Avaliação da atividade anti-fadiga de saponinas totais de Radix Notoginseng

Xu Yong-xin & Zhang Jian-jun

Faculdade de Educação Física, Universidade de Zhengzhou, Zhengzhou, PR China

Para mais informações: ali.ma@wecistanche.com

Antecedentes e objetivos:

Várias atividades biológicas de saponinas totais de Radix notoginseng (TSRN), uma medicina tradicional chinesa foram relatadas. O presente estudo foi realizado para investigar aatividade anti-fadigade TSRN em camundongos machos Kunming.

Métodos:

Os ratos foram divididos em quatro grupos. O primeiro grupo designado como grupo controle foi administrado com água destilada por gavagem todos os dias. O segundo, terceiro e quarto grupos designados como grupos de tratamento TSRN foram administrados com TSRN de 20, 40 e 80 mg/kg de peso corporal/dia, respectivamente. O tratamento continuou por 28 dias. Tempo exaustivo de natação, lactato sanguíneo e conteúdo de glicogênio tecidual de camundongos após a natação foi determinado.

Resultados:

O TSRN estendeu o tempo de natação exaustivo dos camundongos, efetivamente atrasou o aumento de lactato no sangue, bem como aumentou o conteúdo de glicogênio tecidual.

Interpretação e conclusões:

TSRN mostrou-se promissoratividade anti-fadigaem modelo animal. No entanto, mais estudos são necessários para elucidar o mecanismo do efeito do TSRN nafadiga.

Palavras-chave: Atividade anti-fadiga - lactato - natação - saponinas totais de Radix notoginseng

Panax notoginseng (Burk.) FH Chen é cultivado em todo o sudoeste da China, Birmânia e Nepal. A raiz, a parte comumente usada desta planta chamada Radix notoginseng ou Sanchi, tem uma longa história como remédio na medicina tradicional oriental1-3. Na China, R. notoginseng é usado para promover a circulação sanguínea, remover a estase sanguínea, induzir a coagulação do sangue, aliviar o inchaço, retardarfadiga,e aliviar a dor4,5. R. notoginseng é relatado como benéfico para doença cardíaca coronária, doença vascular cerebral, câncer, diabetes mellitus, bem como melhora de aprendizado e memória em estudos experimentais6-8. Estes efeitos terapêuticos são atribuídos aos seus ingredientes ativos, nomeadamente saponinas, flavonóides e polissacarídeos9-11. As saponinas totais de R. notoginseng (TSRN) são consideradas os principais ingredientes ativos e são uma mistura de mais de 20 saponinas do tipo Dammarane, incluindo ginsenosídeo Rg1, Rg2, Rb1, Rb2, Rb3, Rc, Rd, Re, Rh, F2 , e notoginsenosídeo R1, R2, R3, R4, R6, Fab, Fc, Fe, etc12. Embora muitas atividades biológicas e funções farmacológicas do TSRN sejam conhecidas. Sabe-se que há estudos limitados investigando seus efeitos sobrefadiga física. Portanto, o presente estudo foi desenhado para investigar aatividade antifadigade saponinas totais de R. notoginseng em um modelo de rato.

Materiais e Métodos

O estudo foi realizado no Laboratório de Bioquímica da Universidade de Zhengzhou (Zhengzhou, China). Materiais vegetais: A amostra seca de R. notoginseng foi obtida da Henan Chinese Herbal Medicine Company, (Zhengzhou, China), e foi autenticada pelo Departamento de Botânica da Universidade de Zhengzhou (Zhengzhou, China). A amostra foi identificada por características macromorfológicas e microscópicas e cromatografia em camada delgada (TLC). Com base na Farmacopeia Chinesa, foi identificado como a raiz da

Panax notoginseng (Burk.) FH Chen. Preparação de saponinas totais de R. notoginseng (TSRN):

R. notoginseng seco foi moído em pó e passado por uma peneira de malha 40. O TSRN foi preparado pelo método de Sun e cols.13. Em resumo, as amostras energizadas (1 kg) foram extraídas com 70 por cento de etanol a 100 graus (3 x 4 l) e concentradas em vácuo (40 graus) para evaporar o solvente para dar um pequeno volume. Após extração com éter (3 x 0,5 l), a porção da camada aquosa foi extraída com n-butanol até que a camada de n-butanol se tornasse incolor. A solução de n-butanol foi concentrada e seca em vácuo (60 graus). O extrato seco foi submetido a cromatografia em coluna de resina D101, lavado com H2O e eluído com etanol para dar TSRN. TSRN continha 64,3 ± 1,15 por cento de notoginsenosídeo conforme determinado por cromatografia em camada fina e método espectrofotométrico.

