Parte 2: Cistanosídeo de Cistanche Herba melhora os danos reprodutivos masculinos induzidos por hipóxia através da supressão do estresse oxidativo

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Fengqi Yan1*, Xiaoliang Dou1*, Guangfeng Zhu1*, Mingyuan Xia1, Yahui Liu3, Xiaozi Liu3, Guojun Wu2, HeWang1, Bo Zhang1, Qiuju Shao4, Yong Wang1

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Resultados

Efeitos da hipóxia nas células GC-1

Para determinar os efeitos da hipóxia nas células germinativas, primeiro examinamos as alterações na viabilidade celular após o tratamento da hipóxia com diferentes concentrações de oxigênio (20 por cento, 15 por cento, 10 por cento, 5 por cento) para 1,3, 5, e 7 dias, respectivamente. Os resultados do ensaio CCK-8 mostraram que, em comparação com o grupo controle (concentração de oxigênio de 20 por cento), as células expostas à hipóxia exibiram uma diminuição significativa na viabilidade (P < 0,01;="" figura="" 1a).="" além="" disso,="" sua="" taxa="" de="" sobrevivência="" foi="" inversamente="" proporcional="" à="" concentração="" de="" oxigênio="" e="" diminuiu="" ainda="" mais="" com="" o="" tempo="" de="" indução.="" para="" evitar="" um="" efeito="" citotóxico="" excessivo,="" uma="" concentração="" de="" oxigênio="" de="" 10%="" e{14}}dia="" de="" tempo="" de="" indução="" foram="" selecionados="" como="" critérios="" do="" modelo="" hipóxico="" para="" experimentos="" in="" vitro="">

Posteriormente, foi realizada coloração de FCM e imunofluorescência para avaliar ainda mais a alteração da proliferação de células GC-1 sob tratamento com hipóxia. Os resultados mostraram que a hipóxia pode induzir a parada das células GC-1 na fase G1, reduzindo assim a entrada das células na fase S e inibindo a replicação do DNA. Assim, a hipóxia reduziu significativamente o índice de proliferação deCG{{0}} células (P < 0,01;="" figura="" 1b).="" a="" coloração="" positiva="" de="" ki-67é="" outro="" biomarcador="" específico="" de="" células="" em="" proliferação.="" portanto,="" também="" examinamos="" a="" proporção="" de="" células="" ki-67-positivas="" com="" ou="" sem="" tratamento="" de="" hipóxia.="" comparado="" com="" o="" grupo="" controle,="" o="" tratamento="" de="" hipóxia="" reduziu="" notavelmente="" as="" células="" ki-67-positivas,="" conforme="" mostrado="" na="" figura="">

Em seguida, objetivamos investigar o modo de inibição da viabilidade celular GC{{0}}induzida por hipóxia. Conforme relatado na literatura, o nível de ROS aumentou quando os ratos foram expostos a um ambiente hipóxico hipobárico [8, 20]. Assim, os níveis de ROS endógenos em células GC-1 foram medidos usando o ensaio FCM. Os resultados mostraram níveis mais elevados de ROS sob hipóxia em comparação ao grupo oxigênio normal (P < 0,01;="" figura="" 1d).="" o="" acúmulo="" de="" ros="" causa="" um="" comprometimento="" acentuado="" do="" dna,="" que="" por="" sua="" vez="" causa="" a="" ativação="" da="" via="" de="" apoptose="" celular="" e="" pode="" ser="" o="" principal="" fator="" etiológico="" para="" o="" aumento="" do="" risco="" de="" infertilidade="" masculina="" [21,="" 22].="" em="" seguida,="" detectamos="" o="" efeito="" de="" ativação="" apoptótica="" da="" hipóxia="" em="" células="" gc-1="" por="" coloração="" tunel.="" conforme="" mostrado="" na="" figura="" 1e,="" o="" tratamento="" com="" hipóxia="" resultou="" em="" um="" aumento="" na="" fluorescência="" do="" tunel="" em="" comparação="" com="" o="" grupo="" controle,="" indicando="" um="" aumento="" na="" apoptose="" no="" grupo="">

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Como o dano celular induzido por ROS geralmente é causado por OS, testamos ainda mais o OS de células GC-1. Conforme apresentado na Figura 1F, os níveis de LPO de células GC-1 no grupo modelo foram significativamente aumentados em comparação com os níveis de LPO de células GC-1 no grupo de controle. Esses achados sugeriram que a lesão de células GC-1 induzida por hipóxia pode estar relacionada à OS, que é induzida pela acumulação de ROS.

