Extratos de Cistanche Deserticola podem antagonizar a imunossenescência e prolongar a vida útil em camundongos com senescência acelerada de camundongos 8 (SAM-P8)

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As 8 subcepas propensas a camundongos acelerados por senescência (SAM-P8), amplamente aceitas como modelo animal para o estudo de drogas antienvelhecimento e envelhecimento, foram usadas para examinar os efeitos da suplementação dietética com extratos de Cistanche deserticola (ECD), que tem sido amplamente utilizado em medicina tradicional chinesa por causa de sua capacidade percebida de promover a função imunológica em idosos. Camundongos SAM-P8 machos de oito meses de idade foram tratados com ECD por administrações orais diárias durante 4 semanas. Os resultados mostraram que a suplementação dietética de 150 mg/kg e 450 mg/kg de ECD poderia prolongar o tempo de vida medido pela análise de sobrevivência de Kaplan-Meier de maneira dose-dependente. A suplementação dietética de camundongos SAM-P8 por 4 semanas com 100.500 e 2.500 mg/kg de ECD mostrou resultar em aumentos significativos em células T virgens e células assassinas naturais no sangue e nas populações de células do baço. Em contraste, as células T de memória periférica e a citocina pró-inflamatória, IL-6 no soro, foram substancialmente diminuídas nos camundongos que ingeriram 100 e 500 mg/kg de ECD diariamente. Além disso, células Sca-1 positivas, os progenitores reconhecidos deingênuo periféricocélulas T, foram restauradas em paralelo. Nossos resultados fornecem suporte experimental claro para estudos observacionais clínicos de longa data que mostram queCistanchedeserticola possui efeitos significativos no prolongamento da vida e sugerem que isso é alcançado antagonizandoimunossenescência.

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1. Introdução

Cistanchedeserticola, um dos medicamentos/produtos de saúde tradicionais chineses mais populares, foi descrito em várias farmacopeias de ervas chinesas históricas como tendo propriedades antienvelhecimento. Consequentemente, tem sido amplamente utilizado na China para o tratamento de vários distúrbios relacionados à idade, incluindo demência senil, impotência, infertilidade, infecção crônica e distúrbios hematopoiéticos em idosos [1]. As abordagens químicas modernas permitiram que dois tipos principais de compostos, glicosídeos feniletanoides e oligossacarídeos, fossem isolados como os principais ingredientes ativos da Cistanche deserticola [1]. Na última década, Cistanche deserticola e seus extratos têm sido intensamente estudados e demonstrados serem capazes de proteger neurônios de lesões induzidas por neurotoxinas [2], inibindo a indução de tetracloreto de carbono.hepatotoxicidade[2], e promovendo a recuperação das células da medula óssea dos danos causados ​​pela radiação induzida pelo Co60 [3]. Também foi demonstrado que tem efeitos anti-inflamatórios, antioxidantes e antienvelhecimento [4]. No entanto, se Cistanche deserticola pode aumentar a vida útil e quais são os mecanismos moleculares subjacentes [3] associados às suas propriedades antienvelhecimento não foram rigorosamente testados.

A imunossenescência, ou seja, a alteração do sistema imunológico com a idade forma o pano de fundo contra o qual se observou o aumento da suscetibilidade a infecções, câncer, doenças neurodegenerativas e doenças autoimunes em idosos [5]. Intervenções terapêuticas, como restrição calórica [6] e suplementação de vitamina E, têm sido relatadas como eficazes em retardar a progressão da imunossenescência e, portanto, reduzir a morbidade de algumas doenças relacionadas à idade, além de prolongar a vida útil de humanos e roedores. [7, 8]. No entanto, os estudos nesta área são complicados pelo fato de que o envelhecimento está associado ao paradoxo de imunodeficiência simultânea e inflamação crônica [9]. Isso significa que a simples estimulação da proliferação de linfócitos ou anti-inflamação não representa intervenções terapêuticas ideais para lidar com o envelhecimento e condições relacionadas à idade [10]. Consequentemente, na busca de intervenções médicas capazes de prevenir ou aliviar condições relacionadas à idade, incluindo infecções, câncer, doenças autoimunes, aterosclerose e doenças neurodegenerativas, que são as principais causas de morte e incapacidade, e o reparo de defeitos do sistema imunológico deve ser acompanhado por uma inibição de respostas inflamatórias. O camundongo acelerado pela senescência [11] é um modelo de camundongo consanguíneo, derivado da linhagem AKR/J, que é amplamente utilizado em estudos de envelhecimento. A subestirpe P8 (SAM-P8) desses camundongos tem uma vida útil marcadamente menor quando comparada à subestirpe R1 (SAM-R1), que também apresenta um processo de envelhecimento mais lento [12]. Paralelamente ao envelhecimento prematuro, os camundongos SAM-P8 também apresentam aumento da senescência neurológica, imunossenescência e doenças relacionadas à idade.hematopoiéticodéficits que imitam de perto as características típicas do envelhecimento humano [13, 14]. A análise dos mecanismos subjacentes responsáveis ​​pelo processo de envelhecimento acelerado e distúrbios relacionados à idade indica que a disfunção mitocondrial [15], estresse oxidativo e aumento da taxa de mutação do DNA somático parecem estar envolvidos [16, 17]. Este sistema de camundongos, com seu fundo genético homogêneo, fornece um excelente modelo experimental para estudar o envelhecimento e a terapêutica antienvelhecimento [12]. Este estudo se concentrou em investigar se extratos de Cistanche deserticola são capazes de prolongar a vida útil de camundongos SAM-P8 e reverter seu status de imunossenescência.

