ABSTＲACT

Objetivo: Esclarecer secistanósidos(GCs) melhoradisfunção cognitivacamundongos que envelhecem rapidamente (SAMP8) mediando receptores andrógenos específicos (AＲ) noregulação da expressão da proteína sináptica． 

Métodos: Um total de camundongos SAMP8 machos com 76 7- meses de idade foram divididos aleatoriamente em grupo modelo, grupo GCs, grupo GCs + flutamida (F), grupo GCs + fulvestrant (ICI), grupo F e grupo ICI. As funções de aprendizagem e memória dos ratos em cada grupo foram testadas com o labirinto aquático de Morris. Western blotting e RT-PCR foram usados ​​para testar onível de expressão de sinaptofisina(SYN), densidade pós-sináptica － 95 (PSD － 95) e o fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) de camundongos em cada grupo．

Resultados: Os GCs melhoraram significativamente o aprendizado e a função cognitiva dos camundongos SAMP8.

Em comparação com o grupo GCs, a função de aprendizagem e memória dos ratos no grupo GCs + F e no grupo GCs + ICI foi significativamente reduzida. Os resultados de Western blotting e RT-PCR mostraram que o nível de expressão de BDNF, SYN e PSD－ 95 foi significativamente aumentado no nível da proteína e no nível do gene no grupo GCs em comparação com o grupo Modelo ( P ＜ 0． {{ 11}}5) ． O nível de expressão de SYN foi aumentado no grupo GCs + F e GCs + ICI, e os níveis de expressão de BDNF e PSD - 95 foram significativamente diminuídos nos grupos GCs + F e GCs + ICI em comparação com o grupo GCs (P < 0． 05) ．

Conclusão: Os GCs podem mediar especificamente AＲ para aumentar a plasticidade sináptica em camundongos SAMP8, o que por sua vez melhora o aprendizado e a função cognitiva.

PALAVRAS-CHAVE:Cistanosídeos gerais; Receptor de andrógeno; Plasticidade sináptica; Ratos SAMP8

Suplemento Cistanche Melhoria da Função Cognitiva Suplemento dietético PhGs75% Ech 30% Act 12%

doença de Alzheimer(AD) é comumdoença neurológica degenerativa, clinicamente caracterizada por declínio progressivo da função cognitiva e alterações no estado mental e psicológico [1]. Estudos descobriram que os níveis de testosterona em pacientes do sexo masculino com DA são significativamente mais baixos do que em homens normais.

Ofunção cognitiva dos pacientesfoi melhorado em vários graus apósterapia de reposição cetônica[2], o que indica que a diminuição dos níveis de andrógenos relacionada à idade pode ser um fator de risco para DA em homens mais velhos.

Glicosídeos totais de Cistanche deserticola (cistanósidos gerais, GCs) são um dos principais extratos de Cistanche deserticola, que podem melhorar a aprendizagem relacionada à DA edisfunção cognitiva[3]. Além disso, a administração de GCs por gavagem aumentou significativamente os níveis de testosterona em animais [4]. Os GCs também têm a função de promover o yang e podem exercer

Efeitos farmacodinâmicos semelhantes aos andrógenos. Estudos anteriores relataram que a testosterona pode melhorar o aprendizado e as funções cognitivas de animais modelo de DA, e esse processo depende de um receptor de andrógeno específico (receptor de andrógeno, AR) mediado [5].

É bem conhecido que a disfunção cognitiva em pacientes com DA está intimamente relacionada à plasticidade sináptica. No entanto, o mecanismo específico através do qual os GC regulam a plasticidade sináptica e, assim, melhoram a aprendizagem e as funções cognitivas ainda não está claro. Este estudo teve como objetivo explorar se os GCs medeiam ARＲ específico para afetar a plasticidade sináptica e, assim, melhorar a aprendizagem e as funções cognitivas na DA.

1 Materiais e métodos

1. 1 Animais e equipamentos experimentais

Camundongos SAMP8 machos com 3- meses de idade foram adquiridos da Escola de Medicina da Universidade de Pequim (SCXK [Pequim] 2016-0010) e foram criados até os 7 meses de idade. Os animais foram mantidos em ambiente limpo a (24 ± 1) grau e

Os animais receberam iluminação natural e livre acesso a alimentos e água, e atendimento humanitário foi prestado de acordo com os princípios 3R para uso de animais de experimentação. Este estudo experimental foi aprovado pelo Comitê de Ética em Animais Experimentais do Baotou Medical College (Baotou Medical College No. 20201102).

