A trombomodulina é regulada positivamente nos rins de mulheres com pré-eclâmpsia
Mar 22, 2022
A glicoproteína endotelial trombomodulina regula a coagulação, a inflamação vascular e a apoptose. Norim, a trombomodulina protege a barreira de filtração glomerular, provocando crosstalk entre o endotélio glomerular e os podócitos. Várias patologias glomerulares são caracterizadas por uma perda de trombomodulina glomerular. Em mulheres com pré-eclâmpsia, os níveis séricos de trombomodulina solúvel estão aumentados, possivelmente refletindo uma perda do endotélio glomerular. Nós nos propusemos a investigar se a expressão de trombomodulina está diminuída nos rins de mulheres com pré-eclâmpsia e ratos expostos a um inibidor da angiogênese. A expressão de trombomodulina foi examinada usando imuno-histoquímica e qPCR emrenaltecidos de autópsia coletados de 11 mulheres pré-eclâmpticas, 22 controles grávidas e 11 mulheres hipertensas não grávidas. Mais longe,rinsde ratos tratados com doses crescentes de sunitinib ou sunitinib em combinação com antagonistas do receptor de endotelina foram estudados. Os níveis de proteína trombomodulina glomerular estavam aumentados norinsde mulheres com pré-eclâmpsia. Paralelamente, em ratos expostos ao sunitinib, a trombomodulina glomerular foi regulada positivamente de forma dose-dependente, e a regulação positiva da trombomodulina glomerular precedeu o início das alterações histopatológicas. O bloqueio seletivo de ETAR, mas não o bloqueio duplo ETA/BR, normalizou o aumento induzido pelo sunitinibe na expressão de trombomodulina e albuminúria. Propomos que a expressão de trombomodulina glomerular aumenta em um estágio inicial dedano renalinduzida por condições antiangiogênicas. A upregulation desta proteína nefroprotetora em células endoteliais glomerulares pode servir como um mecanismo para proteger a barreira de filtração glomerular na pré-eclâmpsia.
Palavras-chave;falência renal; rim; danos nos rins; Disfunção renal; tecidos renais; renal
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A pré-eclâmpsia afeta 3% a 5% das gestantes e é uma importante causa de morbidade e mortalidade materna e neonatal1. A pré-eclâmpsia é caracterizada por disfunção placentária e produção placentária de vários fatores antiangiogênicos e pró-inflamatórios (por exemplo, Flt-1 solúvel, endoglina solúvel e TNF-alfa), que contribuem para a disfunção endotelial sistêmica, aumento da resistência vascular , e complicações em múltiplos órgãos2. orimé frequentemente afetada em mulheres com pré-eclâmpsia, com sintomas que variam de proteinúria leve a proteinúria nefrótica efalência renalem estágios mais avançados da doença3. As alterações patológicas norinsdas mulheres com pré-eclâmpsia são caracterizadas por endotelinas, apagamento do processo podócito e perda de podócitos4,5. O que impulsiona essas mudanças patológicas não é totalmente compreendido.Disfunção renalna pré-eclâmpsia é provavelmente causada por uma interrupção das vias de sinalização envolvidas na manutenção da barreira de filtração glomerular6. Por exemplo, níveis aumentados do fator antiangiogênico Flt-1 solúvel levam à sinalização prejudicada de VEGF no glomérulo, resultando em uma ruptura da barreira de filtração glomerular, proteinúria e endoteliose glomerular7,8. Em concordância, drogas que inibem a sinalização angiogênica, como o sunitinibe, estão associadas a efeitos adversos que mimetizam a pré-eclâmpsiarimfenótipo9. Outro importante mediador da hipertensão elesão renalna pré-eclâmpsia e a inibição do VEGF é o sistema endotelina10. A endotelina é um potente vasoconstritor produzido pelas células endoteliais que sinalizam através do tipo endotelina
