Extrato de pérola solúvel fornece clareamento eficaz da pele ao antagonizar a endotelina
Mar 21, 2022
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Jing Wang MD1|Zhixiong Chen MSc2|Yaojia Lu BSc2|Lihua Zhang BSc3|Jiahuan Mo BSc2|Fumin Cao BSc2|Min Xie BSc3|Xinzhong Shen BSc3|Anquan Yang BSc3
Abstrato
Fundo:A incidência de distúrbios de pigmentação da pele tem aumentado globalmente. Isso exige produtos tópicos mais seguros e eficazes para clarear a pele e remover sardas. Neste estudo, levantamos a hipótese de queExtrato de pérola solúvel(SPE) pode possuir compostos antagonizantes de endotelina com boa pelebranqueamentoefeitos.
Objetivos: (a) Determinar o efeito e os mecanismos deSPEem células de melanoma B16 tratadas com ET-1-. (b) Explorar os efeitos citotóxicos de SPE em células de melanoma B16.
Métodos:O ensaio CCK-8 foi realizado para determinar como SPE e ET-1 afetam a taxa de proliferação de células de melanoma B16, o ensaio de lise de NaOH foi realizado para quantificar o conteúdo de melanina enquanto a atividade de tirosinase foi determinada por oxidação de DOPA teste. Os níveis de expressão de mRNA e proteína de TYR e TRP-1 foram determinados por ensaio qRT-PCR e ensaio de Western blot, respectivamente.
Resultados:Nós achamos issoSPEem concentrações de 0.1 e 1 ug/mL não tem efeito sobre a proliferação das células e 10 nmol/L ET-1 promoveu a proliferação de células de melanoma B16. Notavelmente, as células de melanoma B16 tratadas com 10 nmol/L ET-1 exibiram níveis de síntese de melanina, atividade de tirosinase, TYR e TRP-1 significativamente mais elevados em comparação com células não tratadas. Vale ressaltar que os efeitos do tratamento com 10 nmol/L ET{11}} foram abolidos com SPE de maneira dose-dependente.
Conclusões:O SPE inibe a endotelina, assim, o clareamento de forma segura e eficaz clareia a pele antagonizando a endotelina. Além disso, o SPE é seguro e eficaz.
PALAVRAS-CHAVE:Células de melanoma B16, endotelina-1, extrato de pérola solúvel,branqueamento
Cistanche Herbaé um ingrediente de clareamento da pele.
1|INTRODUÇÃO
Nos últimos anos, a pele mais nova e eficazbranqueamentocosméticos para uso externo foram colocados no mercado. Isso é atribuído ao desenvolvimento econômico e às mudanças nas necessidades de estilo de vida das pessoas de todas as gerações. A pele atualmente usadabranqueamentoos agentes incluem hidroquinona, ácido kójico, fosfolipase D1, placenta e vitamina A. Os distúrbios da pigmentação da pele estão principalmente associados à produção de melanina. É sintetizado através de um processo iniciado pela conversão da tirosina em dopa catalisada pela tirosinase. Dopa inicia uma série de reações bioquímicas complexas que levam à síntese de melanina. O mecanismo de clareamento do ácido diidro aspargo,1 hidroquinona e ácido kójico envolve a inibição da atividade da tirosinase, que é a enzima limitante da síntese de melanina.2 Ao fazê-lo, esses agentes diminuem a produção de melanina, resultando no clareamento da pele. 3 Por outro lado, a fosfolipase D1, placenta e ácido retinóico atuam reduzindo a quantidade de síntese de tirosinase.4 Embora esses agentes atinjam algum nível de clareamento da pele, seus mecanismos de clareamento não são claros. Além disso, são tóxicos e demoram mais para causar o clareamento da pele.
Portanto, é imperativo encontrar uma pele mais segura e eficazbranqueamentoagentes. A pesquisa sobre clareamento da pele pagou um alto prêmio à interação entre citocinas e melanócitos como uma avenida para desenvolver agentes eficazes de clareamento da pele. Os queratinócitos secretam citocinas como a endotelina (ET) quando expostos à radiação ultravioleta. Essas citocinas influenciam a migração de melanócitos, o desenvolvimento dendrítico e a produção de melanina.5 Assim, antagonizar os locais de ação dessas citocinas levará a uma pele mais branca.6 Shi et al (2011) relataram que o resveratrol, um novo antagonista da endotelina, clareia a pele. pele através de um mecanismo que envolve a inibição da atividade da tirosinase em melanócitos B16.7 Yang et al (2000) descobriram que o resveratrol tem como alvo a membrana dos melanócitos. Isso implica que ela passa apenas pela membrana do melanócito e da membrana do melanossoma para atingir locais onde inibe a produção de melanina.8 A tirosinase está localizada no melanossoma e, portanto, seus inibidores devem atravessar quatro camadas (estrato córneo, epiderme profunda, a membrana do melanócito e a membrana do melanossoma) para bloquear seu efeito.9 O resveratrol ultrapassa apenas duas camadas (o estrato córneo e a epiderme profunda) para inibir a atividade da tirosinase.10 Isso encurta o período de clareamento.
