Resultados do Estudo Alemão da Doença Renal Crônica (GCKD) Associação de Apoio do Comprimento Relativo dos Telômeros com a Mortalidade em uma Grande Coorte de Pacientes com Doença Renal Crônica Moderada
Mar 12, 2022
Contato: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Federica Fazzini1, Claudia Lamina1, Julia Raschenberger & et al.
Internacional do Rim (2020) 98, 488–497; https://doi.org/10.1016/j.kint.2020.02.034
Copyright ª 2020, Sociedade Internacional de Nefrologia. Publicado pela Elsevier Inc. Este é um artigo de acesso aberto sob a licença CC BY
O comprimento dos telômeros é conhecido por estar inversamente associado ao envelhecimento e tem sido proposto como um marcador para doenças relacionadas ao envelhecimento. O desgaste dos telômeros pode ser acelerado por estresse oxidativo e inflamação, ambos comumente presentes em pacientes com doença renal crônica. Aqui, investigamos se o comprimento relativo dos telômeros está associado à mortalidade em uma grande coorte de pacientes com doença renal crônica estágio G3 e A1-3 ou G1-2 com proteinúria evidente (A3) na inscrição. O comprimento relativo dos telômeros foi quantificado no sangue periférico por um método de PCR quantitativo em 4.955 pacientes do estudo GCKD, uma coorte observacional prospectiva em andamento. O acompanhamento completo de quatro anos estava disponível de 4.926 pacientes nos quais registramos 354 mortes. O comprimento relativo dos telômeros foi um preditor forte e independente de mortalidade por todas as causas. Cada diminuição de 0 0,1 unidade de comprimento relativo dos telômeros foi altamente associada a um aumento de 14% no risco de morte (taxa de risco 1,14 [intervalo de confiança de 95% 1.06-1 0,22]) em um modelo ajustado para idade, sexo, TFGe basal, razão albumina/creatinina urinária, diabetes mellitus, doença cardiovascular prevalente, colesterol LDL, colesterol HDL, tabagismo, índice de massa corporal, pressão arterial sistólica e diastólica, proteína C reativa e albumina sérica. Isso se traduziu em um risco 75% maior para aqueles no nível mais baixo em comparação com o quartil mais alto de comprimento relativo dos telômeros. A associação foi impulsionada principalmente por 117 mortes cardiovasculares (1,20 [1.05-1.35]), bem como 67 mortes devido a infecções (1,27 [1.07-1.50]). Assim, nossos achados suportam uma associação de menor comprimento dos telômeros com mortalidade por todas as causas, mortalidade cardiovascular e morte por infecções em pacientes com doença renal crônica moderada.
PALAVRAS-CHAVE:doença renal crônica; infecções; mortalidade; comprimento relativo dos telômeros
Doença renal crônica(DRC) é uma doença complexa, e sua herdabilidade foi estimada em 30% a 70% .9–12 Nos últimos anos, estudos de associação de todo o genoma identificaram muitos loci genéticos associados à função renal e à DRC.13–17
No entanto, polimorfismos de nucleotídeo único de índice nos loci identificados explicam apenas uma parte menor da herdabilidade, e contribuintes genéticos adicionais podem estar faltando. Até o momento, apenas alguns pequenos estudos investigaram a associação entre LT e doença renal. Alguns estudos descobriram que LT curto se correlaciona com função renal prejudicada na população geral,18,19 bem como em pacientes com insuficiência cardíaca. DCV),21 bem como uma associação com duração22 e progressão da DRC.23 Pacientes que atingiram insuficiência renal tratados por hemodiálise são descritos como tendo LT reduzido em comparação com controles saudáveis,24–27 e LT reduzido está inversamente associado à mortalidade. 28 Apenas algumas investigações foram realizadas em pacientes renais não dependentes de diálise.21–23,29,30 Até onde sabemos, o presente estudo é o primeiro estudo prospectivo que investiga a associação entre RTL de leucócitos e causas de mortalidade em um grande coorte de DRC não dependente de diálise.
