Uma nova célula dendrítica inflamatória que é abundante e contígua às células T nos rins de pacientes com nefrite lúpica
Feb 24, 2022
Os mecanismos que promovem lesão inflamatória local durante a crise de nefrite lúpica (NL) são amplamente desconhecidos. Compreender as principais células imunes que impulsionam a inflamação intrarrenal avançará nosso conhecimento da patogênese da doença e informará o desenvolvimento de novas terapêuticas para o manejo da NL. Neste estudo, analisamosrim biópsias de pacientes com NL proliferativa e identificaram uma nova população de células dendríticas inflamatórias (infDC) que é altamente expressa no NLrim, mas minimamente presente em humanos saudáveisrins.Durante uma avaliação agnóstica da expressão do transcrito imune norinsdos pacientes com NL proliferativa, o transcrito mais abundantemente superexpresso dos glomérulos isolados foi o FCER1G, que codifica a cadeia gama do receptor Fc (FcR ). Identificar os tipos de células que expressam FcR que se infiltram norimem LN, foram feitos estudos sobrerimbiópsias de pacientes com NL ativa usando microscopia de imunofluorescência confocal (IF). Isso mostrou que o FcR está presente em abundância na região periglomerular (PG) dorime em menor grau no tubulointerstício (TI). Investigações adicionais dos marcadores de superfície dessas células mostraram que elas eram FcR plus, MHC II plus, CD11c plus, CD163 plus, CD5, DC-SIGN plus, CD64 plus, CD14 plus, CD16 plus, SIRP plus, CD206, CD68, CD123 , CD3 e CD11bV , sugerindo que as células eram infDCs. A quantificação dos infDCs mostrou um nível médio 10-mais alto de infDCs no LNrimem comparação com o saudávelrins. É importante ressaltar que IF identificou células T CD3 mais adjacentes a essas infDCs no espaço PG do LNrim,Considerando que ambos os tipos de células estão minimamente presentes nas células saudáveisrim.Assim, identificamos uma DC não descrita anteriormente no lúpusrinsque podem interagir com as células T intrarrenais e desempenhar um papel na patogênese dalesão renaldurante a erupção do LN.
Palavras-chave:células dendríticas inflamatórias, nefrite lúpica, rim, autoimunidade, resposta imune adaptativa, células T, LES
INTRODUÇÃO
A nefrite lúpica (NL) é uma complicação grave do lúpus eritematoso sistêmico (LES) que está associada a considerável morbidade e mortalidade. Até 30% dos pacientes com NL progridem para o estágio finaldoenca renal(ESKD) (1). Não existem terapias específicas aprovadas pela Food and Drug Administration (FDA) dos Estados Unidos para tratar a NL, e as terapias atuais produzem taxas de resposta abaixo do ideal com citotoxicidade considerável (2). Nós e outros pesquisadores temos explorado a patologia molecular dorimdurante a NL ativa para entender melhor a patogênese dalesão renalem LN e vias que podem ser especificamente direcionadas para tratar LN.
CISTANCHE VAI MELHORAR A FUNÇÃO RENAL/RENAL
Durante o curso de uma avaliação agnóstica da expressão de transcrição em microdissecção a laserrimtecido de biópsias clínicas de LN, descobrimos que o transcrito mais abundantemente superexpresso no compartimento glomerular era FCER1G, codificando a cadeia gama do receptor Fc (FcR). Assumiu-se que este transcrito refletia as células imunes que se infiltravam norimdurante LN ativo, e este trabalho foi realizado para identificar os tipos de células representados pelo FcR superexpresso. Assim, neste estudo, os achados transcriptômicos foram usados para orientar estudos de imunofluorescência confocal (IF) para caracterizar as principais células imunes infiltrantes presentes norimdurante a erupção do LN. Identificamos uma população única de células dendríticas inflamatórias expressando FcR (infDC) que reside no espaço periglomerular (PG) e adjacente às células T CD3 mais, significando um potencial cross-talk entre as populações de células T e infDC.
