Efeitos do extrato de Cistanche Deserticola na resposta erétil do pênis em ratos castrados

Abstrato:Cistanche deserticola(CD) tem sido considerado um agente tônico na função reprodutiva há milhares de anos. Os efeitos do extrato de CD sobrepênis erétilresposta foram investigadas no presente estudo. Após a cirurgia de castração, os ratos foram tratados intragástricamente com extrato de CD ({{0}},45, 0,90 e 1,8 g/kg) diariamente por quatro semanas.pênis erétila resposta foi medida e os hormônios séricos foram ensaiados no final do experimento. Foi avaliado que oerectilelatencytornou-se mais longo e oduração erétilmenor significativamente em ratos castrados em comparação com controles sham-operated. No entanto, o extrato de CD encurtou olatência erétile prolongou a duração da ereção para minimizar os efeitos negativos da castração. Na dosagem de 0,9g/kg, o extrato de CD regulou a concentração sérica de hormônio luteinizante aproximando-se do nível normal em ratos castrados. Esses achados indicaram que a DC facilitou a resposta erétil do pênis e modulou o nível de hormônio sérico até certo ponto.

Palavras-chave:Cistanche deserticola; resposta erétil; castração; hormônio

Para mais detalhes sobre cistanche melhorar a função sexual

INTRODUÇÃO

CistancheHoffmg. Et Link, um dos gêneros da família Orobanchaceae, distribui-se principalmente nas terras áridas e desertos do hemisfério norte, como a Mongólia Interior,Xinjiang, Ningxia regiões autônomas da China e Irã, Índia, Mongólia, etc. As espécies de Cistanch pertencem às ervas parasitas perenes, que geralmente se ligam às raízes de plantas fixadoras de areia como Haloxylox ammodendron, H. persicum, Kalidium foliatum e Tamarix plantas, etc. (Jiang e Tu 2009). Herba Cistanche, o caule da espécie Cistanche, foi considerado um tônico superior e ganhou a honra de "Ginseng dos desertos". Dentre as espécies de Cistanche, Cistanche deserticola YC MA tem sido indicada como a fonte primária de Cistanche (Stefanova et al.2011). No entanto, devido ao excesso de colheita nos últimos anos, os recursos naturais da C. deserticola (CD) selvagem são deficientes, que foi coletada como uma das plantas de Classe II que precisam de proteção na China, assim outras espécies deste gênero, como C. salsa e C. sinensis, também são usados ​​como substitutos em algumas áreas. Desde o primeiro registro no Chinese Material Medica de ShenNong (um antigo compêndio farmacológico), o CD foi pensado para tonificar o rim e revigorar o "Yang" na prática clínica sob a teoria da medicina tradicional chinesa, que é alegadamente eficaz para a reprodução, desenvolvimento e função de fertilidade. Enquanto isso, o CD também foi fervido com carne de carneiro, batata ou arroz para produzir um alimento tônico para tratar deficiências induzidas por sobrecarga por centenas de anos, sugerindo que é seguro tomar por via oral (Xiong et al.2013). No entanto, esses usos anedóticos existem principalmente em incunábulos chineses, com informações científicas limitadas discutidas em termos de conceitos farmacológicos modernos. ). Em resposta aos agentes químicos modernos e sofisticados, tem havido um interesse renovado na busca de medicamentos eficazes e seguros a partir de plantas para o tratamento da DE (Adimoelja 2000). Um estudo anterior (Liuet al. 2009) indicou que a DC electuária acelerou a ereção do pênis em ratos normais, entretanto, não havia dados envolvidos no efeito da DC na disfunção erétil. para investigar ED (Tombal 2005). Portanto, o presente estudo foi realizado para avaliar os potenciais efeitos da DC contra a DE, investigando a latência e duração da ereção em ratos castrados.

