Análise da composição de Cistanche Tubulosa: Separação e estrutura de glicosídeo feniletanoide e glicosídeo neolignan

Contato:joanna.jia@wecistanche.com

Os constituintes de Cistanche Tubulosa (Schrenk) Hook. F. II.1) Isolamento e Estruturas de um Novo Glicosídeo Feniletanoide e um Novo Glicosídeo Neolignano

Fumio Yoshizawa,* a Takeshi Deyama/ Nobuo Takizawa/ Khan UsmanghaniJ e Mansoor Ahmad6

Laboratórios Centrais de Pesquisa, Yomeishu Seizo Co., Ltd., a 2132-37 Nakaminowa, Minowa-machi, Kamiina-gun, Nagano 399-46, Japão e Departamento de Farmacognosia, Faculdade de Farmácia, Universidade de Karachi? Karachi-32, Paquistão. Recebido em 9 de novembro de 1989

Uma novaglicosídeo feniletanoidedenominado tubulósido E (I), e um novoglicosídeo de neolignano, álcool desidrodiconiferílico yO-0-D-glicopiranosídeo (II), foram isolados de plantas inteiras deCistanche tubulosa (Schrenk) Hook. f. (Orobanchaceae), together with dehydrodiconiferyl alcohol 4-O-^-D-glucopyranoside (III), syringalide A 3'-a-L- rhamnopyranoside (IV), isosyringalide S'-a-L-rhamnopyranoside (V), (+ )-syringaresinol O-^-D-glucopyranoside (VI), ( + )-pinoresinol O-^-D-glucopyranoside (VII), liriodendron (VIII), 6-deoxycatalpol (IX), 8-epiIoganic acid (X), 20-hydroxyecdysone (XI), 8-hydroxygeraniol l-j?-D-glucopyranoside (XII) and syringin (XIII). The structure of tubuloside E (I) was established as 2-(3,4-dihydroxy phenyl)ethyl O-a-L-rhamnopyranosyl-(l ->3)-2-O-acetil-4-Op-cumaroil-^-D-glucopiranosídeo com base em evidências químicas e dados espectrais.

Palavras-chave Cistanche tubulosa-, Orobanchaceae;glicosídeo feniletanoide;iridóide; tubulósido E; glicosídeo de álcool desidrodiconiferílico; ramnósido de siringalida;glicosídeo de neolignano; 13C-NMRMOE

glicosídeo feniletanoide em cistanche

Em um artigo anterior, relatamos o isolamento e determinação estrutural de novosglicosídeos feniletanoides, tubulósidos A一D de todas as plantas deCistanche tubulosa(Schrenk) Gancho. f. (Orobanchaceae) no Paquistão.

Este artigo trata do isolamento e elucidação estrutural de uma novaglicosídeo feniletanoide, denominado tubulósido E (I), e um novoglicosídeo de neolignano, álcool desidrodiconiferílico ■/-QgD-glicopiranosídeo (II), bem como o isolamento de 11 compostos conhecidos, álcool desidrodiconiferílico 4-OgD-glicopiranosídeo (III), siringalida A 3'-al-ramnopiranosídeo (IV), isosiringalida 3'-aL-ramnopiranosídeo (V), (mais)-siringaresinol OgD-glicopiranosídeo(VI), (mais)-pinoresinol OgD-glicopiranosídeo (VII), liriodendron (VIII), 6-desoxicatalpol (IX) , 8- ácido epilogânico (X), 20-hidroxiecdisona (XI), 8-hidroxigeraniol 1-gD-glicopiranosídeo (XII) e siringina (XIII). Os compostos VI, VIII一X, XII e XIII foram previamente isolados de Cistanche salsa?'

Tubuloside E (I) foi isolado como um pó amorfo, C31H38O15 -3/2H2O, [a】D -134.0 grau (MeOH). O espectro infravermelho (IR) sugeriu a presença de grupos hidroxila (3430cm-1), éster conjugado (1734cm-x), uma ligação dupla (1634cm-1) e anéis aromáticos ( 1608 e 1518cm-1). O espectro de ressonância magnética nuclear de próton 0H-NMR) de I mostrou sinais devido a um grupo metil de ramnose 0 1.07 (3H, d, J= 6 Hz)], um grupo acetoxil {{22} },98 (3H, s)], prótons de metileno benzílico 0 2,72 (2H, t, J—1 Hz)], um próton glicoanomérico 0 4,54 (1H, d, J{{ 32}} Hz)], um próton ramnoseanomérico 0 5.00 (1H, br s)], dois prótons olefínicos [<5 6.34,="" 7.66="" (1h="" each,="" d,="" j="16" hz)]="" and="" aromatic="" protons="" 0="" 6.50—7.46="">

