Determinação do conteúdo de cinco compostos no sêmen Rehmanniae e estabelecimento de sua impressão digital por HPLC

Tabela 3 Resultados do teste de recuperação (n=6)

2.4 Determinação de amostra

Os seis lotes de Rehmannia recolhidos foram preparados de acordo com o método indicado em "2.2.2" e amostrados e determinados de acordo com as condições cromatográficas indicadas em "2.1". Os resultados da determinação do conteúdo são mostrados na Tabela 4. Os resultados mostram que entre os cinco componentes, o conteúdo do glicosídeo D de rehmannia é o mais alto, variando de 0,460% a {{1 0}},730%; o conteúdo do glicosídeo leonuri é o segundo, variando de 0,100% a 0,270%, e o conteúdo dos dois componentes em amostras de diferentes áreas de produção não é significativamente diferente. Na amostra SX1, com exceção do equinacósido, os conteúdos dos outros quatro componentes são significativamente superiores aos de outros lotes de amostras; o conteúdo de equinacosídeo, cistanchesídeo A e verbascosídeo em Rehmannia glutinosa de diferentes áreas de produção é bastante diferente e irregular.

ERVA CISTANCHE COMCONSISTÊNCIA DE BOA QUALIDADE

2.5 Estabelecimento e avaliação de similaridade da impressão digital HPLC de Rehmannia glutinosa

Os cromatogramas e dados da determinação do conteúdo multicomponente em Rehmannia glutinosa foram importados para o software "Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System (2012 Edition)", e o cromatograma da amostra de teste SX1 foi selecionado como espectro de referência. A largura da janela de tempo foi definida como 0.10 min, e o método da mediana foi usado para gerar espectros sobrepostos e espectros de referência. Um total de 23 picos comuns foram identificados (ver Figura 3). A semelhança entre as impressões digitais da amostra de Rehmannia glutinosa e a referência foi de 0,904~0,950, indicando que as amostras de Rehmannia glutinosa de diferentes áreas de produção e entre Rehmannia glutinosa crua e Rehmannia glutinosa cozida eram semelhantes e tinham boa consistência de qualidade.

Tabela 4 Resultados da determinação do conteúdo de 5 componentes no Sêmen Rehmanniae/%

13. remaniosídeo D; 17. leonurida; 19. equinacósido; 20. castanosídeo A; 21. acteosídeo

Figura 3 Sobreposição de cromatogramas de HPLC de 6 lotes de Semen Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) e referência (R)

3 Discussão

3.1 Seleção de condições cromatográficas

Quatro sistemas de fase móvel, acetonitrila-água, acetonitrila -0 solução de ácido fórmico a 0,1%, metanol-água e metanol -0 solução de ácido fórmico a 0,1%, foram investigados neste estudo. Os resultados mostraram que os cinco componentes tiveram bons efeitos de separação no sistema acetonitrila; em comparação com o sistema de fase móvel acetonitrila-água, os picos de rehmannia glutinosa e glicosídeos de erva-mãe na fase móvel da solução de acetonitrila -0 0,1% de ácido fórmico foram mais estreitos e tiveram boa simetria de pico. Ao mesmo tempo, devido à diferente absorção ultravioleta dos cinco componentes, o conteúdo dos componentes varia muito. Para determinar com maior precisão o conteúdo de cada componente e garantir que a intensidade de absorção dos cinco componentes seja distribuída uniformemente no mesmo cromatograma, a absorção ultravioleta deglicosídeo D de rehmannia, glicosídeo de erva-mãe, equinacósídeo, cistanchesídeo A e verbascósídeo foram analisados, e a determinação de comprimento de onda variável foi selecionada, ou seja, 0-24 min, o primeiro glicosídeo de rehmannia separado foi determinado em 203 nm, e 24-40 min, o equinacósido separado, cistanquésido A e verbascósido foram determinados a 330 nm. Além disso, este estudo também investigou os efeitos de extração de metanol, solução de metanol a 70%, solução de metanol a 50% e solução de acetonitrila a 50% como solventes de extração. Os resultados mostraram que a solução de metanol a 70% como solvente de extração pode dissolver melhor os componentes a serem testados, e a amostra extraída apresenta menos impurezas. Portanto, este estudo selecionou metanol 70% como solvente de extração, solução de acetonitrila -0 0,1% de ácido fórmico como sistema de fase móvel e usou comprimento de onda variável para determinar o conteúdo dos cinco componentes em Rehmannia.

3.2 Análise dos resultados da determinação da amostra

A partir dos resultados da determinação, pode-se observar que após a cozedura a vapor, exceto por um ligeiro aumento no teor de equinacosídeo, os conteúdos dos outros quatro componentes foram significativamente reduzidos, especialmente o teor de leonurisida e cistanchesida A; o conteúdo de glicosídeo D de rehmannia e cistanchesídeo A em Rehmannia glutinosa da mesma área de produção foi ligeiramente diferente, e o conteúdo de leonurisida, equinacosídeo e verbascosídeo foi significativamente diferente; o conteúdo de equinacosídeo em Rehmannia glutinosa da área de produção de Henan foi significativamente maior do que o das amostras da área de produção de Shanxi, e o conteúdo dos outros quatro componentes foi ligeiramente diferente. Ao mesmo tempo, de acordo com a impressão digital de HPLC estabelecida neste estudo, a semelhança entre os 6 lotes de amostras de Rehmannia e a impressão digital de controle foi de 0,904~0,950, indicando que o principal produto químico os componentes dos 6 lotes de amostras de Rehmannia antes e depois do processamento foram altamente consistentes.

Em resumo, o método de determinação de conteúdo e a impressão digital de HPLC estabelecidos neste estudo são precisos, confiáveis ​​e possuem boa especificidade. Eles podem ser utilizados para caracterizar as alterações nos componentes e o grau de processamento de Rehmannia glutinosa antes e depois do processamento, e fornecer suporte técnico para o controle de qualidade de Rehmannia glutinosa. No entanto, este estudo tem as desvantagens de pequenos lotes de amostras e cobertura incompleta das áreas de produção, o que requer análises e verificações adicionais.

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