MATERIAIS E MÉTODOS
Design experimentalO objetivo deste trabalho foi realizar análise transcricional e FI emrimbiópsias feitas no LN flflare para identificar as principais células imunes infiltrantes presentes norimno momento da explosão do LN. A análise transcriptômica foi realizada emrimbiópsias obtidas no flflare de NL de 58 pacientes com NL proliferativa (Classe III/IV ± V) entre 2007 e 2013. As biópsias de arquivo foram usadas após a conclusão do teste clínico. A microdissecção por captura a laser (LCM) foi realizada, e glomérulos e tubulointerstício (TI) foram isolados separadamente. Doador vivo pré-implantaçãorimbiópsias (n=10) serviram como controles saudáveis (HCs) e foram analisadas em paralelo com biópsias LN. O mesmo nefrologista (AM) tratou todos os pacientes, e um nefropatologista experiente (VA) leurimbiópsias. O conselho de ética do Hospital Fernandez (Buenos Aires) e o conselho de revisão institucional da Ohio State University aprovaram a investigação darimbiópsias.
Extração e Análise de RNA
As biópsias utilizadas para análise transcriptômica foram fixadas em formalina e embebidas em parafina (FFPE). Dos blocos de parafina, cortes de 10µm foram cortados de cada biópsia. Após a desparafinização, todos os glomérulos e TI disponíveis foram separados por microdissecção a laser (PALM MicroBeam, Zeiss Labs, Bernried, Alemanha), capturados e digeridos com proteinase K. O DNA foi removido com DNase. O RNA foi precipitado, extraído com colunas de spin RNeasy MinElute (Qiagen, Redwood City, CA, EUA) e eluído em água livre de RNase. A expressão da transcrição foi analisada a partir de 250 ng de RNA extraído usando a plataforma NanoString nCounter e o painel de transcrição de imunologia humana GX [NanoString Technologies, Seattle, WA, EUA; (3-5)]. O painel de imunologia humana v2 consistiu em 579 genes de resposta imune, 6 genes de controle positivo e 6 genes de controle negativo. Uma lista completa desses genes pode ser encontrada na publicação anterior do nosso grupo (6). Para microscopia confocal IF, congeladarimtecidos de biópsia de quatro pacientes com LN Classe IV ativo foram obtidos do Biorepositório de Nefropatologia do Estado de Ohio. Três amostras congeladas de nefrectomia foram usadas como HC. As nefrectomias foram realizadas em pacientes comrenalcarcinoma celular. O tecido obtido para análise foi seccionado do tecido canceroso. O tecido circundante usado para análise parecia saudável por análise histológica. Nefrectomias foram usadas como controle porque eram necessárias amostras congeladas e não tínhamos tecido de doador de transplante congelado armazenado em nosso biorepositório.
Anticorpos
Os anticorpos primários (Abs) usados para IF estão todos listados na Tabela Suplementar 1. Os anticorpos usados neste estudo foram validados para IF usando linfonodo humano ou fígado humano como controle positivo (dados não mostrados). Os controles de isotipo usados são IgG de coelho normal ChromoPure, IgG de camundongo normal (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, EUA), IgG1κ de camundongo (BioLegend, San Diego, CA, EUA) e IgG2bκ de camundongo (Jackson ImmunoResearch). Os anticorpos secundários usados para IF foram cabra F(ab')2 anti-IgG 488 de camundongo (Jackson ImmunoResearch) e cabra anti-coelho IgG 568, cabra anti-coelho IgG 488 e cabra anti-coelho IgG 647 da Invitrogen (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA).
CISTANCHE VAI MELHORAR A DOENÇA RENAL/RENAL
ImunofluorescênciaNefrectomia congelada e NLrimas biópsias foram seccionadas (seção de 5µm por lâmina), fixadas em solução salina tamponada com paraformaldeídofosfato (PBS) a 4 por cento por 15 min à temperatura ambiente e lavadas com PBS (com 0,02 por cento de azida de sódio). As secções foram bloqueadas com 5 por cento de leite em PBS, seguido de incubação com o Ab primário durante a noite. Após três lavagens com PBS por 1 h, as seções foram incubadas com Abs secundários marcados com fluorescência por mais uma hora à temperatura ambiente e os núcleos foram corados com DAPI (100 ng/ml) por 10 min. As seções foram então montadas com Prolong Gold (Invitrogen) sob lamínulas. Controle Abs referem-se à lista de isotipos Abs com seus respectivos Abs secundários. As imagens foram obtidas usando um microscópio confocal de varredura a laser Olympus FluoView 1000 equipado (Olympus Corp., Tóquio, Japão) com um sistema de detecção espectral para uma separação mais fina de flfluorocromos (espectros FV1000) juntamente com lentes de imersão em óleo × 60 em temperatura ambiente.
