Glicosídeos monoterpênicos iridoides e acíclicos, cancanosídeos L, M, N, O e P de Cistanche Tubulosa

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WCERTO(Orobanchaceae) é uma planta parasita perene que cresce nas raízes desalvadorouCalotropisespécies, distribuídas no norte da África, Arábia e países asiáticos.1) Os caules desta planta (Kanka-nikujuyou em japonês) têm sido tradicionalmente usados ​​paratratamento de impotência, esterilidade, lombalgia e fraqueza corporalbem como um agente promotor da circulação sanguínea.1,2) Durante nossos estudos sobre constituintes bioativos de caules deC. tubulosa, 3-6) relatamos anteriormente vinte e quatro aminoglicosídeos feniletanóides, incluindo cancanósidos H1, H2, I, J1, J2, K1e K2e dois oligoaçúcares acilados de caules frescos deC. tubulosa. 5,6) Além disso, principalglicosídeos feniletanóides, equinacosídeo, acteosídeo e isoacteosídeo, descobriu-se que inibiam o aumento dos níveis séricos de aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase (sal) no fígado lesionado de camundongos induzido porD-galactosamina (D-GalN)/lipopolissacarídeo em doses de 25-100 mg/kgpor sistema operacional(p.o.). Os requisitos estruturais dos glicosídeos feniletanóides para a atividade hepatoprotetora também foram elucidados.5) Neste estudo contínuo sobre os constituintes dos caules frescos deC. tubulosa, isolamos ainda onze glicosídeos iridóides, incluindo cancanósidos L (1), M (2), e n (3), sete glicosídeos monoterpênicos acíclicos incluindo cancanósidos O (4) e P (5), três fenilpropanóides e quatro lignanas. Este artigo trata do isolamento e elucidação da estrutura de cinco novos compostos (1-5).

CISTANCHE TUBULOSA NATURAL PARA ALIVIAR A DISFUNÇÃO SEXUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Caules frescos de C. tubulosa (cultivados em Urumqi, província de Xinjiang, China) foram extraídos com metanol sob refluxo para produzir um extrato metanólico (8,36% dos caules frescos). A partir do extrato metanólico, as frações eluídas com H2O e MeOH (5,63% e 2,73%, respectivamente) foram obtidas por cromatografia em coluna Diaion HP-20 (H2O→MeOH) conforme descrito anteriormente.5) A fração eluída com MeOH foi submetido a cromatografias em coluna de SiO2 e ODS e finalmente HPLC para fornecer cancanósidos L (1, 0.0026%), M (2, 0.{{27 }}001%), N (3, 0.00{{60}}7%), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%) e P (5, 0 .0002%), 6-deoxicatalpol3,7) (6, 0,197%), bartsioside3,7) (7, { {147}}.0583%), glurosídeo3,7) (8, 00,0443%), cancanoisídeo A3) (9, 22,3 mg, 0,0010%), ácido mussaenosídico3,7) ( 10, 0,0056%), 8- ácido epilogânico3,8) (11, 0,0023%), 8-ácido epideoxilogânico3,7) (12, 0,0004%), ácido geniposidico3,7) (13, 0,0040% ), cancanósido E3) (14, 0,0026%), (2E,6Z)-8-bD-glucopiranosiloxi-2,6-dimetil-2,6-ácido octadienóico3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014%), (2E,6E)-3,7-dimetil-8-hidroxioctadien-1-il-ObD-glucopiranosídeo10) (16, 0,0082%), 8-hidroxigeraniol 8-O-bD-glucopiranosídeo11) (17, 0,0044%), betulalbusida A12) (18, 0,0004%), coniferina13) (19, 0,0002%), seringina13) ( 20, 0,0015%), aldeído sinápico 4-ObD-glucopiranosídeo14) (21, 0,0001%), ( )-pinoresinol ObD-glucopiranosídeo4,8,15) (22, 0,0010%), eucommina A16) (23, 0,0002 %), isoeucommina A17) (24, 0,0010%) e ( )-seringaresinol ObD-glucopiranosídeo4,8,18) (25, 0,0044%).

