A Base Científica para a Nova Aplicação do Cistanche
Mar 09, 2022
Contato: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Sun Weidong1, Chen fei2, Sun yun2
(1. Hospital de Medicina Tradicional Chinesa de Yangzhou, Yangzhou 225009, Jiangsu; 2. Escola de Medicina, Universidade de Yangzhou, Yangzhou 225001, Jiangsu)
RESUMO: O modelo inicial de hiperplasia prostática (HPB) em ratos foi estabelecido, e três grupos de dose de acteosídeo foram administrados por via oral por 4 semanas, para estudar o efeito do acteosídeo destilado deCistanche tubulosana apoptose e ultra-microestrutura da glândula prostática em ratos com HBP. A alteração ultraestrutural da próstata foi observada por microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram que a apoptose da próstata normal do rato não era óbvia, havia uma baixa
taxa de apoptose da próstata no grupo modelo, no acteosídeo de alta dose deCistanche tubulosatratamento, a apoptose da próstata de rato foi significativamente maior do que a do modelo.
PALAVRAS-CHAVE:Cistanche, Cistanche tubulosa, acteósido; rato; comece a hiperplasia prostática; apoptose; ultraestrutural
No processo de hiperplasia benigna da próstata (HPB), a apoptose celular é um dos mecanismos que estão chamando a atenção atualmente. A codificação do gene o determina e permite que as células controlem a morte celular programada respondendo a sinais específicos.
Depois que a próstata se desenvolve até o tamanho adulto, a taxa de proliferação das células da próstata é mantida em 1% a 2% através do equilíbrio da taxa média de apoptose. Uma vez que o equilíbrio é quebrado, é considerado a causa da HBP. Em condições normais, os níveis de estrogênio e andrógeno e a circulação normal na próstata são uma espécie de estado de auto-equilíbrio que existe no processo de proliferação e apoptose. Quando o equilíbrio entre proliferação e apoptose está desequilibrado, levará a um maior crescimento e expansão da glândula, o que causa principalmente a expansão do compartimento de células epiteliais [1].
Neste experimento, estabelecemos um modelo de hiperplasia prostática de ratos para observar e analisar o efeito do acteosídeo (glicosídeo semelhante à coação), um dos componentes químicos doCistanchesobre a apoptose e alterações ultraestruturais de células prostáticas de ratos, a fim de avaliar o efeito do acteosídeo O efeito de inibição da hiperplasia prostática fornece uma base científica para o desenvolvimento e utilização de novos usos da medicina chinesa Cistanche.
Cistancheextrair
1 Material e Métodos
1. 1 Animal Experimental
Cinquenta ratos machos SD com idade de 6-7 semanas, grau limpo, pesando 80-100 g, são fornecidos pelo Centro de Medicina Comparada da Universidade de Yangzhou.
1. 2 Reagentes e Medicamentos
A injeção de propionato de testosterona é da Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., a especificação é 25 mg·mL-1 e o número do lote é 060708. A solução de corante PI é do Yangzhou University Testing Center. O conteúdo de Aktiside é de 945 g·kg-1, preparado pelo Departamento de Análise de Medicina Chinesa da China Pharmaceutical University.
1. 3 Equipamento Experimental
O microscópio eletrônico de transmissão Philips Tecnai 12 é da Philips na Holanda; O citômetro de fluxo FACSAria é da BD nos Estados Unidos.
1. 4 Agrupamentos e Modelagem
Após a castração de acordo com o método da literatura [3], os ratos foram injetados com 5 mg·(kg·d)-1de propionato de testosterona no dorso dos ratos durante 4 semanas para estabelecer um modelo de hiperplasia da próstata. Os ratos modelo foram divididos aleatoriamente em grupos modelo: grupo modelo mais acteósido de dose elevada, grupo modelo mais acteósido de dose média, grupo modelo mais acteósido de dose baixa, dez ratos em cada grupo; outros dez ratos normais foram como grupo controle.
1. 5 Método de Administração
Uma semana após a modelagem, grupos de dose alta, média e baixa de acteosídeo receberam 60, 30, 15 mg·(kg·d)-1 por gavagem, respectivamente. O grupo modelo e o grupo controle receberam um volume igual de solução salina normal uma vez ao dia durante quatro semanas, pesados uma vez por semana e ajustados a dosagem de acordo com o peso corporal.
