Wen-Lan Li, Jing-Xin Ding, Jing Bai, Yang Hu, Hui Song, Xiang-Ming Sun, Yu-Bin Ji

Contato: Joana.jia@wecistanche.com

Abstrato

A LC Technology é um método reconhecido mundialmente utilizado para avaliar a qualidade dos medicamentos tradicionais chineses (MTC). A qualidade da MTC tem um impacto direto na sua eficácia. Portanto, para revelar completamente como o TCM exerce sua eficácia, em primeiro lugar, é necessário entender a base material de sua eficácia e, em seguida, controlar a qualidade dos compostos ativos. A aplicação do método de relação espectro-efeito é crucial para determinar a base do material farmacológico. O objetivo deste artigo foi investigar as correlações subjacentes entre os perfis químicos e a atividade estrogênica deCistanche, para revelar os compostos ativos. Os perfis químicos deCistancheforam registrados usando HPLC/Q-TOF-MS/MS, e a atividade estrogênica foi determinada pelo teste de crescimento do útero e o ensaio MTT. Em seguida, combinando os resultados da análise bivariada, análise de componentes principais e método de análise de correlação de cinza, quinze compostos ativos foram identificados. Eles são 8-ácido epilogânico, salidrosídeo, siringalídeo A 3'- -l-ramnopiranosídeo, cistanosídeo A,echinacoside, cistanoside F, cistanoside B, cistanoside C, osmanthusside B, acteoside, isoacteside, tubuloside B, 2'-acetylacteoside e dois compostos desconhecidos. Este estudo estabelece uma base para estudos in vivo deCistanche, e para o desenvolvimento de sua aplicação clínica.

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Palavras-chave:Cistanchedeserticola; LC/Q-TOF-MS; atividade estrogênica; análise de componentes principais (PCA); Teste de crescimento do útero.

Abreviaturas

MTC: Medicina Tradicional Chinesa

HPLC/Q-TOF-MS: Cromatografia líquida de alta performance/espectrometria de massa de tempo de voo quadrupolo

BA: análise bivariada

PCA: análise de componentes principais

GCAM: método de análise de correlação de cinza

MTT :tripsina, 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-brometo de difeniltetrazólio

DMSO: dimetilsulfóxido

RPMI1640 Roswell Park Memorial Institute 1640

1. Introdução

Recentemente, a MTC tornou-se cada vez mais popular nos países asiáticos e ocidentais devido aos seus efeitos terapêuticos estáveis ​​e baixa toxicidade na clínica. Como resultado, é necessário desenvolver novos tipos de MTC e entender as composições eficazes usadas durante sua aplicação clínica [1-6].

Em primeiro lugar, a relação espectro-efeito é estudada para discernir a correlação entre a impressão digital cromatográfica e a eficácia farmacodinâmica. Em seguida, usar o relacionamento para procurar componentes eficazes no TCM e formular padrões de controle para refletir sua qualidade interna. A relação espectro-efeito tem sido aplicada em muitas áreas de pesquisa da MTC, como a base material da MTC simples e composta, compatibilidade de componentes, mecanismo de processamento, previsão de efeitos farmacológicos e otimização de tecnologia [7-12]. A relação espectro-efeito é usada para apresentar novas ideias e métodos para explorar substâncias ativas, otimizar fórmulas, melhorar processos de preparação, rastrear e separar ingredientes-alvo e para o desenvolvimento de novos medicamentos para MTC [13-17].

Cistanchetem sido amplamente utilizado para o tratamento de disfunção sexual, constipação, prostatite e deficiência renal. Possui um amplo espectro de bioatividades, incluindo efeito estrogênico, antienvelhecimento, antioxidante e ação imunológica [18-19]. Geralmente, glicosídeos feniletanoides (como cistanosídeo A, tubulosídeo A), lignanas e glicosídeos iridóides foram considerados como constituintes farmacológicos e marcadores químicos para controle de qualidade de Cistanche e seus produtos [20-21]. O espectro químico deCistanchede diferentes áreas foram registrados usando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) [22-23]. Neste estudo, selecionamos o teste de crescimento do útero e o ensaio de proliferação celular MCF7 para avaliar suas atividades estrogênicas. Os métodos de análise de componentes principais, análise bivariada e análise de correlação de cinza foram usados ​​para correlacionar a atividade estrogênica com os componentes individuais. Este estudo teve como objetivo identificar os compostos bioativos do Cistanche responsáveis ​​pelos efeitos estrogênicos in vivo. O estudo estabelece uma base para estudos aprofundados deCistanche.

