Diferenças na composição e eficácia medicinal de produtos crus e produtos de vinho processados a vapor de Cistanches Herba Ⅱ
Sep 10, 2024
2.3.3 Detecção de peso corporal e temperatura corporal
Os ratos foram alimentados de forma adaptativa durante 1 semana, registrado como 0 dia, e o peso corporal e a temperatura retal foram registrados; após a injeção contínua de succinato de hidrocortisona sódica por 14 dias, foi registrado como 14 dias, e o peso corporal e a temperatura retal foram registrados; após modelagem bem-sucedida, o tratamento medicamentoso foi realizado de acordo com o esquema posológico por 30 dias, registrado como 44 dias, e registrado o peso corporal e a temperatura retal.
2.3.4 Detecção de Frequência de Atividade Espontânea
O número de atividades de rato em 5 minutos foi registrado usando um registrador multifuncional de atividade espontânea de rato. Os ratos foram colocados no instrumento de atividade espontânea, os primeiros 3 minutos foram o período de adaptação, e o número de atividades espontâneas dos ratos foi contado pelo gravador nos últimos 5 minutos. A sala deve estar silenciosa, a temperatura ambiente deve ser mantida em 18-22 graus e a umidade deve ser mantida em 45%-65%. O número de atividades espontâneas em 0, 14 e 44 dias foi registrado respectivamente.
2.3.5 Detecção do Índice Soro
Após os ratos serem anestesiados, o sangue foi coletado da aorta abdominal, colocado em um tubo de coagulação e centrifugado a 2000 r/min por 15 min para detectar o conteúdo de T, E2, CREA e BUN no sérum.
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2.3.6 Cálculo do índice de órgãos
Após os ratos serem anestesiados e o sangue coletado, os rins, testículos, epidídimos, vesículas seminais e próstata foram removidos, enxugados com papel filtro e a massa imediatamente pesada. O índice de órgãos foi calculado com base na massa do rato.
Índice de órgão=massa de órgão/massa corporal
2.3.7 Detecção de tecidos
Após a retirada dos testículos dos ratos, a massa foi pesada e imediatamente colocada em geladeira de -80 graus para congelamento. Antes da medição, eles foram retirados, descongelados e foi adicionada solução salina fisiológica pré-resfriada para fazer um homogeneizado de tecido sob condições de banho de gelo, e um homogeneizado de tecido a 10% foi preparado. O homogeneizado foi imediatamente centrifugado a 5,{4}} r/min por 10 min, e o sobrenadante foi levado para uso. De acordo com os requisitos do kit, o método da hidroxilamina foi utilizado para determinar o teor de SOD no tecido testicular, e o método TBA foi utilizado para determinar o teor de MDA no tecido testicular.
Fig. 2 Diagrama de corrente iônica total de Cistanches Herba e Cistanches Herba cozido em vinho no modo de íon negativo
3 resultados
3.1 Diferenças na composição da Cistanche deserticola antes e depois do processamento
3.1.1 Diagrama de fluxo iônico total
Neste estudo, o detector do espectrômetro de massa utilizou o modo de íon negativo da fonte de ionização por eletrospray (ESI-). A Figura 2 mostra o diagrama de fluxo de íons totais de Cistanche deserticola crua e produtos cozidos em vinho no modo de íons negativos. Pode-se observar que a composição das amostras de Cistanche deserticola é muito complexa e existem diferenças óbvias entre a Cistanche deserticola crua e os produtos cozidos em vinho. Além disso, pesquisando o banco de dados existente e consultando a literatura relevante para composição elementar e correspondência de compostos, foi identificado um total de 45 compostos, conforme mostrado na Tabela 3.
Tabela 3 Compostos identificados em amostras de Cistanches Herba
3.1.2 Resultados do PCA
Os diagramas PCA de Cistanche deserticola crua e produtos cozidos em vinho são mostrados na Figura 3, que podem ser agrupados separadamente. Pode-se determinar que deve haver diferenças na composição da Cistanche deserticola antes e depois do processamento.