Animais:

Camundongos Kunming machos, pesando entre 18- 22 g, foram obtidos do Laboratory Animal Center, Medical College of Zhengzhou University (Zhengzhou, China.), e foram alimentados com uma dieta comercial e água ad libitum. A dieta comercial consistia em 12% de gordura, 60% de carboidratos e 28% de proteína. Os animais foram alojados sob um ciclo claro/escuro 12-h a uma temperatura de 22 ± 1 grau e uma umidade de 50 ± 5 por cento. Os camundongos foram autorizados a se aclimatar ao ambiente de laboratório por pelo menos 1 semana antes dos experimentos. A liberação ética para a realização dos experimentos em animais foi obtida do Comitê de Ética Animal Institucional.

Agrupamento de animais:

Noventa e seis camundongos foram divididos aleatoriamente em quatro grupos, cada um composto por 24 camundongos. O primeiro grupo designado como grupo controle (Controle) foi administrado com água destilada por gavagem todos os dias. O segundo, terceiro e quarto grupos designados como grupos de tratamento TSRN foram administrados com TSRN de 20, 40 e 80 mg/kg de corpo/peso dia, respectivamente. A administração de água destilada ou TSRN foi continuada por 28 dias. As doses de TSRN e 28 dias de tempo de tratamento utilizadas neste estudo foram confirmadas como adequadas e eficazes nos camundongos testados, de acordo com experimentos preliminares.

Teste de natação exaustivo:

Após o tratamento final com TSRN ou água destilada, os camundongos foram deixados em repouso por 30 min. Em seguida, oito camundongos foram retirados de cada grupo para um teste exaustivo de natação. Os animais foram colocados no tanque de natação (50 × 50 × 40 cm) a 30 cm de profundidade com água mantida a 25 ± 2 graus. A cauda de cada camundongo foi carregada com um feixe de pedaços de chumbo, que correspondia a 10% do seu peso corporal. A exaustão foi determinada pela observação da perda de movimentos coordenados e falha no retorno à superfície em 10 segundos14. O tempo de natação foi imediatamente registrado.

Medindo parâmetros bioquímicos relacionados à fadiga:

Após o tratamento final com TSRN ou água destilada, os camundongos foram deixados em repouso por 30 min. Em seguida, oito camundongos foram retirados de cada grupo para análises de lactato sanguíneo. Os camundongos foram forçados a nadar por 30 minutos após o carregamento de peso (2% do peso corporal) e o sangue foi coletado da veia da cauda antes e depois da natação. O conteúdo de lactato sanguíneo foi medido de acordo com os procedimentos recomendados fornecidos pelo kit de diagnóstico comercial (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Jiangsu, China). Os oito camundongos restantes foram retirados de cada grupo para análises de glicogênio tecidual. Os camundongos foram forçados a nadar por 90 minutos sem cargas. Depois de descansar por uma hora, os camundongos foram mortos por deslocamento cervical sob anestesia. O fígado e os músculos gastrocnêmios foram coletados15. Os teores de glicogênio tecidual foram testados de acordo com os procedimentos recomendados fornecidos pelo kit de diagnóstico comercial (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Jiangsu, China).

Análise estatística

: Todos os testes foram realizados em triplicado. Os dados experimentais foram expressos como média ± desvio padrão. Análise de variância unidirecional (ANOVA), LSD e testes T3 de Dunnett foram realizados para determinar a diferença significativa entre as amostras dentro do intervalo de confiança de 95 por cento, usando o software SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA).

Resultados

Efeitos do TSRN no tempo de natação exaustivo de camundongos:

O tempo de natação exaustivo do terceiro e quarto grupos aumentou significativamente (P<0.05) when="" compared="" with="" the="" control="" group.="" however,="" the="" exhaustive="" swimming="" time="" of="" the="" second="" group="" showed="" no="" significant="" changes="" compared="" with="" the="" control="" group="" (fig.="" 1).="" the="" swimming="" time="" of="" the="" second,="" third,="" and="" fourth="" groups="" increased="" by="" 21.15,="" 27.41,="" and="" 34.01="" percent,="" respectively.="">

Efeitos do TSRN no conteúdo de lactato sanguíneo de camundongos após a natação:

