O potencial dos polifenóis da salsa e sua capacidade antioxidante para ajudar no tratamento da depressão e da ansiedade: um estudo subagudo in vivo

Para mais informações. contatotina.xiang@wecistanche.com

Abstrato: Depressão e ansiedade são grandes problemas de saúde mental em todas as partes do mundo. Essas doenças estão associadas a vários fatores de risco, incluindo estresse oxidativo. Drogas psicotrópicas de natureza química têm demonstrado vários efeitos colaterais que elevam o impacto dessas doenças. Diante dessa situação, os produtos naturais aparecem como uma alternativa promissora. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos ansiolíticos e antidepressivos do Petroselinum sativumpolifenóisin vivo, bem como suas correlaçõesantioxidante propriedades in vitro.Ansiolíticoa atividade do extrato (50 e 100 mg/kg) foi avaliada pelos testes de campo aberto e câmara clara-escura, enquanto a atividade antidepressiva foi avaliada pelo teste de natação forçada. A atividade antioxidante do extrato foi avaliada pelo teste do radical livre 2,2-difenil-1-picrilhidrazil(DPPH) e pelo teste FRAP (capacidade redutora de ferro). O extrato fenólico mostrou efeitos ansiolíticos e antidepressivos muito potentes, principalmente na dose de 100 mg/kg, diminuindo o comportamento depressivo em camundongos (diminuição do tempo de imobilidade) e também o comportamento ansiolítico (a tendência à descoberta no centro e áreas iluminadas). )melhor ainda que os da paroxetina e bromazepam (medicamentos clássicos) concomitantemente com esses resultados o extrato também mostrou uma importante capacidade antioxidante. Esses resultados preliminares sugerem que Petroselinum satioum apresenta potencial ansiolítico e antidepressivo para uso como complemento ou fitomedicamento independente no tratamento de depressão e ansiedade.

Palavras-chave: Petroselinum sativum; polifenol; ansiolítico; tipo antidepressivo; antioxidante; farmacologia; fitoterapia; Produtos naturais

1. Introdução

Depressão e transtornos de ansiedade há muito são considerados problemas de saúde mental e constituem um fardo pesado para qualquer sociedade em que o estresse é onipresente. A Organização Mundial da Saúde (OMS) prevê que até 2030, a depressão, como uma doença potencialmente fatal, será a segunda principal causa de incapacidade em todo o mundo [1]. De acordo com as últimas estimativas da OMS, mais de 300 milhões de pessoas em todo o mundo sofrem de depressão, das quais mais de 260 milhões também têm transtornos de ansiedade [2].

O Manual Diagnóstico e Estatístico de Transtornos Mentais (DSM-V) definiu o transtorno depressivo maior não apenas como uma tristeza ocasional ou um surto de depressão, mas sim um humor deprimido ou perda de interesse ou prazer por pelo menos duas semanas consecutivas, episódios dos quais são frequentemente recorrente [3]. A OMS também define a depressão como "uma variedade de sintomas psicológicos e biológicos, como uma sensação geral de tristeza, perda de prazer e interesse, sentimento de culpa, sono perturbado (insônia ou sonolência) e apetite, sensação de fadiga (retardo psicomotor ), e falta de concentração". Nos casos mais graves, a depressão pode até levar ao suicídio [4].

A ansiedade, conforme definida pela OMS, é “um sentimento de perigo iminente indeterminado acompanhado de um estado de mal-estar, agitação, desamparo ou mesmo aniquilação”. Também pode ser descrito como um estado de medo antecipado causado pelo perigo potencial e incerto, embora sua causa não seja necessariamente consciente, ao contrário do medo que surge diante do perigo real. No entanto, essas duas emoções são caracterizadas por respostas fisiológicas semelhantes (aumento da pressão arterial, sudorese, taquicardia, etc.) e comportamentais (aumento do estado de alerta e evitação) [5].

Depressão e ansiedade são geralmente tratadas com medicamentos psicotrópicos, incluindo antidepressivos eansiolíticos(tranquilizantes), muitas vezes de natureza química, como paroxetina e benzodiazepinas. No entanto, o uso desses medicamentos apresenta certos limites e podem causar efeitos colaterais indesejados. Bromazepam é prescrito para o tratamento da ansiedade. No entanto, seu consumo vem com uma série de efeitos colaterais negativos, incluindo sonolência, sedação e perda de memória [6]. Dificuldade para dormir, perda de apetite, sonolência e disfunção sexual também são efeitos colaterais típicos da paroxetina, um antidepressivo da família dos inibidores da recaptação de serotonina (ISRS) usado para tratar transtornos depressivos maiores [7]. Como resultado desta eficácia limitada, a exploração de meios terapêuticos novos, mais eficazes e não tóxicos é muito apreciada.