3.1.3 Resultados do OPLS-DA
Após o processamento OPLS-DA, o diagrama S-Plot é mostrado na Figura 4. As duas extremidades da curva em forma de S na figura representam os marcadores característicos com maior contribuição em cada grupo. Ao analisar os dados de íons de fragmentos com valores de VIP maiores que 1 em ambas as extremidades da curva em forma de S e comparar com o controle, quatro componentes diferenciais foram identificados: equinacosídeo (tR=80,39 min, m/z 785. 250 9), verbascosídeo (tR=110,51 min, m/z
623.198 1), isoverbascosídeo (tR=130,38 min, m/z623.198 1) e tubulosídeo B (tR=180,41 min, m/z 665. 208 7).
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3.2 Resultados Experimentais em Animais
3.2.1 Observação Geral do Estado
Após a modelagem, os ratos apresentaram uma série de sintomas como gostar do calor e temer o frio, enrolar e arquear as costas, apatia, cabelos opacos e bagunçados, membros frios, diminuição do apetite, redução do peso corporal e urina clara. Após a administração, os sintomas acima em cada grupo melhoraram significativamente.
3.2.2 Mudanças na dieta e atividade voluntária de ratos após modelagem
Após injeção contínua de succinato de hidrocortisona sódica por 14 dias, o peso corporal, o número de atividades voluntárias em 5 minutos e a ingestão de alimentos, ingestão de água e produção de urina de ratos em cada grupo foram medidos para determinar se o modelo de deficiência de yang do rim de hidrocortisona foi estabelecido com sucesso. Os resultados são apresentados na Tabela 4. Conforme mostrado na Tabela 4, após 14 dias de administração de hidrocortisona, em comparação com o grupo normal, todos os grupos apresentaram diminuição do peso corporal, diminuição da ingestão alimentar, aumento da ingestão hídrica, aumento na produção de urina e diminuição na atividade voluntária, e houve diferenças significativas (P <{5}},05). De acordo com a descrição de algumas síndromes de deficiência de yang do rim no diagnóstico clínico e terminologia de tratamento da medicina tradicional chinesa: "medo de frio e membros frios, especialmente abaixo da cintura e joelhos, tez pálida ou escura, urina clara e longa, micção frequente em noite, língua pálida com pelos brancos, pulso fraco, etc." Combinados com a observação do estado geral após a modelagem, os sintomas após a modelagem foram consistentes com a descrição da deficiência de yang do rim, indicando que a modelagem foi bem-sucedida.
| Não. | Composto | t/min | Modo de Ionização | Fórmula Molecular | Valor Teórico (m/z) | Valor Experimental (m/z) | Erro (×10⁻⁶) | Informações do fragmento (m/z) |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | Açúcar De Uva | 0.79 | [M–H] | C₆H₁₂O₆ | 179.055 | 179.055 | 0.20 | 97, 89 |
| 2 | Tanino de Uva | 0.81 | [M–H] | C₁₅H₁₄O₈ | 331.139 | 331.139 | 1.53 | 295, 313, 311 |