Não houve diferença significativa no conteúdo de lactato sanguíneo entre os grupos de tratamento TSRN e o grupo controle antes da natação. Após a natação, o conteúdo de lactato sanguíneo de cada grupo de tratamento com TSRN diminuiu significativamente (P<0.05) when="" compared="" to="" the="" control="" group="" (fig.="" 2).="" the="" results="" indicated="" that="" the="" blood="" lactate="" contents="" of="" the="" second,="" third="" and="" fourth="" groups="" decreased="" by="" 47.14,="" 57.59,="" and="" 61.96="" percent,="">

Efeitos do TSRN no conteúdo de glicogênio tecidual de camundongos após natação:

Após natação, os conteúdos de glicogênio hepático e muscular de cada grupo de tratamento com TSRN aumentaram significativamente (P<0.05) when="" compared="" with="" that="" of="" the="" control="" group="" (fig.="" 3).="" the="" liver="" glycogen="" contents="" of="" tsrn="" treatment="" groups="" increased="" by="" 58.12,="" 115.84,="" and="" 153.58="" percent,="" respectively.="" the="" muscle="" glycogen="" contents="" of="" treatment="" groups="" increased="" by="" 58.54,="" 83.74,="" and="" 73.98="" percent,="">

Discussão

O presente estudo foi desenhado para investigar a atividade anti-fadiga das saponinas totais de R. notoginseng (TSRN). O nado forçado de animais tem sido empregado como critério de sua capacidade física de trabalho. Muitos estudos apontaram que a natação tem vantagens sobre outras formas de exercício, incluindo a esteira16-19. Para padronizar a carga de trabalho e reduzir o tempo de natação, pesos em percentuais específicos do peso corporal foram adicionados ao peito ou cauda do animal17,20. O presente estudo mostrou que o TSRN estendeu o tempo de natação exaustivo de camundongos, o que indicou que o TSRN tinha atividade anti-fadiga e poderia elevar a tolerância ao exercício. Para explorar os mecanismos, alguns parâmetros bioquímicos foram determinados nos camundongos após a natação. O lactato sanguíneo é o produto da glicólise dos carboidratos em condição anaeróbica, sendo a glicólise a principal fonte de energia para exercício intenso em curto espaço de tempo21,22. Assim, o lactato sanguíneo é um dos indicadores importantes para julgar o grau de fadiga atlética. No presente estudo, o TSRN retardou efetivamente o aumento de lactato no sangue e o aparecimento de fadiga. A energia para o exercício é derivada inicialmente da quebra do glicogênio, após o exercício extenuante o glicogênio muscular será exausto e, posteriormente, a energia virá da glicose circulante liberada pelo fígado. Assim, os conteúdos de glicogênio hepático e muscular são parâmetros sensíveis relacionados à fadiga23-25. No presente estudo, o TSRN aumentou significativamente o conteúdo de glicogênio tecidual de camundongos após a natação. Em conclusão, os resultados sugeriram que o TSRN teve atividade anti-fadiga, o que estendeu o tempo de natação exaustivo dos camundongos, retardou efetivamente o aumento de lactato no sangue, bem como aumentou o conteúdo de glicogênio tecidual. Mais estudos são necessários para elucidar o mecanismo exato do efeito do TSRN na fadiga.

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Referências

1. Wang CZ, Xie JT, Zhang B, Ni M, Fishbein A, Aung HH, et al. Efeitos quimiopreventivos de Panax notoginseng e seus principais constituintes em células de câncer colorretal humano SW480. Int J Oncol 2007; 31: 1149-56.

2. Gupta YK, Briyal S, Gulati A. Potencial terapêutico de medicamentos fitoterápicos na isquemia cerebral. Indian J Physiol Pharmacol 2010; 54: 99-122.

3. Sungnoon R, Chattipakorn N. Efeitos antiarrítmicos da fitoterapia. Coração indiano J 2005; 57: 109-13.

4. Choi RC, Jiang Z, Xie HQ, Cheung AW, Lau DT, Fu Q, et al. Efeitos antioxidantes da flor bienal de Panax notoginseng contra a citotoxicidade induzida por H2O2-em células PC12 cultivadas. Chin Med 2010; 5: 38.

5. Lei XL, Chiou GC. Farmacologia cardiovascular de Panax notoginseng (Burk) FH Chen e Salvia miltiorrhiza. Am J Chin Med 1986; 14: 145-52.

6. Chan P, Thomas GN, Tomlinson B. Efeitos protetores da trioleína extraída de Panax notoginseng contra doenças cardiovasculares. Planta Med 2002; 68: 1024-8.

7. Kim HC, Shin EJ, Jang CG, Lee MK, Eun JS, Hong JT, et al. Ação farmacológica do Panax ginseng nas toxicidades comportamentais induzidas por agentes psicotrópicos. Arch Pharm Res 2005; 28: 995-1001.