As plantas medicinais podem ser uma fonte adequada de novas terapêuticas seguras e eficazes, especialmente porque muitas são conhecidas por apresentarem menos efeitos colaterais [8]. Várias plantas medicinais foram testadas nos distúrbios acima e produziram resultados muito agradáveis ​​que encorajaram mais estudos para descobrir propriedades ansiolíticas e antidepressivas de plantas adicionais [9].

Petroselinum satioum Hoffm., comumente conhecido como "salsa" ("maadnous" em árabe), é um membro da família Apiaceae. Apium crispum Mill, Apium Petroselinum L., Petroselinum Hortense Hoffm e Petroselinum crispum (Mill) Fuss. também são sinônimos de Petroselinum sativum Hoffm.[10. A salsa, como uma erva culinária originária da região do Mediterrâneo, tornou-se uma erva globalmente comum nos tempos modernos [11]. P. sativum tem uma série de propriedades benéficas, incluindoantioxidante, analgésicos, espasmolíticos, antidiabéticos, imunomoduladores e efeitos gastrointestinais [12]. Esses vários benefícios podem ser atribuídos aos componentes centrais da planta, como polifenóis (apigenina, quercetina, luteolina e kaempferol), vitaminas, carotenóides, cumarina e taninos [13]. A família Apiaceae engloba várias plantas conhecidas por suas atividades antidepressivas e ansiolíticas, como Coriandrum satioum L.[14], Pimpinella anisum L.[15], Carum carvi L.[16] para uma concentração variando entre 50 e 200 mg/kg.

Neste estudo, as potenciais atividades antidepressivas e ansiolíticas da salsapolifenóisforam avaliados pela primeira vez, juntamente com suaatividade antioxidante, para determinar se houve uma correlação.

2. Resultados

2.1. Avaliação da atividade antioxidante

2.1.1. Teste DPPH

A Figura 1 mostra a porcentagem de atividade antioxidante em função dos diferentes níveis de PSPE e BHTs. Os resultados obtidos revelam que nosso extrato e BHT apresentam atividade antirradicalar dependente da concentração. Ou seja, a porcentagem de inibição do radical DPPH aumenta com a concentração do extrato fenólico de P. sativum e BHT. O BHIT apresentou a maior atividade em relação ao nosso extrato. Para 0,5 ug/mL, o BHT atingiu uma porcentagem máxima de inibição de 90 por cento, que permaneceu constante para uma concentração de 1 ug/mL. Na mesma concentração, o extrato fenólico produziu uma inibição máxima de 58 por cento

O antioxidante sintético BHT mostrou uma atividade antiradical muito potente, com um IC50 de cerca de 0,024 ug/mL, superior ao registrado para o extrato fenólico de P sativum （cerca de 0,184 ug/mL） .

2.1.2. Teste FRAP

A Figura 2 mostra a variação da densidade óptica (DO) em função das diferentes concentrações de PSPE e BHT (controle positivo). Pode-se observar que as porcentagens de redução são proporcionais à concentração tanto do extrato quanto do BHT. Este último apresentou maior percentual de redução em relação ao extrato.

Para comparar a eficiência da fração polifenólica do P.sativoum(PSPE) com a do BHT, determinamos a concentração que reduziu 50% do FRAP (IC50).

BHT (O antioxidante sintético BHT) mostrou atividade antioxidante altamente potente com um IC50 de cerca de 0,09ug/mL, superior ao registrado para o extrato fenólico de P. sativum （cerca de 0,38 ug/mL ）.

2.2. Avaliação do Teste de Natação Forçada com Atividade Antidepressiva

A variação no tempo de inatividade no teste de natação forçada durante as três semanas do experimento é mostrada na Figura 3. O tempo de imobilidade durante o teste foi significativamente menor em camundongos tratados com PSPE (PSPE 50 mg/kg (34 s±3,286), PSPE 100 mg/kg (33,8s± 2,653)) em comparação com controles (Paroxetina (100,8s±6,837), Veículo (176s±6,550).

Esses resultados mostram que o efeito antidepressivo do extrato fenólico de P. sativum é maior que o da paroxetina.

2.3. Avaliação da Atividade Ansiolítica

2.3.1. Comportamento ansioso em campo aberto

A Figura 4 mostra a variação do tempo gasto no centro do teste de campo aberto durante as três semanas de tratamentos com extrato. Pode-se observar que os camundongos tratados com PSPE (50 e 100 mg/kg) passaram mais tempo na área central em relação aos grupos controle. Este aumento significativo é proporcional não apenas à duração do tratamento, mas também à concentração do extrato. O valor ótimo foi obtido com uma concentração de 100 mg/kg (37,4 s± 1,778, comparado a 33,4 s± 1,208 sat na dose de 50 mg/kg). Isso indica umaansiolíticoefeito desta planta.