Microscopia QuantitativaO nível de expressão de infDC em LN e HCrinsfoi quantificado a partir de imagens que foram coradas para infDC usando anti CD163. A intensidade total de CD163 com base na expressão de infDC foi calculada usando o software ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, MD, EUA). A intensidade de CD163 foi obtida após subtrair a fluorescência de fundo do isotipo mais imagens secundárias coradas com Ab e medindo a área e a intensidade de fluorescência média dos pixels verdes que emanam de infDC usando o anticorpo CD163 como descrito anteriormente (7).
Análise estatísticaPara a análise transcriptômica, a estatística descritiva é apresentada como média ± desvio padrão ou como porcentagem. Para variáveis clínicas, testes t, ANOVA ou testes de soma de postos de Wilcoxon foram aplicados conforme apropriado. Para variáveis clínicas categóricas, foi utilizado o teste exato de Fisher. Para dados de nanostring, as contagens brutas foram normalizadas para os controles de pico positivo e, em seguida, log2 transformados. Para reduzir o viés técnico, os genes com um nível de expressão abaixo da média mais dois desvios padrão dos controles negativos foram filtrados. A normalização quantílica foi aplicada aos transcritos restantes (522 para glomérulos e 502 para TI). As amostras glomerulares foram analisadas separadamente das amostras de TI. Para determinar a expressão diferencial, expressão glomerular e transcrito de TI do LNrinsforam comparados com os controles. Uma mudança de 1.5-vez e p < 0.05="" foram="" necessárias="" para="" que="" uma="" transcrição="" fosse="" considerada="" diferencialmente="" expressa.="" para="" análise="" estatística="" da="" microscopia="" confocal,="" utilizou-se="" o="" teste="" t="" de="" student="" bicaudal="" para="" comparação="" de="" dois="" grupos,="" e="" p="">< 0,05="" foi="" considerado="" significativo.="" todas="" as="" análises="" foram="" executadas="" usando="" o="" origin="" pro="" versão="" 2020="" (originlab="" corp.,="" northampton,="" ma,="">
RESULTADOS
Análise transcriptômica de biópsias renais no LN Flare revela superexpressão significativa de FCER1G nos glomérulos e TI no LN FlareRealizamos análise transcriptômica em RNA isolado de glomérulos e TI usando LCM dorimbiópsias obtidas na fase proliferativa de LN (n=58). Doador vivo pré-implantaçãotransplante de rimbiópsias foram usadas como HCs (n {{0}}). A análise transcriptômica para 579 transcritos imunes mostrou que FCER1G é o transcrito glomerular mais significativamente superexpresso [Fold Change (FC): 3,6, valor p (p): 1E-10], mas também foi significativamente superexpresso no TI (FC: 1.7, p=0.001) no LN flflare (Figura 1 e Tabela Complementar 2) em comparação com HC. Além disso, a expressão de FCER1G se correlacionou com o índice de atividade histológica da doença do NIH (r=-0,43, p=0,01).
Rim FcR é altamente expresso no LN Flare e confinado à região periglomerularPara caracterizar a célula imune que expressa FCER1G, analisamos a proteína codificada por FCER1G, cadeia gama do receptor Fc [FcR ; (8)] em LN humano e HCrimtecido por análise microscópica IF usando um anticorpo específico. A análise de IF revelou que o FcR é minimamente expresso nos glomérulos (identificado pelo marcador de podócitos, sinaptopodina), mas abundantemente expresso nas regiões PG e TI das biópsias de LN flflare. As células expressando FcR pareciam ter uma aparência típica de infiltrado celular na região PG, microscopicamente (Figura 2). A análise de IF demonstrou que durante o flflare de LN, a região PG é expandida devido à presença de infiltrado celular, enquanto a região PG é fina e sem infiltração celular em HC como visto nas imagens mescladas da Figura 2
e Figura Complementar 4. Mais importante, vimos uma expressão fraca a nula de FcR em LN e HCs usando controles de anticorpos isotípicos que foram processados simultaneamente (dados não mostrados). Esses dados suportam os achados transcriptômicos de que FCER1G codifica FcR e é abundantemente superexpresso em surtos de LN proliferativos.