Estruturas dos cancanósidos L (1), M (2) e N (3)

O cancanosídeo L (1) foi obtido como um pó branco com rotação óptica negativa ([a]D 26 - 45.7 em MeOH). Seu espectro de IR mostrou uma forte banda de absorção em 3433 e 1{{20}}80 cm- 1 sugestiva de uma porção glicosídica. O bombardeio de átomos rápidos (FAB) -MS de 1 corrida nos modos de íons positivos e negativos mostrou picos de íons quasimoleculares em m/z 371 [M Na] e 347 [M- H]-, respectivamente, e a fórmula molecular foi determinado como C15H24O9 por medição FABMS de alta resolução. A hidrólise ácida de 1 com ácido clorídrico 1,0 M (HCl) liberou D-glicose, que foi identificada por análise de HPLC usando um detector de rotação óptica.3-6) Os espectros de RMN de 1 H e 13C de 1 (CD3OD, Tabelas 1, 2), que foram atribuídos por vários experimentos de RMN, 19) mostraram sinais atribuíveis a quatro metilenos [d 1,43 (1H, br dd, J= ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 ( 1H, br dd, J= ca. 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= ca. 8 , 14 Hz, 6b-H), 3,50 (1H, ddd, J= 2.4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=

ca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (1H cada, ambos d, J= 13,1 Hz, 10-H2)], dois metinos [d 2,15 (1H, dd, J=7,2, 8,9 Hz, 9-H) e 2,23 (1H, m, 5-H)], e um grupo acetal [d 4,81 (1H, d, J{{28 }},9 Hz, 1-H)] juntamente com uma porção b-glucopiranosil [d 4,70 (d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. 1, o experimento de espectroscopia de correlação 1 H – 1 H (1 H – 1 H COSY) em 1 indicou a presença de estruturas parciais escritas em linhas em negrito. No experimento de correlação heteronuclear de ligações múltiplas (HMBC) em 1, correlações de longo alcance foram observadas entre os seguintes prótons e carbonos (1-H e 3-C, 8-C; {{ 49}}H e 1-C; 7-H e 8-C, 10-C; }}H2 e 7-C, 8-C; 1 -H e 1-C) como mostrado na Fig. 1. Em seguida, a estereoestrutura relativa de 1 foi caracterizada por sensibilidade à fase. Experimento de espectroscopia de aprimoramento nuclear Overhauser (NOESY sensível à fase), que mostrou correlações NOE entre os seguintes pares de prótons (1-H e 3aH; 3a-H e 4a-H; 3b-H e 4b-H; 4b-H e 5-H, 9-H; 5-H e 6b-H, 9-H e 7-H; e 10-H2), como mostrado na Fig. 1. Os espectros de RMN de 1 H e 13C de 1 foram sobrepostos aos do constituinte iridóide principal 6-deoxicatalpol (6), exceto para os sinais devidos à porção d-lactol saturada. Finalmente, a hidrogenação de 6 deu 1, então a estereoestrutura do cancanósido L foi elucidada como sendo 3,4- dihidro-6-deoxicatalpol (1).