Um receptor (ETAR) nas células musculares lisas vasculares, resultando em vasoconstrição11. Por outro lado, a sinalização da endotelina através do receptor de endotelina tipo B (ETBR) resulta na produção de óxido nítrico e prostaciclina que promovem vasodilatação11,12. O bloqueio de ETR e o antagonismo seletivo de ETAR em particular reduzem efetivamente a pressão arterial e a proteinúria em modelos de roedores de pré-eclâmpsia e inibição de VEGF13. Da mesma forma, recentemente demonstramos que o bloqueio seletivo de ETAR resgata orenalfenótipo de ratos expostos à inibição de VEGF14. A trombomodulina é uma glicoproteína transmembrana expressa principalmente por células endoteliais e é um componente do glicocálice da superfície endotelial15. A trombomodulina mantém a homeostase vascular regulando a coagulação, inflamação e apoptose15,16. Em mulheres com pré-eclâmpsia, níveis séricos aumentados de trombomodulina solúvel foram relatados17, o que provavelmente reflete o aumento da clivagem do ectodomínio trombomodulina do endotélio18. A trombomodulina desempenha um papel fundamental na manutenção da barreira de filtração glomerular em camundongos diabéticos: a sinalização perturbada da trombomodulina leva ao aumento da apoptose de células endoteliais glomerulares e podócitos e aumento da ativação do complemento glomerular, resultando em proteinúria agravada e glomeruloesclerose19,20. Assim, a trombomodulina tem efeitos citoprotetores importantes na barreira de fltração glomerular, e a interrupção da sinalização da trombomodulina pode estar envolvida nadoenca renalna pré-eclâmpsia. Neste estudo, investigamos se a expressão de trombomodulina está diminuída norinsde mulheres com pré-eclâmpsia e em um modelo de rato de inibição de VEGF. Além disso, investigamos o papel do sistema endotelina na expressão de trombomodulina renal neste modelo de rato usando um antagonista ETAR seletivo e um antagonista ETA/BR duplo.
Métodos
Matéria do paciente. A coorte de autópsia renal usada neste estudo foi descrita anteriormente (ver: 21). Em suma, uma busca nacional do Registro de Patologia Holandesa (PALGA) foi realizada para coletartecidos renaisde pacientes que estavam grávidas e foram casos confirmados de pré-eclâmpsia. Além disso, dois grupos de controle foram incluídos: (1) mulheres grávidas sem transtorno hipertensivo antes ou durante a gravidez e (2) mulheres jovens não grávidas com histórico médico de hipertensão crônica. Os dados da patologia foram vinculados aos registros do Comitê Nacional de Mortalidade Materna da Sociedade Holandesa de Obstetrícia. A pré-eclâmpsia foi definida com base nos critérios diagnósticos da Sociedade Internacional para o Estudo da Hipertensão na Gravidez (ISSHP)22. Embebido em parafinarimamostras de 11 mulheres com pré-eclâmpsia, 22 controles grávidas normotensas e 11 controles hipertensas não grávidas estavam disponíveis para este estudo. Todas as amostras de autópsia foram codificadas e depois manuseadas e analisadas anonimamente de acordo com as diretrizes nacionais de ética holandesas (Código para Uso Secundário Adequado de Tecido Humano, Federação Holandesa de Sociedades Científicas Médicas). Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética Médica do Centro Médico da Universidade de Leiden (licença número P12.107).