| 3 | Sorbitol | 0.88 | [M–H] | C₁₂H₂₂O₁₁ | 341.108 | 341.108 | 1.50 | 179, 161, 143, 131 |
| 4 | Meio Açúcar De Leite | 1.10 | [M–H] | C₆H₁₂O₆ | 181.071 | 181.071 | 2.68 | 163, 101 |
| 5 | Nutriente C à Base de Plantas | 1.20 | [M–H] | C₂₈H₄₃O₁₂ | 561.197 | 561.197 | -0.01 | 543, 461, 399 |
| 6 | Açúcar de pinho | 1.21 | [M–H] | C₁₆H₂₀O₈ | 341.123 | 341.124 | 1.63 | 179, 161, 143, 131, 119 |
| 7 | Ácido Succínico | 1.52 | [M–H] | C₄H₄O₄ | 117.018 | 117.019 | 3.40 | 99, 73 |
| 8 | Nutriente B à base de plantas | 2.04 | [M–H] | C₂₈H₃₃O₁₃ | 577.192 | 577.192 | -0.03 | 297, 208, 183, 178, 171, 153 |
| 9 | Flavonóides do chá | 2.20 | [M–H] | C₇H₆O₆N₂ | 164.071 | 164.072 | 1.00 | 103 |
| 10 | Extrato de pêra de Pequim | 3.73 | [M–H] | C₁₄H₁₂O₁₁ | 373.113 | 373.115 | 5.48 | 355, 327, 297 |
| 11 | Extrato de Goji Berry | 4.28 | [M–H] | C₂₀H₂₄O₁₈ | 461.169 | 461.169 | 0.00 | 485, 293, 215, 197, 167 |
| 12 | Extrato de Folha de Abacaxi | 4.74 | [M–H] | C₁₁H₁₂O₇ | 487.145 | 487.146 | 0.88 | 389, 179 |
| 13 | Extrato de Flor de Hibisco | 4.63 | [M–H] | C₂₄H₂₈O₁₀ | 537.197 | 537.197 | 0.00 | 501, 415, 375, 357 |
| 14 | 8- -Hidroxilactona | 5.27 | [M–H] | C₁₂H₂₀O₈ | 241.096 | 241.097 | 0.04 | 213, 189 |
| 15 | Rizoma Dioscoreae | 6.10 | [M–H] | C₁₈H₂₄O₈ | 361.115 | 361.113 | 2.20 | 309, 163, 137 |
| 16 | Extrato de Flor de Morango | 6.82 | [M–H] | C₁₅H₂₁O₁₀ | 327.108 | 327.109 | 1.00 | 307, 195 |
| 17 | Pólen de abelha | 7.20 | [M–H] | C₁₄H₂₈O₈ | 437.472 | 437.472 | 0.00 | 393, 373, 355 |
| 18 | -Caroteno | 7.53 | [M–H] | C₂₉H₄₆O₁₆ | 629.192 | 629.192 | 0.00 | 617, 479, 459, 315, 221 |
| 19 | Batata Doce Roxa | 7.70 | [M–H] | C₁₇H₂₄O₉ | 371.134 | 371.134 | 0.00 | 349, 328 |
| 20 | Extrato de pêra de Pequim | 8.02 | [M–H] | C₁₇H₂₄O₉ | 371.134 | 371.134 | 0.00 | 349, 328 |
| 21 | Extrato de flor de pêssego | 8.09 | [M–H] | C₂₈H₄₀O₁₂ | 561.197 | 561.197 | 0.00 | 543, 461, 399 |
| 22 | Extrato de Ginseng | 10.39 | [M–H] | C₈H₁₈O₈ | 799.266 | 799.266 | 0.03 | 417, 439, 543, 561 |
| 23 | Extrato de Chá Oolong | 10.63 | [M–H] | C₂₄H₃₄O₁₆ | 539.149 | 539.149 | 0.10 | 637, 621, 471, 473 |
| 24 | Extrato de Folha de Lótus | 11.51 | [M–H] | C₂₇H₃₄O₁₂ | 549.197 | 549.197 | 0.00 | 197, 153, 135 |
| 25 | Extrato de Flor Peluda | 11.51 | [M–H] | C₂₉H₄₈O₁₆ | 623.197 | 623.196 | -0.21 | 387, 531 |
| 26 | Extrato de Broto de Bambu | 11.51 | [M–H] | C₃₇H₄₈O₂₁ | 827.261 | 827.259 | -1.92 | 461, 315, 135, 297, 161 |
| 27 | Extrato de Crisântemo | 11.60 | [M–H] | C₂₁H₃₀O₉ | 429.118 | 429.118 | 0.00 | 663, 625, 413 |
| 28 | 6-Acetil Flavona | 12.32 | [M–H] | C₁₈H₁₈O₆ | 345.118 | 345.119 | 0.02 | 301, 281 |
| 29 | Extrato de Fruta Longan | 13.41 | [M–H] | C₁₈H₁₈O₈ | 417.154 | 417.159 | -0.11 | 165, 119, 327, 129, 27 |
Fig. 3 Diagrama de análise de componentes principais de CistanchesHerba (1) e Cistanches Herba cozido em vinho (2)