Harley (1993) descobriu que as pérolas na água doce escocesa, australiana e do Sri Lanka eram feitas de composição química semelhante, ou seja, carbonato de cálcio, 91,72 por cento, matéria orgânica, 5,94 por cento, água, 2,23 por cento, e outras substâncias, {{ 7}}.11 por cento .11 Em outros lugares, Zhang et al (2018) descobriram que os extratos de pérola conferem efeitos antioxidantes significativos in vitro.12,13 Yang et al (2016) descobriram que os extratos de pérola podem inibir a atividade da tirosinase em células B16F10, reduzindo assim a produção de melanina.14 Isso indicou que o extrato de pérola pode possuirbranqueamentoefeitos, mas o mecanismo envolvido não foi estudado. Aqui postulamos queSPEantagoniza a endotelina alterando a síntese de melanina e a atividade da tirosinase das células de melanoma B16. Nossos resultados mostram que os extratos de pérolas solúveis antagonizam a endotelina causando clareamento da pele.
2|MATERIAIS E MÉTODOS
2.1|Preparação e análise composicional de extrato solúvel de pérolas (SPE)
O pó de pérola foi dissolvido em ácido lático e o pH da mistura foi ajustado para 7.0 com PBS. A hidrólise enzimática foi iniciada com a adição de protease e o extrato foi filtrado com papel de filtro qualitativo de 10 μm. O sobrenadante foi obtido e liofilizado para preparar o extrato de pérola solúvel.
2.2|Análise da composição do pó liofilizado
Resumidamente, o teor de umidade doSPEfoi medido com o método de secagem atmosférica. Uma quantidade específica de amostra foi aquecida em um forno de secagem a 95-105 graus por 3 horas e pesada. As amostras foram secas repetidamente para obter um peso constante. O teor de umidade foi determinado como a diferença de massa antes e após o aquecimento. A amostra foi queimada resultando na formação de uma substância inorgânica denominada cinza. O método de pesagem da queima foi utilizado para medir a qualidade das cinzas, em que a diferença de qualidade antes e depois da queima foi considerada como o teor de cinzas. O método de Kjeldahl foi empregado para determinar o teor de proteína do SPE. O teor de peptídeos foi estimado conforme descrito anteriormente.15 O teor de polissacarídeos foi determinado usando o método antranona-ácido sulfúrico.
cistacheextrair
2.3|Cultura de células
Células de melanoma murino B16 (gentilmente cedidas pelo Stem Cell Bank, Chinese Academy of Sciences) foram cultivadas em Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) contendo 10 por cento de soro fetal bovino e 1 por cento de penicilina/estreptomicina em uma incubadora (BB150 Thermo Fisher Scientific) definido para 37 graus e 5 por cento de CO2. Após 3 dias de cultura, as células estavam em um estado quase fundido e basicamente espalhadas por todo o prato. As células foram lavadas com solução salina tampão fosfato (PBS) e passadas por digestão com 0,25 por cento de tripsina. As células foram contadas usando uma placa de contagem de células e suspensões de células preparadas em concentrações apropriadas. As suspensões celulares foram cultivadas em uma incubadora de células para experimentos subsequentes
2.4|Detecção de proliferação celular após tratamento com SPE e ET-1 pelo ensaio CCK-8
As células na fase de crescimento logarítmico foram cultivadas em placas de {{0}}poços a uma concentração de 1 × 104 células/mL em uma incubadora ajustada a 37 graus e 5 por cento de CO2 por 24 horas . Diferentes concentrações de SPE ({{10}}, 0,01, 0,1, 1 e 10 ug/mL) foram então adicionadas aos poços e deixadas em repouso por 24 horas. 10 por cento do reagente Cell Counting Kit-8 (CCK-8) (Jian Cheng Bioengineering Co.) foi adicionado a cada poço para medir a taxa de proliferação das células. A absorbância de cada poço foi lida em um comprimento de onda de 490 nm usando um leitor de microplacas. Cada grupo foi testado como três réplicas. O efeito de ET-1 (0,1, 1, 10 e 100 nmoL) na proliferação celular foi avaliado seguindo o mesmo protocolo. As células foram então divididas em três grupos: o grupo controle (nenhum tratamento foi administrado), o grupo ET-1 (as células foram tratadas com 10 nmoL ET-1 por 24 horas) e o grupoSPEgrupo (as células foram tratadas com 10 nmoL ET-1 por 24 horas e depois tratadas com 0,1, 1 ug/mL SPE por 24 horas).