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Ratos. Os experimentos foram realizados de acordo com as diretrizes da Diretiva 2010/63/UE do Parlamento Europeu e da Lei de Experimentos em Animais da Holanda, após obter a aprovação do Comitê de Ética Animal do Centro Médico Eras mus (número de licença 118-16-01). Ratos machos Wistar Kyoto (WKY, 280-300 g) foram obtidos com 10 semanas de idade. Os animais foram alojados em uma sala experimental com temperatura mantida em 21-22 graus e um ciclo claro/escuro de 12-h. Os animais tiveram acesso a ração de rato padrão de laboratório e água ad libitum. Dois experimentos diferentes foram utilizados neste estudo, com métodos detalhados e o fenótipo desses animais publicados anteriormente14,23. Em resumo, os ratos foram tratados com diferentes doses de sunitinibe com ou sem antagonistas de ETR por 8 dias. A pressão arterial aórtica foi medida por radiotelemetria. Antes e após a administração do(s) tratamento(s), os ratos foram alojados em gaiolas metabólicas por 48 h. O primeiro dia foi utilizado para aclimatação e o segundo dia para a coleta de 24-h amostras de urina. No primeiro estudo, os ratos foram aleatoriamente designados para receber uma dose baixa, intermediária ou alta de sunitinibe (7, 14 ou 26,7 mg/kg/dia po sunitinibe-L-malato (Sutent, Pfizer), respectivamente) ou veículo por 8 dias . Ao final do experimento, os ratos foram eutanasiados com 60 mg/kg de pentobarbital intraperitoneal e exsanguinação por punção de veia abdominal23. No segundo estudo, os ratos receberam veículo ou dose intermediária de sunitinibe (14 mg/kg/dia po) sozinho ou em combinação com macitentana (antagonista duplo de ETA/BR, 100 mg/kg/dia po) ou sitaxentana (ETAR seletivo antagonista, 30 ou 100 mg/kg/dia po). Ao final do experimento, os ratos foram eutanasiados por overdose de anestesia com Forane (isoflurano) e exsanguinação por punção de veia abdominal14. Em ambos os estudos, após a eutanásia, orinsforam rapidamente extirpados para análises subsequentes.
Histologia renal.As secções renais foram avaliadas cegamente por um patologista quanto à presença ou ausência de tumefação das células endoteliais, tumefação das células epiteliais, isquemia e proteína intra-epitelial. Para microscopia eletrônica foram examinados dois glomérulos, a presença de endotelinas glomerulares e a morfologia dos podócitos. Achados histopatológicos em humanos e animais expostos a diferentes concentrações de sunitinibe foram publicados anteriormente21,23.
Imuno-histoquímica.Os cortes renais foram desparafinizados. A recuperação do antígeno induzida pelo calor foi realizada usando tampões de citrato (anticorpo anti-trombomodulina humana) ou Tris/EDTA (anticorpos anti-trombomodulina de rato e anti-ETAR). A peroxidase foi bloqueada em solução de peróxido de hidrogênio por 20 min.Rimas amostras foram incubadas com uma trombomodulina monoclonal de camundongo anti-humana (1:200, Leica Biosystems, Danvers), uma trombomodulina monoclonal de coelho anti-camundongo/rato (1:2000, Abcam) ou um anti-ETAR policlonal de coelho (1:700, Invitrogen, Carlsbad) por uma hora à temperatura ambiente. A ligação do anticorpo primário foi visualizada com polímero anti-rato ou anti-coelho marcado com peroxidase (Dako, Dinamarca) e diaminobenzidina como um cromógeno.
Análise de coloração.A coloração de trombomodulina e ETAR foram pontuadas por dois observadores independentes cegos em relação ao diagnóstico clínico e tratamento (CCLA e MB). Vinte e cinco glomérulos selecionados aleatoriamente por amostra foram pontuados usando uma escala semiquantitativa da seguinte forma: 0, ausente; 1,<10% glomerular="" staining;="" 2,="" 10–49%="" glomerular="" staining;="" 3,="" 50–90%="" of="" glomerular="" staining;="" and="" 4,="">90 por cento de coloração glomerular. Exemplos representativos das diferentes pontuações são mostrados nas Figuras Suplementares S1, S2, S3. A concordância interobservador foi minimamente suficiente em todos os experimentos de pontuação (κ maior ou igual a 0,5). Quando os observadores pontuaram os glomérulos de forma diferente, o consenso foi obtido.
qPCR.A PCR quantitativa foi realizada para quantificar a expressão de mRNA de trombomodulina e ET AR. O RNA foi isolado com reagente TRIzol (Life Technologies, San Francisco, CA, EUA). A síntese de cDNA foi realizada com transcriptase reversa de AMV (Roche, Basel, Suíça), e a PCR quantitativa SYBR Green foi realizada de acordo com o protocolo do fabricante (Bio-Rad Laboratories Inc, Hercules, CA, EUA). As sequências de iniciadores estão descritas na Tabela Suplementar S1. A expressão foi medida pelo método do ciclo de limiar comparativo e normalizada para a expressão da hipoxantina fosforibosiltransferase. Uma análise da curva de fusão foi realizada para verificar a especificidade da aplicação.