Na acetilação, o composto I proporcionou o octaacetato (la), cujo espectro 】H-NMR mostrou cinco grupos acetoxil alifáticos 0 1,87, 1,95, 2,02 (3H cada, s), 2,10x2 (6H, s)] e três grupos acetoxil aromáticos [<5 2.27,="" 2.28,="" 2.31="" (3h="" each,="" s)].="" as="" shown="" in="" table="" i,="" the="" carbon="" nuclear="" magnetic="" resonance="" (13c-nmr)="" spectrum="" of="" i="" was="" almost="" identical="" with="" that="" of="" 2'-acetylacteoside="" (ib)「)except="" for="" the="" signals="" due="" to="" the="" ^-coumaric="" acid="">

Na metanólise de I com cloreto de acetila em metanol, metil p-cumarato e álcool 3,4-dihidroxifenetílico foram detectados em cromatografia em camada delgada (TLC) e cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC).

A hidrólise ácida de I com 10% de ácido sulfúrico proporcionou glicose e ramnose em uma proporção de 1 para 1.

From the above results, the structure of tubuloside E (I) was established as 2-(3,4-dihydroxy phenyl)ethy 1 O-a-L- rhamnopyranosyl-( 1 -^3)-2-(?-acetyl-4-O-/>-cumaroil-^- D-glucopiranosídeo.

O Composto III foi isolado como um pó amorfo, [a]D - 56,4 graus (MeOH). A hidrólise enzimática de III proporcionou uma aglicona (Illb) como um pó amorfo, [0]270 -11300, [a]D -31,6 graus (MeOH) e glicose. Os compostos Illb e III foram identificados como álcool desidrodiconiferílico3,4) e seu 4-O-#-D-glucopiranosídeo,3,4) respectivamente, por comparação com amostras autênticas (espectros de TR,】H- e 13C-RMN) .

O Composto II foi isolado como um pó amorfo, [a]D 一 7,4 graus (MeOH), cujo espectro IR sugeriu a presença de um grupo hidroxila (3430 cm-1) e um anel aromático (1614,1522,1502 cm T). O〔H-NMR de II mostrou sinais devido a dois grupos metoxila aromáticos 0 3.74, 3.80 (3H cada, s)], um próton benzílico 0 5.45 (1H, d, J{{ 16}}Hz)], dois prótons trans olefínicos 0 6.17 (1H, dt, J= 16, 7 Hz), d 6,58 (1H, d, J= 16 Hz)] e cinco prótons aromáticos 0 6.7一7.1 (5H, m)]. Na acetilação, o composto II proporcionou o hexaacetato (Ila), cujo espectro de 'H-RMN mostrou cinco sinais de acetil alifáticos 0 2.01, 2,03, 2,09, 2,06 (3H, 3H, 3H, 6H)]. A hidrólise enzimática de II proporcionou a aglicona (lib) e glicose. O composto lib foi isolado como um pó amorfo, [a]D mais 34,8 graus (MeOH), cujos espectros de IR, iH- e 13C-RMN eram quase idênticos aos de Illb, exceto para valores de [a]D e dicroísmo circular (CD ) espectro.

A configuração absoluta do lib foi elucidada pela comparação de seu espectro CD com o de Illb e III, cuja estereoquímica foi confirmada em dados publicados.4) O espectro CD de lib mostrou A& plus 14100 (270) e plus 15200 (283) máximos positivos, por outro lado, o de Illb apresentou A& -11300 (270) e -10990 (283) como máximos negativos. Esses fatos sugerem que lib e Illb são enantiômeros um do outro. A estereoquímica de lib deve ser aquela mostrada no Quadro 1.

Assim, o composto II foi estabelecido para ser monoglucósido de álcool desidrodico niferílico. A posição da glicose

respectivamente. Os deslocamentos dos carbonos correspondentes indo para II de lib foram -4,4 e mais 7,3 ppm, o que indicou que uma porção glicosil em II estava ligada ao grupo hidroxila no átomo Cy'.5)

A partir dos resultados acima, o composto II foi estabelecido como álcool desidrodiconiferílico y'-O-^-D-glucopiranosídeo.