Marcadores de macrófagos CD11b e CD68 não colocaram com FcR no rim humano LN
Com base em descrições anteriores de leucócitos intersticiais em LN (9-11), previmos que a célula expressando FcR fosse um macrófago. Nós duas seções de biópsia coradas com anticorpos anti-FcR anticorpos FcR contra marcadores de macrófagos CD68, CD206 e CD11b. Inesperadamente, coloração para marcadores M2-específicos de macrófagos, CD11b e CD206 [(12); dados não mostrados], mostrou expressão de fraca a nula no LNrim.Enquanto isso, o marcador panmacrófago CD68 (13) apresentou expressão glomerular; assim, sugerindo que macrófagos M1 foram encontrados principalmente dentro dos glomérulos. No entanto, a coloração de CD68 não coincidiu com a coloração de PG e TI para FcR (Figura 3). Esses dados demonstram que as células que expressam FcR norimnão são macrófagos. Embora os anticorpos contra CD206, CD68 e CD11b tenham dado um sinal fraco ou nenhum sinal no LNrim, eles coraram células de Kupffffer em fígado humano saudável de forma robusta, confirmando a confiabilidade e especificidade dos anticorpos [(14); dados não mostrados].
FcR Colocalizado com Marcador de Células Dendríticas Convencionais CD11c e MHCII no rim LN
Para determinar se a célula que expressa FcR era uma célula dendrítica (DC), a microscopia IF de três cores foi feita usando o marcador DC convencional CD11c e MHCII que é conhecido por ser altamente expresso em todas as DCs humanas (15, 16), além de as outras células mieloides. A análise qualitativa demonstrou que a expressão de FcR (marcada usando anticorpo anti-FcR seguido por anticorpo secundário conjugado com corante Alexa-594 (Invitrogen) que mostrou cor de emissão vermelha em microscopia confocal) co-localizou com CD11c e MHCII. CD11c/MHCII foram marcados usando o anticorpo CD11c/MHC II seguido pelo anticorpo secundário conjugado com corante Alexa-488 (Invitrogen) mostrou cor de emissão verde na microscopia confocal (Figura 4). A colocalização resultou em uma cor amarela refletindo a presença de FcR fluorescente (vermelho) e CD11c/MHCII (verde) co-ocorrendo no mesmo local/célula na dimensão XY (Figura 4). O padrão de coloração de CD11c combinou com FcR (Figura 4) na região PG e TI, e nenhum anticorpo corou dentro dos glomérulos. Em linha com CD11c, MHCII (Figura 4, linha inferior) também corou fortemente em PG, co-localizando com FcR. Mas, além da forte coloração de PG, o MHCII também demonstrou uma coloração fraca dentro do glomérulo, sugerindo a presença de uma célula glomerular que expressa MHCII fraca que pode ser uma célula mielóide.
O FcR não foi colocado com o marcador de células dendríticas plasmocitóides CD123, mas colocado com o marcador de células dendríticas derivado de monócitos DC-SIGN
Para identificar qual subconjunto de DC expressando FcR é encontrado na região PG durante a inflamação de LN, o tecido da biópsia foi corado para CD123, um marcador específico de uma DC plasmocitóide (pDC) (16, 17). As células CD123 plus foram encontradas na região TI (Figura 5, linha superior), mas estavam ausentes dos glomérulos e da região PG de LNrins. As células CD123 plus eram esparsas e a coloração CD123 no TI não se alinhou com a coloração FcR. Isto sugere que a DC que expressa FcR intra-renal em LN não é uma pDC. Expressão de proteína reguladora de sinal alfa (SIRP) co-localizada com FcR (Figura 5, linha do meio), sugerindo que as DCs PG não são DCs tipo 1 convencionais mieloides (cDC1) (16). As possibilidades restantes eram que as DCs PG fossem DCs tipo 2 convencionais mieloides (cDCs2) ou DCs derivadas de monócitos (moDCs). Para distinguir entre esses subconjuntos de DC, a expressão DC-SIGN, um marcador específico para moDCs foi avaliada. DC-SIGN colocalizado com FcR na região PG (Figura 5, painel inferior), sugerindo que o PG DC é um moDC.
FcR Colocalizado com CD64, CD16 e CD14 na região periglomerular do rim e confirmado que os DCs
Encontrado no LNRimem Flare Are moDCs Para confirmar que as DCs que expressam FcR são moDCs, elas foram ainda caracterizadas pela avaliação da presença de marcadores adicionais de superfície celular conhecidos por estarem presentes no moDC incluindo CD64, CD16 e CD14. Cada um desses marcadores foi encontrado no LNrimtecido e colocalizado com FcR (Figura complementar 1).
