A diferença dos componentes químicos e das atividades biológicas das fatias de produtos crus e do vinho processado a vapor da Cistanche Deserticola

Apr 17, 2024

1. Introdução

Cistanche deserticolaé uma medicina tradicional chinesa comum e tem sido geralmente usado como tônico na China e no Japão há muitos anos, comumente conhecido como "ginseng do deserto".Cistanche deserticolafoi registrado pela primeira vez como nota máxima no "Clássico de Ervas da Matéria Médica de Shennong (Shen Nong Ben Cao Jing)" em cerca de 100 aC e usado para tratar várias doenças, incluindo deficiência renal, impotência, infertilidade feminina, leucorreia mórbida, metrorragia profusa (brancos) , sensação de frio na região lombar e joelhos e constipação crônica em idosos [1]. Até agora, vários constituintes principais foram isolados, como polissacarídeos [2, 3], glicosídeos feniletanóides (PhGs) [1, 4], iridóides [1] e ligantes [1, 5]. Entre eles,PhGs e polissacarídeossão os principais componentes biologicamente ativos emCistanche deserticola[6–9]. Experimentos farmacológicos modernos provaram queCistancheDeserticolapode aumentar a produção de testosterona e proteger os espermatozoides, estimular a proliferação celular e aumentar a sobrevivência celular, exibindo atividades marcantes para a potência sexual, melhorando a memória, antienvelhecimento, eliminação de radicais livres e neuroproteção [10–13].

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Para reduzir a toxicidade e/ou aumentar os efeitos, a maioria das ervas tradicionais chinesas devem ser processadas antes da prescrição. as etapas do processo tradicional incluem limpeza, processo de água (moagem em água, vapor e torrefação) e processo livre (aquecimento com vinho, vinagre, sal ou mel) [14]. Durante o processo, os componentes químicos podem ser alterados: o conteúdo relativo de certos componentes pode ser alterado ou novos componentes podem ser formados [15]. O processo da Cistanche deserticola tem uma longa história e a Cistanche deserticola deve ser processada por imersão em vinho de arroz e cozimento no vapor conforme descrito na Farmacopeia Chinesa (edição de 2015) [16]. Foi comprovado que o SPW influencia seus efeitos nos meridianos renais, de acordo com a teoria da medicina tradicional chinesa (MTC) [17]. O WSCD foi documentado pela primeira vez no "Tratado de Lei Gong sobre Preparação e Fervura de Matéria Médica (Lei Gong Pao Zhi Lun)" nas Dinastias do Norte e do Sul da China. O WSCD é melhor usado para tratar deficiências renais e proteger o sêmen, conforme registrado em "Taiping Shenghui Fang" na Dinastia Song da China. No entanto, não houve estudos comparativos sobre os componentes químicos entre RCD e WSCD até o momento.

Investigações farmacológicas modernas indicaram que o WSCD poderia tonificar o rim para garantir a essência, estimulando o eixo hipotálamo-hipófise-gônada em vários graus e é usado para o tratamento de deficiências renais, como deficiência de yang do rim [18]. Contudo, até agora, as diferenças nas atividades biológicas entre RCD e WSCD não foram pesquisadas. Recentemente, para facilitar a pesquisa experimental, o modelo animal com deficiência de yang do rim foi duplicado pela injeção de uma alta dose de hidrocortisona em ratos, nos quais os ratos apresentarão sintomas muito semelhantes aos descritos na deficiência de yang do rim da MTC [19, 20] . Ratos com deficiência de yang do rim sempre apresentam alguns sintomas como perda de peso, redução do consumo de alimentos, fraqueza, aumento da ingestão de água e diminuição da atividade. Com base neste modelo animal, as diferenças nos efeitos nutritivos renais entre o RCD e o WSCD foram detectadas e até revelaram a essência científica do processo tradicional chinês.

2. Materiais e métodos

2.1. Materiais e Produtos Químicos

As substâncias padrão, comoacteosídeo, isoacteosídeo, equinacosídeo, cistanosídeo A e 2- acetillacteosídeoforam adquiridos da Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd (Xangai, China). Cistanosídeo F, cistanosídeo C, osmanthusídeo B e tubulosídeo B foram adquiridos da Chengdu Pfeide Biotechnology Co. Ltd (Chengdu, China). A pureza de todos os padrões não foi inferior a 98%. Metanol e acetonitrila de grau HPLC foram adquiridos da Aladdin Chemistry Inc. A água deionizada foi obtida utilizando um sistema de água reagente MilliQ50 SP (Bedford, MA, EUA) para preparação de amostras e soluções móveis. Todos os outros solventes orgânicos utilizados neste estudo eram de grau analítico e adquiridos da Shanghai Chemical Co. Ltd (Xangai, China).