Efeitos de Cis na viabilidade de células GC-1 induzidas por hipóxia in vitro.

Para investigar seCispode prevenir os efeitos inibitórios da hipóxia na viabilidade das células GC{{0}}, um ensaio CCK-8 foi realizado. As células GC-1 foram tratadas com diferentes subtipos (Cis-A, B, C, H) e faixas de concentração (0.02 μM, 0,2μM, 2 μM ) de Cis por 72 h. A comparação do grupo modelo com o grupo DMSO mostrou que o DMSO não promoveu diretamente a viabilidade das células GC{{10}} (Figura 2A). No entanto, a viabilidade celular foi marcadamente restaurada (P < 0.05)="" com="" tratamentos="" com="" cis.="" comparado="" com="" o="" grupo="" modelo,="" cis-a,="" cis-b,="" cis-c="" e="" cis-h="" mostraram="" certos="" efeitos="" protetores="" sobre="" danos="" induzidos="" por="" hipóxia="" à="" viabilidade="" celular="" de="" gc-1,="" e="" cis-b="" mostrou="" o="" efeito="" mais="" significativo="" (figura="" 2a).="" os="" efeitos="" protetores="" de="" cis="" em="" 0.2="" μm="" foram="" significativamente="" maiores="" do="" que="" os="" efeitos="" protetores="" de="" cis="" em="" 0.02="" μm,="" enquanto="" a="" diferença="" entre="" 2="" μm="" e="" 0,2="" μm="" não="" era="" óbvia,="" indicando="" que="" o="" gc="" restaurado{="" {29}}="" viabilidade="" celular="" induzida="" por="" cis="" demonstrou="" um="" aumento="" dependente="" da="" dose="" na="" faixa="" de="" concentração="" de="" 0.02-0.2="" μm="" (figura="" 2a).="" portanto,="" de="" acordo="" com="" as="" necessidades="" experimentais,="" 0,2μm="" cis="" foi="" selecionado="" como="" a="" concentração="" ideal="" nos="" seguintes="" experimentos="" in="" vitro.="" para="" confirmar="" se="" as="" células="" germinativas="" foram="" de="" fato="" protegidas="" por="" cis,="" coloração="" fcm="" e="" ki-67="" foram="" realizadas="" para="" avaliar="" a="" alteração="" da="" proliferação="" de="" células="" gc-1="" após="" o="" tratamento="" com="" cis.="" após="" o="" tratamento="" com="" cis,="" a="" proporção="" de="" gc="" -1células="" na="" fase="" g1="" foi="" reduzida.="" em="" contraste,="" mais="" células="" entraram="" na="" fase="" s,="" sugerindo="" que="" o="" tratamento="" com="" cis="" poderia="" aumentar="" o="" índice="" de="" proliferação="" de="" células="" germinativas="" (p="">< 0,01;="" figura="" 2b).="" as="" estatísticas="" para="" o="" ciclo="" celular="" gc-1="" são="" mostradas="" na="" figura2bb.="" os="" resultados="" da="" coloração="" ki-67="" também="" mostraram="" que="" o="" tratamento="" com="" cis-a,="" cis-b,="" cis-c="" e="" cis-h="" melhorou="" significativamente="" a="" proporção="" de="" células="" ki-67-positivas="" do="" gc="" induzido="" por="" hipóxia-1="" células="" in="" vitro="" (figura="">

Figura 2. Cis restaurou a viabilidade celular de GC-1 induzida por hipóxia.

O mecanismo da Cis protege as células germinativas da hipóxia in vitro.