Os compostos IV e V foram isolados como um pó amorfo (IV, C29H36O14 • 5/2H2O; V, C29H36O14- 1/2H2O). Os espectros de IR sugeriram a presença de grupos hidroxila (3400cm7), uma ligação dupla (1634cm-1) e anéis aromáticos (1606 e 1518cm-1). Na acetilação, os compostos IV e V forneceram os octaacetatos ( IVa, Va), cujos espectros de 1H-NMR mostraram cinco sinais de acetoxil alifático e três sinais de acetoxil aromático, respectivamente. Os compostos IVa e Va foram identificados como siringalida A 3'-aL-ramnopiranosídeo octaacetato e isosiringalida 3'-aL-ramnopiranosídeo octaacetato, respectivamente por comparação de (以 IR e 】H-NMR) com amostras autênticas. 6) O 'H- e O espectro de 13C-RMN de IV e V suportou essas estruturas (ver Experimental). Os compostos VI-XIII foram identificados como (mais)-seringes-esinol O-少-D-glicopiranosídeo (VI),2c) (mais)-pinoresinol O- jS-D-glucopiranosídeo (VII),7) liriodendrina (VIII),2Z,) 6-desoxicatalpol (IX),2c) 8-ácido epilogânico (X),2fl) {{50} }hidroxiecdisona (XI),8) 8-hidroxigeraniol 1-0-D-glucopiranosídeo (XII) e siringina (XIII),2d) respectivamente, por comparação com amostras autênticas

Experimental

Os pontos de fusão foram determinados em um aparelho de microfusão de Mitamura e não foram corrigidos. As rotações ópticas foram medidas com um polarímetro digital JASCO DIP-140. Os espectros IR foram registrados com um espectrofotômetro IR Hitachi 279-30 e os espectros ultravioleta (UV) com um espectrofotômetro Hitachi 200-20. Os espectros de CD foram registrados com um espectrofotômetro JASCO J-20A CD e os espectros de massa (MS) com um JEOL JMS-100. Os espectros de 'H-NMR e 13C-NMR foram registrados com uma máquina JEOL FX-90Q (89,55 e 22,5 MHz, respectivamente).

Os desvios químicos são dados na escala d (ppm) com tetrametilsilano (TMS) como padrão interno. As abreviaturas utilizadas para os dados de ressonância magnética nuclear (NMR) são as seguintes; s, singuleto; d, dupleto; t, tripleto; q, quarteto; br, amplo. A cromatografia gasosa (GC) foi executada em um aparelho Shimadzu GC-4CM com um detector de ionização de chama. A HPLC foi realizada em uma máquina Hitachi 655A-11. Sílica gel (Wako gel C-300) foi usada para cromatografia em coluna. Placas pré-revestidas com gel de sílica 60 F254 (Merck) foram usadas para TLC e a detecção foi realizada por pulverização de 10 por cento de H2SO4 seguido de aquecimento.

Isolamento

Plantas inteiras decistanche tubulosa(7 kg), coletados em dezembro de 1986, em Karachi, Paquistão, foram extraídos com MeOH (20 1 x 2) sob refluxo. O extracto foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo foi suspenso em água. Esta suspensão foi extraída com EtOAc saturado com água. A camada aquosa foi submetida a uma coluna Diaion HP-20 (Nippon Rensui Co.) e lavada com H2O e depois eluída com MeOH. O eluato de MeOH (140 g) foi cromatografado em uma coluna de poliamida C-200 (Wako Pure Chemical) usando H2O e depois MeOH para dar duas frações (fração 1, eluato de H2O; fração 2, eluato de MeOH). A fração 1 foi concentrada para dar um resíduo. O resíduo foi cromatografado em coluna de sílica gel usando CHCl3-MeOH-H2O repetidamente. Após cromatografia repetida de HPLC (coluna, Develosil ODS-10, 20 x 250 mm; solvente; H2O-CH3CN ou H2O-MeOH), 10 compostos foram isolados [II (45mg), III (40mg), VI (35mg ), VII (43mg), VIII (12mg), IX (8mg), X (10mg), XI (20mg), XII (10mg) e XIII (3,6mg)]. A fração 2 foi tratada da mesma maneira que a fração 1 e deu os compostos I (150 mg), IV (10 mg) e V (10 mg).