2.2. Coleta de Amostras

Toda a Cistanche deserticola crua (7 lotes de amostras) foi coletada pela Universidade Médica da Mongólia Interior nas províncias da Mongólia Interior e Ningxia. Todos foram identificados como cistanche deserticola YC Ma por Xiaoqin Wang, professor do Departamento de Farmacognosia da Inner Mongolia Medical University. Uma amostra do voucher foi depositada na Escola de Farmácia da Universidade Médica da Mongólia Interior. após a coleta, foram retiradas as inflorescências de Cistanche deserticola, os caules foram fatiados e secos em temperatura ambiente com ar e, em seguida, as fatias foram divididas aleatoriamente em dois grupos em cada lote: um é RCD e o outro foi utilizado para a preparação de WSCD .

Os WSCD foram preparados em laboratório de acordo com a farmacopeia chinesa (edição de 2015) [16], o que significa que os RCD fatiados foram embebidos em vinho de arroz com recipiente fechado por 6h até ficarem macios, cozidos no vapor em banho-maria por mais 12h até o a superfície fica preta e seca à temperatura ambiente com ar.

2.3. Análise de Componentes Principais (PCA)

A análise de componentes principais (PCA) é uma técnica sofisticada amplamente utilizada para reduzir as dimensões de problemas multivariados. Reduz a dimensionalidade do conjunto de dados original, explicando a correlação entre um grande número de variáveis ​​em termos de um número menor de factores subjacentes, sem perda significativa de informação. Neste estudo, as diferenças entre RCD e WSCD foram realizadas por PCA não supervisionado usando o software SIMCA 13.0 com base nas áreas relativas dos picos na cromatografia HPLC. Com a ajuda do PCA, foram encontradas as principais influências dos produtos químicos na classificação entre diferentes amostras.

2.4. Preparação de amostra

2.4.1. Preparação de Extratos para Animais

O RCD e o WSCD foram selecionados a partir das amostras coletadas e preparadas conforme descrito na Seção 2.2.

O RCD seco ao ar e fatiado foi pulverizado por um pulverizador (FW135, Tianjin Taisite Instrument Co., Ltd.), pesado com precisão de 1,0 kg, e embebido em etanol a 50% por 30 min, e as proporções de planta /etanol utilizado foi 1/10 (p/p). E então, foi extraído sob refluxo duas vezes por 1 h cada vez. os dois extratos foram combinados e filtrados e o etanol foi recuperado sob pressão reduzida a 60∘ C. te O extrato bruto total de PhGs foi seco em vácuo a 60∘ C e purificado por resina macroporosa. Finalmente, o extrato PhG do RCD foi obtido e pesado com precisão.

O extrato PhG do WSCD foi obtido seguindo o mesmo procedimento acima.

os sedimentos da extração dos PhGs foram secos ao ar e decotados duas vezes por 1,5 h de cada vez com 20 vezes de água. Os dois extratos foram combinados e centrifugados a 4.000 rpm por 10 min, e o sobrenadante foi concentrado e precipitado com etanol a 95%. após a centrifugação, o precipitado foi seco em vácuo a 60∘ C. Finalmente, oextrato de polissacarídeode RCD foi obtido e pesado com precisão.

O extrato polissacarídico de WSCD foi obtido seguindo o mesmo procedimento acima.

Os extratos de PhGs e polissacarídeos de RCD e WSCD foram suspensões mistas em água, respectivamente, quando os ratos foram tratados por via oral.

2.4.2. Preparação de Amostras para Determinação de PhGs

Os extratos de PhGs na Seção 2.4.1 foram pesados ​​com precisão a 0 0,15 g e extraídos por ultrassom com 50mL de solução aquosa de metanol a 50% por 40 min. Após resfriamento, a perda de peso foi reposta com metanol a 50%. Todas as amostras e solventes foram filtrados através de uma membrana de 0,45 µm antes da análise. O conteúdo de quatro PhGs em RCD e WSCD foi determinado por HPLC, e o total de PhGs foi determinado por espectrofotometria UV.