Para investigar se os efeitos protetores de Cis nas células GC-1 estavam relacionados à remoção de ROS excessivos, o corante fluorescente DCFH-DA foi usado para detectar os níveis de ROS em cada grupo. Conforme mostrado na Figura 3A, 3B, tratamento com DMSO não alterou o conteúdo de ROS intracelular ou o nível de LPO em comparação com o grupo modelo. No entanto, os níveis de ROS em células GC-1 foram marcadamente reduzidos nos grupos tratados com Cis (Figura 3A). Além disso, uma diminuição do LPO também foi observada em células GC-1 submetidas a Cis (Figura 3B).

Para explorar ainda mais o mecanismo pelo qual Cisprotege as células germinativas da lesão hipóxica, foram realizadas análises de coloração TUNEL e Western blot para avaliar a apoptose. A coloração TUNEL (Figura 3C) mostrou apoptose significativa nos grupos modelo e DMSO. No entanto, menos células apoptóticas foram observadas com o tratamento com Cis, o que indicou que o tratamento com Cis reduziu a apoptose das células GC-1. Além disso, a expressão de PARP, Caspase-3, Bax e Bcl-2 foi medida para corroborar o mecanismo molecular. Conforme apresentado na Figura 3D, Caspase-3e PARP foram ativados em células GC-1 sob hipóxia, e essa ativação foi inibida por Cistreatment. Além disso, a razão Bax/Bcl-2foi maior no grupo modelo do que no grupo controle, e o tratamento com Cis reduziu a razão Bax/Bcl-2 (Figura 3D). Esses dados indicaram que Cis tinha uma capacidade potencial de atenuar o dano oxidativo induzido por hipóxia, e esse efeito protetor pode ser alcançado reduzindo o acúmulo de ROS e inibindo a ativação da via de apoptose relacionada à caspase.

O mecanismo enzimático que inibe o OS envolve sequestradores de radicais livres, como glutationa redutase (GR), glutationa peroxidase (GPx) e superóxido dismutase (SOD) [23]. ]. Para validar ainda mais o mecanismo potencial de inibição Cis de OS induzida por hipóxia em células GC-1, as atividades de GR, GPx e SOD foram medidas. Os resultados revelaram que as atividades de GR, GPx e SOD todas significativamente (P < 0.01,="" figura="" 3e)="" diminuíram="" sob="" hipóxia="" quando="" comparadas="" aos="" grupos="" de="" controle,="" e="" o="" tratamento="" com="" cis="" restaurou="" marcadamente="" suas="" atividades="" em="" gc="" -1="" células="" expostas="" à="" hipóxia="" (p="">< 0,05,="" figura="" 3e),="" sugerindo="" que="" esses="" compostos="" podem="" ativar="" o="" poderoso="">antioxidantesistema.

Figura 3. O mecanismo pelo qual Cis protege as células GC-1 de danos induzidos por hipóxia.

Efeitos da Cis na reprodução em ratos induzidos por hipobaripóxia.

Para determinar os efeitos da hipobáricahipóxiaem ratos machos, primeiro testamos as alterações morfológicas dos testículos em ratos induzidos por hipóxia hipobárica. Os resultados da coloração HE mostraram que no grupo controle, as células espermatogênicas normais em vários estágios estavam dispostas de forma ordenada da membrana basal ao lúmen, e os espermatozóides maduros eram lúmens intúbulos visíveis (Figura 4A). Em comparação com os controles, foram observadas alterações patológicas do tecido testicular no grupo modelo, a membrana basal das células epiteliais testiculares estava disposta frouxamente, o epitélio espermatogênico era extremamente fino e o nível e o número de células germinativas estavam acentuadamente reduzidos (Figura 4A). No entanto, o tratamento com Cis melhorou notavelmente a histologia do dano testicular induzido por hipóxia hipobárica in vivo (Figura 4A). Também medimos o peso corporal, peso dos testículos, peso do epidídimo e peso da glândula seminal-vesícula, o que levou ao cálculo do índice de órgãos reprodutivos (relação órgão reprodutivo/peso corporal). Conforme mostrado na Figura 4B-D, o índice de órgãos reprodutivos (testículos, epidídimo e glândula da vesícula seminal) foi marcadamente menor no grupo modelo (P < 0="" 0,01)="" do="" que="" no="" grupo="" controle.="" no="" entanto,="" o="" efeito="" da="" hipóxia="" hipobárica="" no="" índice="" de="" órgãos="" reprodutivos="" de="" ratos="" foi="" revertido="" com="" o="" tratamento="" com="" cis="" (figura="">