1. 6 Coleta e Processamento de Amostras
1) Preparação do material e da amostra: 24 horas após a última administração, pesar os ratos em jejum e sacrificar os ratos por deslocamento cervical. Abra imediatamente a parte inferior do abdome, retire os tecidos ao redor da próstata, libere a próstata e leve parte da próstata para uso em um banho de gelo. Homogeneizador de tecido homogeneizado, suspensão de célula única de próstata preparada e corada com método de uma etapa de iodeto de propídio [4]; outra parte do tecido prostático foi fixada em 25 g·L-1 glutaraldeído para preparar cortes ultrafinos.
2) Prepare uma suspensão de célula única: Em condições assépticas, remova completamente a próstata do rato e mova-a para uma placa de Petri, lave o sangue e os coágulos sanguíneos na superfície do tecido da próstata com PBS e remova a gordura circundante, o excesso de fibras, e membranas celulares. Da mesma próstata de rato, tecido prostático fresco com o tamanho de cerca de 0,5 cm3foi retirado e cortado em pedaços para preparar uma suspensão de células da próstata [5]. Coloque o bloco de tecido da próstata em uma placa de Petri e adicione uma pequena quantidade de PBS; use uma tesoura oftalmológica para cortar o tecido em um banho de gelo, moa o homogeneizador para uma suspensão, adicione 10 mL de PBS, pipete o tecido homogeneizado e use malha de náilon de tamanho de poro de 0,074 mm foi filtrada no tubo de ensaio, centrifugada em 1 500 r min-1por 3 min, e o precipitado foi lavado três vezes com PBS, cada vez a 500 r min-1centrifugação de baixa velocidade de curto prazo para remover detritos de células, para 0 filtro de malha de nylon de tamanho de poro de 0,037 mm para remover aglomerados de células. Conte as células e ajuste a concentração de células para 2×109 células·L-1. Corar com 1 mL de solução de coloração PI, proteger da luz a 4 graus por 10 min.
3) Preparação de cortes ultrafinos: Para preparação de cortes de tecidos ultrafinos, consulte a literatura [6].
2 Resultados e análise
Fig. 1 Apoptose do modelo de rato BPH e ação induzida de acteosídeo
uma. Grupo normal; b. Grupo modelo; c. grupo de alta dose de acteosídeo; d. Grupo de baixa dose de acteosídeo
2. 1 O efeito do acteosídeo na apoptose da próstata de ratos
A Figura 1 mostra o pico de apoptose detectado por citometria de fluxo, que mostra que o acteosídeo tem um efeito pró-apoptótico. A análise estatística dos resultados de apoptose celular mostrou que a taxa de apoptose de células de rato aumentou significativamente (24,7±1,85) por cento e (16,1±1.04) por cento após o tratamento com doses altas, médias e baixas do acteosídeo. , (14,5±0,68) por cento e o grupo normal (1,1±{{20}},06) por cento, grupo modelo (9,5±0,5) por cento, grupo positivo (9,83± 0,76) A diferença na comparação percentual é significativa (P<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="" apoptosis,="" the="" effect="" is="" stronger="" than="" that="" of="" the="" positive="" control="" drug="" qianliekang="" (figure="">
Fig. 2 O rádio de apoptose no modelo de rato com HBP e efeito de acteosídeo
2.2 O efeito do acteosídeo na ultraestrutura das células da hiperplasia prostática.
Observações de microscopia eletrônica mostram que a próstata normal de rato tem núcleos completos, obviamente nucléolos, e distribuição uniforme de cromatina nuclear; o retículo endoplasmático rugoso tem o mesmo tamanho, está bem organizado e não apresenta vacuolização. Não há microvilosidades semelhantes a dedos na superfície do epitélio, nenhum inchaço das mitocôndrias e poucas secreções na cavidade. Os núcleos das células da próstata no grupo modelo foram deformados e encolhidos, e o citoplasma era abundante. O retículo endoplasmático rugoso foi expandido em forma de cisto e o cisto foi preenchido com partículas de proteína de alta densidade. As mitocôndrias estavam ligeiramente inchadas (também havia vacúolos), existem secreções de densidade média na cavidade e grânulos de secreção redondos densos foram encontrados em algumas células. Em ratos tratados com acteosídeo, o núcleo estava intacto em comparação com o grupo modelo. O núcleo foi concentrado, a densidade nuclear foi aumentada, a heterocromatina se acumulou, o citoplasma apresentou vacúolos e os vacúolos do retículo endoplasmático rugoso foram reduzidos. O grupo de baixa dose de acteosídeos apresentou núcleos levemente enrugados, encolhimento, citoplasma irregular, mais rico e retículo endoplasmático rugoso reduzido (Figura 3).