Tubuloside E (I)

Pó amorfo, [a]p3 —134.0 grau (c= 1.5, MeOH). Anal. Calculado para C31H38O15 -3/2H2O: C, 54,98; H, 6.10. Encontrado: C, 55,01; H, 5,98. IR cm-1: 3430,1732, 1634, 1608,1518. ]H・NMR (MeOH-4) 3: 1,07 (3H, d, J=6Hz, CH3 de ramnose), 1,98 (3H, s, OAc), 2,72 (2H, t, J{ {37}}Hz, Ar-CH2~), 4,54 (1H, d, J=8Hz, Hl de glicose), 5.00 (1H, brs, Hl de ramnose), 6,34 ( 1H, d, J= 16Hz, Ar-CH=CH-), 6,5一6,8 (3H, H aromático), 6,80 (2H, d, J-9Hz, H{ {65}}; H-5'), 7,46 (2H, d, J=9Hz, H-2; H-6Z), 7,66 (1H, d, J= 16 Hz, Ar—CH=CH—). 13C-NMR: Tabela L

Álcool Desidrodiconiferílico y^-O-^-D-GIucopiranosídeo (II)

Pó amorfo, [a]^5 -7,4 graus (c= 1,6, MeOH). IR cm"1: 3430, 1614, 1522, 1502. UV h nm: 227 (sh), 280. H・NMR (DMSO-rf6) J: 3,74, 3,80 (3H cada, s, OCH3), 5,45 (1H, d,丿=6Hz, Ha), 6,17 (1H, dt,丿=16, 7Hz, H-#), 6,58 (1H, d〃= 16Hz; H-az) , 6,7-7,1 (5H, m, H aromático). 13C-NMR: Tabela I.

Álcool Desidrodiconiferílico 4-Oj8-D-Glucopiranosídeo (III)

Pó amorfo, [a]^5 -56.4.(c= 1.1, MeOH). IV cm-1: 3400, 1604, 1566, 1502. UV 11 nm; 222, 277. XH-NMR (DMSO-(76) 6: 3,76, 3,82 (3H cada, s, OCH3), 5,52 (1H, d, J-7 Hz, Ha), 6,18 (1H, dt, J=16, 7 Hz, H-^), 6,49 (1H, d,<7=16 hz,="" h-"),="" 6.7—7.2="" (5h,="" m,="" aromatic="" h).="" 13c-nmr:="" table="">

Siringalida A 3'-(xL-Rhamnopiranosídeo (IV)

Pó amorfo, Anal. Calculado para C29H36O14 • 5/2H2O: C, 56,11; H, 5,94. Encontrado: C, 56,4{{107}}; H, 6.04. IR cm— porcentagem 3400, 1606, 1518. 】H・NMR (MeOH-J4) d: 1,15 (3H, d, J-6 Hz, CH3 de ramnose), 2,90 (2H, t, J{{27) }} Hz, Ar-CH2-), 4,46 (1H, d, J=8Hz, Hl de glicose), 5,27 (1H, brs, Hl de ramnose), 6,35 (1H, d, J-16Hz, Ar—CH=CH—), 6,6—7,3 (3H, H aromático), 7,68 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH {{54) }} CH-). 13C-NMR (CD3OD) 8: 130,6 (Cl), 116,1 (C-2), 130,8 (C-3, 156,6 (C-4), 116,1 (C-6) ), 72,1 (Ca, rham-2, 3), 36,2 (C-8), 127,6 (Cr), 114,6 (C2), 149,6 (C・3'), 146,6 (C{{94) }}'),116,4 (C-5'), 123,1 (C-6'),168,2 (C・a'),115,2 (C书),147.0 104.0 (glu{108}}), 76,0

(glu-2), 81,5(glu-3), 70,3 (glu-4), 75,9 (glu-5), 62,3 (glu-6), 102,8 (rham-1), 73,7 (rham-4), 70,5 (rham-5), 18,3 (rham-6).