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Análise estatística.A variação interobservador foi determinada pela estatística kappa. Dados contínuos normalmente distribuídos foram analisados usando ANOVA de uma via seguido pelo teste post-hoc de diferença menos significativa para as comparações planejadas de grupos pareados. Para analisar as diferenças nos escores de expressão de trombomodulina glomerular entre os grupos da coorte de autópsias, foi utilizada regressão logística ordinal para dados agrupados com equações de estimativa generalizada (GEE). Para analisar supostas correlações entre a expressão de trombomodulina e achados histopatológicos ou clínicos, foi utilizada a correlação de Pearson. As formas das curvas de resposta de trombomodulina e ET AR ao longo da faixa de dose de sunitinibe foram examinadas por meio de linhas de regressão. p<0.05 was="" considered="" statistically="" signifcant.="" unless="" stated="" otherwise,="" summary="" data="" in="" the="" figures="" are="" reported="" as="" the="">
Resultados A trombomodulina glomerular está aumentada nos rins de mulheres com pré-eclâmpsia. A coloração de trombomodulina foi analisada em amostras de rim de 11 mulheres com pré-eclâmpsia,22 controles gestantes normotensas e 11 controles hipertensas não gestantes. Os controles hipertensos eram mais velhos que as mulheres dos outros 2 grupos de estudo; em comparação com as controles grávidas, as mulheres com pré-eclâmpsia tiveram gestação mais longa e pressão arterial mais elevada (Tabela Suplementar S2). Independentemente da presença de trombomodulina no glomérulo, a trombomodulina estava presente nos capilares peritubulares em todas as amostras estudadas (Figura Suplementar S1). Nos glomérulos, a expressão da trombomodulina parecia originar-se do pólo vascular (Fig. 1A). Em média, a expressão de trombomodulina glomerular foi maior nas pacientes com pré-eclâmpsia em comparação com as gestantes e controles hipertensos (fig. 1); em comparação com a pré-eclâmpsia, os controles tiveram pontuações de expressão de trombomodulina glomerular mais baixas (controles grávidas, OR: 3.0; 95 por cento -CI: (1,1, 7,8), p<0.05; and="" hypertensive="" controls,="" or:="" 6.1;="" 95%-ci:="" (1.6,="" 23.3),=""><0.01). in="" pre-eclampsia="" cases,="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" presence="" of="" glomerular="" endothelins="" (r:="" −0.71;=""><0.05). furthermore,="" in="" hypertensive="" controls,="" thrombomodulin="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" glomerular="" tuf="" size="" (r:−0.79,=""><>
Expressão de trombomodulina glomerular em ratos expostos ao sunitinibe.Para entender melhor nossos achados na pré-eclâmpsiarins,a coloração da trombomodulina glomerular foi estudada em ratos expostos a doses crescentes do inibidor do receptor de VEGF sunitinib. A administração de sunitinibe resultou em aumento da pressão arterial e proteinúria de forma dose-dependente23. Ratos expostos à baixa dose de sunitinib não apresentaram anomalias histopatológicas; endotelinas foram observadas norinsde ratos expostos a doses intermediárias e altas de sunitinibe; depósitos de fibrina foram observados apenas nos capilares glomerulares de animais expostos a uma alta dose de sunitinibe23. Nenhum dos glomérulos marcados em ratos foi negativo para trombomodulina. A proteína trombomodulina glomerular foi aumentada nos rins de ratos expostos a doses baixas e intermediárias de sunitinibe (p < 0.05,="" fig.="" 2a),="" mas="" não="" em="" ratos="" expostos="" à="" dose="" mais="" alta="" de="" sunitinibe.="" em="" apoio="" a="" esses="" achados,="" um="" modelo="" de="" regressão="" mostrou="" que="" os="" níveis="" de="" proteína="" trombomodulina="" glomerular="" foram="" associados="" de="" forma="" não="" linear="" com="" a="" dose="" de="" sunitinibe="" como="" uma="" relação="" quadrática="" estatisticamente="" significativa="" (fig.="" 2b,="" y="2.829" mais="" 0).="" 056x−0.002x2,=""><0.01). to="" study="" the="" factors="" that="" may="" induce="" upregulation="" of="" glomerular="" thrombomodulin,="" we="" next="" stained="" for="" the="" etar,="" which="" mediates="">danos nos rinsinduzida pela inibição do VEGF. Em ratos tratados com doses baixas e intermediárias de sunitinibe, mas não em ratos tratados com uma dose alta de sunitinibe, a coloração glomerular de ETAR foi aumentada em comparação com ratos controle (p < {{0}}.0)="" 1,="" fig.="" 2c).="" em="" paralelo="" com="" os="" níveis="" de="" trombomodulina,="" os="" níveis="" glomerulares="" de="" etar="" foram="" quadraticamente="" associados="" à="" dose="" de="" sunitinibe="" (y="0,642" mais="" 0,087x−0,003x2,=""><0.001). without="" taking="" into="" account="" the="" different="" treatment="" groups,="" glomerular="" etar="" protein="" levels="" were="" directly="" correlated="" with="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" (r:="" 0.460,=""><>
