O efeito protetor de Herba Cistanches na miotoxicidade induzida por estatinas in vitro
Mar 24, 2022
Contato: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Elaine Wat a,b,1, Chun Fai Ng a,b,1, Chi Man Koon a,b, Eric Chun Wai Wong a,b, Brian Tomlinson c, Clara Bik San Lau a,b,n
um Instituto de Medicina Chinesa, Universidade Chinesa de Hong Kong, Shatin, Novos Territórios, Hong Kong
b Laboratório Estatal de Fitoquímica e Recursos Vegetais na China Ocidental, Universidade Chinesa de Hong Kong, Shatin, Novos Territórios, Hong Kong
c Divisão de Farmacologia Clínica, Departamento de Medicina e Terapêutica, Universidade Chinesa de Hong Kong, Shatin, Novos Territórios, Hong Kong
Abstrato:
Relevância etnofarmacológica: ErvaCistanches(HC,Cistanchedeserticola, ouCistanchetubulosa) é uma erva chinesa tradicionalmente usada para problemas musculares. Estudos anteriores demonstraram que o extrato de HC pode reduzir o dano muscular e melhorar o armazenamento de ATP em ratos pós-exercício. No entanto, seu efeito na toxicidade muscular induzida por estatinas nunca foi investigado.
Mirar:O objetivo deste estudo foi determinar se o extrato aquoso de HC (HCE) pode prevenir a toxicidade induzida pela sinvastatina em células musculares esqueléticas de ratos L6 e se o verbascoside é o principal constituinte bioativo que contribui para os efeitos
Materiais e métodos:O MTT foi realizado para determinar os efeitos de HCE ({0}}–2000 mg/ml) ou verbascoside (0–160 mM) em células L6 tratadas com sinvastatina (10 mM). O ensaio de apoptose anexina V-FITC/PI e o ensaio de Caspase 3 foram realizados para determinar o papel protetor do HCE na morte celular induzida pela sinvastatina e para avaliar se o HCE exerceu seu efeito protetor através da via das caspases. A produção de ATP foi medida para investigar se o HCE poderia prevenir a redução induzida pela sinvastatina na produção de ATP in vitro.
Resultados:A sinvastatina aumentou significativamente a morte celular apoptótica em células L6. O HCE exerceu significativamente uma redução dependente da dose nas células apoptóticas induzidas pela sinvastatina, possivelmente através de uma via de caspase-3. A sinvastatina reduziu a produção de ATP nas células L6, que foi prevenida de forma dose-dependente pelo HCE. Houve apenas uma tendência, mas não um efeito significativo (exceto em altas doses) do verbascosídeo na proteção da toxicidade muscular induzida pela sinvastatina.
Conclusões:Em conclusão, demonstramos pela primeira vez que o HCE pode exercer um efeito protetor dose-dependente na toxicidade induzida pela sinvastatina in vitro, o que era improvável devido à presença de verbascoside. Nosso estudo sugeriu o uso potencial de HC sob a situação de toxicidade muscular induzida pela sinvastatina.