2.4.3. Preparação de Amostras para Determinação de Polissacarídeo

Os extratos de polissacarídeos na Seção 2.4.1 foram pesados ​​com precisão como 0,10 g e extraídos por ultrassom com 50 mL de água quente por 40 min; após o resfriamento, a perda de peso foi reposta com água. Todas as amostras e solventes foram filtrados através de uma membrana de 0,45 µm antes da análise.

2.5. Condição Cromatográfica de HPLC e Determinação dos quatro PhGs

A separação cromatográfica foi realizada em um sistema HPLC UltiMate 3000 (Thermo Fisher Scientific, EUA), equipado com uma bomba de gradiente duplo, um compartimento de coluna e um detector DAD . Os dados foram coletados e processados ​​usando um Sistema de Dados de Cromatografia ChromeLeon. As amostras foram separadas em um Agilent Zorbax SB-C18 (250mm×4,6 mm, 5 μm) com uma coluna de guarda C18 (4,6mm×12,5 mm, 5 μm). A fase móvel consistia em acetonitrila (A) e solução de ácido fosfórico 0,1% (B) a uma vazão de 1 mL/min. A eluição do gradiente é a seguinte: inicial 0–13 min, mudança linear de AB (5:95, v/v) para AB (15:85, v/v); 13–25 min, mudança linear para AB (20:80, v/v); 25–43 min, mudança linear para AB (25:75, v/v). O comprimento de onda do detector foi monitorado em 330 nm. A temperatura da coluna foi ajustada em 30∘ C e o volume de amostra injetado foi de 10µL [21]. A solução estoque contendo quatro padrões de referência foi preparada dissolvendo os padrões de referência em 50% de metanol até uma concentração final de 0,20 mg/mL para 2-acetilacteosídeo, 0,20 mg/mL para acteosídeo, 0,05 mg/mL para osmanthusídeo B, e 0,10 mg/mL para isoacteosídeo. A solução foi então diluída em cinco concentrações diferentes com três repetições para estabelecer curvas de calibração. O teor da amostra foi expresso em g/kg de peso bruto.

2.6. Determinação do total de PhGs

Os PhGs totais foram determinados usando o método de espectrofotometria UV no comprimento de onda de 330nm em um espectrofotômetro UV1000 (Shanghai Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.). A solução estoque foi preparada dissolvendo padrões de equinacosídeo em 50% de metanol até uma concentração final de 0,10 mg/mL e depois diluído em cinco concentrações diferentes com três repetições para estabelecer curvas de calibração.

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2.7. Determinação de Polissacarídeos

A determinação depolissacarídeosfoi realizado pelo método fenol-ácido sulfúrico. 1mL da solução amostra foi colocado em um tubo de ensaio de 20 mL com rolha de vidro, e 1 mL de solução de fenol a 6% e 5 mL de ácido sulfúrico concentrado foram adicionados e agitados por 5 min. A mistura foi transferida para banho-maria fervente por 10 minutos e resfriada à temperatura ambiente para detecção ultravioleta. A absorção ultravioleta foi monitorada a 480 nm em espectrofotômetro UV1000. O padrão de referência de D-glicose anidra foi pesado com precisão e dissolvido em água destilada até uma concentração final de 0,10 mg/mL. Em seguida, a solução foi diluída em cinco concentrações diferentes com três repetições para estabelecer curvas de calibração.

2.8. Experimentos com Animais

2.8.1. Animais e Habitação

Ratos SD machos com maturidade sexual (180-200 g) foram adquiridos na Fazenda Experimental de Animais de Xinglong (Pequim) (idade: 6 semanas de idade) e a licença para animais de laboratório era SCXK (Jing):2016-0003. Todos os procedimentos com animais foram aprovados pelo Comitê de Pesquisa em Animais da Universidade Médica da Mongólia Interior e realizados de acordo com as diretrizes do Instituto Nacional de Saúde em relação aos princípios de cuidados com animais (2004). Todos os animais foram mantidos em sistema de barreira com temperatura regulada de 21 a 23∘ C e umidade relativa de 40 a 65% e em ciclo claro/escuro de 12 horas. Os ratos receberam comida e água ad libitum e foram aclimatados ao ambiente acima durante uma semana.