O benefício do cistanche: anti-Apoptose
3 Discussão
A apoptose é um processo de morte celular programada em organismos multicelulares que regula o desenvolvimento do corpo e mantém a estabilidade do ambiente interno, e os códigos genéticos o determinam.
As células apoptóticas têm suas características morfológicas e biológicas únicas: encolhimento da cromatina nuclear, extensa degradação e fragmentação do DNA, encolhimento em grande escala das células, encolhimento das membranas celulares e saliências externas que cobrem as organelas (como mitocôndrias e ribossomos) e a formação de células nucleares características. fragmentos Corpos apoptóticos, as células apoptóticas não apenas retêm uma estrutura e função completas da membrana celular, mas também possuem uma estrutura completa de organelas, o que é diferente da necrose celular.
O mecanismo molecular da apoptose celular ainda não foi totalmente elucidado. Estudos [7] mostraram que existem muitos genes envolvidos na regulação gênica da apoptose celular.
A apoptose é o processo de HBP que atualmente está atraindo mais atenção. É determinado pela codificação do gene e permite que as células controlem a morte celular respondendo a sinais específicos [1]. Depois que a próstata atinge o tamanho adulto, a taxa de proliferação das células da próstata é mantida em 1% a 2% através do equilíbrio da taxa de apoptose. A destruição desse equilíbrio sempre foi considerada a causa da HBP [8]. Em condições normais, o nível de estrogênio e andrógeno e a circulação regular na próstata são uma espécie de estado de auto-equilíbrio que existe no processo de proliferação e apoptose. Quando a proliferação e a apoptose estão desequilibradas, isso fará com que as glândulas cresçam e se expandam ainda mais, principalmente devido à expansão do compartimento das células epiteliais [9]. A interrupção desse equilíbrio pode ser devido a alterações nos níveis ou funções dos andrógenos; também pode ser devido a qualquer resposta produzida pela estimulação de DHT por AR ou alterações nos níveis de fator de crescimento mediado por DHT [2]. Neste estudo, a FCM detectou apoptose celular e descobriu que a taxa de apoptose das células da próstata em ratos que receberam altas doses de acteosídeo aumentou significativamente. Os resultados da microscopia eletrônica mostraram que os núcleos das células da próstata no grupo modelo estavam deformados, o retículo endoplasmático rugoso estava altamente expandido em forma de cisto e o cisto estava preenchido com partículas de proteína de alta densidade e vacuolização foi encontrada. As mitocôndrias estavam levemente inchadas e estudos relacionados[ 10-11 ] O relatório é consistente.
Após a intervenção com acteosídeos, o grau de hiperplasia da próstata em ratos foi menor. O grupo de alta dose também mostrou sinais precoces de apoptose: o núcleo das células da próstata permaneceu intacto e os vacúolos do retículo endoplasmático foram significativamente menores. Condensação de núcleos, aumento da densidade nuclear, acúmulo de heterocromatina, semelhante à caracterização de células do tecido prostático em ratos após castração [12-13]. Mostra que o acteosídeo docistachepode induzir a apoptose celular em ratos com hiperplasia da próstata, regular e restaurar o equilíbrio da apoptose e proliferação das células da próstata e desempenhar um papel na inibição da proliferação das células da próstata. Os resultados deste estudo e de estudos anteriores [14] indicam que o efeito inibitório do acteosídeo, um componente químico doCistanche tubulosa, na hiperplasia prostática pode estar relacionada à sua promoção de apoptose celular, redução de AR e superexpressão de TGF-UR1. O mecanismo de ação detalhado ainda precisa ser mais estudado.
Benefício Cistanche: melhora a imunidade
Referências:
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