8. Chuang CM, Hsieh CL, Lin HY, Lin JG. Panax notoginseng Burk atenua o comprometimento das funções de aprendizado e memória e aumenta as células imunorreativas ED1, BDNF e beta-secretase em ratos feridos de isquemia-reperfusão em estágio crônico. Am J Chin Med 2008; 36: 685-93.

9. Wu W, Zhang XM, Liu PM, Li JM, Wang JF. Efeitos da saponina Panax notoginseng Rg1 nas propriedades eletrofisiológicas cardíacas e no limiar de fibrilação ventricular em cães. Acta Pharm Sin 1995; 16: 459-63.

10. Chen JC, Chen LD, Tsauer W, Tsai CC, Chen BC, Chen YJ. Efeitos do Ginsenoside Rb2 e Rc na motilidade inferior do esperma humano in vitro. Am J Chin Med 2001; 29: 155-60.

11. Wei JX, Wang JF, Chang LY, Du YC. Estudos químicos de san chi Panax notoginseng I: Estudos sobre os constituintes dos pêlos radiculares de Sanchi. Acta Pharm Sin 1980; 15: 359-64.

12. Li X, Wang G, Sun J, Hao H, Xiong Y, Yan B, et al. Estudo farmacocinético e de biodisponibilidade absoluta do Panax notoginsenoside total, um típico constituinte múltiplo da medicina tradicional chinesa (MTC) em ratos. Biol Pharm Bull 2007;

13. Sun HX, Pan HJ, Pan YJ. Atividades hemolíticas e efeito adjuvante imunológico de saponinas de Panax e não de ginseng. Acta Pharmacol Sin 2003; 24: 1150-4.

14. Wu JL, Wu QP, Huang JM, Chen R, Cai M, Tan JB. Efeitos do L-malato na resistência física e atividades de enzimas relacionadas ao transporte malato-aspartato no fígado de camundongos. Physiol Res 2007; 56: 213-20.

15. Feng H, Ma HB, Lin HY. A atividade antifadiga de extratos aquosos da folha de Toona sinensis Roemer e alterações relacionadas ao exercício na peroxidação lipídica no exercício de resistência. J Med Plants Res 2009; 3: 949-54.

16. Matsumoto K, Ishihara K, Tanaka K, Inoue K, Fushiki T. Uma piscina de corrente ajustável para a avaliação da capacidade de resistência de camundongos. J Appl Physiol 1996; 81: 1843-9.

17. Mizunoya W, Oyaizu S, Ishihara K, Fushiki T. Protocolo para medir a capacidade de resistência de camundongos em uma piscina de corrente ajustável. Biosci Biotechnol Biochem 2002; 66: 1133-6.

18. Kamakura M, Mitani N, Fukuda T, Fukushima M. Efeito antifadiga da geléia real fresca em camundongos. J Nutr Sci Vitaminol 2001; 47: 394-401.

19. Jung KA, Han D, Kwon EK, Lee CH, Kim YE. Efeito antifadiga do extrato de Rubus coreanus Miquel em camundongos. J Med Food 2007; 10: 689-93.

20. Ascensão A, Magalhães J, Soares J, Ferreira R, Neuparth M, Marques F, et al. O treinamento de resistência atenua o dano oxidativo cardíaco induzido pela doxorrubicina em camundongos. Int J Cardiol 2005; 100: 451-60.

21. Yu B, Lu ZX, Bie XM, Lu FX, Huang XQ. Atividade sequestrante e antifadiga de peptídeos fermentados de soja desengordurados. Eur Food Res Technol 2008; 226: 415-21.

22. Tang KJ, Nie RX, Jing LJ, Chen QS. Atividade anti-fadiga atlética das saponinas (Ginsenosides) do ginseng americano (Panax quinquefolium L.). Afr J Pharm Pharmacol 2009; 3: 301-6.

23. Suh SH, Paik IY, Jacobs K. Regulação da homeostase da glicose no sangue durante o exercício prolongado. Mol Cells 2007; 23: 272-9.

24. Wei W, Zheng LY, Yu MY, Jiang N, Yang ZR, Luo X. Atividade antifadiga do extrato da fermentação submersa de Ganoderma lucidum usando Radix astragali como substrato. J Anim Plant Sci 2010; 6: 677-84.

25. Shang HP, Cao SH, Wang JH, Putheti R. Glabridin da erva chinesa alcaçuz inibe a fadiga em camundongos. Afr J Trad CAM 2010; 7: 17-23.