A variação no número de telhas cruzadas durante o experimento de três semanas é mostrada na Figura 5. A análise mostrou um aumento notável no número de telhas atravessadas por camundongos tratados com PSPE (50 mg/kg (161,2 ± 5,490), 100 mg/ kg (173±10,104)) em comparação com os grupos tratados com bromazepam 1 mg/kg (115,8± 1,393) e veículo (147,4±1,568). Esses resultados indicam um efeito ansiolítico maior do FPPS mesmo do que o do bromazepam na dose de 1 mg/kg.

2.3.2. Comportamento Ansioso no Quarto Claro-Escuro

A Figura 6 apresenta os resultados da variação do tempo de permanência na câmara iluminada durante o período de estudo. Os resultados mostram um aumento progressivo no tempo gasto na câmara iluminada ao longo do tempo para camundongos tratados com PSPE. Este aumento é especialmente perceptível no dia 21. Neste teste, camundongos tratados com bromazepam e tratados com PSPE passaram significativamente mais tempo no compartimento iluminado (bromazepam 1 mg/kg (146,8 s ± 1,068), PSPE 50mg/kg (199,6 s± 6.838), PSPE 100 mg/kg (213,6s±9,331) em comparação com camundongos controle (veículo (75,8s±4,352)). Isso foi interpretado como evidência de um efeito ansiolítico do extrato polifenólico de P. sativum.

A Figura 7 mostra a variação no número de transições entre as câmaras claras e escuras durante este teste. Uma diferença notável foi encontrada durante os 21 dias entre camundongos tratados com PSPE (50 mg/kg (16±{{10}},548), 100 mg/ kg (12,4±0,510)) e camundongos controle (veículo (10±0,837),bromazepam 1 mg/kg (12±0,949). Esses resultados são consistentes com os resultados do tempo gasto na câmara iluminada, pois esses dois parâmetros são inversamente proporcional ao nível de ansiedade que os ratos apresentaram.

3. Discussão

Demonstramos neste estudo que o extrato fenólico de P. satioum apresenta atividade antioxidante in vitro e atividade ansiolítica e antidepressiva in vivo.

O ácido ferúlico e o ácido cinâmico demonstraram ter efeitos antidepressivos em alguns estudos [17,18], enquanto a quercetina e o hidroxitirosol demonstraram um efeito ansiolítico aprovado [19,20]. Esses compostos podem estar por trás do efeito observado.

A eficácia de um antioxidante pode ser exercida de diferentes formas, como a eliminação de radicais livres, a decomposição de radicais livres e também a quelação de íons metálicos [17]. Essa atividade pode ser avaliada por ensaios de FRAP e DPPH, sendo que este último, devido à sua rapidez, é frequentemente utilizado para triagem de moléculas presentes em extratos vegetais [18]. Nossos resultados mostraram atividade antioxidante no extrato fenólico de salsa. Trabalhos anteriores de Hinneburg et al.[21] mostraram que o extrato aquoso de salsa exerceu fraca atividade inibitória do radical DPPH, com um IC50 na ordem de 12.0±{{8} }.10 mg/mL (comparado ao extrato polifenólico em nosso estudo, 0,184 ug/mL). Por outro lado, o efeito quelante deste extrato foi mais eficaz em comparação com outros extratos usados ​​no mesmo estudo.

Estudos recentes também encontraram uma ligação entre transtornos de humor e estresse oxidativo [22,23] e estresse psicológico [24,25], abrindo novos caminhos para prevenir e/ou controlar a ansiedade e a depressão em relação à potencial aplicação de antioxidantes. Desrumaux et ai. [26] notaram que o déficit de vitamina E no cérebro de camundongos elevou os níveis dos principais sinais de estresse oxidativo e comportamentos que provocam ansiedade. Da mesma forma, ratos que receberam vitamina C revelaram recentemente que este composto tem um papel antidepressivo com base nos resultados do teste de suspensão da cauda [27]. Os polifenóis, incluindo flavonóides e ácidos fenólicos, são bem conhecidos por seus potentes efeitos antioxidantes [28,29]. O uso desses metabólitos fitoquímicos secundários como forma de evitar e controlar a ansiedade e a depressão pode ser uma estratégia promissora [9]. Um estudo realizado por Akinci et al. [30] demonstraram que a salsa é bem sucedida em minimizar os danos gástricos induzidos pelo estresse quando ingerida por via oral, apoiando o sistema de defesa antioxidante das células, o que se reflete em um aumento nos níveis médios de glutationa tecidual (53,31 ± 9,50) e nas atividades da superóxido dismutase. 15,18±1,05) e catalase (16,68±2,29).