Isosiringalida S^aL-ramnopiranosídeo (V)

Pó amorfo, Anal. Calculado para C29H36O14-1/2H2O: C, 56,31; H, 5,96. Encontrado; C, 56,4{{70}}; H, 6.04. IR 唸cm-1: 3420, 1608, 1518. XH-NMR (MeOH-J4) d: 1,09 (3H, d,丿=6Hz, CH3 de ramnose), 2,80 (2H, t, J-6 Hz, Ar-CH2-), 4,40 (1H, d, J=8Hz, Hl de glicose), 5,23 (1H, br s, Hl de ramnose), 6,37 (1H, d, J-18Hz, AsCH=C旦'一),6,6-7,2 (3H, H aromático), 7,71 (1H, d, 丿=18Hz, Ar -CH=CH-y 13C-NMR (CD3OD) S: 131,4 (Cl), 116,3 (C-2), 144,5 (C-3X 146,0 (C-4) ), 117,0 (C-5), 121,2 (C-6), 72,2 (Ca), 36,5 (C/), 127,1 (Cr), 116,8 (C-2\ 69, 131,2) (C-3\5'),161,2 (C-4'),168,2 (CH), 114,7 (C-^), 147,5 (Cy), 104,1 (glu-1), 76,1 (glu-2), 81,5 (glu{113}}),

70,2 (glu-4), 75,9 (glu-5), 62,3 (glu-6), 102,8 (rham-1), 72,1 (rham-2, 3 ), 73,7 (rham-4), 70,6 (rham-5), 18,4 (rham-6).

(mais)-Siringaresinol Oj?-D-Glucopiranosídeo (VI)

Pó amorfo, [a]g5 -14.4.(c=0.1, MeOH). Anal. Calculado para C28H36O13: C, 57,93; H, 6,25. Encontrado: C, 58,01; H, 6,26. IRv^cm-1: 3430, 1600, 1518. 】H・NMR (DMSO"6).: 3,78 (12H, s?OCH3 x 4), 6,60,6,66 (2H cada, s, H aromático).

(mais)-Pinoresinol O-^-D-Glucopiranosídeo (VII)

Pó amorfo, [a]^5 mais 38,9 graus (c=0,6, MeOH). Anal. Calculado para C26H32O11T/2H2O: C, 58,97; H, 6,28. Encontrado: 58,94; H, 6,29. IR cm-1: 3425, 1606, 1516. 】H-NMR (C5D5N) W 3,77, 3,80 (3H cada, s, OCH3), 6,9-7,7 (6H, m, H aromático).

Liriodendro (VIII)

Agulhas incolores (MeOH), p.f. 255 a 257 graus, [a]p5 -9,2 graus (c=L3, piridina). IR cm-1: 3400, 1598, 1510. XH-NMR (DMSO/6)<5: 3.78="" (12h,="" s,="" och3x4),="" 6.67="" (4h,="" s,="" aromatic="">

6-Desoxicatalpol (IX)

Agulhas incolores (MeOH), p.f. 204-206 graus, [a]p5 -50,1 graus (c=0,7, MeOH). Anal, Calculado para C15H22O9: C, 52,02; H, 6,40. Encontrado: C, 52,12; H, 6,41. IR 唸cm-1: 3400, 1658. 】H・NMR (D2O) 3:

eu. 3—1,9 (1H, m, H-6), 2,1—2,7 (3H, m, H-5, H-6, H-9), 3,65 (1H, s-like, H-7), 3,90, 4,35 (2H, ABsystem, J=13Hz, H-10), 4,92 (1H, d, J=7 Hz, aromérico H), 5,10 (1H, dd, J=6, 4Hz, H-4), 5,12 (1H, d, J-10Hz, Hl), 6,38 (1H, dd, 1Hz, H-3).

{{0}}Ácido Epilogânico (X) Agulhas incolores (MeOH), mp 147一149 graus , [a]p5 — 135.0 graus (c= 1.0, piridina ). Anal. Calculado para C16H24O10H2O: C, 48,73; H, 6,65. Encontrado: C, 48,60; H, 6,70. IR v;cm-1: 3400, 1680, 1640, 1430. 】H・NMR (C5D5N)<5: 1.18="" (3h,="" d,="" j="7Hz," ch3),="" 2.2—2.5="">

m, H-6), 2,60 (1H, m, H-8), 3,08 (1H, dt, J=3, 8,5Hz, H-9), 3,58 ( 1H, m, H-5), 5,40 (1H, d, J=7,5Hz, H anomérico), 5,91 (1H, d〃=3Hz, Hl), 7,92 (1H , s, H-3).