O tratamento com o bloqueador de ETAR sitaxentan normaliza a expressão da trombomodulina.Para estudar se a expressão da trombomodulina é regulada pela sinalização da endotelina, ratos expostos à dose intermediária de sunitinibe foram tratados com agentes bloqueadores de ETR. O tratamento com um antagonista seletivo de ETAR (sitaxentano) normalizou a pressão arterial e a albuminúria em ratos tratados com sunitinibe14 (Figura complementar S4). Por outro lado, o tratamento com um antagonista duplo ETA/BR (macitentano) resultou na normalização da pressão arterial, mas não na normalização da albuminúria induzida por sunitinibe14 (Figura S4 suplementar).
A expressão de mRNA de trombomodulina foi aumentada nos rins de ratos expostos a sunitinib em comparação com controles (Fig. 3A, p<0.01). administration="" of="" sitaxentan,="" at="" both="" concentrations,="" on="" top="" of="" sunitinib="" normalized="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" to="" control="" levels=""><0.01). however,="" the="" administration="" of="" macitentan="" did="" not="" affect="" thrombomodulin="" mrna="" levels.="" relative="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" relative="" etar="" mrna="" expression="" in="" the="" control="" group="" (r:="" 0.936,=""><0.01). in="" animals="" exposed="" to="" sunitinib="" only,="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" the="" amount="" of="" albuminuria="" (r:="" 0.876,=""><0.01). at="" the="" protein="" level,="" sunitinib="" exposure="" resulted="" in="" higher="" glomerular="" thrombomodulin="" expression="" as="" compared="" to="" controls="" (fig. 3b,=""><0.05). neither="" co-administration="" of="" sunitinib="" with="" sitaxentan="" or="" macitentan="" resulted="" in="" the="" normalization="" of="" the="" sunitinib-induced="" increase="" in="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="">
Discussão
Aqui, mostramos que a proteína nefroprotetora trombomodulina está aumentada narimglomérulos de mulheres com pré-eclâmpsia. Além disso, mostramos que em ratos expostos ao inibidor da angiogênese sunitinibe, a trombomodulina glomerular é regulada positivamente de maneira dose-dependente, e o aumento da trombomodulina glomerular precede o início das manifestações histopatológicas. Finalmente, mostramos que o bloqueio do ETAR normaliza a regulação positiva da trombomodulina glomerular induzida pelo sunitinib. Nossos achados sugerem que a regulação positiva da trombomodulina endotelial glomerular ocorre em um estágio inicial da pré-eclâmpsiadano renale serve como mecanismo de proteção da barreira de filtração glomerular. Nosso estudo é o primeiro a relatar aumento da expressão de trombomodulina glomerular na pré-eclâmpsia. Como descobrimos anteriormente que nas placentas de mulheres com pré-eclâmpsia, a trombomodulina é regulada negativamente24, o
níveis séricos aumentados de ectodomínio de trombomodulina solúvel em pacientes com pré-eclâmpsia17 podem ser derivados do endotélio glomerular. Além disso, encontramos uma associação inversa entre a expressão de trombomodulina glomerular e a presença de endotelinas glomerulares, sugerindo que a regulação positiva da trombomodulina serve como mecanismo de proteção glomerular. Essa noção é apoiada por evidências pré-clínicas em camundongos diabéticos, nos quais a trombomodulina preserva criticamente a sobrevivência das células glomerulares e suprime a ativação do complemento glomerular19,20. Em contraste com nosso achado de que um estado antiangiogênico aumenta os níveis de trombomodulina glomerular, um estudo anterior descobriu que o tratamento com sFlt-1 reduziu a expressão de trombomodulina glomerular em ratos com glomerulonefrite crescente25. Hara et al.25 não estudaram o efeito do sFlt-1 na trombomodulina glomerular em ratos saudáveis. Portanto, embora níveis aumentados de fatores infamatórios também sejam encontrados na pré-eclâmpsia, a regulação negativa da trombomodulina glomerular neste estudo pode ser explicada pela inflamação glomerular de alto grau presente na glomerulonefrite (citocinas pró-inflamatórias, ativação do complemento), que suprimem fortemente a expressão da trombomodulina26 .