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RESULTADOS
Características basais da população do estudo
O RTL foi quantificado no sangue periférico por um método quantitativo de reação em cadeia da polimerase em 4.955 pacientes da AlemanhaDoença Renal Crônicaestudar. Um acompanhamento completo de {0}}anos estava disponível de 4.926 pacientes. As características basais desses 4.926 pacientes de acordo com os quartis do RTL são fornecidas na Tabela 1. O RTL variou de um mínimo de {{10}}.40 a um máximo de 2,31 (Figura complementar S1 ), com média ± DP de 0,95 ±0,19 e mediana de 0,92 (1º quartil ¼ 0,82; 3º quartil ¼ 1 .05). O RTL foi negativamente correlacionado com a idade (r ¼ –{{30}}},36, P < 0,001)="" e="" positivamente="" correlacionado="" com="" a="" taxa="" de="" filtração="" glomerular="" estimada="" (egfr;="" r="" ¼="" 0,17,="" p="">< 0,001)="" e="" albumina="" urinária–="" razão="" de="" creatinina="" (r="" ¼="" 0,05,="" p="">< 0,001).="" quando="" ajustamos="" o="" rtl="" para="" idade="" e="" sexo,="" não="" observamos="" mais="" correlação="" significativa="" com="" tfge="" e="" razão="" albumina-creatinina="" na="">
Acompanhamento prospectivo e mortalidade
Um total de 354 mortes ocorreu durante um período médio de acompanhamento de 4 anos (1483 dias). As causas de morte foram DCV, incluindo infarto do miocárdio, doença coronariana, morte súbita cardíaca, insuficiência cardíaca congestiva, embolia pulmonar, doença valvar cardíaca e acidente vascular cerebral isquêmico (117 pacientes, 33,1 por cento), infecções (67 pacientes, 18,9 por cento), doenças cerebrovasculares não isquêmicas causas (9 pacientes, 2,5 por cento), doença vascular periférica (7 pacientes, 2,{15}} por cento), insuficiência renal (8 pacientes, 2,3 por cento), várias outras causas (103 pacientes, 29,1 por cento) e causas desconhecidas ( 43 pacientes, 12,1 por cento).
Gráficos de incidência cumulativa mostram que a incidência de mortalidade por todas as causas (Figura 1a) aumenta com RTL mais curto, com a incidência mais alta com o quartil de RTL mais baixo. Nas curvas de função de incidência cumulativa de mortalidade cardiovascular (Figura 1b) e por infecção (Figura 1c), a diferença entre os quartis foi menos pronunciada, mas a ordem dos quartis foi a mesma.
Figura 1|Função de incidência cumulativa para (a) mortalidade por todas as causas, (b) mortalidade por doença cardiovascular (DCV) e (c) morte devido a infecções, por quartis (Q) de comprimento relativo dos telômeros (RTL). Q1 é o quartil que inclui pacientes com o RTL mais curto.
Os resultados dos modelos de regressão de Cox aplicando diferentes ajustes são fornecidos na Tabela 2 e mostraram uma associação significativa entre o RTL mais curto e o risco de mortalidade por todas as causas. Avaliada continuamente, cada diminuição de 0.1 unidades RTL foi associada a um aumento de 16% no risco de morte em um modelo ajustado para idade e sexo (taxa de risco [HR], 1,16; intervalo de confiança de 95% [CI], 1.08–1,24; P ¼ 1,7e-05). A associação permaneceu significativa após um ajuste prolongado para eGFR, razão albumina-creatinina na urina, diabetes mellitus e doença cardiovascular prevalente (modelo 2: HR, 1,16; IC 95%, 1,08–1,24), bem como os fatores de risco de DCV adicionais de baixa densidade colesterol de lipoproteína, colesterol de lipoproteína de alta densidade, tabagismo, índice de massa corporal, pressão arterial sistólica, pressão arterial diastólica, proteína C reativa e albumina sérica na linha de base (modelo 3: HR, 1,14; IC 95%, 1,06-1,22; P ¼ 3,5e-04). As análises de spline P não linear são apresentadas na Figura 2 e revelaram uma associação quase linear de RTL com mortalidade por todas as causas. Pacientes com o RTL mais curto (1º quartil) tiveram um risco 75% maior de mortalidade por todas as causas em comparação com aqueles no quartil com o RTL mais longo (Tabela Suplementar S1, modelo totalmente ajustado: HR, 1,75; IC 95%, 1,22–2,50 ; P=0,0024).
Em seguida, analisamos o que está impulsionando a associação de LRT com mortalidade por todas as causas (Tabela 2). Avaliamos as 2 causas específicas de morte mais frequentes e observamos que cada diminuição de 0,1 unidades RTL foi associada a um aumento de 20 por cento no risco de morte por DCV no modelo totalmente ajustado (HR, 1,2 0; IC de 95 por cento, 1.05–1,35; P ¼ 0,0052). A redução do RTL também foi significativamente inversamente associada à morte por infecções. Cada diminuição de 0,1 unidade de RTL foi associada a um risco 1.27-mais alto de morte devido a infecções (HR, 1,27; IC 95%, 1,07–1,50; P=0,0051). Observando as estimativas para os vários quartis na Tabela Suplementar S1, revelou para morte devido a infecções que as estimativas para cada um dos quartis 1, 2 e 3 foram igualmente elevadas em comparação com o quartil 4. A análise com outras causas de morte como bem como causas de morte desconhecidas foi obviamente muito heterogêneo e não revelou qualquer associação com RTL (dados não mostrados).
O gráfico dos resíduos de Schoenfeld escalonados e o teste em suposições de risco proporcional não sugeriram nenhum efeito variável no tempo para RTL em nenhum dos resultados investigados. Os HRs de subdistribuição para morte cardiovascular e por infecção, relatados na Tabela Complementar S2, são apenas ligeiramente atenuados em comparação com os HRs de causa específica.