Fig. 4 Parcela S de Cistanches Herba e Cistanches Herba cozida em vinho
Tabela 4 Mudanças na dieta e atividade autonômica de ratos após modelagem ( xs ± , n=10)
| Grupo | Peso corporal (g) | Ingestão Alimentar 24h (g) | Ingestão de água em 24 horas (mL) | Débito de Urina em 24 horas (mL) | Contagem de atividades espontâneas de 5 min |
|---|---|---|---|---|---|
| Normal | 285.14 ± 9.26 | 15.81 ± 2.19 | 20.86 ± 3.59 | 11.09 ± 2.57 | 100.4 ± 14.7 |
| Modelo | 226.67 ± 12.14* | 11.92 ± 3.69* | 32.53 ± 4.65* | 15.58 ± 6.38* | 72.7 ± 11.6* |
| RP | 222.89 ± 9.87* | 10.65 ± 4.20* | 31.54 ± 3.55* | 19.36 ± 5.20* | 68.9 ± 18.0* |
| Prisioneiro de guerra | 219.16 ± 10.75* | 12.37 ± 3.42* | 29.11 ± 4.78* | 16.01 ± 3.96* | 62.8 ± 14.9* |
| JK | 230.02 ± 7.95* | 10.22 ± 2.26* | 34.57 ± 5.36* | 19.13 ± 7.57* | 69.3 ± 11.3* |
Notas:
Comparação com o grupo normal: *P < 0,05.
*P < 0,05 vs grupo normal.
Tabela 5 Mudanças no peso corporal de ratos durante o ciclo de dosagem (xs ±, n=10)
| Grupo | Peso corporal (g) | 0 d | 14 d | 44 d |
|---|---|---|---|---|
| Normal | 192.12 ± 5.48 | 285.14 ± 9.26 | 430.02 ± 6.14 | |
| Modelo | 187.24 ± 4.56* | 226.67 ± 12.14* | 328.33 ± 14.77* | |
| RP | 185.07 ± 5.11 | 222.89 ± 9.87* | 345.25 ± 8.22*# | |
| Prisioneiro de guerra | 183.48 ± 6.44 | 219.16 ± 10.75* | 362.17 ± 7.82*#Δ | |
| JK | 194.13 ± 5.90 | 230.02 ± 7.95* | 356.94 ± 7.47*# |
Notas:
*P < 0,05 vs grupo normal.
*P＜{{0}}.05 vs grupo normal; #P<0,05 vs grupo modelo; △P<0,05 vs grupo PR. O mesmo que abaixo.
3.2.3 Mudanças no peso corporal de ratos
Com base nas alterações de peso corporal de três vezes em 0, 14 e 44 dias, o efeito da injeção de succinato de sódio de hidrocortisona im no peso corporal de ratos e a recuperação do peso corporal de ratos após tratamento de intervenção medicamentosa foram analisados. Os resultados são mostrados na Tabela 5.
Pode-se observar na Tabela 5 que após 1 semana de alimentação adaptativa, o peso corporal dos ratos aumentou e ficou relativamente equilibrado. Os pesos corporais dos ratos foram todos (200±20) g. Não houve diferença significativa entre os grupos, indicando que o ambiente de alimentação e as condições dietéticas foram adequados para a sobrevivência dos ratos. Após 14 dias de administração de hidrocortisona, em comparação com o grupo normal, o aumento de peso corporal dos ratos do grupo modelo e de cada grupo de medicação foi reduzido, e houve uma diferença significativa (P<0.05). The body weight of the rats in the normal group was
3.2.4 Mudanças na temperatura corporal de ratos
Com base nas mudanças de temperatura corporal de três vezes em 0, 14 e 44 dias, o efeito da injeção intramuscular de injeção de succinato de hidrocortisona sódica na temperatura corporal de ratos e na recuperação da temperatura corporal de ratos após intervenção medicamentosa foi analisado . Os resultados são mostrados na Tabela 6.