A fim de elucidar se na pré-eclâmpsia, a trombomodulina glomerular é regulada positivamente como resultado da inibição sistêmica do receptor de VEGF, estudamos a expressão da trombomodulina em ratos expostos ao sunitinibe. O sunitinibe aumentou a trombomodulina glomerular de forma dose-dependente em doses baixas e intermediárias, mas não na dose mais alta. Como não foram observadas alterações histológicas nos rins de ratos expostos a baixas doses de sunitinibe23, o aumento da expressão da trombomodulina glomerular precedeu o início do dano histopatológico glomerular induzido pelo sunitinibe. Em ratos expostos a uma dose intermediária de sunitinibe, foi observado o maior nível de expressão de trombomodulina glomerular, e isso foi diretamente associado à quantidade de albuminúria. O fenótipo histopatológico renal de nossos casos de pré-eclâmpsia humana foi comparável ao dano renal de ratos tratados com uma dose intermediária de sunitinibe: endotelinas foram observadas em 6 de 11 pré-eclâmpsia
casos e microtrombos foram observados em 1 de 11 casos de pré-eclâmpsia21, enquanto no modelo de rato, os ratos tratados com dose intermediária tinham endotelinas e os ratos tratados com a dose mais alta tinham endotelinas combinadas com depósitos de fibrina23. Propomos que a expressão de trombomodulina glomerular aumenta em um estágio inicial de pré-eclâmpsia e inibição angiogênica, como um mecanismo protetor para compensar o estresse antiangiogênico na barreira de fltração glomerular. Em contraste, nos ratos tratados com a dose mais elevada, a expressão de trombomodulina foi reduzida para níveis de controlo. Um estudo recente constatou que as dimensões da camada do glicocálice endotelial são reduzidas em mulheres com pré-eclâmpsia grave de início precoce27. Portanto, propomos também que em ratos tratados com altas doses de sunitinibe, o glicocálice endotelial é afetado, o que provoca interação entre trombomodulina e enzimas, contribuindo assim para a clivagem proteolítica e perda da proteína trombomodulina glomerular. Em nossos casos de pré-eclâmpsia, os níveis de trombomodulina glomerular aumentados foram associados a menos endotelinas glomerulares, uma lesão causada diretamente pela sinalização do VEGF glomerular perturbada. Estudos in vitro identificaram o VEGF como um potente fator indutor da expressão de trombomodulina em células endoteliais28. Portanto, a regulação positiva da trombomodulina renal sob condições antiangiogênicas, como pré-eclâmpsia e inibição angiogênica, pode parecer contra-intuitiva. Curiosamente, um estudo mostrou que o VEGF está aumentado nos glomérulos de mulheres com pré-eclâmpsia29, provavelmente refletindo um mecanismo compensatório glomerular na tentativa de compensar a biodisponibilidade reduzida do VEGF. Assim, a suprarregulação da trombomodulina pode ser causada por um aumento compensatório do VEGF glomerular sob condições antiangiogênicas sistêmicas. Além disso, a sinalização da endotelina pode estar envolvida na regulação da trombomodulina glomerular. Os níveis plasmáticos de endotelina estão aumentados em mulheres com pré-eclâmpsia30 e estão associados a níveis sFlt{20}} sistêmicos31,32. Em nosso modelo de rato, ambos os tratamentos com sitaxentano (antagonista de ETAR) e macitentano (antagonista duplo de ETA/BR) resultaram na normalização da hipertensão induzida por sunitinibe em nossos ratos14. No entanto, apenas o tratamento com sitaxentano (antagonista de ETAR) normalizou a regulação positiva