Em seguida, a atividade da enzima acrossomal e a taxa de espermatozóides vivos de espermatozóides de ratos machos também foram medidas para elucidar danos na função testicular. Conforme mostrado na Figura 4E, 4F, atividade de acrossomoenzima e motilidade espermática foram menores nos ratos do grupo modelo do que no grupo controle (P < 0.01).="" no="" entanto,="" em="" comparação="" com="" ratos="" no="" grupo="" modelo,="" a="" atividade="" da="" enzima="" acrossomal="" foi="" restaurada="" em="" ratos="" tratados="" com="" 8="" mg/kg/d="" cis(p="">< 0.05)="" (figura="" 4d).="" além="" disso,="" como="" mostrado="" na="" figura="" 4f,="" o="" tratamento="" com="" cis="" também="" aumentou="" a="" taxa="" de="" esperma="" vivo;="" os="" ratos="" tratados="" com="" 8="" mg/kg/d="" cis="" mostraram="" uma="" taxa="" de="" esperma="" vivo="" significativamente="" aumentada="" (55,83="" ±="" 6,03="" por="" cento,="" p="">< 0,05;69.00="" ±="" 2,29="" por="" cento,="" p="">< 0,01;="" 52,33="" ±="" 3,40="" por="" cento,="">< 0.05;="" and="" 53.67="" ±="" 2.25%,="" p="" <="" 0.05="" respectively)="" when="" compared="" with="" the="" model="" rats="" (43.83="" ±="">

Em conjunto, esses resultados sugeriram que o ambiente hipóxico hipobárico levou a alterações morfológicas testiculares, perda de peso de órgãos reprodutivos e danos na função testicular em ratos machos, e Cis poderia proteger efetivamente os órgãos reprodutivos de danos induzidos por hipóxia.

Figura 4. Efeitos da Cis no sistema reprodutivo de ratos expostos à hipóxia hipobárica.

Efeitos da Cis sobre OS nos testículos de ratos induzidos por hipobaripóxia.

Os níveis de ROS e LPO nos testículos de ratos foram medidos para analisar os efeitos da Cis na OS induzida por hipóxia hipobárica. A análise de ROS revelou que, em comparação com o grupo controle, os níveis de ROS nos testículos no grupo modelo foram significativamente aumentados (P < 0.01="" figura="" 5a).="" por="" outro="" lado,="" lpo="" foi="" dramaticamente="" elevado="" nos="" testículos="" (p="">< 0="" 0,01)="" sob="" hipóxia="" hipobárica="" em="" comparação="" com="" condições="" normóxicas="" (figura="" 5b).="" no="" entanto,="" o="" tratamento="" com="" cis="" alterou="" as="" alterações="" acima="" (p="">< 0,05),="" em="" que="" cis-b="" exerceu="" melhores="" efeitos="" do="" que="" outros="" cis="" (figura="" 5a,="" 5b).="" ciseed="" para="" proteger="" os="" testículos="" reduzindo="" os="" sob="" condições="" hipóxicas="" hipobáricas="" in="">

Adicionalmente,apoptoseanálises foram realizadas para avaliar melhor o mecanismo pelo qual Cis protegeu contra a lesão da função testicular induzida por hipóxia hipobárica. Os resultados da coloração de TUNEL (Figura 5C) mostraram que existia apoptose significativa no grupo modelo em comparação com o grupo controle. No entanto, após o tratamento com Cis(8 mg/kg/d), ocorreram menos células apoptóticas (P < 0,05)="" (figura="" 5c).="" os="" dados="" de="" westernblot="" também="" mostraram="" que="" hipóxia="" e="" tratamento="" hipobárico="" resultaram="" na="" ativação="" de="" caspase-3="" e="" parp="" e="" um="" aumento="" da="" razão="" bax/bcl-2no="" tecido="" testicular,="" indicando="" um="" aumento="" da="" apoptose="" (figura="" 5d).="" além="" disso,="" diferentes="" tipos="" de="" tratamentos="" com="" cis="" reduziram="" significativamente="" a="" apoptose="" no="" tecido="" testicular="" (figura="" 5d).="" da="" mesma="" forma,="" a="" análise="" ihq="" do="" tecido="" testicular="" mostrou="" resultados="" semelhantes="" (figura="" 1="">