Palavras-chave:ErvaCistanches, EstatinaColesterol, Hiperlipidemia, Toxicidade muscular, Verbascoside, Caspase-3
1. Introdução
Os inibidores da HMG-CoA redutase (estatinas), sendo a classe de medicamentos prescritos mais vendidos no mundo na história, estão bem documentados como benéficos para pacientes de ambos os sexos em diferentes idades com risco moderado e alto de doença cardiovascular (DCV) (Golomb e Evans, 2008). Diferentes estatinas foram então desenvolvidas e aprovadas clinicamente, incluindo pravastatina, atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pitavastatina, rosuvastatina e sinvastatina. Em geral, todas as estatinas atuam inibindo a redução de HMG-CoA a ácido mevalônico durante o estágio inicial da via do mevalonato para reduzir a produção de colesterol (Kromer e Moosmann, 2009; Thompson et al., 2003). Embora as estatinas sejam geralmente bem toleradas, um dos efeitos adversos clínicos mais importantes e conhecidos é a toxicidade do músculo esquelético (rabdomiólise) (Kobayashi et al., 2008). As anormalidades do músculo esquelético podem variar de mialgia benigna a miopatia grave. Embora uma mistura de mecanismos seja proposta e possa ser responsável pelos efeitos adversos musculares da estatina, acredita-se que os mecanismos mitocondriais desempenhem um papel importante (Golomb e Evans, 2008). O mevalonato não é apenas um precursor do colesterol, mas também de outros compostos, incluindo selenoproteínas, dolicol e ubiquinona (Kaufmann et al., 2006; Vaklavas et al., 2009). A capacidade das estatinas de inibir o mevalonato, portanto, também inibiria a produção de selenoproteínas como a glutationa peroxidase (GPx), que são enzimas importantes na manutenção do mecanismo de defesa antioxidante (Kromer e Moosmann, 2009). As estatinas também podem levar à depleção de ubiquinona, causando uma redução no consumo de oxigênio e na síntese de ATP (Beltowski et al., 2009). Além disso, estudos crescentes in vitro e in vivo demonstraram que a estatina também pode atuar diretamente nas mitocôndrias teciduais para induzir a transição de permeabilidade da membrana (MPT) dependente de Ca2+ de maneira dose-dependente (Beltowski et al., 2009; Velho et al., 2006 ). Também está associado ao aumento das espécies reativas de oxigênio (ROS) e estresse oxidativo mitocondrial, levando à morte celular e, portanto, contribuindo para lesão hepática e muscular (Beltowski et al., 2009; Velho et al., 2006).
ErvaCistanches, toda a planta seca de Cistanche deserticola YC Ma, ou Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight (família Orobanchaceae), são plantas parasitas que crescem predominantemente nas áreas desérticas do norte e nordeste da China (Siu e Ko, 2010).ErvaCistanchesé uma erva tônica chinesa revigorante do Yang que é usada principalmente para tratar a deficiência renal com sintomas como impotência, infertilidade, ejaculação precoce. A natureza pesada e enjoativa da erva também umedece os intestinos e ajuda a aliviar a constipação. É também uma erva chinesa que é tradicionalmente prescrita a pacientes para dores nos lombos e joelhos e é uma erva comumente usada em formulações chinesas para o tratamento de problemas musculares (Siu e Ko, 2010; Xiong et al., 1998). Curiosamente, isso também é consistente com os estudos científicos modernos que demonstraram as atividades anti-fadiga de um extrato rico em polissacarídeos e feniletanoides deErvaCistanchesem ratos pós-exercício, diminuindo o dano muscular e melhorando o armazenamento de ATP (Cai et al., 2010). Trabalhos recentes demonstraram que um extrato metanólico de Herba Cistanches poderia aumentar a geração de ATP mitocondrial (Leung e Ko, 2008). Siu e Ko (2010) demonstraram queErvaCistanchestambém poderia melhorar o status de glutationa mitocondrial mediando os níveis de síntese de glutationa e GPx, protegendo assim os tecidos do estresse oxidativo em corações de ratos. Siu e Ko (2010) também mostraram queErvaCistanchespoderia diminuir o conteúdo mitocondrial de Ca2+, reduzindo assim o MPT dependente de Ca2+. Além disso,ErvaCistanchestambém provou ser um forte antioxidante e sequestrador de radicais livres em vários órgãos, reduzindo o estresse oxidativo e as atividades de EROs em estudos in vivo (Lu et al., 1995; Sui et al., 2011). Mais interessante, na tentativa de determinar a fração ativa que contribui para a atividade anti-fadiga deErvaCistanches, verificou-se que o verbascoside foi o constituinte majoritário na fração ativa (Cai et al., 2010). Verbascosídeo também demonstrou reduzir a fadiga muscular em sapos, possivelmente devido às suas atividades antioxidantes (Liao et al., 1999), sugerindo que o verbascosídeo pode ser o componente bioativo que contribui para os efeitos benéficos da Herba Cistanches.