2.8.2. Dosagem e Amostragem

Os ratos foram transferidos para gaiolas metabólicas individuais e divididos aleatoriamente em 6 grupos (?=10 em cada grupo). Eles receberam uma injeção intramuscular de 15 mg / kg de succinato de hidrocortisona sódica (adquirido da Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin, China) por 2 semanas, exceto para o grupo 1, que foi injetado com um volume igual de solução salina fisiológica. No 14º dia, foram coletados peso corporal, consumo alimentar, ingestão de água, volume de urina e atividade espontânea em 5 minutos para garantir se o modelo de deficiência de yang do rim foi feito com sucesso. A partir do 15º dia, 6 grupos foram tratados da seguinte forma: grupo 1 e grupo 2 (grupo modelo, M) foram tratados com igual volume de água destilada, grupo 3 (extrato PhGs do grupo RCD, PR) foram tratados com {{12 }}.42 g/kg de extrato de PhGs de RCD, que era igual a cerca de 1,8 g/kg de Cistanche deserticola crua e os outros grupos eram iguais, o grupo 4 (extrato de PhGs do grupo WSCD, PW) foi tratado com uma dose de { {17}},49 g/kg de extrato de PhGs de WSCD, grupo 5 (extrato de polissacarídeo do grupo RCD, SR) foram tratados com {{20}},18 g/kg de extrato de polissacarídeo de RCD, e o grupo 6 foi (extrato polissacarídico do grupo WSCD, SW) foram tratados com uma dose de 0,22 g/kg do extrato polissacarídico do WSCD. Todos os ratos foram tratados por perfusão gástrica por dia. Após um mês de tratamento, os ratos não tiveram alimentação por 12 horas antes da coleta de sangue. No dia seguinte, todos os ratos foram anestesiados e sacrificados. Durante os testes, os ratos foram pesados ​​uma vez por semana para ajustar a dosagem e pesados ​​novamente antes do sacrifício. Amostras de sangue foram coletadas em tubo Eppendorf com solução de EDTA-2Na a 10%. O soro foi separado por centrifugação a 2.000 rpm por 15 min e armazenado a -80 graus para uso posterior. Além disso, rins, testículos, epidídimo, próstata e vesícula seminal foram removidos e pesados ​​rapidamente. Após pesagem, os testículos foram congelados em nitrogênio líquido para determinação de SOD e MDA.

2.9. Análise do efeito hormonal e antioxidante

Os níveis de testosterona (T) e estradiol (E2) foram determinados no Centro de Inspeção de Qualidade Qingdao Kechuang por radioimunidade e método colorimétrico. Os testículos congelados foram pesados ​​e misturados com 20 vezes de soro fisiológico frio (P/P). O homogeneizado de testículo obtido pelo homogeneizado de tecido no banho de gelo foi centrifugado para obtenção do sobrenadante. O conteúdo de SOD e MDA do testículo foi determinado pelos kits SOD e MDA seguindo as instruções.

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2.10. Análise Estatística

A significância das diferenças entre os grupos foi comparada por meio do teste ANOVA unidirecional seguido do teste de Schefe com limite de significância de 0.05 utilizando o software SPSS 25.0. Todos os dados foram expressos como média ± desvio padrão (DP) (n=3).

3. Resultados

3.1. A análise das alterações de PhGs após SPW usando PCA

Para comparar as alterações de PhGs após SPW, 9 picos cromatográficos foram selecionados como picos característicos e identificados. Suas estruturas são mostradas na Figura 1, cujas áreas relativas dos picos foram calculadas para expressão quantitativa. O cromatograma de HPLC é mostrado na Figura 2, o que indica que o conteúdo relativo dos principais PhGs foi alterado durante o SPW. A análise de PCA nas áreas relativas dos picos de 9 componentes foi obtida para a discriminação de diferentes amostras. O RCD e o WSCD estavam distantes um do outro no gráfico dos escores (Figura 3(a)), o que indicou que as amostras foram classificadas em dois conglomerados. Portanto, acredita-se que os conteúdos dos constituintes químicos fossem diferentes. Para encontrar ainda mais os potenciais marcadores químicos para a discriminação, uma análise estatística estendida foi realizada para gerar o gráfico de carregamento Bi (Figura 3 (b)). Os picos 2, 3, 4, 6 e 7 diminuirão após o SPW enquanto os picos 5, 8 e 9 aumentarão, e todos eles foram os componentes mais importantes para distinguir o RCD e o WSCD. os conteúdos relativos do pico 1 não variam muito após o SPW.