20-Hidroxiecdisona (XI)

Sólido cristalino, p.f. 241 a 242 graus, [a]p5 mais 70.0 graus (c= LI, MeOH). Anal. Calculado para C27H44O7: C, 67,47; H, 9.23. Encontrado: C, 67,28; H, 9.18. IR cm-1: 3440, 1646. XH-NMR (C5D5N) 1,06 (3H, s, H-19), 1,20 (3H, s, H-18), 1,36 (6H, s, H-26, H-27)? 1,58 (3H, s, H-21), 6,24 (lH,d, J=2Hz, H-7). 13C-NMR (C5D5N): 38,0 (Cl),

68,2 (C-2, C-3), 32,5 (C・4), 51,5 (C-5), 203,7 (C-6), 121,8 (C-7), 166,3 (C-8), 34,6 (C-9), 38,8 (C-10), 21,3 (C-ll), 31,9 (C {{30}}), 48,2 (C-13), 84,4 (C-14), 32,1 (C-15), 21,6 (C-16) ), 50,2 (C-17), 18,0 (C-18), 24,6 (C-19), 77,0 (C-20), 21,8 (C-21) ), 77,7 (C-22), 27,6 (C-23), 42,7 (C-24), 69,8 (C-25), 30,1 (C-26) , 27).

8-Hidroxigeraniol 1-^-D-GIucopiranosídeo (XII)

Agulhas incolores (MeOH), mp 58—60 graus, [a]^5 —40.1.(c=L2, MeOH). Anal. Calculado para C16H28O71/2H2O: C, 56,29; H, 8,56. Encontrado: C, 56,40; H, 8,50. IR cm"1: 3350, 1670, 1446. XH-NMR (C5D5N)<5: 1.72,="" 1.59="" (3h="" each,="" s,="" ch3),="" 2.04="" (4h,="" brm,="" h-4,="" h-5),="" 4.80="" (1h,="" d,="" j="7.5Hz," anomeric="" h),="" 5.56="" (2h,="" brt,="" j="7Hz,">

Seringina (XIII)

Agulhas incolores (MeOH), mp 188一189 graus, [a]^5 — 15,3 graus (c=0.4, MeOH). Anal. Calculado para C17H24O9: C, 55,13; H, 6,53. Encontrado: C, 54,83; H, 6,50. IR cm-1: 3400, 1592, 1514. 'H-NMR (DMSO/6)W 3,78 (6H, s, OCH3 x 2), 6,3-6,5 (2H, m, —CH=CH—), 6,72 (2H, s, H aromático).

Acetilação de I Composto I (50 mg) foi dissolvido em piridina (1 ml) e anidrido acético (1 ml) e deixado à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi vertida em água gelada e depois extraída com EtOAc. O extracto de EtOAc foi concentrado in vácuo e o resíduo foi cromatografado numa coluna de sílica gel usando benzeno-acetona (5:1) para dar o octaacetato (la) (35 mg). IR cm"1: 1760, 1638, 1604, 1508. iH-NMR(CDC13)(5: 1,02 (3H, d, J=6Hz, CH3 de ramnose), 1,87, 1,95, 2,02 (3H cada, s, OAc), 2,10 (6H, s, OAc x 2), 2,27, 2,28, 2,31 (3H cada, s, Ar-OAc), 2,90 (2H, t, J=7Hz, Ar-CH{ {43}}), 6,38 (1H, d, J=16Hz, AR~CH=CH-), 6,80-7,15 (3H, m, H aromático), 7,24 (2H, d, J-9 Hz, H-3\H・5'), 7,55 (2H, d,丿=9Hz, H-2, H-6), 7,72 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH=CH-).

Acetilação de II e III

Os compostos II e III (20 mg cada) foram acetilados do mesmo modo que descrito para o composto I e originaram os hexaacetatos [Ila (12 mg), Ila (15 mg)]. Ila: IR 唸顋 cm-1: 1754, 1608, 1506. 】H・NMR (CDC13) 5: 2,01, 2,03, 2,09 (3H cada, s, OAc), 2,06 (6H, s, OAc x 2 ), 2,30 (3H, s, OAc), 3,84 (3,95 (3H cada, s, OCH3), 5,54 (1H, d,丿=6Hz, Ha), 6,05 (1H5 dt, J{{38} }, 7Hz, H-^), 6,53 (1H, d, «/= 16Hz, H-a'), 6,8一7,1 (5H, m, H aromático). Illa: IR v^cm 1: 1760, 1604, 1516. 】H-NMR (CDC13)<5: 2.05="" (9h,="" s,="" oac="" x="" 3),="" 2.08="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.11="" (3h,="" s,="" oac),="" 3.80,="" 3.92="" (3h="" each,="" s,="" och3),="" 5.51="" (1h,="" d,="" j="7Hz," h-a),="" 6.14="" (1h,="" dt,="" j="16," 7hz,="" h-#),="" 6.62="" (1h,="" d,丿="16Hz,">

(5H, m, H aromático).