MATERIAIS E MÉTODOS

 Chemicals and materials Echinacoside (purity >98%) and acteoside (purity >98 por cento) foram adquiridos do National Institutes for Food and Drug Control (Pequim, China). O metanol de grau HPLC foi adquirido da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EUA). A água purificada foi produzida usando um sistema MilliporeMilli-Q Integral 3 e sistema Q-POD Milli-Q (Bedford, MA, EUA). Os caules de C. deserticola foram adquiridos de Shenzhen GURU Biology Co., Ltd (GuangDong, China) e moídos em pó fino com um pulverizador passado por uma peneira de 60 mesh. (Zhao et al.2011). Em seguida, cada 100 g de pó seco foi fervido em 1,5 L de água por 1,5 h. Arrefecendo à temperatura ambiente, o licor misturado foi centrifugado a 2000 rpm durante 10 min (Eppendorf 5810R, Alemanha) e o precipitado foi reextraído duas vezes nas mesmas condições. Os sobrenadantes combinados foram concentrados por um evaporador rotativo a vácuo (Heidolph laborota 4001-eficiente, Alemanha) a 60 graus, e então liofilizados e renderam cerca de 42 por cento de extrato seco em pó. Ao realizar o experimento animal subsequente, o extrato seco foi dissolvido em água purificada à temperatura ambiente.

Animais experimentais

Ratos Sprague-Dawley machos adultos (200-220g) foram obtidos da Medicine Experimental Animal

Centro da Província de Guangdong (Guangzhou, PR China), mantido em quartos com temperatura controlada com 12-h ciclos claros/escuros à temperatura ambiente (22-24 graus ) e umidade constante (40-70 por cento ) em SPF (específico livre de patógenos) em laboratório e alimentados ad libitum. Os procedimentos experimentais estavam de acordo com o National Institutes of Health Guide for Care and Use of LaboratoryAnimals.Procedimento experimental

Uma semana antes da administração, cinquenta ratos machos SD foram anestesiados com pentobarbital sódico por via intraperitoneal (40 mg/kg) (Jung et al. 1999) e alocados aleatoriamente em cinco grupos: exceto ratos no grupo sham-operado (Sham), os demais foram castrados bilateralmente por via escrotal (Anders 2003, Schlatt et al. 2002). Enquanto isso, os grupos tratados com CD foram administrados por via intragástrica com 0,45g/kg (baixa dose de extrato de CD, LCD mais Cas), 0,9g/kg (dose mediana de extrato de CD, MCD mais Cas) e 1,8g/kg (alta dose de CD extrato, HCD mais Cas) extrato de CD, respectivamente, enquanto os grupos sham e castrados foram administrados apenas com a quantidade correspondente de água. A medição do peso corporal foi realizada no início do procedimento e depois semanalmente. Todos os ratos foram submetidos à laparotomia imediatamente após a morte para retirada e posterior pesagem dos seguintes órgãos: glândulas prepuciais, vesícula seminal, próstata e músculo elevador do ânus.

Medição da resposta erétil do pênis

A função erétil dos ratos em cada grupo foi avaliada seguindo os métodos anteriores (Ji et al. 2009, Luo et al.2006). Resumidamente, um eletrodo bipolar de aço inoxidável (BL420F Data Acquisition & Analysis System, TmeTechnology Co., Ltd, Chengdu, PR China) foi cuidadosamente posicionado no pênis até que fosse erguido com o pulso da estimulação elétrica (5 V) 0,2 s. O tempo desde a estimulação até a ereção foi registrado como a latência erétil do pênis.

Amostragem de sangue e análise de hormônios séricos

Os ratos foram anestesiados com pentobarbital sódico por via intraperitoneal (40mg/kg) (Jung et al. 1999).

Amostras de sangue foram coletadas e coaguladas a 4 graus por 4h, das quais o soro foi coletado por centrifugação a 4000rpm por 5 min a 4 graus (Eppendorf 5810 R, Alemanha) e imediatamente armazenado em freezer -20 graus até Os níveis totais de LH e FSH foram medidos usando kits comerciais de radioimunoensaio (RIA) (Beijing North Institute of Biological Technology, Pequim, China) de acordo com as instruções do fabricante (Matsumoto et al. 1986). Com base na técnica imunológica radioativa competitiva, I125-marcado LH (ou FSH) foi usado no ensaio. Resumidamente, 100 µl de I125-agente LH (ou FSH) marcado foi adicionado a uma amostra de soro de 100 µl e incubada com 100 µl de anticorpo de coelho purificado a 4 graus (ou 37 graus) durante a noite. Em seguida, um agente de separação imune burro-anti-coelho foi adicionado ao complexo antígeno-anticorpo e centrifugado (3500 rpm, 15 min) para separar 125I-LH (ou FSH) livre e ligado ao anticorpo. Posteriormente, a radioatividade do precipitado foi medida em um contador de ensaio imunológico por rádio (DMF-96,Zhongcheng electric technology development Co., Ltd.,Hefei, China). Os limites de sensibilidade do ensaio LH e FSH foram ambos de 1,0 mIU/ml.