FcR Colocalizado Com Marcador InfDC Circulante Identificado Anteriormente A expressão CD163 e CD163 é superexpressa no LN Flare
Posteriormente, a análise de colocalização de CD163 com FcR foi feita para determinar se a população de moDC vista aqui poderia ser a infDC circulante recentemente descrita (18). A Figura 6 confirma a co-localização de CD163 (verde) com FcR (vermelho) na região PG (Figura 6A) e o TI (Figura 6B), sugerindo fortemente que o subconjunto de moDC está presente norimdurante o LN flflare são de fato infDCs. Como as infDCs não expressam CD5 (18), orimtecido foi corado para CD5. Embora as células que expressam CD5- estivessem presentes norim, eles não estavam localizados nas proximidades da região PG e não co-localizaram com FcR (Figura 2 suplementar), sugerindo que esses infDC não possuem expressão de CD5. Para quantificar a diferença em infDC em LN e HCrins, as infDC foram quantificadas medindo a área de expressão de CD163 após coloração com um anticorpo monoclonal anti-CD163 e a intensidade de fluorescência média de CD163. Usando 16 imagens glomerulares de 4 LN flflarerins, e 18 imagens glomerulares de três HCrins, encontramos um nível 9- a 21-mais alto de infDC em rins LN em comparação com HC (Figura 6C). Como os infDCs já demonstraram expressar CD11b (19, 20), analisamos ainda mais o LN humanorimcom mAb anti-CD11b humano de rato (clone M1/70) juntamente com anticorpo anti-CD163. Consistente com descobertas anteriores neste manuscrito (Figura 3), o clone M1/70 deu um sinal fraco a nulo nas infDCs (Figura 3 suplementar).
Células dendríticas inflamatórias estavam presentes em proximidade com células T no LN Flare
Doença de Lupusrimas seções foram co-coradas com o marcador de células T CD3 e anticorpos para FcR e CD163 para localizar espacialmente células T e infDCs. A fixação de CD3 com marcadores infDC foi feita de duas maneiras usando dois clones diferentes de anticorpos anti-CD3 (mAb de camundongo UCHT1 e mAb SP7 de coelho) e 2 marcadores de infDC. A coloração do mAb CD3 UCHT1 e anti-FcR mostrou a presença de células T CD3 mais presentes adjacentes a FcR mais infDCs na região PG do LNrim(Figura 7A). A coloração com anti-CD163 mais CD3 mAb SP7 (Figura 7B) confirmou que infDC estavam presentes em estreita proximidade com células T CD3 mais no LN humanorim.Embora a marcação de CD3 com marcadores infDC tenha mostrado principalmente coloração verde e vermelha discreta para ambos os tipos de células, em alguns lugares a coloração vermelha e verde se sobrepuseram.
DISCUSSÃO Neste estudo, identificamos uma nova população de infDC infiltrando orimno flare do LN. Esses infDCs se infiltram, localizam-se nos espaços PG e TI, e sua expressão foi 10-vezes maior no flare LNrimcomparado aos HCs. A evidência de que estes são novos é baseada em seus marcadores de superfície, sendo FcR plus , MHCII plus , CD11c plus , CD163 plus , CD5 , DC-SIGN plus , CD64 plus , CD14 plus , CD16 plus , SIRP plus , CD206 , CD68 , CD123 , CD3 e CD11bV . Notavelmente, esses infDC estavam presentes em grande aproximação às células T na região PG dorimdurante a erupção do LN. As observações desta investigação são apoiadas por estudos anteriores que detectaram a infiltração de PG DC em vários modelos de camundongos de glomerulonefrite experimental (21, 22). No entanto, não está claro por que o infDC se instala no espaço PG. A literatura anterior sugere que arenalAs DC começam no glomérulo e atravessam do mesângio através do tufo glomerular e linfáticos até os linfonodos de drenagem para apresentar o antígeno às células T no PG (23). Neste caso, orenalAs DC podem começar no glomérulo, mas no momento em que o LN se torna clinicamente evidente, essas DC já se moveram para fora do glomérulo e se estabeleceram no espaço PG. Sinais inibitórios podem então ser liberados e bloquear as citocinas/quimiocinas necessárias para a diferenciação de monócitos no infDC, explicando a ausência de infDCs dos glomérulos LN no momento da biópsia. Alternativamente, é possível que fatores quimiotáticos DC sejam liberados diretamente derenalcélulas tubulares que atraem DC infiltrantes (24). Especulamos que ambos ocorram em resposta a estímulos inflamatórios resultando em acúmulo de PG e TI de infDC durante a NL.