Acetilação de IV e V

Os compostos IV e V foram acetilados do mesmo modo como descrito para o composto I e originaram os octaacetatos [IVa, Va]. IVa: IR 唸児 cmT: 1754, 1636, 1514. 】H・NMR (CDC,) W 1,03 (3H?d, J=6Hz, CH3 de ramnose), 1,87, 1,94, 1,99 (3H cada, s, OAc), 2,09 (6H, s, OAcx2), 2,28 (6H, s, OAcx2), 2,30 (3H, s, OAc), 2.86 (2H, t, J=6 .6Hz, Ar■-CH?—), 3,67 (2H, t, J=7,2Hz Ar-CH2~CH2-), 6,35 (1H, d, J=16Hz , AsCH=CU—), 6,87—7,35 (3H, m, Ar—7,09 (4H, q, J=8,6Hz, A2/B2/tipo), 7,65 (1H, d, J =16Hz, Ar CH=CH). Va: IR cm-1: 1750, 1636, 1608, 1514. ^-NMR (CDC13) 1,03 (3H, d,<7= 6="" hz,="" ch3="" for="" rhamnose),="" 1.87,="" 1.94,="" 2.02="" (3h="" each,="" s,="" oac),="" 2.09="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.28="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.31="" (3h,="" s,="" oac),="" 2.86="" (2h,="" t,="" j="6.6" hz,="" ar-ch2-),="" 3.73="" (2h,="" t,=""><7=6.6 hz,="" ar="" ch2-ch2-),="" 6.34="" (lh,d,="" j="16" hz,="" ar—ch="" —="" ch—),="" 6.78—7.20="" (3h,="" m,="" ar—h),="" 7.31="" (4h,="" q,=""><7=8.5>

A2zB/tipo), 7,71 (1H, d, «/=16Hz, Ar-CH=CH ).

Metanólise de I

O Composto I (ca. 1 mg) foi refluxado com 5 por cento de CH3COC1 metanólico (2 ml) por 30 min, e então o reagente foi evaporado in vacuo. A presença de metil p-cumarato e 3,4-álcool dihidroxifenetílico no resíduo foi detectada por TLC [CHCl3-MeOH (10:1)] e HPLC [coluna, Develosil ODS -7 (4,6 x 250 milímetros); solvente, 55 por cento de MeOH; detector (UV), 220 nm; caudal, 1,0 ml/min]. p-cumarato de metilo; Rf 0,82, ;R (min) 8,8, 3,4-álcool di-hidroxifenetílico;母0,31, tR (min) 3,2.

Hidrólise ácida de IA

solução do composto I (2 mg) em 10 por cento de H2SO4 (1 ml) foi aquecida em banho-maria fervente por 30 min. A solução foi passada através de uma coluna Amberlite IR-45 e concentrada para dar um resíduo, que foi reduzido com borohidreto de sódio (ca. 3 mg) durante 1 h. A mistura de reação foi passada através de uma coluna Amberlite IR-120 e concentrada até a secura. O ácido bórico foi removido por destilação com MeOH e o resíduo foi acetilado com anidrido acético (1 gota) e piridina (1 gota) a 100 graus por 1 h. Os reagentes foram evaporados in vacuo. Acetato de glucitol e acetato de ramnitol foram detectados em uma razão de 1 para 1 do composto I por GC. Condição: coluna, 1,5 por cento OV-17, 3 mm x 1,5 m; temp. da coluna, 180 graus; gás transportador, N2 (30 ml/min). tR (min): 2,0 (acetato de ramnitol), 5,5 (acetato de glucitol).