O objetivo deste estudo foi determinar se o uso de extrato aquoso de Cistanches à base de plantas (HCE) poderia reduzir a toxicidade muscular induzida pela sinvastatina in vitro. Foi levantada a hipótese de que o uso de HCE poderia corrigir os efeitos colaterais da toxicidade muscular causada pela sinvastatina. Também foi feita uma tentativa para determinar se os efeitos benéficos daErvaCistanchessão atribuídas à presença de verbascoside.
2. Materiais e métodos
2.1. Autenticação e preparação de materiais à base de plantas
Matéria prima de ervas deErvaCistanchesfoi adquirido de um fornecedor renomado em Guangzhou, China.ErvaCistanchesfoi autenticado quimicamente usando cromatografia em camada fina (TLC) de acordo com a Farmacopeia Chinesa (CP), 2010, com verbascoside e echinacoside como marcadores químicos (dados não mostrados). Mediante autenticação química, espécime de comprovante de herbário deErvaCistanchesfoi depositado no Museu do Instituto de Medicina Chinesa da Universidade Chinesa de Hong Kong (CUHK), com o número de espécime do comprovante 2014–3434.
Resumidamente, 1 kg da erva crua foi embebido por 1 h, seguido de extração duas vezes por aquecimento por 1 h sob refluxo a 100 graus usando 10 água destilada para cada extração. Os extratos aquosos (HCE) foram combinados e filtrados. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida a 60 graus. O extrato concentrado foi liofilizado até a secura. A percentagem de rendimento foi de 50,1 por cento p/p. Uma pequena quantidade foi usada para determinar a quantidade de verbascoside e echinacoside usando cromatografia líquida de ultra-performance (UPLC). Todo o pó extraído foi embalado a vácuo e armazenado até o uso.
2.2. Análise UPLC do extrato aquoso
As análises de UPLC foram realizadas usando o Waters Acquity Ultra Performance LC System (Waters, EUA). Todos os solventes necessários para as análises UPLC foram adquiridos do Departamento de Química da Universidade Chinesa de Hong Kong. Verbascoside e echinacoside foram adquiridos do National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, China. A solução de amostra foi injetada em uma coluna Waters Acquity UPLC BEH C18 (10{{20}} 2,1 mm2 id, tamanho de partícula 1,7 mm) com pré-coluna Waters ACQUITY UPLC BEH C18 VanGuard ( 5-2.1 mm2 id, tamanho de partícula 1,7 mm). Todos os solventes foram pré-filtrados com 0,45 mm de disco de filtro Millipore (Millipore) e desgaseificados. A eluição em gradiente foi realizada com os seguintes sistemas solventes: fase móvel A – acetonitrila; fase móvel B – água bidestilada/ácido fórmico (99,9/0,1; v/v). A eluição foi realizada com um procedimento de gradiente como segue: 0-5 min, 88 por cento B; 5–10 min, de 88 por cento B a 83 por cento B. A taxa de fluxo utilizada foi de 0,4 ml/min e a detecção foi realizada a 331 nm de acordo com CP (2010). Cada amostra (5 ul) foi injetada na coluna após filtração através de um disco de filtro de 0,2 mm. A identificação dos marcadores químicos foi realizada comparando os tempos de retenção e a absorbância de UV dos picos desconhecidos com os dos padrões. Uma curva de calibração foi traçada por uma série de concentrações de verbascoside e echinacoside (40, 20, 10, 5, 2,5 e 1,25 mg/ml) para quantificação. A quantificação de verbascoside e echinacoside dentro do extrato de ervas foi realizada em triplicata. O sistema foi monitorado por um computador equipado com o software Waters MassLynx para coleta, integração e análise de dados.
2.3. Cultura de células
A linha celular de músculo esquelético de rato L6 foi adquirida da American Type Culture Collection (ATCC, Manassa, VA, EUA). As células foram mantidas em densidade subconfluente em meio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM, ATCC, Manassas, VA, EUA) suplementado com 10 por cento v/v de soro fetal bovino (FBS) e 1 por cento de penicilina-estreptomicina (P/S), e incubado a 37 graus em uma atmosfera umidificada contendo 5 por cento de CO2 e 95 por cento de ar.