O experimento de campo aberto é usado para avaliar a condição emocional de um animal. Animais que foram separados de sua gaiola e colocados em um ambiente diferente, muitas vezes demonstram angústia e ansiedade, apresentando alterações em todos ou alguns dos parâmetros, como diminuição da atividade ambulatorial, exploração e imobilização, mas um aumento na higiene comportamento [31]. O extrato de P.sativum na dose de 100 mg/kg produziu um efeito ansiolítico muito significativo, demonstrado pelo aumento significativo do tempo gasto no centro do campo e da atividade ambulatorial total. Este aumento foi maior do que o observado em camundongos tratados com bromazepam a 1 mg/kg.

O experimento de quarto claro-escuro também é útil para prever o efeito ansiolítico de medicamentos. Para medir o grau de ansiedade em camundongos durante este teste, dois parâmetros são observados: (1) A menor porcentagem de tempo que o animal passou na câmara escura está relacionada ao seu nível de ansiedade. Ou seja, quando o percentual de tempo gasto no compartimento iluminado é mínimo, a ansiedade é considerada alta e(2) o número de transições, ou seja, o número de passagens entre os dois compartimentos, está inversamente relacionado ao nível de ansiedade (menor número de transição significa alto nível de ansiedade)[32]. Os resultados deste estudo revelaram que o extrato polifenólico de P. sativum a 100 mg/kg mostrou um efeito ansiolítico ideal com base no aumento do tempo gasto pelo animal na câmara iluminada e no número de transições em comparação com os controles durante o período de estudo.

O experimento de natação forçada foi desenvolvido na década de 1970. Também é conhecido pelo nome de seu inventor como teste de Porsolt [33]. Nosso achado indica que o tempo de imobilidade dos camundongos tratados foi menor do que o dos camundongos controle, indicando um efeito antidepressivo do extrato fenólico de P. sativum. No entanto, essa diminuição do tempo de imobilidade pode ter sido a favor de um aumento no tempo de natação ou no tempo de escalada. Essa diferença é muito importante do ponto de vista neurofarmacológico, pois teoricamente, durante a natação forçada, os antidepressivos que produzem uma elevação predominantemente noradrenérgica ou dopaminérgica reduzem a imobilidade aumentando o tempo de escalada [34], enquanto aqueles que ativam o 5HT reduzem a imobilidade aumentando o tempo de natação [35]. Em termos de função do SNC, a maioria dos polifenóis interage diretamente com os sistemas de neurotransmissores [36]. Estudos realizados com salsa mostram predominância de flavonóides 37]. A ampla variedade de flavonóides encontrados em extratos medicinais tradicionais convencionais é relatada como tendo efeitos sedativos/ansiolíticos por ligação direta aos receptores GABAA [38].

Um estudo realizado por Priprem et al. [39]indica que o polifenol quercetina demonstra atividade ansiolítica após uma semana de administração repetida na dose de 300 mg/kg, que não é tão eficaz quanto o diazepam, que exibe seu efeito uma hora após a administração em doses menores. Pereira et ai. [40] mostraram que o ácido rosmarínico apresenta efeito ansiolítico em doses muito baixas (2 a 4 mg/kg). Outro exemplo é a apigenina, que demonstra uma afinidade seletiva e baixa para os receptores benzodiazepínicos produzindo uma atividade ansiolítica quase sem efeitos colaterais[41. Os flavonóides também desempenham um papel na depressão através da inibição da monoamina oxidase e do aumento resultante nos níveis de 5-HT, DA e norepinefrina em certas áreas do cérebro [42].

Aminoácidos excitatórios, como aspartato, glutamato, homocisteína e cisteína, estimulam as células pós-sinápticas, enquanto aminoácidos inibitórios, como alanina, glicina, GABA e taurina, suprimem o desenvolvimento de células pós-sinápticas 43]. Uma enzima chamada descarboxilase de L-aminoácidos aromáticos, também chamada de DOPA descarboxilase, triptofano descarboxilase, 5-hidroxitriptofano descarboxilase ou AAAD, que catalisa a respectiva descarboxilação de L-dopa e 5-hidroxitriptofano em dopamina e {{ 7}}hidroxitriptamina também pode desempenhar um papel. A salsa pode causar superexpressão dessa enzima, contribuindo para seu efeito antidepressivo. Um estudo realizado na Centella Asiatica, planta pertencente à mesma família Apiaceae, mostrou que o efeito antidepressivo dos triterpenos totais se deveu à melhora da função do eixo hipotálamo-hipófise-adrenocortical e ao aumento do conteúdo de neurotransmissores monoamina [44]. Esses estudos sugerem a presença de atividade ansiolítica e antidepressiva pelo extrato fenólico de P. sativum.