CISTANCHE TUBULOSA NATURAL PARA ALIVIAR O TRANSTORNO DE EXCITAÇÃO DO CORREIO PHGS75% ECH 30% ACT 12%

O cancanosídeo M (2) foi obtido como um pó branco com rotação óptica negativa ([a]D 26 - 18.7 em MeOH). O espectro IR de 2 mostrou bandas de absorção em 3433, 1736, 1655 e 1076 cm- 1 atribuíveis a porções hidroxila, d-lactona, olefina e éter. O espectro FAB-MS de íon positivo de 2 mostrou um pico de íon quasimolecular em m/z 353 [M Na], e a fórmula molecular foi determinada como C15H22O8 por medição FAB-MS de íon positivo de alta resolução. A hidrólise ácida de 2 com HCl 1,0 M liberou D-glicose. Os espectros 1 H- e 13CNMR de 2 (CD3OD, Tabelas 1, 2) mostraram sinais atribuíveis a quatro metilenos [d 1,66, 2,11 (1H cada, ambos m, 4-H2), 2,15, 2,75 (1H cada, ambos m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J= 2.8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (1H cada, ambos d, J{{61 }},1 Hz, 10-H2), 4,35 (1H, ddd, J= 3,1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], dois metinos [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, 9-H)], uma olefina [d 5,94 (1H, m, 7-H)] e um grupo lactona saturado (d C 174,9) juntamente com uma porção bD-glucopiranosil [d 4,32 (1H, d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Como mostrado na Figura 1, o experimento 1 H – 1 H COSY em 2 indicou a presença de estruturas parciais escritas em linhas em negrito e, no experimento HMBC, foram observadas correlações de longo alcance entre os seguintes pares de prótons e carbono ({{ 103}}H e 1-C; 7-H e 9-C; }}H2 e 7-C, 8-C, 9-C; A estereoestrutura relativa de 2 foi caracterizada por um experimento NOESY sensível à fase, que mostrou correlações NOE entre os seguintes pares de prótons (3a-H e 4a-H; 3b-H e 4b-H; 4b-H e 5- H; 5-H e 6b-H, 9-H) como mostrado na Fig. 1. Assim, a estereoestrutura de 2 foi elucidada como mostrado.

O cancanosídeo N (3) foi isolado como um pó branco com rotação óptica negativa ([a]D 25 - 24.6 em MeOH). No FAB-MS de íon positivo de 3, um pico de íon quasimolecular foi observado em m/z 371 [M Na]. A fórmula molecular C16H28O8 foi determinada por medição FAB-MS de alta resolução. A hidrólise ácida de 3 com 1,0 M HCl liberou D-glicose. Os dados de RMN de 1 H e 13C (CD3OD, Tabelas 1, 2) mostraram sinais atribuíveis a um metil [d 1.07 (3H, d, J= 7.2 Hz, {{ 28}}H3)], quatro metilenos {d 1,37, 1,87 (1H cada, ambos m, 7-H2), 1,65, 1,81 (1H cada, ambos m, 6-H2), [3,65 ( 1H, dd, J= 9,1, 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J= 5,9, 9,8 Hz), 11-H2] e [3,70 (1H, dd, J= 3,3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), 3-H2]}, quatro metinos [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8-H), 2,16 (1H, m, 5-H)], e um grupo hemiacetal [d 4,67 ( 1H, d, J= 7,4 Hz, 1-H)] junto com uma porção bD-glucopiranosil [d 4,26 (1H, d, J= 7,9 Hz, {{101 }}H)]. A estrutura iridóide de 3 foi esclarecida por experimentos 1 H – 1 H COSY e HMBC e a estereoestrutura relativa foi caracterizada por um experimento NOESY sensível à fase, como mostrado na Fig. 1. Consequentemente, a estereoestrutura de 3 foi elucidada como mostrado.

CISTANCHE TUBULOSA NATURAL PARA RESOLVER PROBLEMAS SEXUAIS PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Estruturas dos cancanósidos O (4) e P (5)

Os cancanosídeos O (4) e P (5), C16H26O8, também foram obtidos como pós brancos com rotações ópticas negativas (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32. 7 ambos em MeOH). Os espectros de IV de 4 e 5 mostraram bandas de absorção em 3433, 1696, 1647 e 1076 cm- 1 para 4 e 3434, 1701, 1647 e 1{ {95}}76 cm- 1 para 5, atribuível às funções glicosídica, carboxila e olefina. Seus espectros de UV mostraram um máximo de absorção comum em 217 nm, indicando a presença de uma porção de ácido carboxílico a, b-insaturado em ambos. A hidrólise ácida de 4 e 5 liberou D-glicose, enquanto pela hidrólise enzimática com glicosidase, 4 e 5 deram (2E,6E)-8-hidroxi-2,6-dimetil{{37} },6-ácido octadienóico20) (4a) e (2E,6E)-8-hidroxi-3,7- dimetil-2,{{ 47}}ácido octadienóico21) (5a), respectivamente. Dados de RMN de 1 H e 13C de 4 (CD3OD, Tabelas 2, 3) mostraram sinais atribuíveis a dois metils [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{ 66}},0 Hz, 9-H3)], três metilenos {d 2,19 (2H, br t, J= ca. 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [4,24 (1H, dd, J= 7,6, 12,0 Hz), 4,33 (1H, dd, J= 6,2, 12,0 Hz), { {96}}H2]} e duas olefinas trissubstituídas [d 5,41 (1H, ddd, J= 1.2, 6,2, 7,6 Hz, 7- H), 6,75 (1H, tq, J{ {111}},2, 1,0 Hz, 3-H)] juntamente com uma parte b-Dglucopiranosil [d 4,34 (d, J= 7,8 Hz, 1 -H)]. Pela comparação de sinais de carbono no espectro 13C-NMR de 4