Hidrólise Enzimática de II e III Composto II

(13 mg) ou III (40 mg) foi hidrolisado com celulase (40 mg) em água (1 ml) por 2h a 37 graus. A mistura reaccional foi extraída com EtOAc. O extrato de EtOAc foi concentrado in vacuo para dar o resuo, que foi cromatografado em HPLC [coluna, Develosil ODS-10 (20 x 250 mm); solvente. II: H2O-CH3CN (77,5:22,5); III: H2O-CH3CN (80:20); detector (UV), 205 nm; caudal, 6,0 ml/min] para dar lib (3,3 mg), Illb (5,7 mg). lib: [a]^5 mais 34,8 graus (c=0.3, MeOH). CD (c=3.3mg/10ml, MeOH) [0]25 (nm): 1740 (330), 15200 (283), 14100 (270), 0 (247), - 16700 (232 ). IR 唸E; cm"1: 3380, 1606, 1520, 1500. UV nm: 276. MS m/z (porcentagem): 358 (M mais, 53), 340 (M mais -H2O, 100), 338 (58), 325 ( 47), 310 (23), 162 (41), 151 (36), 137 (59). XH-NMR (acetona-J6)<5: 3.55="" (1h,="" brt,=""><7=6hz, h-g),="" 3.84,="" 3.87="" (3h="" each,="" s,="" och3),="" 4.19="" (2h,="" brd,="" j-5hz,="" h-yz),="" 5.56="" (1h,="" d,="" j="6," 5="" hz,="" h-a),="" 6.23="" (1h,="" dt,=""><7=16, 5="" hz,="" h-#),="" 6.56="" (1h,="" brd,="" j="16Hz," hh),="" 6.7—7.1="" (5h,="" m,="" aromatich).="" 13c-nmr:="" tablel.iiib:="" [a]-31.6°="" (c="0.6," meoh).="" cd="" (c="2.28mg/lOml," meoh)="" [0]25="" (nm):="" 2200="" (330),="" 0="" (310),="" -10990="" (283),="" -11300="" (270),="" 0="" (242),="" 5650="" (232).="" 0-nmr="" (acetone-j6)=""><5: 3.84,="" 3.87="" (3h="" each,="" s,="" och3="" x="" 2),="" 4.19="" (2h;="" brd,="" j="5Hz," h"'),5.56="" (1h,="" d,丿="6.5" hz,="" h-a),="" 6.23="" (1h,="" dt,丿="16," 5="" hz,="" h・#),="" 6.52="" (1h,="" d,="" j="16" hz,="" h-az),="" 6.7一7.1="" (5h,="" m,="" aromatic="" h).="" 13c-nmr:="" table="" i.="" the="" ir="" and="" uv="" spectra="" were="" similar="" with="" that="" of="">

ReconhecimentoSomos gratos ao Prof. A. Ueno e Dr. T. Miyase, University of Shizuoka, pelas medições dos espectros de RMN e CD, e por suas valiosas sugestões, e ao Dr. M. Kikuchi, Tohoku College of Pharmacy, por fornecer amostras autênticas.

Referências e Notas

1) H. Kobayashi, H. Oguchi, N. Takizawa, T. Miyase, A. Ueno, K. Usmanghani e M. Ahmad, Chem. Farmácia. Bull., 35,3309 (1987).

2) a) H. Kobayashi e J. Komatsu, Yakugaku Zasshi, 103, 508 (1983); b) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase e S. Fukushima, Chem. Pharm, Bull., 33, 1452 (1985); c) Idem, ibid., 33, 3645 (1985); d) H. Karasawa, H. Kobayashi, N. Takizawa, T. Miyase e S. Fukushima, Yakugaku Zasshi. 106, 721 (1986).

3) HD Ludemann e H. Nimz, Die Makromolekulare Chemie., 175, 2393 (1974).

4) a) H. Achenbach, J. Grob, XA Dominguez, G. Cano, JV Star, LC Brussolo, G. Munoz, F. Salgado e L. Lopez, Phytochemistry. 26, 1159 (1987); b) AN Binns, RN Chen, HN Wood e DG Lynn, Proc. Nacional Acad. Sci. Os EUA, 84, 980 (1987); c) DG Lynn, RH Chen, KS Manning e HN Wood, ibid., 84, 615 (1987).

5) T. Deyama, T. Ikawa, S. Kitagawa e S. Nishibe, Chem. Farmácia. Bull., 35, 1803 (1987).

6) M. Kikuchi, Y. Yamauchi e F. Tanabe, Yakugaku Zasshi, 107, 350 (1987).

7) M. Chiba, S. Hisada, S. Nishibe e H. Thieme, Phytochemistry, 19, 335 (1980).

8) a) H. Hikino, Y. Hikino, Fortschritted. Química Org. Naturst., 28, 256 (1970); b) RW Miller, J. Clardy, J. Kozlowski, KL Mikolajczak, RD Plattner, RG Powell, CR Smith, D. Weisleder e Q.-T. Zheng, Planta Medica, 1985, 40.