ANÁLISE ESTATÍSTICA

A análise dos dados foi realizada com o software SPSS versão 16.0.

Os valores foram expressos como média ± desvio padrão (DP). Os dados paramétricos foram analisados ​​usando análise de variância unidirecional (ANOVA) seguida de testes post hoc LSD. Os dados não paramétricos foram analisados ​​pelo teste de Kruskal-Wallis. As diferenças foram consideradas estatisticamente significativas se a probabilidade de desvio fosse menor que 0,05.

RESULTADOS

Determinação quantitativa do conteúdo de equinacósido e acetonídeo do pó de CD

Os teores de equinacósido e acetonido no pó de CD foram 1,27±0.01 por cento e 0,52±0,003 por cento, o que está de acordo com os requisitos da Farmacopeia Chinesa. O cromatograma de HPLC do pó de CD foi mostrado na fig. 1.

(4,6 mm × 250 mm, 5 µm, Waters, Milford, MA, EUA); fase móvel: 0,5 por cento (V/V) solução aquosa de ácido acético (A) e metanol ( B) ingradiente (0min, A: B=25:75; 10-30 min, A: B=40: 60; 30 min, A: B=0: 100); taxa de fluxo: 1ml/min; comprimento de onda de detecção: 330 nm; temperatura: 30.

Fig. 2: Latência e duração da ereção do pênis em ratas castradas. Os dados são expressos como a média ± SD (n=10). ##p<0.01 relative="" to="" sham-operated="" group,=""><0.01 relative="" to="" castrated="" group.="" abbreviation="" (below):="" sham,="" sham-operated="" group;="" cas,="" castration="" control="" group;="" lcd="" +cas="" (0.45g/kg),="" mcd="" +cas="" (0.9g/kg)="" and="" hcd="" +cas="" (1.8g/kg),="" three="" groups="" of="" cd="" extract="" treated="" in="" castrated="">

Fig. 3: Os efeitos do extrato de CD nas concentrações séricas de LH em ratos castrados. Os dados são expressos como a média ± SD (n=10). #p<0.05 relative="" to="" sham-operated="" group,="" *=""><0.05 relative="" to="" castrated="" group.="" body="" weights="" and="" relative="" accessory="" organs="" weights="" shown="" in="" table="" 1,="" all="" rats="" were="" of="" similar="" initial="" body="" weights="" with="" an="" increase="" from="" day="" 1="" to="" day="" 28.="" however,="" mean="" values="" in="" castrated="" group="" increased="" from="" 216.8±9.2="" g="" to="" 251.4±12.7,="" 283.3±15.1,="" 306.8±15.4="" and="" 322.2±18.4="" g,="" gaining="" less="" weights="" compared="" to="" the="" sham="" operated="" counterparts=""><0.05). there="" were="" no="" statistical="" difference="" between="" sham="" group="" and="" cd="" treated="">

Além disso, os pesos relativos médios da glândula prepucial, glândula prostática e vesícula seminal e ratos castrados do músculo elevador do ânus foram significativamente menores (p<0.05) than="" those="" of="" normal="" controls,="" respectively.="" compared="" with="" the="" rats="" castrated="" only,="" the="" relative="" values="" of="" these="" organs="" weight="" tended="" to="" be="" higher="" under="" the="" treatment="" of="" cd="" extract.="" erectile="" response="" assessment="" in="" contrast="" to="" sham="" group,="" castration="" made="" the="" rats="" spend="" more="" time="" gaining="" penis="" erection="" under="" electric="" stimulation=""><0.01). however,="" the="" erectile="" latency="" was="" shortened="" by="" cd="" extract,="" exhibiting="" a="" significant="" decrease="" by="" 52.7%="" in="" lcd="" +cas="" group=""><0.01), 73.5%="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 74.5%="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01), respectively.="" furthermore,="" castration="" shortened="" the="" erectile="" duration="" with="" the="" mean="" value="" of="" 37.2±17.3="" s="" compared="" to="" sham="" operated="" group=""><0.01). however,="" the="" erectile="" duration="" in="" rats="" was="" significantly="" prolonged="" approximately="" by="" 2.6-fold="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 2.1-fold="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01). it="" showed="" no="" strict="" dose-related="" correlation.="" (fig.="">