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3.2. O conteúdo de polissacarídeos totais e PhGs mudou após SPW

Conforme mostrado na Figura 3 (b), 8 componentes (5, 8 e 9 aumentaram e 2, 3, 4, 6 e 7 diminuíram) mudaram significativamente e tiveram um grande impacto no agrupamento da amostra. Entre eles, o isoacteosídeo e o osmanthusídeo B foram os que mais aumentaram, enquanto o 2? -acetilacteosídeo e acteosídeo foram os que mais diminuíram. Então, o conteúdo do isoacteosídeo, Osmanthusida B, 2? -acetilacteosídeo e acteosídeo foram determinados por HPLC. Como mostrado na Figura 1, o pico 4 foi acteosídeo, o pico 5 foi isoacteosídeo, o pico 7 foi 2? -acetilacteosídeo, e o pico 8 foi osmanthusídeo B. Os PhGs totais em RCD e WSCD foram determinados pelo método UV e os polissacarídeos totais foram realizados pelo método fenol-ácido sulfúrico, os resultados foram mostrados na Tabela 1, isoacteosídeo, Osmanthusídeo B ,polissacarídeos totais e PhGsno WSCD aumentou significativamente em comparação com o RCD. 2? -acetilacteosídeo e acteosídeo diminuíram significativamente.

3.3. Foi feito o modelo de deficiência de Yang do rim induzida por hidrocortisona

Em comparação com o grupo normal, após 2 semanas de injeção intramuscular de 15 mg/kg de succinato sódico de hidrocortisona, o peso corporal, o consumo de alimentos e a atividade espontânea diminuíram significativamente (P<0.05) and the water intake and urine volume were increased; the results were shown in Table 2. The T and E2 levels in the serum of the model group were lower than normal group as shown in Figure 4. From the above, the kidney-yang deficiency model was successfully made.

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3.4. O impacto dos extratos no peso e índice médio das vísceras.

Todos os ratos e suas vísceras foram pesados ​​e então o índice médio de vísceras foi calculado. Comparado com o grupo N, o grupo M diminuiu significativamente o peso das vísceras do rim, vesícula seminal, epidídimo e testículo, o que também indicou que o modelo de deficiência de yang do rim induzido por hidrocortisona foi feito com sucesso. Em comparação com o grupo M, o peso de todas as vísceras observadas aumentou nos grupos PW e SR, o grupo PR aumentou o peso do testículo, epidídimo, vesícula seminal e próstata, e o grupo SW teve aumento do peso do rim, testículo, epidídimo e vesícula seminal. Comparado com os grupos PR, o grupo PW foi melhor nos rins, vesícula seminal e próstata. Não houve diferença significativa entre os grupos SR e SW no peso do testículo, epidídimo, vesícula seminal e próstata. Os resultados são mostrados na Tabela 3.

Em comparação com o grupo N, os índices de vísceras do rim, testículo, epidídimo e vesícula seminal estavam diminuídos no grupo M. Comparado com o grupo M, o grupo PW e SR aumentaram o índice de rim, testículo, próstata e vesícula seminal, os grupos PR aumentaram o índice de testículo, próstata e vesícula seminal, e o grupo SW aumentou o índice de rim, testículo e vesícula seminal. Comparado com os grupos PR, o grupo PW foi melhor nos rins, vesícula seminal e próstata. Os grupos SW e SR apresentaram índice semelhante de rim, testículo, vesícula seminal e epidídimo. Os resultados são mostrados na Tabela 4.

3.5. O impacto do extrato no nível hormonal (T e E2)

Como mostrado na Figura 4, em comparação com o grupo M, os níveis de T e E2 em todos os grupos de tratamento (grupo PW, PR, SW e SR) aumentaram significativamente (P<0.05). However, the PW group was better than the PR group in the level T and E2. The SR and SW groups had no significant difference.

3.6. O impacto dos extratos no efeito antioxidante

SOD é uma importante enzima antioxidante. O MDA é o produto da peroxidação lipídica, que é o indicador que reflete o grau de dano oxidante. O conteúdo de SOD e MDA afeta a extensão da capacidade oxidante e antioxidante. Conforme mostrado na Figura 5, em comparação com o grupo M, o efeito antioxidante em todos os grupos de tratamento (PW, PR, SW e SR) foi aumentado. O grupo SW teve o maior efeito antioxidante.