Esta investigação estabeleceu que as DCs PG não são DCs plasmocitóides ou convencionais. A expressão dos marcadores de monócitos CD14, CD64 e CD16 que foram relatados anteriormente confirmou que essas DCs PG representam um moDC (16, 25, 26). No cenário de inflamação ou infecção ativa, as moDCs são denominadas infDCs (27). A caracterização adicional desses moDCs revelou uma população única de infDC não descrita anteriormente no LN humano. Notavelmente, no entanto, um estudo transcriptômico recente de células imunes do sangue periférico em pacientes com LES identificou uma assinatura de infDC que era CD163 plus, CD14 plus e CD5h, que é semelhante à população de infDC intrarrenal relatada aqui (18). Recentemente, uma extensa avaliação de células imunes foi realizada usando RNA-Seq de célula única derimbiópsias no LN flflare (28). Vários agrupamentos de monócitos foram identificados neste estudo com um agrupamento de monócitos expressando uma assinatura CD163 plus, CD14 plus, CD16 plus, CD64 plus e DC-SIGN plus, semelhante ao infDC descrito aqui. Além disso, pensava-se que a linhagem de monócitos caracterizada era um subconjunto de monócitos infiltrantes, uma vez que foi minimamente expresso em células saudáveis.rins. Embora esses estudos IF não forneçam uma medida precisa do nível de expressão do marcador de linhagem, e isso possa identificar os estágios de transição da conversão de monócitos para DC dDFOult, esses achados permitem caracterização e orientação espacial para informar estudos quantitativos adicionais.
Essa nova população de infDC também se assemelha a infDC relatada anteriormente, de linfonodos de camundongos infectados com Listeria (CD64 mais CD11c mais MHCII mais ) (27) e mucosa intestinal de doença celíaca (29). As InfDCs também foram descritas anteriormente no líquido sinovial artrítico humano de pacientes com artrite reumatóide (20). No entanto, o infDC descrito na LNrimdifere do fluido sinovial infDC; em que, eles não têm os marcadores de macrófagos CD11b e CD206 que estão presentes no líquido sinovial infDC. Isso sugere que a população de infDC aqui descrita difere da infDC observada em pelo menos algumas outras doenças autoimunes e pode ser exclusiva darimdurante a erupção do LN. Além disso, estudos anteriores identificaram FcεRI [(19, 30); identificado usando um anticorpo antiFcεRI (eBioscience, Inc., San Diego, CA, EUA) para o local de ligação do anticorpo] como o melhor marcador para distinguir infDC
FIGURA 6|A cadeia gama do receptor Fc coloca-se com o marcador de células dendríticas inflamatórias circulantes (infDC) previamente identificado e a expressão de CD163 é superexpressa em LN humanos em comparação com HCs. (A) Três imagens IF coloridas que são representativas de 3 LN humanosrinsmostrando a colocalização de CD163 em verde FIGURA 6|(fifirst) com FcR em vermelho (meio) na região PG. A segunda linha mostra uma parte ampliada das imagens da linha superior destacada no quadrado pontilhado. A terceira coluna mostra a fusão do primeiro 2 junto com a coloração DIC e DAPI dos núcleos (azul). (B) Três imagens IF coloridas que são representativas dos 3 LN humanosrinsmostrando a colocalização de CD163 em verde (primeiro) com FcR em vermelho (meio) na região tubulointersticial (TI). (C) O gráfico de barras retrata a quantificação de infDCs com base na expressão de CD163 usando a cor verde da coloração anti-CD163 de imagens de 18 G de 3 HCs diferentes e 16 imagens de glomérulos de 4 amostras de LN diferentes usando o software ImageJ. A área sozinha (gráfico à esquerda) e área × intensidade de fluorescência média (gráfico à esquerda) de CD163 (verde) foram medidas e plotadas com média ± SD. Os dados foram analisados pelo teste t não pareado (unicaudal) usando cada medida, e os valores p foram indicados no gráfico de barras. FIGURA 7|linha retrata 3 imagens IF coloridas que representam os três LN diferentesrinsmostrando a presença de CD3 (marcador de células pan T em vermelho) adjacente a CD163 (marcador infDC em verde) que são altamente ampliados a partir da região PG. A linha inferior mostra as imagens mescladas das primeiras 2 colunas à direita e imagens mescladas das primeiras 2 colunas mais coloração DIC e DAPI dos núcleos (azul) à esquerda. de macrófagos e cDC por citometria de fluxo. Nossos estudos sugerem que FcR , uma subunidade gama citoplasmática através da qual múltiplos FcRs funcionam, incluindo FcεRI, Fc RI, Fc RIIIa e Fc RI, bem como outros receptores imunológicos como GPVI, OSCAR e TREM (8), seja um marcador para estudos IF em amostras de biópsia de pacientes. É provável que infDC no LNrimexpressam FcεRI, semelhante a Fc RI e Fc RIIIa (Figura 1 complementar), uma vez que a presença de FcR sugere indiretamente a presença de múltiplos receptores, incluindo FcεRI.