Todos os procedimentos experimentais foram revisados ​​e aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Harbin University of Commerce.

Cistanchedeserticola(cd-20120227-005) foi comprado no mercado de drogas e identificado pelo Prof. Zhang Delian (Harbin University of Commerce). O dietilestilbestrol foi adquirido de HEFEI JIULIAN PHARMACEUTICAL CO., LTD. RPMI1640 e RPMI1640 sem vermelho de fenol foram adquiridos da HyClone Company (EUA). O MTT e o DMSO foram todos adquiridos da Sigma-Aldrich Co. LLC (St Louis, EUA). A linha celular de câncer de mama humano MCF7 foi fornecida pelo Centro de Pesquisa das Ciências da Vida e Ciências Ambientais (Harbin University of Commerce). Os padrões utilizados foram os seguintes: acteoside (111530- 200505), echinacoside (111670-200503) e salidroside (110736-200628) foram obtidos do National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products (Pequim , China). Acetonitrila, metanol e ácido fórmico eram de grau MS, enquanto a água era ultrapura. Outros reagentes eram de grau analítico e estavam comercialmente disponíveis.

EchinacosidedentroCistanchetubulosa tem muitos efeitos

2 Procedimento Experimental

2.1 Materiais

O sistema Agilent 1290 HPLC, o sistema Agilent 6530 Series Quadrupole Time-of-Flight LC/MS (Q-TOF) e as estações de trabalho Chemical HPLC-3D foram usados ​​para experimentos de química analítica e processamento de dados. Água ultrapura Milli-Q foi usada para a preparação de amostras e padrões. Instrumentos adicionais incluíram a balança analítica eletrônica AR1140 (Ohaus International Ltd), o leitor de microplacas 680 (Bio-Rad Corporation) e a centrífuga de alta velocidade 64R (Beckman Coulter Allegra).

Camundongos Kunming fêmeas imaturos (cerca de 21 dias de nascimento, desmamados) pesando (12 ± 2) g, foram adquiridos do Centro de Animais de Laboratório de Base da Indústria Biológica Nacional de Changchun (Changchun, China). Os camundongos foram alojados em uma sala com temperatura regulada (22 ± 2 graus) com acesso irrestrito a comida e água. A experimentação animal foi iniciada após cinco dias de aclimatação. Os camundongos jejuaram durante a noite com livre acesso à água antes de administrar as soluções de teste. Este estudo foi realizado em estrita conformidade com as recomendações do Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório do National Institutes of Health.

2.2 Preparação da solução de amostra

Amostras de Cistanche foram coletadas em dez habitats diversos, a saber, Neimeng, Xinjiang, Ningxia, Guizhou, Chaidamu, Xizang, Alashan, Qinghai, Sichuan e Hubei.

A solução (1.0 g/mL) da amostra Cistanche foi preparada em água destilada para administração oral. A concentração de dietilestilboestrol foi de 20ug/mL e foi utilizada como solução de controle positivo. A solução (1.0 g/mL) da amostra Cistanche foi preparada em 50 por cento de acetonitrila. Acteoside, echinacoside e salidroside (2,0 mg cada) foram dissolvidos em 10 mL de solução de acetonitrila a 50 por cento. As soluções de amostra e padrão foram filtradas usando um filtro de 0,{11}}μm antes da análise.

2.3 Condições de LC-MS

Um Waters Symmetry Shield RP18 (3,9 mm×150 mm, 5μm; Waters Corporation, Milford, MA, EUA) foi usado para analisar as amostras. A fase móvel consistia em acetonitrila (A) e 0,2 por cento (v/v) solução aquosa de ácido fórmico (B) e foi bombeada a uma taxa de fluxo de 0,5 mL/min. O volume de injeção de cada amostra foi de 10 μL. O programa de eluição em gradiente foi o seguinte: A fase móvel A foi iniciada em 5 por cento e aumentou linearmente para 23 por cento em 35 min. A solução A foi subsequentemente aumentada para 25 por cento (35 a 65 min). A fase móvel A foi então diminuída para 5 por cento nos últimos 5 minutos da corrida (65 a 70 minutos). A temperatura da coluna foi mantida a 30 graus. Os cromatogramas foram monitorados a 254 nm. A pressão do gás de atomização era de 30 psi e a voltagem capilar era de 3,5 kV. A taxa de fluxo do gás seco foi ajustada para 8 L/min com uma temperatura de 30 graus. Os espectros de massa foram registrados dentro da faixa de varredura de 100- 3,000 Da e estavam no modo de varredura de íons negativos.