We also evaluated whether the effect of RTL on the 3 different outcomes differed between men and women and for patients with and without diabetes mellitus, but we did not detect a significant interaction for these variables, or for age (all P values of interaction >0.1 nos modelos totalmente ajustados). Dado que recentemente observamos uma associação em forma de U entre a duração da DRC e o RTL,22 realizamos uma análise de sensibilidade adicionalmente ajustando a duração da DRC na linha de base definida como menos de 6 meses, entre 6 meses e 5 anos e mais de 5 anos. Este ajuste adicional resultou apenas em alterações marginais dos HRs obtidos para todos os 3 endpoints (Tabela Suplementar S3).
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DISCUSSÃO
Os resultados deste estudo mostraram uma associação significativa de LRT com mortalidade por todas as causas em uma coorte de DRC não dependente de diálise. RTL mais curto foi associado a um maior risco de mortalidade independentemente da função renal e dos fatores de risco tradicionais de DCV. Essa associação foi impulsionada pela morte por DCV, bem como pela morte por infecções.
Associação com mortalidade por todas as causas
Estudos anteriores,5,6,31–35com poucas exceções,36,37 demonstraram uma associação negativa entre LRT e mortalidade por todas as causas na população geral. O maior estudo até agora (n=64.637) foi realizado por Rode et al., com HR ajustada para mortalidade de 1,40 para o decil com o menor versus o decil com o maior RTL.35De acordo com esses resultados, nosso estudo mostrou a cada diminuição de 0.1 unidades RTL um risco 14% maior de mortalidade por todas as causas, o que se traduz em um risco 75% maior para aqueles no nível mais baixo em comparação com o mais alto quartil de RTL. Até onde sabemos, apenas Carrero et al.28investigaram a relação entre RTL e risco de mortalidade em pacientes com DRC. Eles estudaram 175 pacientes com doença renal em estágio terminal tratados por hemodiálise, dos quais 70 morreram durante uma média de 31 meses de observação. Os autores observaram que TL predisse independentemente a sobrevida do paciente após ajuste adicional para idade, sexo e inflamação. O estudo atual estende essas observações para um grupo muito maior de indivíduos com DRC que não necessitam de diálise.
Figura 2|Splines não lineares ajustadas (e bandas de confiança de 95%) para a associação entre o aumento do comprimento relativo dos telômeros (RTL) e a razão de risco (HR) de (a) mortalidade por todas as causas, (b) morte cardiovascular e (c) morte devido a infecções . HR é dado como escala logarítmica sobre os impostos. Grayline: modelo de ajuste 1 (ajustado por idade e sexo). Linha azul: modelo de ajuste 3 (ajustado por idade, sexo, estimado [continuação]
Associação com mortalidade por DCV
Até o momento, nenhum estudo investigou a associação de LRT com mortalidade por DCV em pacientes com DRC, embora esta seja a principal causa de morte nesses pacientes. Dependendo da etnia investigada e dos modelos de ajuste de dados, alguns, mas não todos, estudos na população geral relataram uma associação entre baixo RTL e desfechos de DCV.33,38–41Um forte apoio para uma associação causal veio de um estudo de randomização mendeliano no qual variantes genéticas associadas a RTL mais curtos foram associadas à doença cardíaca isquêmica.40No presente estudo, identificamos uma associação significativa de RTL com mortes cardiovasculares, com um risco 20 por cento maior com cada diminuição de RTL em 0,1 unidades, ou um risco 75% maior para aqueles pacientes no quartil com o LT mais curto comparado ao quartil com os TL mais longos. Esse achado está de acordo com nosso relato anterior de uma associação com eventos cardiovasculares prevalentes nesta população de pacientes: cada diminuição de RTL em 0,1 unidade foi significativamente associada a uma chance 6% maior de DCV prevalente em um modelo ajustado para idade, sexo, tabagismo, hipertensão, diabetes, colesterol de lipoproteína de baixa densidade, colesterol de alta densidade
colesterol de lipoproteína, proteína C reativa, eGFR e índice de massa corporal.21O acompanhamento prospectivo desses pacientes na presente investigação revelou que especialmente o quartil mais baixo de RTL estava associado a um risco marcadamente aumentado, enquanto os outros 3 quartis mostraram estimativas muito semelhantes (Figura 1b).
Associação com morte por infecções
Embora evidências experimentais apoiem o papel da senescência celular e LT curto na resposta imune prejudicada, estudos epidemiológicos são escassos, especialmente em pacientes com DRC. Helby et ai. conduziram o maior (n ¼ 75.309) estudo prospectivo de base populacional investigando RTL e o risco de hospitalização por doenças infecciosas e o risco de morte relacionada à infecção. Durante 7 anos de acompanhamento, eles observaram um risco maior de qualquer infecção no quartil com o RTL mais curto em comparação com o quartil com o RTL mais longo.42 Estudos anteriores com amostras menores relataram resultados conflitantes.32,43,44Nossos achados em pacientes com DRC descrevem pela primeira vez a associação entre RTL curto e maior risco de morte por infecções nesta população de alto risco.