com aqueles de 4a, foi observado um desvio de glicosilação na posição 8- (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). A posição da ligação glicosídica também foi confirmada por experimentos de HMBC, como mostrado na Fig. 2. Consequentemente, a estereoestrutura de 4 foi esclarecida como sendo (2E,6E)-8-bD-glucopiranosiloxi-2,{{ 16}}dimetil-2,6-ácido octadienóico. Por outro lado, os dados de RMN de 1 H e 13C de 5 (CD3OD, Tabelas 2, 3) indicaram a presença de um (2E,6E)-8-hidroxi{{30}} ,7-dimetil-2,6-porção de ácido octadienóico [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 (2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (1H cada, ambos br d, J= ca. 12 Hz, 8-H2), 5,47 (1H, tq, J= 7.1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H )] junto com uma parte bD-glucopiranosil [d 4,23 (d, J= 7,7 Hz, 1 -H)]. A conectividade da porção bD-glucopiranosil em 5 foi elucidada com base em experimentos de HMBC como mostrado na Fig. 2. Além disso, uma mudança típica de glicosilação foi observada para os sinais na posição 8- (d C 5: 75,6; 5a: 68,8). com base nas evidências mencionadas acima, a estereoestrutura de 5 foi determinada como sendo (2E,6E)-8-bD-glucopiranosiloxi-3,7-dimetil-2,{{103 }}ácido octadienóico.

Efeitos dos constituintes na citotoxicidade induzida pelo fator de necrose tumoral-a (TNF-a) em células L929

Sabe-se que o TNF-a medeia uma variedade de lesões de órgãos através da sua indução de apoptose celular. No caso do fígado, os efeitos biológicos do TNF-a têm sido implicados na lesão hepática induzida por toxinas hepáticas, isquemia/reperfusão, hepatite viral e álcool.22-24) Portanto, o TNF-a é considerado um alvo importante para descobrir agentes anti-inflamatórios e hepatoprotetores. Com base no conceito acima mencionado, investigamos constituintes protetores de produtos naturais na morte celular induzida por TNF-α em células L929, uma linhagem celular sensível ao TNF-α.25) Anteriormente, relatamos

que vários constituintes de Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) e Sapindus rarak, 36-38) mostraram efeitos inibitórios de citotoxicidade induzida por TNF-a em células L929. Uma vez que os constituintes feniletanóides de C. tubulosa (por exemploequinacosídeo, acteosídeo e isoacteosídeo, etc.) 5) também inibiu essa citotoxicidade, examinamos ainda os constituintes iridóide, fenilpropanóide e lignana, conforme mostrado na Tabela 4. Como resultado, o cancanósido A (9, inibição: 16,3± 2,0% em 1 00 mM), ácido mussaenosídico (10, 44,7± 8,7%), 8-ácido epigâmico (11, 10,7± 0,4%), 8-hidroxi geraniol 8-ObD- glucopiranosídeo (17, 21,3± 2,4%) e ()-pinoresinol ObD-glucopiranosídeo (22, 22,3± 1,6%) apresentaram atividade significativa. Embora suas atividades fossem mais fracas que as do equinacosídeo (IC 50= 31 0,1 mM), acteosídeo (17,8 mM) e isoaceteosídeo (22,7 mM), os principais constituintes do feniletanóide.5)

CISTANCHE TUBULOSA NATURAL PARA MELHORAR A FUNÇÃO SEXUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%