Para determinar os efeitos do HCE na toxicidade muscular induzida por estatinas, as células L6 foram tratadas com sinvastatina a 10 μM por 48 h para induzir toxicidade. HCE (nas concentrações 0, 250, 500, 1000 e 2000 ug/ml) ou verbascoside (nas concentrações 0, 20, 40, 80 e 160 μM) foram adicionados como co-tratamento com uma estatina para determinar se o extrato de ervas poderia prevenir a toxicidade da estatina induzida nas células do músculo esquelético e que, se verbascoside, poderia exercer efeitos protetores semelhantes aos do extrato aquoso de ervas.
Efeito protetor do extrato de Herba Cistanche na toxicidade induzida pela sinvastatina in vitro
2.4. Citotoxicidade in vitro
Células L6 (1x105/poço) foram semeados em {{0}}placas de cultura de fundo chato de poço (Iwaki, Japão) durante a noite, seguido de tratamento com 10 μM de sinvastatina, juntamente com ou sem várias doses de HCE ( 0–2000 ug/ml) ou verbascoside (0–160 μM), por 48 h. Meio simples (DMEM) foi adicionado aos poços de controle. O extrato de ervas e o composto foram dissolvidos em DMEM.
Após o tratamento de 48 h, o meio de todas as células foi descartado e 30 ul de 5 mg/ml 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,{{ 8}} brometo de difenil-tetrazólio (MTT; Sigma, EUA) em solução salina tamponada com fosfato (PBS) foram adicionados a cada poço e as placas foram ainda incubadas por 3 h a 37 graus. O sobrenadante foi então removido e 100 ul de DMSO foram adicionados a cada poço para dissolver os cristais roxos de formazan (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. EUA). A absorbância de cada amostra foi lida em 540 nm usando um leitor de microplacas (Biotek μ-Quant, EUA). Os resultados foram expressos como a porcentagem de absorbância de MTT em relação às células de controle.
2.5. Ensaio de coloração de Anexina-V FITC/PI
Células L6 (3 x105/poço) foram tratados com sinvastatina, juntamente com ou sem várias doses de HCE ou verbascosídeo. Em seguida, as células foram coletadas, lavadas e coradas com kit anexina-V FITC de acordo com o protocolo do fabricante (Trevigen, MD, EUA). Resumidamente, as células foram lavadas duas vezes com 1 x tampão de ligação e incubadas em 100 ul de solução de marcação contendo 1 ul de conjugado anexina-V FITC e 10 ul de PI no escuro por 15 min à temperatura ambiente. A fluorescência das amostras foi detectada por citometria de fluxo (Becton Dickinson FACSCanto II, EUA).
2.6. Ensaio de atividade de caspase 3
A atividade da caspase 3 foi determinada usando um ensaio fluorométrico de enzimas imunoabsorventes (Sigma) de acordo com as instruções do fabricante. Resumidamente, células L6 (3 105/poço) tratadas com sinvastatina, juntamente com ou sem várias doses de HCE verbascoside foram lisadas usando o tampão de lise. A 7-amino-4-metilcumarina (AMC) livre gerada pela clivagem proteolítica do substrato pela Caspase 3 foi medida e quantificada fluorometricamente com comprimento de onda de excitação em 360 nm e comprimento de onda de emissão em 460 nm com uma microplaca BMG FLUOstarOptima leitor (BMG LABTECH GmbH, Alemanha).
2.7. Ensaio de ATP celular
Células L6 (3x105/poço) foram tratados com sinvastatina, juntamente com ou sem várias doses de HCE ou verbascosídeo. Após o tratamento, as células foram coletadas e o teor de ATP foi medido usando o kit colorimétrico comercialmente disponível (Abcam, Reino Unido) por medição do teor de glicerol fosfato das células lisadas e leitura a 570 nm usando um leitor de microplacas (Biotek μ-Quant, EUA ). A medida da produção de ATP foi expressa em porcentagem em relação ao grupo controle.