Níveis séricos de hormônios

Analisada pelo ensaio RIA, a concentração sérica média de LH em ratos castrados foi de 2,50±0,34mIU/ml, mostrando um aumento em relação ao controle sham operado (p<0.05). however,="" the="" value="" descended="" about="" 49.2%="" in="" mcd="" +cas="" group="" relative="" to="" that="" in="" castrated="" control=""><0.05) (fig.="" 3).="" shown="" in="" fig.="" 4,="" no="" statistical="" differences="" were="" observed="" among="" all="" groups="" on="" fsh="">

DISCUSSÃO

Nossos resultados demonstraram que a castração prolongou significativamente a latência erétil do pênis e encurtou a duração da ereção, com notável atrofia de órgãos acessórios. No entanto, o extrato de CD facilitou a resposta erétil do pênis e modulou o nível sérico de LH até certo ponto em ratos castrados. Talha et al.2007). Níveis insuficientes de testosterona levam a uma diminuição do seu relaxamento (McClure 1988), o que resulta em impotência no homem (Bivalacqua et al. 2000).

Especialmente em ratos, é mantida por uma ampla faixa de concentrações sistêmicas de testosterona como {{0}} por cento, abaixo da qual a resposta erétil é atenuada de maneira dose-dependente (Armagan et al. 2006). No presente estudo, a concentração de testosterona na circulação foi muito baixa para atingir o limite de sensibilidade (0,02ng/ml) em todos os ratos castrados (os dados não foram mostrados nos resultados). No entanto, CDextract encurtou significativamente a latência erétil do pênis em três dosagens e prolongou a duração da ereção em 0,90g/kg e 1,8g/kg. Provavelmente foi consequência do efeito androgênico da DC mencionado em alguns estudos anteriores (He et al. 1996a, He et al. 1996b). alterações no estado endócrino (Trisomboon et al. 2007, Jang et al. 2011).

Existia um nível limiar de testosterona, abaixo do qual o metabolismo desses órgãos era inibido (Trachtenberg1985). Foi confirmado em nosso estudo que a castração induziu a diminuição do peso dos órgãos reprodutores acessórios devido à deficiência de testosterona. um papel importante na manutenção da função peniana dos animais castrados (Robert et al. 2004). Como o eixo hipotálamo-hipófise-gônada (HPG) é um mecanismo de controle de feedback de circuito fechado, baixos níveis de hormônios gonadais podem regular a secreção de LH e FSH por sua vez (Morales et al. 2004). Nosso estudo investigou que o nível sérico de LH foi significativamente aumentado em ratos castrados e depois desceu para os níveis normais pelo extrato de CD a 0,90 g/kg, o que estava de acordo com a conclusão anterior de que o aumento do nível de LH estava associado a um maior risco de disfunção erétil (Kupelian et al. 2006).

Nos testículos, o LH estimula a síntese e liberação de testosterona, cujo controle de feedback é relativamente consistente, enquanto o FSH atua diretamente nas células de Sertoli para nutrição com o complexo de controle de feedback (Hellqvist et al. 2008). Esses achados ofereceram mais suporte para a suposição de que o CD expressou efeito andrógeno-like, que pode ser o principal responsável pela redução do LH sérico mais do que do FSH. et al. 2006), contrariando os resultados em ratas (Pantaleão et al. 2010). O extrato de CD foi incapaz de melhorar significativamente o peso corporal, provavelmente devido à duração insuficiente do tratamento ou aos complexos impactos no estado geral de saúde. O extrato de CD facilitou a resposta erétil do pênis encurtando a latência erétil e prolongando a duração da ereção em ratos castrados. Esses efeitos foram provavelmente devidos ao efeito androgênico, que foi corroborado pela observação de que o extrato de CD normalizou essas concentrações séricas de LH especialmente na dosagem de 0,90g/kg.

No entanto, evidências adicionais são necessárias para demonstrar o efeito do extrato de CD contra os níveis límbico e hipotalâmico de ED e mais atenção pode ser dada a esta valiosa medicina tradicional no mundo moderno.