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Mecanismo potencial
O mecanismo biológico subjacente à relação entre RTL e mortalidade ainda não está claro. A associação identificada por nosso estudo não elucida se o encurtamento do RTL está causalmente relacionado a doenças cardiovasculares e infecções. No entanto, um estudo de associação de todo o genoma seguido por uma análise de pontuação de risco genético combinando variantes principais em 7 loci genéticos mostrou uma associação dos alelos associados a RTL mais curto com risco aumentado de doença arterial coronariana. Esta descoberta fornece suporte possível para um potencial papel causal do RTL na DCV.45,46Além disso, a senescência celular induzida pelo atrito dos telômeros pode ser um gatilho da aterosclerose, bem como da arteriosclerose. O acúmulo de células senescentes no vaso contribui para a formação de placas ateroscleróticas e calcificações médias, resultando em aumento da rigidez arterial como característica dominante da doença arterial urêmica.47A maioria dos estudos mediu RTL no DNA de leucócitos periféricos. No entanto, uma estreita correlação tem sido demonstrada entre leucócitos e LT do tecido da parede aórtica.48Portanto, a senescência celular poderia afetar as células endoteliais levando à disfunção na parede vascular e promovendo a adesão de células imunes, um evento primário na aterosclerose. Além disso, telômeros curtos ativam p53 e autofagia em células progenitoras cardíacas, desestabilizando o equilíbrio de quiescência e proliferação em direção à diferenciação e senescência, levando à exaustão das células progenitoras cardíacas.49Foi demonstrado que a disfunção dos telômeros induz uma profunda repressão p53-dependente dos reguladores mestres da biogênese e função mitocondrial, o que leva ao comprometimento bioenergético devido à fosforilação oxidativa prejudicada e à geração de trifosfato de adenosina.50,51
Existem também várias ligações entre RTL e infecções. A perda de telômeros foi observada durante a diferenciação de células T,52em infecções virais crônicas,53e com a idade.54Além disso, LT leucocitário curto tem sido relatado como fator de risco em várias doenças relacionadas ao sistema imunológico.55e diabete.56O LT mais curto de leucócitos causa senescência celular que é seguida por uma redução da capacidade proliferativa das células imunes. A LT também pode estar envolvida em declínios da função imune relacionados à idade relacionados à resposta insuficiente a vacinas e infecções agudas.57–59Um papel potencial de TL em infecções também é apoiado por um recente estudo de associação genômica em uma população chinesa. Dorjee e colegas observaram uma associação entre um alelo redutor de TL e morte por infecção respiratória.60O atrito do RTL pode ser fortemente desencadeado pela presença de estresse oxidativo elevado, uma condição comum na DRC.61 Vários estudos in vitro e in vivo mostraram que o estresse oxidativo acelera o desgaste dos telômeros.62,63De fato, os telômeros, com seu alto teor de guanina, são altamente suscetíveis a danos oxidativos,64e quebras de DNA de fita simples induzidas por estresse oxidativo podem ser um fator importante para o encurtamento dos telômeros durante a replicação do DNA.65
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Pontos fortes e limitações
Os pontos fortes desta investigação incluem o grande tamanho da amostra de uma população bem definida com um seguimento médio de 4 anos com quase nenhuma perda de seguimento, homogeneidade da população de estudo e uma avaliação centralizada de LT e medidas de resultado. A medição do RTL especialmente é de extrema importância porque a padronização entre laboratórios não é fácil de realizar e, portanto, o processo deve ser realizado no mesmo laboratório sob exatamente as mesmas condições em termos de protocolo, gene de referência, instrumento, pessoal66 e DNA procedimento de extração.67
Existem algumas limitações para este estudo. Primeiro, o RTL foi medido em leucócitos periféricos. Sabe-se que a taxa de progressão para a senescência difere entre os subgrupos de linfócitos. 59Infelizmente, não havia dados disponíveis sobre a composição do tipo de células sanguíneas na Alemanha.Doença Renal Crônicaestudo e, portanto, não foi possível investigar esse aspecto. Conhecer RTL de vários tipos de células renais seria de interesse, mas não é possível obter em um grande estudo epidemiológico, pois isso exigiria material tecidual de biópsias. A segunda limitação inclui o desenho observacional do estudo, que não permite esclarecimento de causalidade ou mecanismo biológico. Terceiro, o estudo recrutou principalmente pacientes com DRC no estágio G3 ou A3, e os achados podem não ser generalizáveis para outros estágios da DRC. Quarto, a associação com causas específicas de morte pode ter sido limitada pelo poder estatístico, mas ainda estava presente para as duas principais causas específicas de morte. Finalmente, embora nossas análises tenham sido ajustadas para fatores de risco cardiovascular tradicionais, bem como parâmetros de função renal, não podemos excluir a possibilidade de confusão residual por fatores desconhecidos ou não medidos.
variáveis. No entanto, foi muito interessante ver que as estimativas de RTL ajustadas por idade e sexo para vários desfechos foram muito estáveis com ajustes adicionais para as outras variáveis, indicando que o RTL é relativamente independente de outras variáveis quando os dados são ajustados para idade e sexo.