2.8. Análise estatística
Os dados foram apresentados como médias7SD, Prism 5 for Window (versão 5.0c, GraphPad Software, Inc., EUA) foi usado para análise estatística. Diferenças significativas entre todos os grupos foram avaliadas por ANOVA de uma via, seguida pelo Teste de Comparação Múltipla de Bonferroni. Uma probabilidade de po0.05 foi considerada estatisticamente significativa.
3. Resultados
3.1. Análise UPLC do extrato aquoso de Herba Cistanches
A Fig. S1A mostrou o perfil UPLC de uma mistura padrão contendo echinacoside e verbascoside. Os pontos de tempo de retenção de cada um desses marcadores foram comparados com o perfil UPLC deErvaCistanchesextrato aquoso (Fig. S1B). A quantidade de echinacoside e verbascoside dentroErvaCistanchesextrato aquoso foi encontrado para ser {{0}},45 por cento p/p e 0,085 por cento p/p, respectivamente.
3.2. Efeito de HCE e verbascoside na citotoxicidade in vitro da sinvastatina em células musculares esqueléticas L6
Conforme mostrado na Fig. 1A, a sinvastatina causou citotoxicidade significativa para as células L6, conforme refletido pela redução significativa na viabilidade das células L6 a 10 mM de sinvastatina. O tratamento com HCE preveniu de forma dose-dependente e significativa a citotoxicidade induzida pela sinvastatina a 500, 1000 e 2000 mg/ml. Verbascoside exerceu uma tendência para melhorar a viabilidade de células L6 co-tratadas com sinvastatina. No entanto, nenhuma das concentrações atingiu significância estatística (Fig. 1B).
Fig. 1. Efeito protetor de (a) HCE; e (b) verbascoside na citotoxicidade induzida pela sinvastatina em células L6. Os valores representam médias 7DP (n¼3). Uma diferença significativa entre o tratamento apenas com sinvastatina e o grupo controle usando o teste t de Student: ### po0.{{10}}01. Diferença significativa entre todos os grupos tratados com sinvastatina com ou sem co-tratamento com HCE verbascoside usando ANOVA de uma via: ** po0,01,*** po0,001.
3.3. Efeito de HCE e verbascoside na morte celular induzida por sinvastatina em células musculares esqueléticas L6
Para examinar o modo de morte celular induzida pela sinvastatina e determinar o papel protetor de HCE ou verbascoside na morte celular induzida pela sinvastatina, a proporção de células apoptóticas foi detectada por coloração com iodeto de propídio (PI). Os resultados mostraram que a sinvastatina induziu um aumento significativo na proporção de células apoptóticas precoces (Anexina V-FITC positiva e PI negativa, Q4-2) e células apoptóticas/mortas tardias (Anexina V-FITC positiva e PI-positiva, Q2- 2) em relação ao grupo controle. O co-tratamento com HCE reduziu a proporção de células apoptóticas precoces e apoptóticas tardias/mortas de forma dose-dependente até 1000 mg/ml (Fig. 2A). Este efeito protetor também foi observado em grupos de co-tratamento com verbascoside. No entanto, nenhuma das concentrações testadas atingiu significância estatística (Fig. 2B).
Fig. 2. Efeito da sinvastatina com ou sem HCE ou co-tratamento com verbascoside na externalização de fosfatidilserina em células L6. As células foram coradas com Anexina-V FITC e I e detectadas por citometria de fluxo
3.4. Efeito de HCE e verbascoside na atividade da caspase 3 em células musculares esqueléticas L6 tratadas com sinvastatina
Como mostrado na Fig. 3A, 10 mM de sinvastatina induziu significativamente a atividade de caspase 3 em células L6, sugerindo apoptose induzida por sinvastatina para células L6 através da cascata de caspase. No entanto, em células L6 co-tratadas com sinvastatina e HCE, HCE dose-dependente e reduziu significativamente a atividade da caspase 3, sugerindo a capacidade de HCE para prevenir a apoptose induzida pela sinvastatina através da cascata de caspase. Por outro lado, embora o verbascoside também tenha exercido uma tendência para reduzir o aumento induzido pela sinvastatina na atividade da enzima caspase 3, apenas a concentração a 160 mM atingiu significância estatística (Fig. 3B).