2.4 Avaliação de impressão digital

As impressões digitais de LC das amostras coletadas de 10 lotes diferentes foram estabelecidas e combinadas automaticamente usando o Sistema de Avaliação de Similaridade para Impressão Digital Cromatográfica de TCM (versão 2012; Comitê de Farmacopeia da China, Pequim, China). Além disso, o mapa do cromatograma de referência foi gerado usando o método da mediana. Além disso, a análise de agrupamento foi aplicada para avaliar a qualidade das amostras de dez habitats diversos.

2.5 Análise de componentes principais (PCA)

PCA é um método estatístico multivariado. Ele pode reter informações suficientes da aquisição de dados. No presente estudo, picos característicos de cromatogramas de LC foram rastreados ainda mais por PCA e tiveram como objetivo identificar compostos ativos com base na relação espectro-efeito.

2.6 Teste de crescimento do útero

Os camundongos foram divididos em 12 grupos (1{11}} por grupo). As soluções de amostra que foram preparadas a partir de Cistanche foram coletadas em dez habitats diferentes e foram administradas duas vezes ao dia (manhã e noite) por gavagem na dose de 30 g/kg de peso corporal por quatro dias. Os grupos branco e controle positivo continham volumes iguais de água destilada e solução de dietilestilboestrol e foram administrados duas vezes ao dia durante quatro dias. No quinto dia, as amostras de sangue contendo a droga foram retiradas dos camundongos anestesiados. As amostras foram centrifugadas (5,000 rpm, 10 min), e os sobrenadantes (amostras de soro contendo droga) foram separados. As amostras de soro contendo a droga foram inativadas por aquecimento a 56 graus em banho-maria por 30 min e foram filtradas através de um filtro de 0,{12}}μm antes do ensaio MTT. Concomitantemente, os úteros dos camundongos foram imediatamente excisados ​​e pesados ​​para calcular os índices de peso uterino. A experimentação animal foi iniciada após cinco dias de aclimatação. Os camundongos jejuaram durante a noite com livre acesso à água antes da administração das soluções de teste. O presente estudo foi realizado em estrita conformidade com as recomendações do Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório do National Institutes of Health. Todos os procedimentos experimentais foram revisados ​​e aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Harbin University of Commerce. Todos os procedimentos potencialmente estressantes foram realizados sob anestesia com pentobarbital sódico.

2.7 Ensaio MTT

As células MCF7 foram co-cultivadas com RPMI 1640 sem vermelho de fenol (contendo 5 por cento de CDT-FBS) durante quatro dias. As células foram semeadas em 96-placas de poço a uma densidade de 2,000 células/poço. Uma cultura aderente foi alcançada e após 72 h de cultura, as células foram co-cultivadas em meio RPMI 1640 contendo amostras de soro de camundongos tratados com Cistanche. Os experimentos foram conduzidos em seis repetições. Posteriormente, 20 μL de solução de MTT (5 mg/mL em PBS) foram adicionados a cada poço e as células foram incubadas por 4 h. Após a remoção do meio, 150 µL de DMSO foram adicionados para produzir o produto formazan e as placas foram agitadas no escuro para dissolver completamente. A absorbância foi medida a 570 nm usando um leitor de microplacas. A taxa de proliferação foi calculada como o valor médio de absorbância do grupo de soro contendo a droga dividido pelo valor médio de absorbância do grupo controle em branco (células co-cultivadas em RPMI 1640 sem soro).

2.8 Análise estatística

O teste t de amostra pareada (bicaudal) foi usado para identificar diferenças estatisticamente significativas entre os valores nos grupos controle e experimental em branco. As diferenças foram consideradas significativas a um nível de confiança de 95 por cento (p <>

PCA foi usado para avaliar áreas de pico características nos cromatogramas das amostras de dez habitats diversos. A análise bivariada e a análise de correlação de Gray foram usadas para avaliar a correlação das áreas de pico e sua atividade estrogênica. A correlação foi calculada pelo software estatístico SPSS Statistics (SPSS para Windows 21.0, SPSS Inc., EUA). As diferenças foram consideradas significativas a um nível de confiança de 95 por cento (bicaudal).