Os principais reagentes do experimento são:Cistanche deserticola glicosídeos totais(GCs, Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.); flutamida, antagonista do receptor de andrógeno (Sigma Company, EUA); antagonista do receptor de estrogênio-fulvestrant (ICI 182780, EUA) Med Chem Express); Anticorpo BDNF anti-rato de coelho,

Anticorpo PSD-95, anticorpo SYN, anticorpo -actina (Proteintech Company dos Estados Unidos); solução de eletroforese de proteínas, solução de transferência de proteínas, TEMED, tampão de acrilamida, persulfato de amônio, Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); Kit de síntese de cDNA, detecção quantitativa de fluorescência de talentos

Kit de reagentes (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.), etc. O principal equipamento experimental inclui um tanque de eletroforese de placa vertical, aparelho de eletroforese, tanque de transferência, agitador de descoloração (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), sistema de análise de imagem de gel de proteína (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), instrumento de PCR quantitativo de fluorescência em tempo real (EUA Roche) etc.

1.2 Agrupamento e administração

Dois camundongos morreram naturalmente durante o processo de alimentação, e os 78 camundongos restantes foram divididos aleatoriamente em grupo modelo, grupo GCs, grupo GCs + flutamida (F), grupo GCs + fulvestrant (ICI), grupo F, ICI

Grupos de 13 animais cada. Com exceção do grupo modelo, grupo F e grupo ICI, os outros grupos receberam GCs continuamente na dose de 50 mg/(kg·d) por 30 dias.

A partir do 24º dia após a administração dos GCs, o grupo GCs + flutamida (F) e o grupo GCs + fulvestrant (ICI) receberam injeção intraperitoneal de F (5 mg/kg/d) 30 minutos após a administração dos GCs por gavagem. ), ICI (1 mg/kg/d), injeção contínua por 7 dias. Ajuste a concentração de dosagem para garantir que o volume gástrico máximo dos ratos seja de 0,5 mL, 1 vez/d.

1. Teste do labirinto aquático de 3 Morris

Os ratos se adaptaram ao ambiente aquático com um dia de antecedência. O labirinto aquático de Morris durou 6 dias. Os primeiros 5 dias foram de teste de posicionamento e navegação. Os ratos foram treinados uma vez por dia em cada um dos quatro quadrantes durante 1 minuto de cada vez. Cada intervalo de treinamento foi de 15 minutos e os registros foram registrados no mesmo horário. Latência de escape do teste de posicionamento e navegação do animal; no 6º dia, retire a plataforma da água e faça um teste de exploração espacial. Registre o número de travessias de plataforma e a porcentagem de tempo gasto no quadrante alvo do mouse. o quadrante alvo) e trajetória de natação de exploração espacial (trajetória de natação do teste de sonda espacial) e outros indicadores.

1. 4 Detecção de Western Blot

Expressão de proteínas relacionadas à sinapse SYN, PSD-95 e BDNF. Após o teste do labirinto aquático de Morris, todos os ratos foram anestesiados rotineiramente, suas cabeças foram decapitadas, seus cérebros foram removidos e seus hipocampos foram arrancados. O tecido do hipocampo foi lisado com proteínas, rompido por ultrassom a 4 graus, deixado em gelo por 30 minutos e centrifugado a 12,{5}} r/min por 15 minutos a 4 graus. O sobrenadante foi retirado e a concentração de proteína foi medida utilizando o método BCA. Após carregar a proteína, realize eletroforese em gel de empilhamento a uma voltagem constante de 80 V, eletroforese em gel de separação a uma voltagem constante de 120 V e transferência úmida a um fluxo constante de 300 mA; retire a membrana de PVDF, bloqueie com leite desnatado 5% por 80 minutos em temperatura ambiente e lave a membrana três vezes com TBST. 15 min/tempo, o anticorpo primário foi incubado durante a noite numa mesa com agitação a 4 graus; no dia seguinte, a membrana foi lavada 3 vezes com TBST.

15 min/tempo, o anticorpo secundário foi incubado à temperatura ambiente durante 2 h, depois foi realizado o desenvolvimento da cor ECL e a imagem foi realizada com um sistema de imagem por quimioluminescência. A -actina foi utilizada como referência interna, e o valor da densidade óptica da banda foi analisado utilizando o software Image J.

1. 5ＲRT－PCRＲDetecção

A expressão de mRNA de SYN, PSD-95 e BDNF foi extraída do RNA total do tecido do hipocampo de acordo com o método de extração Trizol, e o cDNA foi gerado após transcrição reversa. O kit de detecção quantitativa de fluorescência Talent foi usado para detecção quantitativa de fluorescência relativa. O experimento foi repetido três vezes e os resultados foram convertidos em 2 - ΔΔCT foi analisado. Os iniciadores de actina de camundongo, SYN, PSD -95 e BDNF foram projetados pela Shanghai Sangon Company, e as sequências de iniciadores são mostradas na Tabela 1.

1.6 Análise estatística

Via SPSS 25. 0 software estatístico para processamento, o software Graphpad Prism 8 foi usado para desenhar gráficos estatísticos e ANOVA unidirecional foi usada para comparar médias pareadas de múltiplas amostras. P < 0. 05 significa que a diferença é estatisticamente significativa.