Para verificar o mecanismo da OS reduzida em Cis desencadeada pela hipóxia hipobárica, testamos ainda as atividades de GR, GPx e SOD no tecido testicular. Conforme mostrado na Figura 5E, em comparação com o grupo controle, o tratamento de hipóxia hipobárica reduziu significativamente as atividades de GR, GPx e SOD (P < 0.01).="" no="" entanto,="" o="" tratamento="" com="" cis="" restaurou="" as="" atividades="" enzimáticas="" (gr,="" gpx="" e="" sod)="" do="" tecido="" testicular="" em="" ratos="" tratados="" com="" hipóxia="" hipobárica="" (p="">< 0,05).="" em="" conclusão,="" cis="" pareceu="" proteger="" os="" testículos="" ativando="" um="" poderoso="" mecanismo="" de="" defesa="" de="" enzimas="" antioxidantes="" endógenas="" sob="" condições="" de="" hipóxia="">

Figura 5. O efeito de Cis em OS nos testículos de ratos induzidos por hipóxia hipobárica.

Discussão

Em áreas de alta altitude, a hipóxia hipobárica é conhecida por afetar vários sistemas em humanos, incluindo oreprodutor masculino[4, 20]. Investigações experimentais recentes são voltadas para a compreensão dos mecanismos de como a hipóxia hipobárica prejudica o sistema reprodutor masculino. Neste estudo, o efeito terapêutico do extrato de Cis de Cistanches Herba em danos reprodutivos induzidos por hipóxia foi investigado. Os resultados demonstraram que Cis pode proteger o sistema reprodutor masculino de danos hipóxicos, reduzindo o acúmulo de ROS induzida por hipóxia e OS através do aumento da atividade de enzimas antioxidantes endógenas.

Cistanche aumenta aatividade enzimática antioxidante.

ROS são radicais livres derivados de oxigênio que desempenham um papel vital na fisiologia e patologia humana. Baixas doses de ROS são essenciais para a capacitação espermática, a reação acrossômica e a fusão espermatozóide-oócito [24, 25]. No entanto, o acúmulo excessivo de ROS muitas vezes leva a danos às células germinativas e às células do estroma, resultando em infertilidade masculina [26]. As ROS podem facilmente danificar membranas celulares, ácidos nucléicos, proteínas, enzimas e outras macromoléculas biológicas.

através da peroxidação. Além disso, eles também levam a potenciais danos celulares e de DNA quando excedem a capacidade de transporte de antioxidantes. Evidências acumuladas suportam o papel central das EROs na patogênese da fertilidade masculina [27, 28]. A produção de ROS é regulada pela tensão de oxigênio. Sob condições hipóxicas, o oxigênio disponível no ambiente diminui e a viscosidade do sangue aumenta, afetando muitos processos metabólicos dependentes de oxigênio no organismo [29, 30]. No entanto, a pressão atmosférica mais baixa em grandes altitudes causa retorno venoso deficiente e diminuição da quantidade de oxigênio transportado pela corrente sanguínea para todas as células do organismo, o que aumenta ainda mais a hipóxia dos órgãos e células [29, 30]. Assim, a exposição a uma atitude elevada dá origem a uma série de respostas fisiológicas hipóxicas, incluindo a produção e acúmulo de EROs, quando a demanda por oxigênio excede a oferta vascular. Como mencionado anteriormente, o acúmulo de ROS leva a uma variedade de efeitos intracelulares, sendo o mais crítico causar OS nas células.