4. Materiais e Métodos

4.1. Material vegetal

Petroselinum sativum Hoffm. as partes aéreas foram coletadas durante a fase de pré-floração (primavera de 2018) da região de Tanounate no norte de Marrocos (34 graus 32'9"N 4 graus 38'24"W). A classificação, identificação e nome botânico desta planta foram verificados por um botânico qualificado Pr. Bari Amina. A amostra da planta está depositada no herbário da Faculdade de Ciências Dhar El Mahrez Fez (espécime voucher: 18TA5001).

4.2. Extração

A extração foi realizada como descrito por Slighoua et al. [11]. Resumidamente, 10 g das partes aéreas secas de pó fino de P. sativum foram misturados com metanol (100 mL) e macerados durante 3 h a uma temperatura de 50 graus. Em seguida, o filtrado foi concentrado em evaporador rotativo até a secura para garantir a completa evaporação do solvente. O extrato resultante foi redissolvido em água destilada (200 mL) e lavado com três hexano e clorofórmio (200 mL três vezes) para eliminar os pigmentos e outras impurezas. A fase aquosa final foi extraída com acetato de etila (200 mL três vezes). A fase orgânica (acetato de etila) foi concentrada para obter o extrato polifenólico. O rendimento da extração é de 10,52%.

Publicamos anteriormente um trabalho sobre o mesmo extrato demonstrado usando análise HPLC-DAD que é composto pelos seguintes polifenóis: (1) ácido ferúlico, (2) ácido cinâmico, (3) ácido gálico, (4) quercetina, (5) Miricetina, (6) Naringenina, (7) Hidrox-tirosol [11].

4.3. Animais de estudo

Neste estudo, camundongos (albino suíço) foram fornecidos pela Casa de Animais da faculdade de ciências Dhar el Mahraz Fez. Antes de serem incluídos nos experimentos, eles foram colocados em grupos de seis em gaiolas convencionais e tiveram um período de adaptação de duas semanas com livre acesso a comida e água e temperatura controlada de 22±2 graus e sob um ciclo claro/escuro de 12h/12h.

Os experimentos foram realizados de acordo com as normas internacionais para o Tratamento e Uso de Animais Experimentais [16] e o Comitê Interno de Ética Animal (#09-12/2019/LBEAS).

4.4. Avaliação da atividade antioxidante

4.4.1.2,2-Teste de Difenil-1-picrilhidrazil (DPPH)

O DPPH é um dos compostos químicos mais usados ​​para avaliar a atividade antioxidante de compostos fenólicos |45. DPPH possui um elétron desemparelhado em um átomo de ponte de nitrogênio. O princípio deste teste é resumido na capacidade do extrato de reduzir o radical livre DPPH roxo escuro em uma redução de cor amarelada mensurável por espectrofotometria [28]. Uma série de concentrações de extrato foram preparadas em metanol, 100 μL de cada um dos quais foi adicionado a 750 μL de uma solução metanólica de DPPH (0,004 por cento). Após um período de incubação de 30 min a 25 graus, a absorbância foi medida a 517 nm. Para o controle negativo, a amostra foi substituída por metanol. A porcentagem de DPPH foi determinada pela seguinte equação:

(1)I=[(Amostra em branco)/Em branco]×100

Na porcentagem de atividade anti-radical, Amostra é a absorbância da amostra e Branco é a absorbância do controle negativo.

4.4.2. Teste de Poder Redutor Ferroso (FRAP)

O poder redutor do ferro (Fe3 plus ) no extrato estudado foi determinado de acordo com o método descrito por Mechchate et al. 【28】. Resumidamente, 100 μL do extrato em diferentes concentrações foi misturado com 500μL de uma solução tamponada com fosfato （PBS,0,2 M, pH 6,6 ）e 500 μL de uma solução a 1% de ferricianeto de potássio K, Fe（CN）. Estes foram incubados em banho-maria a 50 graus por 20 min. Em seguida, 500 μL de uma solução aquosa a 10 por cento de ácido tricloroacético （TCA）, 100 μL de uma solução a 0,1 por cento de cloreto férrico FeCl3 e 0,5 mL de água destilada foram adicionados à mistura de reação. A leitura da absorbância desta mistura foi feita a 700 nm contra um branco contendo todos os reagentes do meio, exceto o extrato vegetal. Os resultados são expressos em 50% de concentração efetiva (EC50), que representa a concentração de antioxidantes necessária para obter uma absorbância de 0,5. Um aumento na absorbância corresponde a um aumento no poder redutor do extrato testado.