Aprovação ética: A pesquisa realizada não está relacionada ao uso humano ou animal.

cistache acteoside tem muitas funções

3 Resultados e discussão

3.1 Análise de cluster e avaliação de similaridade

O desvio padrão relativo do tempo de retenção e da área de pico dos picos característicos foram {{0}},58 e 0,34 por cento para precisão, 0,52 e {{8} },31 por cento para reprodutibilidade e {{10}},19 e 0,13 por cento para estabilidade, respectivamente. Esses achados indicaram que nosso método LC de estabelecimento de impressões digitais era razoável e confiável. As semelhanças dos cromatogramas de dez amostras foram superiores a 0,9. Os picos comuns para todas as amostras não podem representar totalmente os constituintes característicos de Cistanche, pois o pico pode ter sido perdido. Portanto, o número de correspondência da amostra foi ajustado de 26 para 20 para obter um mapa de cromatograma mais preciso. Obteve-se um total de 26 picos, e a soma de suas áreas foi superior a 0,8 em relação à área total dos picos da amostra. Portanto, concluímos que esses picos cromatográficos podem refletir efetivamente os principais constituintes químicos do Cistanche. Os resultados da análise de agrupamento são mostrados na Figura 1. Um total de dez habitats diversos foram divididos em três categorias: (A) 2, Guizhou; 3, Qinghai; 4, Chaidamu; 10, Neimeng; 7, Xinjiang e 6, Sichuan. (B) 1, Xizang; 8, Ningxia e 5, Alashan. (C) 9, Hubei. A tendência da análise de agrupamento mostrou que os habitats das ervas medicinais são semelhantes quando na parte inferior do limiar. Mas com o aumento do limiar, as condições climáticas e de crescimento dos habitats estão próximas. Isso mostra que a análise de cluster pode não apenas distinguir bem os diversos habitats, mas também refletir as afinidades entre eles.

3.2 Identificação dos constituintes químicos

Based on the synergy between components, TCM exerted pharmacological effects. Certain studies have been conducted to identify the chemical compositions of C. deserticola [24-26]. The correlation of inherent constituents with their activities indicated that they could be identified based on the combination of LC with the corresponding indices of pharmacological activity. Q-TOF-MS is suitable for multi-constituent identification of TCM since it can provide the exact molecular mass because of its high resolution. A total of 26 compounds were identified by analyzing the primary and secondary MS data. PCA was used to assess whether these compounds concerning their oestrogenic activity. A contribution of the activity is indicated by an eigenvalue higher than 1 (> 1) and a cumulative contribution rate of variables higher than 0.8 (>0.8). Quanto maior o valor absoluto da carga Eigen, maior a influência dos compostos nos índices estrogênicos.

Os cromatogramas de Cistanche e as amostras padrão foram comparados para identificar componentes individuais sob as mesmas condições de LC-MS. Conforme mostrado na Tabela 1, um total de 26 constituintes foram identificados com base no tempo de retenção e nos dados de MS [24-26]. Os ingredientes ativos são administrados oralmente na forma de misturas em vez de monômeros, pois a medicina tradicional chinesa está na forma de uma mistura para desempenhar um papel terapêutico. Um único composto após ser separado individualmente não foi encontrado para desempenhar um papel. Nosso objetivo é revelar compostos que tenham atividade estrogênica nos componentes conhecidos de Cistanche [23-30], e por isso não selecionamos RMN e outros meios técnicos para validar sua identidade. O pico 1 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 373 (C16H22O10), que era idêntica à composição elementar do ácido geniposidico. Isso foi apoiado pela perda de uma fração de glicose que rendeu um fragmento de íon com uma razão m/z de 211. O pico 2 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 461 (C20H30O12), que era idêntico à composição elementar de decafeoilactosídeo, e foi suportado pela perda de uma porção ramnosil, formando uma fragmentação com razão m/z de 315. O pico 4 indicou um íon desprotonado predominante com razão m/z de 375 (C16H24O10), que era idêntico ao composição elementar do ácido 8-epilogânico. A perda de uma porção de glicose, formou uma fragmentação com uma razão m/z de 213, apoiou ainda mais a inferência. O pico 6 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 607 (C29H36O14), que era idêntica à composição elementar do siringalido A3'- -l-ramnopiranosídeo.