CISTANCHE VAI MELHORAR A DOENÇA RENAL/RENAL
A importância de caracterizar o tipo de célula intrarrenal expressando CD163 é reforçada por achados recentes do nosso grupo, revelando que os níveis urinários de CD163 foram significativamente maiores no NL ativo em comparação com o LES extrarrenal ou LES inativo (31). A urina CD163 correlacionou-se com a gravidade da doença e o índice de atividade histológica. Enquanto o estudo de Mejia et al (31). sugerimos que o CD163 deriva de macrófagos M2, agora sugerimos que o CD163 urinário também deriva do infDC, apoiando a ideia de que o CD163 urinário é um biomarcador que reflete a atividade da doença em LN.
Com relação à origem dessas infDCs, a expressão de marcadores de monócitos sugere que as infDCs podem ser diferenciadas de monócitos infiltrados norimdurante a inflamação causada por vários estímulos autoimunes, incluindo complexos imunes. Por outro lado, a presença de CD163 mais CD14 mais infDCs nos pacientes com circulação de lúpus (18) sugere que infDC da circulação periférica entre narimem L.N. Também é possível que ambos os mecanismos respondam porrenalinfDCs. Os mecanismos pelos quais as infDC interagem com as células T durante a NL humana são atualmente desconhecidos. Embora a marcação de CD3 juntamente com marcadores infDC mostre principalmente populações discretas de ambos os tipos de células em estreita proximidade (Figura 7B), também há evidências de alguma sobreposição sugerindo a formação de sinapses imunológicas e interações entre essas infDCs e células T no LNrim.No entanto, as células T estão prontas para migrar para os órgãos linfoides secundários; um relatório recente mostrou a presença de agregados imunes organizados como estruturas linfóides terciárias (TLS) em pacientes com LN e LN murinorinsque se assemelham a linfonodos por assinaturas genéticas e composição celular (32). Isso é consistente com um relatório anterior que identificou centros germinativos com agregados de células T e B no LNrim(33). Considerando esses achados no contexto da identificação de infDCs na LNrimsugere que as infDCs no PG e TI podem ser importantes condutores de uma resposta imune adaptativa local dentro do rim LN. Embora ainda não esteja claro se essas células T são células T residentes ou células T iniciadas, as infDCs são conhecidas sob várias condições de doença por terem a capacidade de desencadear o desenvolvimento de subconjuntos principais de células T auxiliares, a saber, Th1, Th2 e Th17 (20). , 34, 35). Embora, estudos in vitro sugiram que as infDCs estejam envolvidas na iniciação e manutenção da resposta Th17 (19), estudos adicionais sobre o novo LNrim euAs nfDCs são necessárias porque o estímulo inflamatório e o microambiente tecidual determinam a função das infDC in situ (36).
CONCLUSÃO
Em conclusão, identificamos uma nova população de infDC que não foi descrita anteriormente no LNrim.Essas infDCs residem na região PG e adjacentes às células T infiltrantes. Nossos achados, juntamente com a literatura recente identificando CD163 mais infDC circulante no LES e CD163 na urina como um marcador valioso da atividade da doença no LN, sugerem que as infDCs e seus parceiros de células T podem ser os principais contribuintes para a condução da resposta imune adaptativa local durante o LN ativo. Mais estudos são necessários para definir os subconjuntos de células T que residem próximos às infDCs e entender os mecanismos pelos quais as PG infDCs se comunicam com as células T para conduzir a inflamação local no LN.