4.5. Teste de Natação Forçada com Atividade Antidepressiva (FST)

O modelo de Porsolt, ou teste de natação forçada, é um teste preditivo da atividade do tipo antidepressivo. Os camundongos são forçados individualmente a nadar em um recipiente cilíndrico cheio de água até a altura de 12 cm. O teste dura 6 minutos, mas apenas os últimos 4 minutos do teste são analisados. O animal é considerado imóvel quando flutua na posição vertical e realiza poucos movimentos para manter o equilíbrio na água (tempo de imobilidade).

Um total de quatro lotes de cinco camundongos cada foi usado para este teste. Todos os extratos vegetais foram administrados por gavagem por 21 dias, e o teste foi realizado 1 h após a administração dos extratos em 21 dias. O grupo A, o controle negativo, recebeu uma solução fisiológica como veículo. O Grupo B, o grupo controle positivo, recebeu paroxetina na dose de 11 mg/kg. Os grupos C e D receberam PSPE a 50 e 100 mg/kg, respectivamente.

Uma hora após a administração do extrato vegetal, o tempo de imobilidade foi contado por 6 min. Os primeiros dois minutos permitiram que o camundongo se adaptasse ao estresse e, em seguida, o camundongo ficou cansado e imobilizado com o tempo. O tempo de imobilidade foi contado em segundos e, em seguida, foi comparado com o tempo de imobilidade dos camundongos do grupo controle positivo (paroxetina) para referência [33].

4.6. Atividade An.xiolítica

4.6.1. Campo Aberto

O teste de campo aberto (OF) é usado para prever a atividade ansiolítica, pois os animais mostram um alto grau de evitação de uma área central em relação à periferia. Também é usado como um teste de exploração e locomoção. A área consistia em quatro paredes de madeira de 40 cm de altura dispostas em uma área de 50 x 50 cm, divididas em 25 ladrilhos de igual tamanho marcados por linhas pretas.

Um total de quatro lotes de cinco camundongos cada foi usado para este teste. Todos os extratos vegetais foram administrados por gavagem por 21 dias. Em seguida, o teste foi realizado 1 h após a administração do extrato vegetal nos dias 1,7,14, e o Grupo A, controle negativo, recebeu solução fisiológica como veículo. Grupo B, controle positivo, recebeu bromazepam na dose de 1 mg/kg . Os grupos C e D receberam PSPE a 50 e 100 mg/kg, respectivamente.

Após 60 min, o teste foi realizado colocando cada camundongo no quadrado central para explorar a arena para medir a atividade ambulatorial total dos camundongos (o número total de ladrilhos cruzados pelos camundongos, ou seja, o número de ladrilhos periféricos e o número de ladrilhos de azulejos centrais atravessados ​​pelos ratos com as quatro patas) e o tempo passado no centro do campo aberto [3146].

4.6.2. Teste de quarto claro-escuro

O teste de quarto claro-escuro também é usado para predizer a atividade ansiolítica, pois permite uma fácil avaliação dos comportamentos dos animais relacionados à ansiedade, analisando os movimentos do animal entre dois compartimentos de cores e iluminação diferentes. Animais mais ansiosos tendem a passar menos tempo na sala iluminada. A caixa de madeira clara-escura com dimensões 44 × 21 × 21 cm era composta por dois compartimentos preto e branco, ligados por uma passagem (um orifício de 7 × 7 cm no centro, separando os dois compartimentos e permitindo o acesso a um ou outro dos compartimentos). O compartimento iluminado foi iluminado por uma lâmpada.

Um total de quatro lotes de cinco camundongos cada foi usado para este teste. Todos os extratos vegetais foram administrados por gavagem por 21 dias. O teste foi realizado 1 h após a administração do extrato vegetal nos dias 1,7,14 e 21. O grupo A, controle negativo, recebeu uma solução fisiológica como veículo. O grupo B, controle positivo, recebeu bromazepam na dose de 1 mg/kg. Os grupos C e D receberam PSPE a 50 e 100 mg/kg, respectivamente.

Após 60 minutos, o teste de cinco minutos foi realizado colocando cada camundongo de frente para a abertura que une o compartimento escuro [47]. Após cada teste, a caixa foi limpa com álcool. Os parâmetros medidos foram o tempo gasto na câmara iluminada e o número de transições da câmara [48].

5. Conclusões

A salsa, uma erva culinária usada diariamente em todo o mundo, apresenta enormes benefícios à saúde e, através deste estudo, demonstrou ter uma notável atividade antidepressiva e ansiolítica, ainda melhor que as drogas clássicas, especialmente com a dose de 100 mg/kg. Na busca por um medicamento eficaz com menos ou quase nenhum efeito colateral, essa planta pode ser uma alternativa bem colocada. Este trabalho incentiva seu consumo diário, bem como seu desenvolvimento para um fitomedicamento bem estabelecido.