cistanche tubulosaé um inibidor da tirosinase
2.5|Teste de atividade da tirosinase
10 μL de células (tratadas de forma diferente) foram semeados em cada poço de uma 96-placa de poço a uma densidade celular de (5-10) × 104 células/mL, e 100 μL do meio de crescimento foi adicionado a cada poço. As células foram então pré-cultivadas em uma incubadora ajustada a 37 graus e 5 por cento de CO2 por 24 horas. As placas foram centrifugadas a 2000 rotações por minuto durante 2 minutos e o sobrenadante foi descartado. As células foram lavadas três vezes com PBS depois e 50 μL de 1 por cento de solução Triton X-100 (Jian Cheng Bioengineering Co.) foi adicionado a cada poço. As células foram imediatamente armazenadas a -80 graus por 30 minutos e depois descongeladas à temperatura ambiente para atingir a ruptura completa das células. As células foram então pré-aquecidas a 37 graus por 5 minutos e 10 μL de solução de L-DOPA a 1 por cento foram adicionados. As células foram deixadas em repouso a 37 graus por 2 horas, e a absorbância da placa foi medida em um comprimento de onda de 490 nm usando um leitor de microplacas.
2.6|Teste de conteúdo de melanina
As células foram cultivadas em placas de {{0}}poços a uma densidade de (5-10) × 104 por poço. Cada poço continha 2 mL de meio de crescimento. As células foram incubadas por 24 horas em uma incubadora ajustada a 37 graus e 5 por cento de CO2. O sobrenadante foi descartado e os melanócitos foram tratados com 0,25% de tripsina por 3 minutos. 2 mL de meio DMEM contendo 10 por cento de FBS foi subsequentemente adicionado para parar a reação. Os melanócitos foram coletados em um tubo de centrífuga de 15 mL, centrifugados a 1000 rotações por minuto por 5 minutos, e o sobrenadante descartado. Os melanócitos foram lavados com PBS e colocados em tubos contendo 500 μL de solução de etanol/éter misturado na proporção de 1:1 e bem misturado por agitação. A mistura foi deixada repousar à temperatura ambiente durante 30 minutos e depois centrifugada a 3000 rotações por minuto durante 5 minutos. O sobrenadante foi descartado e 300 μL de 1N NaOH (contendo 10 por cento de DMSO) foi adicionado às células. Esta mistura foi deixada para reagir em banho-maria a 80 graus por 40 minutos para dissolver completamente a melanina. 200 μL da melanina dissolvida foi então transferido para uma placa de 96-poço e a absorbância foi medida em um comprimento de onda de 405 nm usando um leitor de microplacas.
2.7|Análise quantitativa de PCR em tempo real (qRT-PCR)
O RNA total foi extraído das células dos três grupos (Controle, ET-1 eSPEgrupos) usando o kit RNAiso Plus (TaKaRa Bio) e transcrita reversa em cDNA usando o kit de reagentes PrimeScript™ RT (TaKaRa Bio). o ensaio qRT-PCR foi realizado para detectar a expressão de -actina em cada amostra. Isso foi feito usando o corante verde SYBR. As sequências de primer 16 usadas (TaKaRa Bio) são mostradas na Tabela 1. As condições de PCR foram uma temperatura inicial de desnaturação definida em 95 graus por 30 segundos, 40 ciclos de desnaturação, temperatura de hibridização definida em 95 graus por 5 segundos e 60 graus por 34 segundos, respectivamente. Isso foi realizado em um sistema StepOne plus PCR em tempo real (Applied Biosystems). Os resultados de qRT-PCR foram analisados e expressos como expressão relativa de mRNA com base em valores de CT (ciclo de limiar) que foram posteriormente convertidos em alterações de dobra.