3.2.5 Mudanças nas atividades espontâneas dos ratos
Com base nas mudanças no número de atividades espontâneas em 3 dias em 0, 14 e 44 dias, o efeito da injeção im de hidrocortisona de succinato de sódio no número de atividades espontâneas em ratos e na recuperação do número de atividades espontâneas atividades em ratos após tratamento com intervenção medicamentosa foram analisadas. Os resultados Ver Tabela 7.
Pode-se observar na Tabela 7 que 14 dias após a injeção de hidrocortisona, em comparação com o grupo normal, o número de atividades espontâneas dentro de 5 minutos de cada grupo diminuiu significativamente, e houve uma diferença significativa (P<0.05). One month after administration, compared with the model group, the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group increased (P<0.05); compared with the normal group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group; Compared with the JK group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities among the Cistanche deserticola administration groups. It shows that Cistanche deserticola extract can increase the number of spontaneous activities in rats with kidney-yang deficiency, and after 30 days of treatment, the number of spontaneous activities is close to that of normal rats.
3.2.6 Índice de órgãos
Após 30 dias de administração contínua, os ratos foram mantidos em jejum por 12 horas e sacrificados. A qualidade dos órgãos foi medida. Os efeitos do modelo de deficiência de yang renal induzido por hidrocortisona nos órgãos de ratos e a administração de diferentes extratos de Cistanche deserticola foram observados no nível do órgão. Recuperação de órgãos de ratos após tomar o medicamento. Após a administração de hidrocortisona, o peso corporal dos ratos variou muito e a massa dos órgãos também mudou significativamente. Este experimento usou o índice de órgãos como um indicador para considerar
Os efeitos nos órgãos foram observados antes e depois da administração. Os resultados são mostrados na Tabela 8.
Pode-se observar na Tabela 8 que, em comparação com o grupo normal, após a injeção intramuscular de succinato sódico de hidrocortisona em ratos, os índices de órgãos dos rins, testículos, epidídimo e próstata no grupo modelo diminuíram (P<0.05), indicating that hydrocortisone-induced The kidney-yang deficiency model in rats will cause changes in the indexes of the kidneys, testicles, epididymis and prostate, but has little effect on the seminal vesicles.
No geral, em comparação com o grupo modelo, os índices de órgãos de cada grupo de administração foram melhorados, indicando que a Cistanche deserticola crua, o vinho Cistanche deserticola e as pílulas Jingui Shenqi poderiam aliviar o declínio no índice de órgãos no modelo de deficiência de rim-yang.
Do ponto de vista de cada órgão, em comparação com o grupo modelo, o grupo vinho Cistanche deserticola pode aumentar significativamente o índice de órgão do rim (P<0.05). Comparing different drug administration groups, the wine Cistanche deserticola group is better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). ; From the perspective of testicular index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the testis (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group has a significant advantage over the raw Cistanche deserticola group. (P < 0.05); from the perspective of epididymal index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the epididymis (P < 0.05); from the perspective of seminal vesicle index, compared with the model group , the wine Cistanche deserticola group can significantly improve the organ index of the seminal vesicles (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group is significantly better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05); from the perspective of the prostate, compared with the model group In comparison, the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group could significantly increase the prostate organ index (P<0.05).
3.2.7 Detecção de indicadores de função renal
BUN e CREA refletem a função renal. O CREA no soro é o produto final da matéria orgânica contendo nitrogênio, e o BUN no soro é o principal produto final do metabolismo das proteínas. Ambos são excretados principalmente por filtração glomerular [10-11]. Quando a função renal está prejudicada, a função de filtração glomerular diminui e as concentrações de ambos aumentam. Os níveis sanguíneos de BUN e CREA refletem o estado da função renal: quanto mais elevados forem os seus níveis, mais graves serão os danos à função renal. Nesta experiência, os conteúdos de BUN e CREA no soro de rato foram detectados para avaliar os efeitos de cada grupo de administração na função renal em ratos com deficiência de yang renal induzida por hidrocortisona.