Conclusões
A LT relativa curta quantificada a partir de leucócitos do sangue periférico foi independentemente associada à mortalidade por todas as causas durante 4 anos de seguimento em pacientes com DRC moderadamente grave. Essa associação foi impulsionada pela morte por DCV, bem como pela morte por infecções.
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MÉTODOS
População do estudo
O alemãoDoença Renal Crônica study is an ongoing prospective multicenter observational cohort. A detailed description of the study has been published previously.68 Briefly, 5217 patients under regular care by nephrologists were enrolled. Inclusion criteria were moderately reduced kidney function defined as eGFR of 30–60 ml/min per 1.73 m2 (stage G3, A1–A3) or an eGFR >60 ml/min por 1,73 m2 na presença de proteinúria evidente (estágio G1-G2, A3). Os critérios de exclusão foram etnia não caucasiana, transplante de órgão sólido ou medula óssea, malignidade ativa nos 24 meses anteriores à triagem, insuficiência cardíaca estágio IV da New York Heart Association e presença legal ou incapacidade de fornecer consentimento. Os parâmetros laboratoriais apresentados foram todos medidos a partir de bioamostras coletadas em um laboratório central, conforme descrito anteriormente.68 Informações sobre fatores sociodemográficos, histórico médico e familiar, medicamentos e qualidade de vida relacionada à saúde foram obtidas por pessoal treinado por meio de questionários padronizados. A doença cardiovascular prevalente no início do estudo foi definida como história de infarto do miocárdio não fatal, cirurgia de revascularização do miocárdio, angioplastia coronária transluminal percutânea, acidente vascular cerebral e intervenções nas artérias carótidas (endarterectomia carotídea e/ou angioplastia carotídea com balão ou implante de stent).
Todos os participantes forneceram consentimento informado por escrito e o estudo foi aprovado pelos comitês de ética de todas as instituições participantes e registrado no registro nacional de estudos clínicos (DRKS 00003971). Todos os métodos foram realizados de acordo com as diretrizes aprovadas e a Declaração de Helsinque. Os dados são coletados e gerenciados usando o Askimed (https://www.askimed.com) como uma plataforma web baseada em nuvem para a coleta e gerenciamento de formulários de relatórios de casos e dados laboratoriais.
Desfechos clínicos durante o acompanhamento prospectivo
Conforme descrito recentemente, 69 pacientes são acompanhados anualmente por pessoal treinado, alternando visitas presenciais com visitas telefônicas. Durante essas visitas, os dados sobre hospitalizações, eventos de desfecho e histórico médico são atualizados como parte de uma entrevista estruturada. Quaisquer relatórios de alta hospitalar são coletados dos médicos assistentes e/ou hospitais. Os endpoints são continuamente extraídos desses relatórios por um comitê de endpoints treinado e supervisionado composto por 3 médicos independentes de acordo com um catálogo de endpoints pré-especificado. As informações sobre a causa da morte são retiradas desses relatórios, bem como de certidões de óbito coletadas nos cartórios de registro civil sempre que o pessoal do estudo é informado da morte de um participante do estudo.
A análise atual inclui todos os endpoints que ocorreram até o acompanhamento de 4-anos. Se um paciente perdesse a visita de acompanhamento de 4-anos, incluímos todos os endpoints até 4,5 anos após a respectiva visita de referência. Portanto, o tempo de censura foi a data de acompanhamento de 4-anos ou 4,5 anos após a linha de base. O desfecho primário foi mortalidade por todas as causas. Para avaliar se as associações identificadas poderiam ser atribuídas a uma causa específica de morte, foram considerados como desfechos secundários óbitos por causas cardiovasculares e doenças infecciosas. O grupo de morte por DCV incluiu infarto do miocárdio, doença coronariana, morte súbita cardíaca, insuficiência cardíaca congestiva, embolia pulmonar, doença valvar cardíaca e acidente vascular cerebral isquêmico. Outras causas de morte também foram registradas, mas esses subgrupos não eram grandes o suficiente para realizar análises adicionais de causas específicas.
