculo foram medidos em cólons transversais de ratos nos cinco grupos após coloração com H&E. Ao comparar a patologia do cólon dos ratos em todos os grupos, a mucosa colônica era lisa e contém pequenas artérias e pequenas veias na submucosa e um grande número de células adiposas. Além disso, a camada muscular era composta por células musculares lisas e a subserosa era completa. O comprimento médio das vilosidades foi significativamente menor no Grupo B do que no Grupo A (𝑃 < {{0}}.01).="" no="" entanto,="" o="" comprimento="" médio="" das="" vilosidades="" no="" grupo="" c="" aumentou="" muito="" em="" mais="" de="" 30="" por="" cento="" quando="" comparado="" com="" o="" grupo="" b="" (figuras="" 6="" e="" 7)="" (𝑃="">< 0,05).="" enquanto="" isso,="" o="" comprimento="" médio="" das="" vilosidades="" aumenta="" muito="" nos="" grupos="" d="" e="" e="" quando="" comparado="" com="" o="" grupo="" b="" (figuras="" 6(a)="" e="" 6(b))="" (𝑃="">< 0,01).="" além="" disso,="" a="" alteração="" da="" espessura="" do="" músculo="" foi="" muito="" semelhante="" ao="" comprimento="" das="" vilosidades.="" no="" grupo="" b,="" a="" espessura="" do="">

foi dramaticamente mais fino quando comparado com o Grupo A. No entanto, os níveis de espessura muscular nos Grupos C, D e E aumentaram de 30 a 35 por cento em relação aos do Grupo B (Figuras 6 e 7). No geral, esses achados indicam que o AEHC pode aumentar o comprimento das vilosidades e a espessura do músculo no cólon de ratos constipados.

3.7. A administração do tratamento com AHEC aumentou a expressão proteica de c-Kit e SCF.

A imunorreatividade do mesmo foi detectada no cólon, pois as células em todos os grupos testaram positivo para c-kit. Conforme mostrado na Figura 8, o nível de expressão de c-kit no Grupo B foi menor do que no Grupo A (𝑃 < 0.05).="" o="" nível="" de="" expressão="" de="" c-kit="" no="" grupo="" c="" foi="" maior="" do="" que="" no="" grupo="" b="" (𝑃="">< 0.{{20}}5),="" enquanto="" mais="" c-kit="" estava="" presente="" nos="" grupos="" d="" e="" e="" do="" que="" no="" grupo="" b="" (𝑃="">< 0.05).="" após="" tratamento="" com="" diferentes="" concentrações="" de="" extrato="" aquoso="" de="" herba="" cistanche="" por="" 2="" semanas,="" os="" níveis="" de="" expressão="" proteica="" de="" c-kit="" e="" scf="" foram="" detectados="" por="" análise="" de="" western="" blot.="" a="" análise="" de="" western="" blot="" mostrou="" que="" os="" níveis="" de="" expressão="" de="" c-kit="" e="" scf="" foram="" notavelmente="" mais="" baixos="" após="" o="" tratamento="" com="" loperamida="" em="" cólons="" de="" ratos="" (figura="" 9).="" a="" figura="" 8(e)="" demonstra="" que="" a="" diminuição="" do="" c-kit="" em="" ratos="" com="" constipação="" aumentou="" significativamente="" em="" 31,2%="" após="" o="" tratamento="" dos="" ratos="" com="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" (𝑃="">< 0,05).="" além="" disso,="" o="" tratamento="" com="" 100="" e="" 200="" g/ml="" de="" aehc="" elevou="" os="" níveis="" de="" expressão="" da="" proteína="" c-kit.="" a="" expressão="" da="" proteína="" scf="" aumentou="" significativamente="" em="" 20,1,="" 24,7="" e="" 8,4="" por="" cento="" no="" tratamento="" com="" 100,="" 200="" e="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc,="" respectivamente="" (figura="" 9).="" 3.8.="" efeito="" de="" aehc="" na="" expressão="" de="" mrna="" de="" c-kit,="" scf="" e="" pi3k.="" para="" investigar="" se="" o="" tratamento="" com="" aehc="" pode="" afetar="" a="" regulação="" do="" mrna="" relacionado="" à="" contração="" muscular,="" foram="" observadas="" alterações="" nos="" níveis="" de="" expressão="" de="" c-kit,="" scf="" e="" pi3k="" em="" cólons="" de="" ratos="" constipados="" usando="" primers="" específicos.="" os="" resultados="" mostraram="" que="" os="" níveis="" de="" mrna="" de="" c-kit="" no="" grupo="" b="" foram="" significativamente="" menores="" em="" comparação="" com="" o="" grupo="" a="" (𝑃="">< 0,05),="" enquanto="" os="" níveis="" de="" mrna="" nos="" grupos="" c,="" d="" e="" e="" foram="" maiores="" do="" que="" no="" grupo="" b="" (𝑃="">< 0,05)="" (figura="" 10).="" também="" examinamos="" o="">

expressão de SCF, um ligante de kit. A expressão de mRNA de SCF em ratos do Grupo B foi significativamente menor do que no Grupo A, enquanto o tratamento com AEHC nos Grupos C, D e E aumentou a expressão de mRNA de SCF (Figura 10). Além disso, examinamos o efeito de AEHC na expressão do gene PI3K. No dia 14, o nível de expressão do gene PI3K foi significativamente maior nos Grupos C, D e E do que no Grupo B (𝑃 <>