A perda de uma porção caff, formou um íon fragmento com uma razão m/z de 445, apoiou ainda mais a inferência. O pico 8 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 799 (C36H48O20), que era idêntica à composição elementar do cistanosídeo A. A perda de uma porção caff formou um íon fragmento com uma razão m/z de 637, apoiou ainda mais a inferência. O pico 11 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 487 (C21H28O13), que era idêntica à composição elementar de cistanosídeo F. Isso foi apoiado pela perda de uma porção de ramnosil que rendeu um íon fragmento com um m/z razão de 341, e a perda de outra porção caff formou um íon fragmento com uma razão m/z de 179, apoiou ainda mais a inferência. O pico 12 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 813 (C37H50O20), que era idêntica à composição elementar do cistanosídeo B. A perda de uma porção de glicose, formou um fragmento de íon com uma razão m/z de 651, apoiou ainda mais a inferência. O pico 13 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 827 (C37H48O21), que era idêntica à composição elementar do tubulosídeo A. A perda de uma porção de ramnosil, formou uma fragmentação com uma razão m/z de 681, adicionalmente apoiou a inferência. O pico 14 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 637 (C30H38O15), que era idêntica à composição elementar de cistanosídeo C. A perda de uma porção de ramnosil, formou um íon fragmento com uma razão m/z de 491, apoiou ainda mais a inferência.

O pico 15 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 591 (C29H36O13), que era idêntica à composição elementar do osmanthuside B. A perda de uma porção de ramnosil, formou um íon fragmento com uma razão m/z de 445, apoiou ainda mais a inferência. O pico 16 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 623 (C29H36O15), que era idêntica à composição elementar de acteosídeo. A perda de uma porção caff, formou um íon fragmento com uma razão m/z de 461,apoiou ainda mais a inferência. O pico 18 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 623 (C29H36O15), que era idêntica à composição elementar do isoacteoside. A perda de uma porção caff, forepeak15 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 591 (C29H36O13), que era idêntica à composição elementar do osmanthusídeo B. A perda de uma porção de ramnosil, formou um íon fragmento com uma razão m/z de 445, adicionalmente apoiou a inferência. O pico 16 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 623 (C29H36O15), que era idêntica à composição elementar de acteosídeo. A perda de uma porção caff, formou um íon fragmento com uma razão m/z de 461, apoiou ainda mais a inferência. O pico 17 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 623 (C29H36O15), que era idêntica à composição elementar do cis-acteoside. A perda de uma porção caff, formou um fragmento ioda fragmento com uma razão m/z de 461, apoiou ainda mais a inferência. O pico 21 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 653 (C30H38O16), que era idêntica à composição elementar de campneoside Ⅰ.

A perda de uma porção caff formou um íon fragmento com uma razão m/z de 491, e a perda de outra porção ramnosil formou um íon fragmento com uma razão m/z de 345, apoiando ainda mais a inferência. O pico 22 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 665 (C31H38O16), que era idêntica à composição elementar do tubulosídeo B. A perda de uma porção CH3CO formou um íon fragmento com uma razão m/z de 623, e a perda de outra porção caff formou um íon fragmento com uma razão m/z de 461, apoiando ainda mais a inferência. O pico 23 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 639 (C29H36O16), que era idêntica à composição elementar do campneosídeo. A perda de uma porção de ramnosil, formou um íon fragmento com uma razão m/z de 493, apoiou ainda mais a inferência. O pico 24 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 665 (C31H38O16), que era idêntica à composição elementar do 2'-acetilacteoside. A perda de uma porção Ac formou um íon fragmento com uma razão m/z de 623, e a perda de outra porção caff formou um íon fragmento com uma razão m/z de 461, apoiando ainda mais a inferência. O pico 25 indicou um íon desprotonado predominante com uma razão m/z de 445 (C20H30O11), que era idêntica à composição elementar de cistanosídeo G. A perda de uma porção de ramnosil, formou um íon fragmento com uma razão m/z de 299, apoiou ainda mais a inferência. As estruturas dos compostos estão listadas na Figura 2.

3.3 PCA

As shown in Table 2, the eigenvalues of the first eight principal components were higher than 1(> 1), and the cumulative contribution rate of the first six principal components was 93.417%. Therefore, the first six principal components were evaluated further. Table 2 indicates their eigenvalues and factor loadings. The first principal component exhibited a higher load based on the eigenvalues of the eight peaks (>0.9). Esses picos foram os seguintes: 9, 12, 14 e 15. Consequentemente, echinacoside, cistanoside B, osmanthuside B e acteoside, correspondendo a um total de 4 picos, foram selecionados como variáveis ​​representativas para a atividade estrogênica (Figura 3).

.

3.4 Determinação da atividade estrogênica

A razão do peso úmido uterino para o peso corporal de cada camundongo foi calculada (Figura 4). Os animais expostos a Cistanche de nove habitats exibiram atividades estrogênicas significativas aumentando seu peso uterino em comparação com camundongos do grupo controle em branco. A Figura 4 mostra ainda a taxa de proliferação de células MCF7 tratadas com soro de camundongos tratados com Cistanche. As células tratadas com soros de camundongos que receberam Cistanche de dez habitats apresentaram crescimento significativamente maior em comparação com células sem tratamento.