Medição de RTL
O DNA genômico foi extraído do sangue total em um laboratório central com o Chemagic Magnetic Separation Module I (PerkinElmer chromagen Technologie GmbH, Baesweiler, Alemanha). A análise atual foi baseada em 4.926 pacientes para os quais estavam disponíveis medições de RTL em amostras de sangue basais e dados sobre mortalidade. O RTL foi medido em quadruplicata usando um ensaio quantitativo baseado em reação em cadeia da polimerase desenvolvido por Cawthon70 e modificado conforme descrito anteriormente.71 Amostras de DNA foram executadas em reações de 15-ml contendo 1x Quantifast TM SYBR Green PCR master mix (Qiagen, Hilden, Alemanha), 10 ng de DNA, 1 mM de primer de telômero ou 250 nm de primer de gene 36B4 de manutenção. Determinamos a razão relativa do número de cópias repetidas dos telômeros (T) para o número de cópias do gene de cópia única (gene 36B4, que codifica a fosfoproteína ribossômica PO, localizada no cromossomo 12; S). As razões T/S são proporcionais ao RTL individual. A automação deste procedimento de alto rendimento resultou em medidas de controle de qualidade muito boas com um baixo coeficiente de variação inter-ensaio das relações T/S. Um DNA disponível comercialmente incluído em todas as placas quantitativas de reação em cadeia da polimerase foi usado para verificar o desempenho do ensaio ao longo de todo o estudo. O coeficiente de variação interensaio das razões T/S desta amostra analisada em 112 experimentos independentes foi de 9,6 por cento antes da normalização e diminuiu para 4,0 por cento após a normalização (Figura complementar S2).
Análise estatística
Comparamos as características basais dos participantes (Tabela 1) usando o teste de Kruskal-Wallis para variáveis contínuas e testes qui-quadrado para variáveis categóricas. As curvas de função de incidência cumulativa foram usadas para estimar a incidência cumulativa das diferentes causas de morte contabilizando o risco competitivo.72 Modelos de regressão de riscos proporcionais de Cox foram realizados para avaliar as associações de RTL com 3 desfechos: (i) mortalidade por todas as causas, ( ii) óbito por DCV e (iii) óbito por infecção. Para ambos os desfechos de causa específica (ii e iii), os pacientes foram censurados, caso a morte ocorresse por qualquer outra causa. Além disso, as associações com esses desfechos específicos de causa foram examinadas usando regressão de sobrevida de riscos competitivos, considerando todas as mortes por outras causas como eventos competitivos. Portanto, tanto os HRs de causa específica quanto os HRs de subdivisão são relatados para óbito por DCV ou infecções. Os modelos de riscos proporcionais de Cox foram ajustados usando 3 níveis diferentes de ajuste: modelo 1 ajustado para idade e sexo; modelo 2 ajustado adicionalmente para eGFR basal, razão albumina-creatinina na urina, DCV prevalente e diabetes; o modelo 3 ajustou ainda mais os fatores de risco de DCV tradicionais de colesterol de lipoproteína de baixa densidade, colesterol de lipoproteína de alta densidade, índice de massa corporal, tabagismo, pressão arterial sistólica e diastólica, proteína C reativa e albumina. A seleção das variáveis ajustadas nos diversos modelos baseou-se nas diferenças nas características clínicas entre os quartis de RTL fornecidas na Tabela 1. Nos modelos de regressão, o RTL foi analisado continuamente e como preditor categórico (em quartis de RTL). Dado que os resultados iniciais indicaram um risco maior, especialmente para valores baixos de RTL, a FC (específica da causa) também é relatada para os quartis 1, 2 e 3 em comparação com o quartil 4 como referência (Tabela Complementar S1). A análise posterior a jusante foi baseada na inspeção visual da P-spline para derivar a forma da relação entre RTL e risco de mortalidade. Utilizou-se o coeficiente de correlação de postos de Spearman para avaliar a associação entre as variáveis do estudo. Todas as análises estatísticas foram realizadas usando R 3.3.2 (https://www.r-project.org); Valores P<0.05 were="" considered="" statistically="">
REFERÊNCIAS
1. Moyzis RK, Buckingham JM, Cram LS, et al. Uma sequência de DNA repetitiva altamente conservada, (TTAGGG)(n), presente nos telômeros dos cromossomos humanos. Proc Natl Acad Sci US A. 1988;85:6622–6626.
2. Baird DM. Dinâmica dos telômeros em células humanas. Bioquimia. 2008;90:116–121.
3. von Zglinicki T, Martin-Ruiz CM. Telômeros como biomarcadores para o envelhecimento e doenças relacionadas à idade. Curr Mol Med. 2005;5:197–203.
4. Forero DA, González-Giraldo Y, López-Quintero C, et al. Comprimento dos telômeros na doença de Parkinson: uma meta-análise. Exp Gerontol. 2016;75:53–55.
5. Mons U, Müezzinler A, Schöttker B, et al. Comprimento dos telômeros de leucócitos e todas as causas, doenças cardiovasculares e mortalidade por câncer: resultados da meta-análise de dados de participantes individuais de 2 grandes estudos de coorte prospectivos. Am J Epidemiol. 2017;185:1317–1326.
6. Wang Q, Zhan Y, Pedersen NL, et al. Comprimento dos telômeros e mortalidade por todas as causas: uma meta-análise. Envelhecimento Rev. 2018;48:11–20.