da trombomodulina renal induzida pelo sunitinib e diminuiu a albuminúria. Isso sugere que a regulação da expressão da trombomodulina renal é independente do dano endotelial mediado pela hipertensão, o que também foi apoiado pela falta de expressão aumentada da trombomodulina em nossos pacientes hipertensos de controle. Resta investigar se o ETAR induz a expressão de trombomodulina via efeitos sistêmicos ou via sinalização em células endoteliais glomerulares especificamente. Curiosamente, a expressão de trombomodulina foi normalizada apenas no nível de mRNA após o bloqueio de ETAR em ratos tratados com sunitinibe, mas não no nível de proteína. Essa discrepância pode ser explicada por efeitos pós-traducionais, meia-vida da proteína e fatores que influenciam a clivagem da trombomodulina do endotélio.
A trombomodulina possui importantes propriedades anti-inflamatórias, que incluem a inibição da infiltração leucocitária pelo sequestro de moléculas pró-inflamatórias como o antígeno y de Lewis e HMGB-133,34, diminuindo a atividade do NF-κB35 e inibindo a ativação do complemento20. Anteriormente, relatamos que em nossos casos de pré-eclâmpsia, a ativação do complemento glomerular estava aumentada em comparação com controles gestantes e hipertensos36. Isso sugere que a regulação positiva da trombomodulina endotelial glomerular na pré-eclâmpsia funciona como um mecanismo anti-inflamatório e anti-complemento. Além de seus conhecidos efeitos anti-inflamatórios, um estudo recente descobriu que a trombomodulina tem propriedades pró-inflamatórias; a trombomodulina liga-se às integrinas leucocitárias LFA-1 e Mac1, promovendo assim a adesão leucocitária ao endotélio in vitro37. O aumento da trombomodulina glomerular pode, portanto, também contribuir diretamente para a inflamação e o dano glomerular. Devemos reconhecer as limitações do nosso estudo. Em primeiro lugar, todas as mulheres com pré-eclâmpsia nas quais investigamos a expressão da trombomodulina glomerular morreram devido às consequências da pré-eclâmpsia. Isso torna essas mulheres um subgrupo específico de pacientes com pré-eclâmpsia e, portanto, os resultados deste estudo podem não ser aplicáveis a todas as mulheres que desenvolvem pré-eclâmpsia. Em segundo lugar, ratos machos tratados com sunitinib foram usados como modelo para estudar a regulação da trombomodulina em condições antiangiogênicas. Além disso, o sunitinibe inibe diversos receptores de tirosina quinases e não é um inibidor específico do VEGF. Claramente, este modelo não imita totalmente a pré-eclâmpsia, no entanto, o tratamento com sunitinibe leva a hipertensão e proteinúria23. Portanto, pudemos usar esse modelo para estudar a regulação da trombomodulina em condições antiangiogênicas. Apesar das limitações do nosso estudo, ele apresenta insights interessantes sobre os mecanismos de dano renal na pré-eclâmpsia. Em conclusão, a expressão da trombomodulina renal está aumentada na pré-eclâmpsia e em um modelo de inibição angiogênica induzido por sunitinibe. Especulamos que o aumento dos níveis de trombomodulina glomerular reflete um mecanismo renoprotetor em resposta ao estresse antiangiogênico da barreira de fltração glomerular. Além disso, o tratamento com um antagonista do ETAR normalizou a expressão do mRNA da trombomodulina renal concomitantemente com a redução da proteinúria em ratos tratados com sunitinibe. Mais pesquisas são necessárias sobre o papel da trombomodulina na barreira de fltração glomerular.