Como pode ser visto na Tabela 9, em comparação com o grupo normal, os conteúdos de BUN e CREA no grupo modelo aumentaram e houve uma diferença significativa (P<0.05), indicating that hydrocortisone caused kidney damage to rats. Compared with the model group, the wine Cistanche deserticola and raw Cistanche deserticola groups can reduce the content of CREA (P<0.05), thereby alleviating kidney damage to a certain extent.
3.2.8 Detecção de indicador de hormônio sexual
Os rins são a base do caráter inato e desempenham um papel importante no crescimento, desenvolvimento e processos vitais humanos. A medicina tradicional chinesa acredita que os rins governam a reprodução e que a relação entre os rins e o sistema reprodutivo é muito estreita. Cada vez mais pesquisadores descobriram que pacientes com deficiência de yang do rim apresentam alterações significativas no eixo hipotálamo-hipófise-gonadal, muitas vezes acompanhadas por sintomas de diminuição dos hormônios sexuais, como T e E2 [12]. Neste experimento, os conteúdos de T e E2 no soro foram medidos para determinar os efeitos de cada grupo de administração sobre hormônios sexuais em ratos com deficiência de yang renal induzida por hidrocortisona.
Como pode ser visto na Tabela 10, em comparação com o grupo normal, os conteúdos de T e E2 do grupo modelo diminuíram (P<0.05), indicating that hydrocortisone can cause a decrease in rat sex hormone levels. Compared with the model group, each administration group was able to significantly increase the levels of T and E2 in serum (P<0.05) and improve the decrease in sex hormones induced by hydrocortisone. Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group was better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). Generally speaking, wine Cistanche deserticola has obvious performance in increasing T and E2 in the serum of rats with kidney yang deficiency, which is consistent with literature reports that phenylethanol glycosides, the main components of wine Cistanche deserticola, have hormone-like effects [13].
3.2.9 Detecção de índice antioxidante
SOD é um antioxidante que reflete a capacidade do corpo de eliminar radicais livres, enquanto o MDA é o produto final da reação de estresse oxidativo e pode refletir o grau de dano oxidativo ao corpo. Neste experimento, os conteúdos de SOD e MDA nos testículos foram medidos para determinar a atividade antioxidante de cada grupo de administração contra o modelo de deficiência de yang renal induzido por hidrocortisona.
Como pode ser visto na Tabela 11, em comparação com o grupo normal, o conteúdo de SOD no grupo modelo diminuiu (P<0.05). After 1 month of administration, compared with the model group, the SOD content in the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group increased. Compared with the normal group, the MDA content in the model group increased (P<0.05), indicating that the testicular tissue of rats with kidney-yang deficiency induced by hydrocortisone was oxidatively damaged. After being given Cistanche deserticola extract or Jingui Shenqi Pill positive medicine, each administration group was able to significantly reduce the content of MDA in testicular tissue and alleviate the oxidative damage caused by hydrocortisone. Taken together, both raw Cistanche deserticola and wine Cistanche deserticola can improve the body's ability to resist oxidative damage and alleviate oxidative damage caused by hydrocortisone.
(1) Agrupamento: Os ratos tiveram livre acesso a água e dieta. Após 1 semana de alimentação adaptativa, eles foram divididos aleatoriamente em 5 grupos (Tabela 2), com 10 ratos em cada grupo, ou seja, grupo normal, grupo modelo, grupo Cistanche deserticola crua (PR), grupo Cistanche deserticola cozido em vinho (PW) e controle positivo do grupo Jinkui Shenqi Pill (JK). (2) Modelagem: Exceto o grupo normal, os outros quatro grupos foram todos injetados com injeção de succinato sódico de hidrocortisona, na dose de 20 mg/kg, por 14 dias consecutivos. O grupo normal foi injetado com a mesma dose de solução salina normal. O estado geral dos ratos de cada grupo foi observado para determinar se apresentavam sintomas como medo do frio, preferência por calor, membros frios, urina clara e longa, costas enroladas e arqueadas, cabelos opacos e bagunçados e depressão mental. Ao mesmo tempo, foram medidos o peso corporal, o número de atividades espontâneas, a ingestão alimentar, a ingestão hídrica, o débito urinário e outros indicadores dos ratos de cada grupo.