Fig. 3. Efeito protetor de (a) HCE; e (b) verbascoside na atividade enzimática de caspase 3 induzida por sinvastatina em células L6. Os valores representam médias 7DP (n¼3–5).Uma diferença significativa entre o tratamento com sinvastatina isolada e os grupos de controle usando o teste t de Student: ###po0.001. Diferença significativa entre todos os grupos tratados com sinvastatina com ou sem HCE ou co-tratamento com verbascoside usando ANOVA de uma via: *po0.05, **p o0.01, ***po0.001.
3.5. Efeito do HCE na redução induzida pela sinvastatina na produção de ATP em células musculares esqueléticas L6
A sinvastatina (10 mM) reduziu significativamente a produção de ATP em células L6 em cerca de 60 por cento em comparação com o grupo controle (Fig. 4A). O co-tratamento com HCE atenuou de forma dependente da dose a redução na produção de ATP em células tratadas com sinvastatina, das quais apenas as concentrações de 500, 1000 e 2000 mg/ml atingiram significância estatística. Por outro lado, embora o verbascoside tenha exercido uma tendência para restaurar a produção de ATP em 50 mg/ml, não atingiu significância estatística (Fig. 4B).
Fig. 4. Efeito protetor de (a) HCE e (b) verbascoside na redução induzida pela sinvastatina na produção de ATP em células L6. Os valores representam médias 7DP (n¼3–5).Uma diferença significativa entre o tratamento com sinvastatina isolada e os grupos de controle usando o teste t de Student: ###po0.001. Diferença significativa entre todos os grupos tratados com sinvastatina com ou sem HCE ou co-tratamento com verbascoside usando ANOVA de uma via: *po0,05, **po0,01.
4. Discussão
Com o aumento da prevalência de doenças cardiovasculares (DCV) e pacientes diagnosticados com hipercolesterolemia globalmente, o uso de estatinas tornou-se mais comum. Embora as estatinas sejam em geral muito bem toleradas, a lesão muscular é um efeito colateral frequentemente relatado associado ao uso de estatinas que pode ocorrer de forma aguda semanas ou meses após o início da droga (Fine, 2003). Os sintomas musculares podem variar de problemas leves, por exemplo, dor, sensibilidade ou fraqueza com ou sem elevação da creatina quinase (CK), até a condição mais grave de rabdomiólise (Armitage, 2007; Hu et al., 2012). Devido à ocorrência desses efeitos colaterais e ao fato de não existir tratamento eficaz para a toxicidade muscular induzida por estatinas, as estatinas permanecem subutilizadas. Em uma ampla pesquisa com 10.409 indivíduos franceses realizada por meio de entrevista por telefone, 10% dos pacientes que receberam tratamento com estatina relataram sintomas musculares, dos quais 30% desses pacientes sintomáticos resultaram na descontinuação do tratamento (Rosenbaum et al., 2013).
Demonstramos pela primeira vez que o extrato aquoso deErvaCistanches, uma erva tradicional chinesa comumente usada, pode exercer um efeito protetor contra a toxicidade induzida pela sinvastatina in vitro em células musculares esqueléticas L6, sugerindo o potencial deErvaCistanchesextrato aquoso (HCE) por seu papel protetor contra a toxicidade muscular induzida por estatinas, que é um efeito colateral comum reconhecido em pacientes que tomam estatinas. A potente capacidade do HCE de proteger contra a toxicidade muscular induzida por estatinas seria, portanto, de grande potencial.