2.8|Análise de Western Blot
As proteínas totais foram extraídas das células usando Radio-Immunoprecipitation Assay (RIPA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). A concentração dos extratos de proteína foi determinada com o kit Bicinchoninic Acid Assay (BCA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). As proteínas foram então separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida de dodecilsulfato de sódio (SDS-PAGE), e as bandas resultantes foram transferidas eletroforeticamente para uma membrana de fluoreto de polivinilideno (PVDF). A membrana foi então bloqueada com 5% de leite em pó desnatado e incubada com anticorpos contra TYR, TRP-1 e -actina (Santa Cruz Biotechnology) a 4 graus por 24 horas. Em seguida, a membrana foi incubada com o anticorpo secundário (Goat Anti-Mouse IgG Abmart) por 1 hora à temperatura ambiente. As bandas de proteína foram detectadas usando a quimioluminescência aumentada (ECL) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.). A análise de varredura da tira foi realizada usando um sistema de análise Image J. -Actina foi utilizada como referência interna na análise da expressão proteica. As amostras foram executadas como réplicas independentes repetidas três vezes para cada grupo.
2.9|Análise estatística
As análises estatísticas foram realizadas usando o software GraphPad prism8. As diferenças dos grupos foram comparadas usando análise de variância unidirecional (ANOVA), e os resultados são apresentados como média ± SD P<.05 was="" considered="" statistically="">
Cistanche à venda: Cistanche é um sérum clareador
3|RESULTADOS
3.1|Análise composicional de SPE
A caracterização química mostrou queSPEcontinha um teor de umidade de 6.03 ± 0,16 por cento, teor de cinzas de 1,55 ± {{10}},11 por cento, teor de peptídeo de 7,52 ± {{16) }}.03 por cento, teor de proteína de 54,12 ± 0,18 por cento e teor de polissacarídeo de 0,09 ± 0,005 por cento. Esses resultados indicam que as proteínas foram as mais abundantes na matéria orgânica do SPE.
3.2|Efeito da SPE na proliferação de células de melanoma B16
Depois que as células de melanoma B16 foram tratadas com diferentes concentrações (0, 0.01, 0.1, 1 e 10 ug/mL) de SPE por 24 horas, a proliferação celular foi avaliada pelo ensaio CCK-8 (Figura 1A). Descobrimos que a proliferação de células de melanoma B16 tratadas com 0,01 ug/mL de SPE foi maior do que a do grupo em branco (P<.01). 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" spe="" had="" no="" effect="" on="" the="" proliferation="" of="" the="" cells.="" however,="" 10="" μg/ml="" of="" spe="" significantly="" inhibited="" the="" proliferation="" of="" b16="" melanoma="" cells="" (p=""><.01). thus,="" 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" of="">SPEfoi usado em experimentos subsequentes. Com base em considerações de segurança, como um componente natural dabranqueamentocosméticos, o SPE não é tóxico para as células nessas duas concentrações; assim, é seguro até certo ponto.
3.3|Efeito de ET-1 na proliferação de células de melanoma B16
As células de melanoma B16 foram tratadas com diferentes concentrações de ET-1 por 24 horas, e a proliferação das células foi avaliada por um ensaio CCK-8. Notavelmente, o tratamento de células de melanoma B16 com 0.1, 1 e 10 nmol/L de ET-1 promoveu a proliferação de maneira dependente da concentração, com 10 nmol/L de ET{{12} } produzindo a maior taxa de proliferação (P<.001). by="" contrast,="" 100="" nmol/l="" of="" et-1="" decreased="" the="" proliferation="" of="" cells="" (figure="" 1b).="" therefore,="" 10="" nmol/l="" was="" used="" in="" subsequent="">
3.4|SPE inibe a atividade da tirosinase em células de melanoma B16
Para explorar ainda mais o mecanismo inibitório deSPEna síntese de melanina, analisamos seu efeito sobre a enzima limitante de velocidade (tirosinase) no processo de síntese de melanina. A atividade da tirosinase nas células foi detectada pelo método de oxidação da L-dopa. Células de melanoma B16 tratadas com 10 nmol/L ET-1 mostraram atividade de tirosinase intracelular significativamente maior em comparação com células não tratadas (P < 0,01).="" no="" entanto,="" a="" atividade="" da="" tirosinase="" em="" células="" tratadas="" com="" 0,1="" ug/ml="" e="" 1="" ug/ml="" de="" tratamento="" com="" spe="" foi="" menor="" do="" que="" em="" células="" não="" tratadas="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,01).="" esses="" resultados="" mostram="" que="" a="" spe="" inibiu="" a="" atividade="" da="" tirosinase="" de="" maneira="" dependente="" da="" concentração="" (figura="">