Mais pesquisas são necessárias para concluir este trabalho, incluindo a realização de outros testes comportamentais com o mesmo extrato para confirmar sua eficácia. Assim, um fracionamento bioguiado do extrato fenólico de P. satioum está planejado para identificar o componente chave responsável pelas atividades ansiolíticas e antidepressivas observadas e determinar seu mecanismo de ação preciso.

Referências
1. Friedrich, MJ Depressão é a principal causa de deficiência em todo o mundo. JAMA 2017, 317, 1517. [CrossRef] [PubMed]
2. Lim, GY; Tam, WW; Lu, Y.; Ho, CS; Zhang, MW; Ho, RC Prevalência de Depressão na Comunidade de 30 Países entre 1994 e 2014. Sci. Rep. 2018, 8, 2861. [CrossRef]
3. Associação Psiquiátrica Americana. Manual Diagnóstico e Estatístico de Transtornos Mentais (DSM-5®); Associação Psiquiátrica Americana: Washington, DC, EUA, 2013; ISBN 0-89042-557-4.

4. Dinga, R.; Marquand, AF; Veltman, DJ; Beekman, AT; Schoevers, RA; van Hemert, AM; Penninx, BW; Schmaal, L. Prevendo o curso naturalista da depressão a partir de uma ampla gama de dados clínicos, psicológicos e biológicos: uma abordagem de aprendizado de máquina. Trad. Psiquiatria 2018, 8, 1-11. [CrossRef]
5. Daviu, N.; Bruchas, MR; Moghaddam, B.; Sandi, C.; Beyeler, A. Ligações Neurobiológicas entre Estresse e Ansiedade. Neurobiol. Estresse 2019, 11, 100191. [CrossRef]
6. Sanabria, E.; Cuenca, RE; Esteso, M.Á.; Maldonado, M. Benzodiazepinas: Seu uso como medicamentos essenciais ou como substâncias tóxicas. Tóxicos 2021, 9, 25. [CrossRef] [PubMed]
7. Kanekar, S.; Sheth, CS; Ombach, HJ; Olson, PR; Bogdanova, OV; Petersen, M.; Renshaw, CE; Sung, Y.-H.; D'Anci, KE; Renshaw, PF Exposição à Hipóxia Hipobárica em Ratos Diferencialmente Altera a Eficácia Antidepressiva dos Inibidores Seletivos da Recaptação de Serotonina Fluoxetina, Paroxetina, Escitalopram e Sertralina. Pharmacol. Bioquímica. Comportamento 2018, 170, 25-35. [CrossRef]
8. Es-Safifi, I.; Mechchate, H.; Amaghnouje, A.; Jawhari, FZ; Bari, A.; Cerruti, P.; Avella, M.; Andriy, A.; Andriy, D. Plantas medicinais usadas para tratar problemas agudos do sistema digestivo na região de Fez-Meknes em Marrocos: um levantamento etnofarmacológico. Etnobotânica. Res. Aplic. 2020, 20. [CrossRef]
9. Amaghnouje, A.; Mechchate, H.; Es-Safifi, I.; Boukhira, S.; Aliqahtani, AS; Noman, OM; Nasr, FA; Conte, R.; Calarco, A.; Bousta, D. Avaliação subaguda da toxicidade e efeitos antidepressivos de Origanum Majorana L. Polifenóis em camundongos albinos suíços. Moléculas 2020, 25, 5653. [CrossRef]
10. Agyare, C.; Appiah, T.; Boakye, YD; Apenteng, JA Petroselinum crispum: Uma Revisão. Med. Especiarias Veg. Afr. 2017, 527-547. [CrossRef]
11. Slighoua, M.; Mahdi, I.; Di Cristo, F.; Amaghnouje, A.; Grafov, A.; Boucetta, N.; Bari, A.; Bousta, D. Avaliação das atividades estrogênicas e anti-inflamatórias in vivo do extrato hidroetanólico e da fração polifenólica de salsa (Petroselinum sativum Hoffm.). J. Etnofarmacol. 2020, 265, 113290. [CrossRef] [PubMed] 12. Farzaei, MH; Abbasabadi, Z.; Ardekani, MRS; Rahimi, R.; Farzaei, F. Parsley: Uma Revisão de Etnofarmacologia, Fitoquímica e Atividades Biológicas. J. Tradição. Queixo. Med. 2013, 33, 815-826. [CrossRef]
13. Chaves, DS; Fratini, FS; Assafifim, M.; de Almeida, AP; Zingali, RB; Costa, SS Composição Química Fenólica do Extrato de Petroselinum Crispum e seu Efeito na Hemostasia. Nat. Prod. Comum. 2011, 6, 1934578X1100600709. [CrossRef]