4. Discussão

Antes da aplicação clínica, os materiais brutos devem ser submetidos a técnicas de processo tradicionais chinesas. A vaporização é uma das abordagens tradicionais de processamento de algumas ervas medicinais chinesas, que confere uma cor preta produzida pela reação de Maillard [22], aumentando as quantidades de alguns componentes bioativos [23] e atividades farmacológicas. O WSCD, como um dos produtos de processamento, é melhor em termos de nutrição dos rins em comparação com o RCD, conforme documentado na edição de 2015 da Farmacopeia Chinesa. Neste estudo, os resultados do PCA indicaram que o SPW alterou o perfil químico do RCD. Além disso, 8 componentes dos PhGs mudaram significativamente. PhGs totais, polissacarídeos totais, isoacteosídeo e osmanthusídeo B foram os que mais aumentaram, enquanto 2? -acetilacteosídeo e acteosídeo diminuíram após SPW. Os resultados indicaram que o SPW poderia alterar os constituintes químicos do RCD. O conteúdo de PhGs com 1,3,{8}} porções glucopiranosil trissubstituídas (como acteosídeo, 2? -acetilacteosídeo e cistanósido C) diminuiu em WSCD, no entanto, as concentrações de seus isômeros com 1,3,{{13 }} a porção glucopiranosil trissubstituída (como isoacteosídeo e tableside B) aumentou, o que indicou que a transformação dos constituintes químicos pode ocorrer durante o SPW, e a reação de hidrólise será um dos motivos. As vias de transformação propostas são mostradas na Figura 6. O aumento de polissacarídeos após SPW também foi relatado no ginseng [24].

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Foi documentado que Cistanche deserticola revigora o rim e reverte a redução nos níveis de testosterona e possui efeito antioxidante e ação antiinflamatória [25], e PhGs e polissacarídeos foram os dois principais componentes biologicamente ativos em Cistanche deserticola. Como PhGs, o isoacteosídeo e o osmanthusídeo B tiveram efeitos antioxidantes e antiinflamatórios [26, 27]. Assim, foi estudada a comparação dos efeitos farmacológicos no nível de testosterona e no efeito antioxidante do RCD e WSCD. No modelo de deficiência de yang renal induzida por hidrocortisona, o sistema endócrino foi perturbado e o nível de hormônios sexuais diminuiu bastante no sangue. Neste estudo, os resultados da análise dos hormônios sexuais mostraram que tanto o RCD quanto o WSCD poderiam aumentar significativamente o nível de T e E2, e ambosPhGs e polissacarídeosmostrou a melhora dos hormônios sexuais. O WSCD foi melhor que o RCD, principalmente nos grupos de extrato de PhGs. Os resultados dos índices de vísceras mostraram que tanto PhGs quanto polissacarídeos podem melhorar o peso das vísceras e seus índices de peso. Nos grupos de extrato de PhGs, o WSCD é melhor que o RCD no aumento dos pesos e índices dos rins e das vesículas seminais. Além disso, Cistanche deserticola tem um efeito antioxidante significativo, especialmente nos grupos de extratos de polissacarídeos com WSCD. Conforme discutido acima, tanto o RCD quanto o WSCD poderiam melhorar a síndrome de deficiência de yang do rim; entretanto, o WSCD é melhor que o RCD no aumento do nível de T, E2, dos pesos e dos índices do epidídimo e do testículo. Os resultados do estudo dos efeitos farmacológicos indicaram que o SPW alterou os componentes químicos dos PhGs e aumentou o conteúdo de polissacarídeos, o que por sua vez aumentou o nível de hormônio sexual e aumentou o efeito antioxidante.

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5. Conclusão

O estudo teve como objetivo descobrir a mudança de PhGs, polissacarídeos totais e o efeito farmacológico em RCD e WSCD no rato com deficiência de yang do rim, especialmente no nível hormonal e no efeito antioxidante. este estudo demonstrou que o processo das ervas tradicionais chinesas pode alterar os seus constituintes químicos e afectar a sua bioactividade. É também sustentado que os produtos crus e os produtos transformados foram prescritos de forma diferente.nãoapenasna clínica.

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