3.5|SPE inibe a síntese de melanina em células de melanoma B16
Testamos ainda se os efeitos da SPE na produção de melanina em células de melanoma B16 foram mediados por ET-1 usando o método de lise de NaOH. Os resultados mostraram que o conteúdo de melanina nas células de melanoma B16 aumentou significativamente após o tratamento com 10 nmol/L de ET-1 em comparação com o grupo controle (P<.01). however,="" the="" melanin="" content="" in="" cells="" treated="" with="" the="" 0.1="" μg/ml="" and="" 1="" μg/ml="" of="" spe="" was="" significantly="" lower="" than="" in="" cells="" of="" the="" control="" group.="" moreover,="" the="" inhibitory="" effects="" of="">SPEna produção de melanina foram dose-dependentes. Os efeitos da SPE no conteúdo de melanina e na atividade da tirosinase foram semelhantes (Figura 2B). Dado que 0,1 ug/mL e 1 ug/mL de SPE não alteraram a proliferação de células de melanoma B16, a diminuição do teor de melanina nessas duas concentrações pode ocorrer por mecanismos desconhecidos.
3.6|Efeito da SPE nos níveis de mRNA de TYR e TRP-1
O mecanismo pelo qual a SPE alterou os efeitos de ET-1 em células de melanoma B16 foi determinado medindo os níveis de mRNA de TYR e TRP-1 em células que receberam diferentes tratamentos. Os níveis de mRNA de TYR e TRP-1 em células de melanoma B16 foram significativamente maiores (P<.01 and="" p=""><.001, respectively)="" after="" treatment="" with="" 10="" nmol/l="" et-1="" compared="" to="" cells="" of="" the="" control="" group.="" interestingly,="" spe="" treatment="" effectively="" inhibited="" the="" expression="" of="" tyr="" and="" trp-1="" mrna="" (p=""><.05, p=""><.05 for="" 0.1="" μg/ml,="" and="" p="" <="" .01,="" p="" <="" .01="" for="" 1="" μg/ml,="" respectively).="" altogether,="" these="" results="" show="" that="" treatment="" with="">SPEinibiu os níveis de expressão de TYR e TRP-1 mRNA de uma maneira dependente da concentração.
3.7|Efeito da SPE nos níveis de proteína TYR e TRP-1 em células de melanoma B16
A expressão proteica de TYR e TRP-1 em células de melanoma B16 foi detectada por Western blot. Encontramos níveis mais elevados de proteína de TYR e TRP-1 em células de melanoma B16 tratadas com 10 nmoL ET- 1 em comparação com o grupo controle (P<.05 and="" p=""><.01, respectively).="" this="" indicated="" that="" 10="" nmol/l="" et-1="" promoted="" the="" synthesis="" of="" melanin="" in="" the="" cells.="" this="" indicates="" that="" et-1="" may="" promote="" the="" synthesis="" of="" melanin="" by="" activating="" tyr="" and="" trp-1="" signaling="" pathways.="" in="" contrast,="" cells="" (treated="" with="" 10="" nmol="" et-1="" for="" 24="" hours="" and="" then="" treated="" with="">SPEpor 24 horas) apresentaram níveis de proteína significativamente mais baixos de TYR e TRP-1 (P<.001 and="" p=""><.001, respectively)="" than="" cells="" treated="" with="" 10="" nmol/l="" et-1.="" this="" indicated="" that="" spe="" antagonized="" the="" effect="" of="" et-1="" thereby="" inhibiting="" melanin="" synthesis="" (figure="">
4|DISCUSSÃO
A endotelina (ET) é um peptídeo bioativo natural sintetizado pelas células endoteliais do corpo humano. É composto por três isômeros: ET{0}}, ET-2 e ET-3 que sinalizam através de três receptores ET: ETA, ETB e ETC.17 ETA e ETB são os principais receptores expressos no sistema ET humano.18 O ET é liberado dos queratinócitos quando expostos à irradiação da radiação ultravioleta B (UVB). Quando o ET se liga aos receptores dos melanócitos, estimula a síntese de DNA e aumenta a atividade da tirosinase. Isso promove a rápida proliferação de melanócitos e síntese de melanina.19 ET-l promove a proliferação de melanócitos, formação dendrítica, adesão e migração.20 Aqui, descobrimos que 0,1, 1, 10 e 100 nmol/L ET-1 promoveu significativamente a proliferação celular. A proliferação foi maior em 10 nmol/L ET-1, o que é consistente com os resultados relatados por Geng et al (2011), que descobriram que ET-1 melhorou a proliferação e a síntese de melanina de melanócitos de pele de alpaca cultivados. 21 genes TYR e TRP-1 desempenham um papel na produção de melanina. De fato, um estudo anterior descobriu que os efeitos da endotelina-1 na atividade da tirosinase são mediados por receptores ETA.22 10 O tratamento com nmol/L de ET-1 em células de melanoma B16 aumentou a atividade da tirosinase e o conteúdo de melanina . Os resultados de qRT-PCR revelaram que os níveis de mRNA de TYR e TRP-1 nas células tratadas com 10 nmol/L ET-1 foram maiores do que no grupo controle. Isso confirmou que ET-1 promoveu a produção de melanina.