OS refere-se a um desequilíbrio entre as reações de oxidação e redução, levando à geração de excesso de oxidantes ou moléculas que aceitam um elétron de outro reagente, que por sua vez produz ROS [31, 32]. A OS é bem compreendida como sendo capaz de ser desencadeada por uma série de fatores endógenos e exógenos, incluindo exposição a grandes altitudes. Os espermatozóides são células que são particularmente suscetíveis à OS devido aos seus sistemas de reparo celular inadequados e alto conteúdo de ácidos graxos poliinsaturados na membrana plasmática [33]. Tecidos testiculares e epididimários não são exceção, pois a presença de OS grave tem sido observada em espermátides redondas em ratos submetidos à hipóxia[4]. OS afeta a estabilidade do DNA, comprometendo assim a integridade do material genético do gameta [34-36]. No entanto, foi confirmado que um alto nível de dano ao DNA em gametas masculinos leva à ativação da sinalização de apoptose, o que resulta em uma redução da contagem de espermatozóides do epidídimo e um aumento na porcentagem de células defeituosas [28, 37]. No presente estudo, a hipóxia reduziu significativamente a viabilidade das células GC-1 através da indução de apoptose e parada do ciclo celular. Mais importante, os níveis de ROS significativamente aumentados foram mostrados pela análise de FCM após estimulação de hipóxia, com uma taxa de apoptose aumentada e maior ativação de Caspase-3, PARP e relação Bax/Bcl-2, indicando que ROS poderia ativar a apoptose ativando o Via de sinalização da caspase durante danos à fertilidade induzidos por hipóxia. Nossos achados demonstraram que a hipóxia levou ao acúmulo excessivo de EROs, causando danos oxidativos às células reprodutivas. Assim, é significativo identificar novos antioxidantes que possam servir como uma abordagem eficaz para aliviar a lesão de fertilidade induzida por hipóxia.

Cistanchelesão de fertilidade aliviada.

Para proteger contra OS, existe um complexo sistema antioxidante no organismo, composto principalmente por fatores enzimáticos. Sob condições fisiológicas, o conteúdo de ROS e o sistema antioxidante mantêm certo equilíbrio. No entanto, a produção excessiva de ROS esgota o sistema antioxidante do esperma, levando ao OS, que causa danos ao DNA do esperma e resulta em menores taxas de fertilidade e gravidez [23]. Assim, para abordar a superprodução de ROS e os efeitos deletérios relacionados ao nível celular no sistema reprodutor masculino, diferentes estratégias antioxidantes foram testadas [23]. Atualmente, a literatura sobre o uso de compostos com atividade antioxidante e melhora da função espermática é extensa. É importante ressaltar que a maioria dos relatórios descreve uma melhora nos parâmetros do esperma após a ingestão oral de antioxidantes, incluindo melhorias na concentração e motilidade do esperma ou diminuição do dano ao DNA [38]. Assim, um número crescente de urologistas está prescrevendo antioxidantes orais para infertilidade devido a problemas relacionados ao OS [39]. Esses antioxidantes incluem principalmente carnitinas, vitaminas, zinco, melatonina e compostos naturais [23, 40]. Atualmente, com o desenvolvimento da tecnologia de extração de drogas, um número crescente de extratos de MTC também está sendo considerado para mitigar a infertilidade masculina porque esses antioxidantes podem reduzir os efeitos destrutivos do OS [41]. Yüce A. et ai. relataram em 2013 que a canela tem efeitos benéficos no equilíbrio oxidativo e antioxidante nos testículos e na qualidade do esperma [42]. Zhang L et ai. mostraram que a curcumina melhora significativamente a motilidade do esperma em pacientes e diminui o H2O2 [43]. Além disso, uma variedade de outros extratos de plantas, como mirtilo, crocus sativus, sementes de romã e chá verde, também demonstraram proteger o sistema reprodutivo por meio de mecanismos antioxidantes [27, 44-47]. Cistanches Herba é uma importante MTC que possui um perfil de segurança favorável e amplas funções medicinais para o tratamento da infertilidade, entre outras condições [13]. Estudos farmacológicos modernos mostraram que Cistanches Herba possui várias atividades, como atividades antioxidantes, anti-inflamatórias, hepatoprotetoras e anti-neurodegenerativas [13, 48]. Portanto, extratos, frações ou compostos de Cistanches Herba podem ter características antioxidantes potenciais para o tratamento da infertilidade.