7. Wills LP, Schnellmann RG. Telômeros e telomerase na saúde renal. J Am Soc Nephrol. 2011;22:39–41.
8. Kordinas V, Tsirpanlis G, Nicolaou C, et al. Existe uma conexão entre inflamação, atividade da telomerase e o status transcricional da transcriptase reversa da telomerase na insuficiência renal? Cell Mol Biol Lett. 2015;20:222–236.
9. Cañadas-Garre M, Anderson K, Cappa R, et al. Suscetibilidade genética à doença renal crônica – mais algumas peças para o quebra-cabeça da hereditariedade. Frente Genet. 2019;10:453.
10. Satko SG, Freedman BI. O agrupamento familiar de doença renal e fenótipos relacionados. Med Clin North Am. 2005;89:447–456.
11. Regele F, Jelencsics K, Shiffman D, et al. Estudos genômicos para identificar fatores de risco para doença renal com foco em pacientes com diabetes. Transplante Nephrol Dial. 2015;30:iv26–iv34.
12. Wuttke M, Köttgen A. Insights sobre doenças renais a partir de estudos de associação do genoma. Nat Rev Nephrol. 2016;12:549–562.
13. Böger CA, Gorski M, Li M, et al. Associação de loci relacionados à eGFR identificados pelo GWAS com incidentes de DRC e DRT. PLoS Genet. 2011;7: e1002292.
14. Chambers JC, Zhang W, Lord GM, et al. Loci genéticos que influenciam a função renal e a doença renal crônica. Nat Genet. 2010;42:373–375.
15. Köttgen A, Pattaro C, Böger CA, et al. Novos loci associados à função renal e doença renal crônica. Nat Genet. 2010;42:376–384.
16. Pattaro C, Teumer A, Gorski M, et al. Associações genéticas em 53 loci destacam tipos de células e vias biológicas relevantes para a função renal. Nat Comun. 2016;7:10023.
17. Wuttke M, Li Y, Li M, et al. Um catálogo de loci genéticos associados à função renal a partir de análises de um milhão de indivíduos. Nat Genet. 2019;51:957–972.
18. Bansal N, Whooley MA, Regan M, et al. Associação entre função renal e comprimento dos telômeros: o estudo do coração e da alma. Am J Nephrol. 2012;36:405–411.
19. Eguchi K, Honig LS, Lee JH, et al. O comprimento curto dos telômeros está associado à insuficiência renal em indivíduos japoneses com risco cardiovascular. PLoS Um. 2017;12:e0176138.
20. Wong LSM, Van Der Harst P, De Boer RA, et al. A disfunção renal está associada ao menor comprimento dos telômeros na insuficiência cardíaca. Clin Res Cardiol. 2009;98:629–634.
21. Raschenberger J, Kollerits B, Titze S, et ai. Associação do comprimento relativo dos telômeros com doença cardiovascular em uma grande coorte de doença renal crônica: o estudo GCKD. Aterosclerose. 2015;242:529–534.
22. Raschenberger J, Kollerits B, Titze S, et ai. Os telômeros têm maior plasticidade do que se pensava? Resultados do estudo Alemão da Doença Renal Crônica (GCKD) como uma população de alto risco. Exp Gerontol. 2015;72: 162–166.
23. Raschenberger J, Kollerits B, Ritchie J, et ai. Associação do comprimento relativo dos telômeros com a progressão da doença renal crônica em duas coortes: modificação do efeito pelo tabagismo e diabetes. Sci Rep. 2015;5:1–8.
24. Betjes MGH, Langerak AW, Van Der Spek A, et al. Envelhecimento prematuro das células T circulantes em pacientes com doença renal terminal. Int. Rim 2011;80:208–217.
25. Hirashio S, Nakashima A, Doi S, et al. Comprimento da cauda G telomérica e hospitalização por eventos cardiovasculares em pacientes em hemodiálise. Clin J Am Soc Nephrol. 2014;9:2117–2122.
26. Ramírez R, Carracedo J, Soriano S, et al. Senescência prematura induzida por estresse em células mononucleares de pacientes em hemodiálise de longa duração. Am J Kidney Dis. 2005;45:353–359.
27. Tsirpanlis G, Chatzipanagiotou S, Boufidou F, et al. A atividade da telomerase está diminuída nas células mononucleares do sangue periférico de pacientes em hemodiálise. Am J Nephrol. 2006;26:91–96.
28. Carrero JJ, Stenvinkel P, Fellström B, et al. O atrito dos telômeros está associado à inflamação, baixos níveis de fetuína-A e alta mortalidade em pacientes em hemodiálise prevalentes. J Intern Med. 2008;263:302–312.
29. Mazidi M, Rezaie P, Covic A, et al. Atrição dos telômeros, função renal e doença renal crônica prevalente nos Estados Unidos. Oncotarget. 2017;8:80175–80181.
30. Kidir V, Aynali A, Altuntas A, et al. Atividade da telomerase em pacientes com doença renal crônica estágio 2-5D. Nefrologia. 2017;37:592–597.