Além disso,SPEinibiu os efeitos da endotelina em células de melanoma B16. Na concentração de 10 ug/mL, exerceu efeitos tóxicos e, portanto, inibiu a proliferação de células de melanoma B16. No entanto, SPE não alterou a proliferação de células nas concentrações de 0.1 e 1 ug/mL. No entanto, na concentração de {{10}}.01 ug/mL, promoveu significativamente a proliferação celular quando comparado ao grupo controle. Esses resultados sugeriram que a SPE é segura em concentrações abaixo de 1 ug/mL. A SPE inibiu a produção de melanina induzida por ET-1-em concentrações de 0,1 e 1 ug/mL de maneira dose-dependente. Além disso, o tratamento com 0,1 e 1 ug/mL de SPE resultou em níveis mais baixos de mRNA de TYR e TRP-1 em comparação com o grupo controle. Além disso, o efeito inibitório da SPE foi dependente da concentração. A análise de Western blot revelou efeitos semelhantes de SPE em ambas as concentrações (0,1 e 1 ug/mL) nos níveis de proteína de TYR e TRP-1.
Nos melanócitos, o ET-1 liga-se ao receptor do Receptor de Endotelina tipo B (EDNRB) levando à ativação da fosfolipase C (PLC).23 Isso hidrolisa ainda mais o difosfato de fosfatidilinositol (PIP2) e ativa a proteína quinase C (PKC), alterando assim a permeabilidade dos canais iônicos.24 A mudança na permeabilidade leva à ativação de canais de Ca2 mais voltagem-dependentes e fosfolipase A (PLA).25 Eventualmente, isso ativa a síntese de melanina.26 Aqui, o mecanismo pelo qual SPE antagonizou ET{{ 8}} para inibir a produção de melanina foi estudado apenas preliminarmente. Como tal, a expressão do receptor EDNRB, bem como outros aspectos da síntese de melanina, como PKC, PKA e KIT27 merecem investigação adicional.
Os principais componentes químicos do pó de pérola são carbonato de cálcio e proteínas, enquanto outros, como porfirina e taurina, são menos abundantes.28 O extrato aquoso do pó de pérola contém principalmente proteínas. A queratina dura é a principal proteína do extrato aquoso. No entanto, o extrato de água também pode conter um pequeno número de oligoelementos.29Pesquisas farmacológicas modernas sugerem que a pérola pode promover a taxa metabólica do corpo humano, aumentar a viabilidade das células epidérmicas, retardar o envelhecimento das células e inibir a produção de melanina como além de outros efeitos farmacológicos como clareamento e desintoxicação de sardas.30 A caracterização química revelou que as proteínas são as biomoléculas mais abundantes no conteúdo de matéria orgânica do SPE. Assim, hipotetizamos que oSPEtambém teriabranqueamentoefeitos em células de melanoma B16. Nossos resultados confirmaram essa hipótese.
5|CONCLUSÃO E PERSPECTIVAS
ET{{0}} promove a proliferação de células de melanoma B16 e a síntese de melanina, ativando as vias de sinalização TYR e TRP-1. SPE em concentrações de 0,1 e 1 ug/mL inibe a síntese de melanina antagonizando assim os efeitos de ET-1 sem quaisquer efeitos citotóxicos em células de melanoma B16. Como tal,SPEé um potencial antagonista da endotelina que pode ser usado como um agente clareador da pele seguro e eficaz.
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