14. Mahendra, P.; Bisht, S. Atividade Anti-Ansiedade de Coriandru m Sativum Avaliada Usando Diferentes Modelos Experimentais de Ansiedade. Indian J. Pharmacol. 2011, 43, 574. [CrossRef]
15. Shahamat, Z.; Abbasi-Maleki, S.; Mohammadi Motamed, S. Avaliação dos efeitos antidepressivos de extratos aquosos e etanólicos de frutas Pimpinella Anisum em camundongos. Avicena J. Phytomed. 2016, 6, 322-328. [PubMed]
16. Es-Safi, I.; Mechchate, H.; Amaghnouje, A.; Jawhari, FZ; Al Kamaly, OM; Imtara, H.; Grafov, A.; Bari, A.; Bousta, D. Uma visão sobre as propriedades ansiolíticas e antidepressivas de Carum carvi L. e sua associação com sua atividade antioxidante. Vida 2021, 11, 207. [CrossRef]
17. Zheng, X.; Cheng, Y.; Chen, Y.; Yue, Y.; Li, Y.; Xia, S.; Li, Y.; Deng, H.; Zhang, J.; Cao, Y. Ácido Ferúlico Melhora o Comportamento Depressivo em Ratos Descendentes em Estresse Pré-Natal via Atividade Anti-Inflamatória e Eixo HPA. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 493. [CrossRef]
18. Diniz, LRL; de Souza, MTS; Barboza, JN; de Almeida, RN; de Sousa, DP Potencial Antidepressivo dos Ácidos Cinâmicos: Mecanismos de Ação e Perspectivas no Desenvolvimento de Medicamentos. Moléculas 2019, 24, 4469. [CrossRef]
19. Lee, B.; Yeom, M.; Shim, I.; Lee, H.; Hahm, D.-H. Efeitos protetores da quercetina em sintomas semelhantes à ansiedade e neuroinflamação induzida por lipopolissacarídeo em ratos. Evid. Complemento baseado. Alternar. Med. 2020, 2020, 4892415. [CrossRef]
20. Karkovic Markovic, A.; Tori's, J.; Bárbaro, M.; Jakobuši´c Brala, C. Hidroxitirosol, Tirosol e Derivados e Seus Efeitos Potenciais na Saúde Humana. Moléculas 2019, 24, 2001. [CrossRef]
21. Hinneburg, I.; Dorman, HD; Hiltunen, R. Atividades antioxidantes de extratos de ervas e especiarias culinárias selecionadas. Química Alimentar. 2006, 97, 122-129. [CrossRef]
22. Nunes, CS; Maes, M.; Roomruangwong, C.; Moraes, JB; Bonifácio, KL; Vargas, HO; Barbosa, DS; Anderson, G.; de Melo, LGP; Drozdstoj, S. Baixa qualidade de vida em transtornos do humor está associada ao aumento do estresse neuro-oxidativo e níveis de hormônio estimulante da tireóide basal e uso de estabilizadores de humor anticonvulsivantes. J. Eval. Clin. Pratique. 2018, 24, 869–878. [CrossRef] [PubMed]
23. Bonifácio, KL; Barbosa, DS; Moreira, EG; Conegliano, CF; Vargas, HO; Nunes, SOV; Moraes, JB; Maes, M. Aumento da toxicidade do estresse nitro-oxidativo como um dos principais determinantes do aumento da pressão arterial em transtornos do humor. J. Afeto. Desordem. 2021, 278, 226-238. [CrossRef] [PubMed]
24. Eick, SM; Barrett, ES; van't Erve, TJ; Nguyen, RH; Bush, NR; Milne, G.; Swan, SH; Ferguson, KK Associação entre estresse psicológico pré-natal e estresse oxidativo durante a gravidez. Pediatra Perinat. Epidemiol. 2018, 32, 318-326. [CrossRef]
25. McAllister, MJ; Basham, SA; Waldman, HS; Smith, JW; Mettler, JA; Butawan, MB; Bloomer, RJ Efeitos do Estresse Psicológico durante o Exercício em Marcadores de Estresse Oxidativo em Homens Jovens Saudáveis ​​e Treinados. Fisiol. Comportamento 2019, 198, 90-95. [CrossRef] [PubMed]
26. Desrumaux, C.; Risold, P.-Y.; Schroeder, H.; Deckert, V.; Masson, D.; Athias, A.; Laplanche, H.; Le Guern, N.; Blache, D.; Jiang, X.‑C. A deficiência de proteína de transferência de fosfolipídios (PLTP) reduz o conteúdo de vitamina E do cérebro e aumenta a ansiedade em camundongos. FASEB J. 2005, 19, 1–16. [CrossRef]