De acordo com a teoria tradicional da MTC, o Yang está relacionado ao metabolismo energético mitocondrial no corpo, e a prescrição de ervas revigorantes do Yang foi encontrada para aumentar a geração de ATP mitocondrial (Ko e Leung, 2007). Curiosamente, observamos uma redução na produção de ATP em células musculares esqueléticas L6 tratadas com sinvastatina, e essa redução na produção de ATP foi significativamente melhorada com o co-tratamento com HCE. Em nosso estudo, utilizando células musculares esqueléticas de ratos L6, demonstramos uma redução na viabilidade celular causada pela sinvastatina. Esta redução na viabilidade celular foi significativamente melhorada com o co-tratamento deErvaCistanchesde forma dose-dependente. Embora o mecanismo exato da toxicidade muscular induzida por estatinas não tenha sido totalmente elucidado, a apoptose induzida por estatinas de miócitos esqueléticos saudáveis foi sugerida como um fator contribuinte para a miopatia, o efeito colateral mais comum experimentado por usuários de estatinas (Dirks e Jones, 2006). . Em nosso estudo, observamos um aumento significativo de células apoptóticas induzidas pela sinvastatina, que foi associado com atividade da caspase 3 significativamente elevada. Esses dados também são consistentes com estudos anteriores, que demonstraram que várias estatinas podem induzir apoptose em mioblastos esqueléticos, miotubos e em células musculares esqueléticas humanas primárias diferenciadas por meio da ativação de atividades de caspase-9 e caspase-3 (Dirks e Jones, 2006). Nosso HCE foi capaz de evitar esse aumento induzido pela sinvastatina na apoptose ativada por caspase-3 de maneira dose-dependente.
ErvaCistanches
Além disso, a literatura anterior sugeriu que o verbascoside é um dos principais constituintes ativos dentroErvaCistanches. Verbascosídeo, também conhecido como acteosídeo, pertence ao membro dos glicosídeos feniletanoides, um grupo natural de compostos polifenólicos solúveis em água (Liao et al., 1999). Anteriormente, foi demonstrado que o verbascoside é um potente antioxidante que pode exibir fortes atividades antioxidantes e de eliminação de ROS (Liao et al., 1999). Em nosso estudo, para determinar se o verbascoside é o principal componente em nosso HCE que contribui para os efeitos benéficos observados, testamos os efeitos do verbascoside nas concentrações de 0–160 mM. Como demonstramos que nosso HCE está ativo na faixa de concentração de 250–2000 mg/ml, com base em nossos resultados de HPLC, que sugeriram que nosso HCE continha verbascoside na concentração de 0,085% em peso /wt, a concentração ativa de verbascoside deve variar entre 0,2125–1,7 mg/ml (ou seja, 0,34–2,72 mM), o verbascoside deve ser o constituinte ativo? No entanto, não conseguimos observar um efeito benéfico significativo do verbascoside com a faixa de concentração testada, embora tenhamos observado uma tendência dependente da dose para um efeito benéfico do verbascoside nas células musculares esqueléticas L6. Esses dados sugeriram que é improvável que o efeito benéfico de nosso HCE observado em células esqueléticas L6 seja atribuído ao efeito do verbascoside sozinho, sugerindo que outros componentes além do verbascoside podem ser responsáveis pelos efeitos benéficos observados. Também é possível que o verbascoside interaja com outros compostos bioativos dentro do extrato para contribuir para os efeitos benéficos. Experimentos adicionais usando fracionamento guiado por bioensaio serão úteis para fornecer mais informações sobre a descoberta dos componentes bioativos responsáveis por contribuir para os efeitos protetores observados do HCE na toxicidade muscular induzida pela sinvastatina.
Em conclusão, o presente estudo indica que o HCE pode exercer efeitos protetores potentes na redução induzida pela sinvastatina na viabilidade das células musculares in vitro. Esses resultados fornecem a evidência preliminar sugerindo que nosso extrato aquoso de HC pode ser de valor terapêutico como alimento funcional ou nutracêutico para pacientes hiperlipidêmicos que precisam interromper o tratamento com estatina devido à miotoxicidade induzida por estatina.
AgradecimentoEste estudo foi financiado pelo Food and Health Bureau HKSAR, Health, and Medical Research Fund no. 11120831.
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