3.5 Análise bivariada

No presente estudo, observamos que os pesos uterinos de camundongos Kunming fêmeas imaturas aumentaram e a proliferação de células de câncer de mama humano MCF7 foi promovida. Esses achados verificaram a atividade estrogênica do Cistanche. A Figura 5 indicou os índices uterinos e as taxas de proliferação de células MCF7 desses constituintes. O coeficiente de correlação de Pearson foi usado para calcular as áreas relativas dos picos, que correspondiam à atividade estrogênica das amostras. Os coeficientes de correlação superiores a 0,3 foram considerados significativos (p < 0.05),="" enquanto="" os="" coeficientes="" de="" correlação="" superiores="" a="" 0,5="" foram="" considerados="" altamente="" significativos="" (p="">< 0,01).="" com="" base="" nos="" resultados,="" cistanche="" demonstrou="" possuir="" atividade="">

Um total de nove compostos se correlacionou significativamente com o aumento do peso uterino (p < {{0}},05),="" enquanto="" dez="" compostos="" se="" correlacionaram="" significativamente="" com="" a="" proliferação="" celular="" de="" mcf7="" (p="">< 0,05).="" os="" compostos="" que="" se="" correlacionaram="" significativamente="" com="" o="" peso="" uterino="" e="" a="" proliferação="" celular="" foram="" 8-ácido="" epilogânico,="" salidrosídeo,="" siringalídeo="" a3'-="" -="" l-ramnopiranosídeo,="" cistanosídeo="" a,="" cistanosídeo="" b,="" cistanosídeo="" c,="" osmantusídeo="" b,="" acteosideo,="" isoacteosideo,="" tubulosídeo="" b,="" 2'-acetilacteoside="" e="" dois="" compostos="" desconhecidos="" (figura="" 5).="" esses="" treze="" compostos="" exerceram="" atividades="">

3.6 Método de análise de correlação de Gray

A Figura 6 mostra a correlação relativa dos picos característicos de 26 compostos com os índices uterinos, e a Figura 7 mostra a correlação relativa dos picos característicos dos 26 compostos com suas taxas de proliferação celular. Um total de três compostos apresentou a maior correlação com os índices uterinos, a saber, ácido 8-epilogânico, cistanosídeo F e acteosídeo (Figura 6, em ordem decrescente); enquanto os seis compostos que exibiram a maior correlação com a proliferação de células MCF7 foram echinacoside, cistanoside F, cistanoside B, osmanthusside B, isoacteoside e tubuloside B (Figura 7, em ordem decrescente). As correlações relativas de echinacoside, osmanthuside B, acteoside e isoacteoside foram superiores a 0.5.

3.7 Otimização das condições de LC-MS

Para obter um melhor mapa de cromatograma, metanol e acetonitrila foram comparados. Por fim, a combinação de ácido fórmico aquoso (0,2 por cento, v/v) - acetonitrila foi a melhor fase móvel para separação. Na faixa de varredura de comprimento de onda completo de 200-400nm, 254nm foi selecionado como o ideal. Além disso, os parâmetros MS também foram melhorados. O modo de varredura de íons negativos foi selecionado porque melhorou os valores de resposta da maioria dos ingredientes no Cistanche.

4. Conclusão

A tecnologia LC-Q-TOF-MS foi usada para identificar os constituintes ativos estrogênicos do Cistanche. O presente estudo ilustrou que 8-ácido epilogânico, salidroside, siringalideA3'- -l-ramnopiranosídeo, cistanoside A, echinacoside, cistanoside F, cistanoside B, cistanoside C, osmanthusside B, acteoside, isoacteoside, tubuloside B, 2'-acetilacteoside, e dois compostos desconhecidos foram os principais constituintes ativos de Cistanche. No entanto, esses achados requerem mais estudos para explorar os efeitos in vivo e o mecanismo de ação dos constituintes.

cistacheacteosídeos têm muitas funções, como estimular o sistema imunológico

Agradecimentos:

Este projeto foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (nº 81073015), Fundação Científica da Natureza da Província de Heilongjiang (ZD2017014) e o plano de treinamento de talentos inovadores da Faculdade da Província de Heilongjiang (UNPYSCT-2017209) . Os autores declaram que não há conflito de interesse em relação à publicação deste artigo.

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