31. Batsis JA, Mackenzie TA, Vasquez E, et al. Associação de adiposidade, comprimento dos telômeros e mortalidade: dados do NHANES 1999-2002. Int J Obes. 2018;42:198–204.
32. Fitzpatrick AL, Kronmal RA, Kimura M, et al. Comprimento dos telômeros de leucócitos e mortalidade no estudo de saúde cardiovascular. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2011;66A:421–429.
33. Needham BL, Rehkopf D. Comprimento dos telômeros de leucócitos e mortalidade no National Health and Nutrition Examination Survey, 1999–2002. Epidemiologia. 2015;26:528–535.
34. Pusceddu I, Kleber M, Delgado G, et al. Comprimento dos telômeros e mortalidade no estudo de risco e saúde cardiovascular de Ludwigshafen. PLoS Um. 2018;13:e0198373.
35. Rode L, Nordestgaard BG, Bojesen SE. Comprimento dos telômeros de leucócitos do sangue periférico e mortalidade entre 64 637 indivíduos da população geral. J Natl Cancer Inst. 2015;107:djv074.
36. Loprinzi PD, Loenneke JP. Comprimento dos telômeros de leucócitos e mortalidade entre adultos dos EUA: modificação do efeito pelo comportamento da atividade física. J Sports Sci. 2018;36:213–219.
37. Gao X, Zhang Y, Mons U, et al. Comprimento dos telômeros de leucócitos e escore de risco de mortalidade baseado em epigenética: associações com mortalidade por todas as causas em idosos. Epigenética. 2018;13:846–857.
38. D'Mello MJJ, Ross SA, Briel M, et al. Associação entre comprimento dos telômeros leucocitários encurtados e desfechos cardiometabólicos: revisão sistemática e metanálise. Circ Cardiovasc Genet. 2015;8:82–90.
39. Haycock PC, Heydon EE, Kaptoge S, et ai. Comprimento dos telômeros leucocitários e risco de doença cardiovascular: revisão sistemática e metanálise. BMJ. 2014;349:g4227.
40. Madrid AS, Rode L, Nordestgaard BG, et al. Comprimento dos telômeros curtos e
cardiopatia isquêmica: estudos observacionais e genéticos em 290.022 indivíduos. Clin Chem. 2016;62:1140–1149.
41. Mwasongwe S, Gao Y, Griswold M, et al. Comprimento dos telômeros de leucócitos e doença cardiovascular em afro-americanos: The Jackson Heart Study. Aterosclerose. 2017;266:41–47.
42. Helby J, Nordestgaard BG, Benfield T, et ai. O comprimento mais curto dos telômeros de leucócitos está associado a um maior risco de infecções: um estudo prospectivo de 75.309 indivíduos da população geral. Hematologica.2017;102:1457–1465.
43. Cawthon RM, Smith KR, O'Brien E, et al. Associação entre comprimento dos telômeros no sangue e mortalidade em pessoas com 60 anos ou mais. Lanceta. 2003;361:393–395.
44. Njajou OT, Hsueh WC, Blackburn EH, et al. Associação entre comprimento dos telômeros, causas específicas de morte e anos de vida saudável em saúde, envelhecimento e composição corporal: um estudo de coorte de base populacional. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2009;64:860–864.
45. Codd V, Nelson CP, Albrecht E, et al. Identificação de sete loci que afetam o comprimento médio dos telômeros e sua associação com a doença. Nat Genet. 2013;45:422–427.
46. Zhan Y, comprimento Hägg S. Telômero e risco de doença cardiovascular. Curr Opin Cardiol. 2019;34:270–274.
47. Stenvinkel P, Luttropp K, McGuinness D, et al. A expressão de CDKN2A/p16INK4a está associada à progeria vascular na doença renal crônica.
Envelhecimento (Albany. NY). 2017;9:494–507.
48. Wilson WRW, Herbert KE, Mistry Y, et al. O conteúdo de DNA de telômeros de leucócitos no sangue prediz o conteúdo de DNA de telômeros vasculares em humanos com e sem doença vascular. Eur Heart J. 2008;29:2689–2694.
49. Matsumoto C, Jiang Y, Emathinger J, et al. Telômeros curtos induzem p53 e autofagia e modulam mudanças associadas à idade no destino das células progenitoras cardíacas. Células-tronco. 2018;36:868–880.
50. Lai L, Leone TC, Zechner C, et ai. Os coativadores transcricionais PGC-la e PGC-lb controlam os programas de sobreposição necessários para a maturação perinatal do coração. Genes Dev. 2008;22:1948–1961.
51. Moslehi J, Depinho RA, Sahin E. Telômeros e mitocôndrias no envelhecimento do coração. Circ Res. 2012;110:1226–1237.
52. Rufer N, Brümmendorf TH, Kolvraa S, et al. As medições de fluorescência dos telômeros em granulócitos e subconjuntos de linfócitos T apontam para um alto.