As substâncias ativas em plantas que melhoram a fertilidade incluem vários grupos químicos, como PhGs, saponinas, compostos voláteis oxigenados e alcalóides [41]. Estudos de atividade farmacológica de PhGs demonstraram que PhGs exibem uma ampla gama de bioatividades, como antioxidação, neuroproteção anti-radiação e aprimoramento da função sexual [49,50]. Dentre essas atividades, a antioxidação vem aos poucos chamando a atenção. Alguns componentes únicos ou frações de PhGs foram relatados para inibir a apoptose de células germinativas induzida por vários produtos químicos, e suas capacidades antioxidantes in vitro também foram demonstradas in vivo em vários modelos animais [51, 52]. Esses resultados indicam que PhGs podem ser um candidato atraente para o tratamento de infertilidade masculina. Cis é um PhG ativo que pode ser isolado de Cistanches Herba. No presente estudo, exploramos os efeitos da Cis em células tratadas com hipóxia ou em um modelo de rato e investigamos os mecanismos moleculares subjacentes. Cisexibiu atividades protetoras sobre diminuição da viabilidade induzida por hipóxia e aumento de inapoptose em células GC-1, e também mostrou efeito protetor sobre danos induzidos por hipóxia no sistema reprodutivo de ratos in vivo. Observou-se diminuição significativa das atividades de GR, GPx e SOD sob hipóxia em comparação aos grupos normóxicos, enquanto as atividades específicas de GR, GPx e SOD aumentaram significativamente nos testículos ou células GC-1 tratadas com Cis. Ciseed proteger os testículos e células GC{10}} sob condições hipóxicas, aumentando as atividades de enzimas antioxidantes.

Os antioxidantes enzimáticos funcionam principalmente pela eliminação de ânions superóxidos, evitando assim a lipoperoxidação e danos ao DNA para prevenir a infertilidade. Os mecanismos antioxidantes enzimáticos desempenham um papel crucial na prevenção do dano oxidativo[23]. O mecanismo enzimático contra OS compreende sequestradores de radicais livres e enzimas dependentes de glutationa, incluindo GR, GPx e SOD [12]. As enzimas antioxidantes são bem conhecidas como essenciais para o sistema reprodutor masculino. No estudo atual, o efeito da redução das atividades das enzimas antioxidantes sob hipóxia hipobárica foi acompanhado pelo aumento de ROS e LPO no grupo modelo, o que é consistente com relatos anteriores [12]. No entanto, a administração de Cis levou a uma recuperação das atividades da enzima antioxidante no GC{ {4}} e testículos de ratos, possibilitando a geração de estratégias de administração de CistanchesHerba para prevenir danos induzidos por hipóxia hipobárica, como sugerido anteriormente. Embora nossos resultados tenham mostrado que o tratamento com Cispartly diminuiu o dano celular germinativo induzido por hipóxia em ratos, são necessárias mais investigações para desvendar o quadro completo de seus efeitos protetores reprodutivos. Por exemplo, o mecanismo específico de Cis afeta a atividade de enzimas antioxidantes. Além disso, há uma questão de saber se outros mecanismos também poderiam ser pertinentes, pois a Cis apenas recuperou parcialmente o dano reprodutivo causado pela hipóxia.

Cistanche temefeito promotor de crescimento diretonas células germinativas.

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Conclusões

Em geral, os achados deste estudo enfatizam o potencial da Cis como antioxidante para o tratamento de danos reprodutivos masculinos induzidos por hipóxia. Cis pode proteger contra danos reprodutivos masculinos induzidos por hipóxia, restaurando a atividade de enzimas antioxidantes, reduzindo OS induzida por ROS, aumentando simultaneamente a viabilidade celular e diminuindo a apoptose. É importante ressaltar que os subtipos Cis (Cis-A, Cis-B, Cis-C e Cis-H) estudados neste estudo mostraram um certo efeito protetor sobre o sistema reprodutivo, e Cis-B mostrou o efeito mais significativo. Portanto, especulamos que Cis pode ser um bom candidato a antioxidante para o tratamento de danos reprodutivos masculinos induzidos por hipóxia, embora o mecanismo subjacente preciso requeira mais investigação.