Cistanche pode melhorar a imunidade e anti-fadiga

2. Materiais e métodos
2.1. Materiais. O fresco Cistanche deserticola YC MA foi coletado em várias áreas no noroeste da China, incluindo as regiões autônomas de Xinjiang, Neimenggu e Ningxia. As amostras usadas para preparar os extratos foram autenticadas pelo professor Pengfei Tu, especialista em farmacognosia do Departamento de Medicamentos Naturais da Faculdade de Ciências Farmacêuticas da Universidade de Pequim. O espécime de comprovante de Cistanche deserticola (número CD-2007-03-08) usado foi depositado no herbário da Escola de Ciências Farmacêuticas da Universidade de Pequim, China. 2.2. Preparação de Extratos de Cistanche deserticola (ECD) e Análise por HPLC. Cistanche deserticola (2.0 kg) seca ao ar e fatiada foi pulverizada e extraída duas vezes com 70 por cento de etanol durante 1 hora. As relações planta/etanol utilizadas foram 1/6 (p/p) na primeira extração e 1/4 (p/p) na segunda. Os dois extratos foram combinados e filtrados antes de serem concentrados a uma densidade relativa de 1,10–1,15 sob pressão reduzida a 60∘ C. Este concentrado foi então seco a vácuo e o pó resultante foi o extrato de Cistanche deserticola (ECD) utilizado ao longo deste estudo. Os componentes do ECD foram analisados ​​usando HPLC como descrito anteriormente [1]. Resumidamente, 100 mg de pó de ECD foi dissolvido em 10,0 mL de H2O e após filtração injetado no HPLC. A análise de HPLC foi realizada em um sistema de cromatografia líquida Agilent 1100 (Agilent Co., EUA). A fase móvel consistia em uma mistura de metanol (A) e 0,10 por cento de ácido metanóico (B). Um programa de cromatografia de gradiente foi empregado; isso foi 26,5 por cento (A) e 73,5 por cento (B) em 0-7 min, 26,5-29,5 por cento (A) e 73,5-70,5 (B) em 8-10 min, e 29,5 por cento (A) e 70,5 por cento (B ) em 20-27 min. A vazão foi mantida constante em 1,0 mL/min, o volume de injeção foi de 10 mL e a temperatura da coluna foi mantida em 25°C. Um detector de UV ajustado em 330 nm foi usado para monitorar a saída da coluna e gerar cromatogramas. Glicosídeos e oligossacarídeos feniletanoides foram identificados a partir de seus tempos de retenção e espectros de absorção. A quantificação foi realizada por curvas de calibração padrão externas. O rendimento de extratos de Cistanche deserticola (ECD) foi de cerca de 3,33 por cento e o teor de feniletanoides foi de 17,94 por cento. Acteoside e echinacoside foram os dois principais constituintes desta fração, com teores de 3,80% e 8,25%, respectivamente. Os oligossacarídeos representam 82 por cento do total de ECD. As concentrações dos principais componentes ativos do ECD são apresentadas na Tabela 1. 2.3. Análise do Período de Vida Animal. Os camundongos machos SAM-P8 e controle SAM-R1 foram adquiridos do Centro de Pesquisa e Reprodução de Animais de Laboratório do Centro de Ciências da Saúde da Universidade de Pequim (Pequim, China). Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Pesquisa em Animais da Universidade de Pequim e realizado de acordo com as diretrizes para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório da Universidade de Pequim. O número de certificação desses mouses era SCXK2001-2008. Os camundongos foram mantidos em gaiolas metabólicas padrão em condições ambientais controladas (22 ± 2∘ C, 45-60 por cento de umidade e ciclo claro/escuro de 12 h) e permitiram livre acesso a comida e água. Após 2 semanas de aclimatação, os animais foram divididos em cinco grupos: 3 grupos de tratamento com ECD, um grupo controle SAM-R1 e um grupo controle SAM-P8 sem tratamento. A dieta dos 3 grupos de tratamento foi complementada com uma dieta misturada com

diferentes concentrações de ECD: rendimento de doses médias baixas (50} mg/kg), médias (150 mg/kg) e altas (450 mg/kg) de ECD diário. Os grupos SAM-R1 e SAM-P8 sem tratamento foram alimentados com a mesma dieta sem ECD. A medição da ingestão alimentar de todos os animais foi realizada a cada três dias durante todo o experimento. A pressão arterial e o monitoramento da frequência cardíaca foram realizados de forma não invasiva a cada três meses durante o experimento para determinar o estado de saúde dos camundongos. O tempo de vida de cada camundongo foi registrado até a morte de todos os animais. 2.4. Análise de Células T Naive, Células T de Memória, Células NK e Células Positivas Sca-1 em Populações de Sangue Periférico e Células do Baço por Citometria de Fluxo. Camundongos SAM-P8 machos de oito meses de idade e camundongos SAM-R1 controle foram divididos em 5 grupos: 3 grupos de tratamento ECD de camundongos SAM-P8, um grupo controle SAM-P8 sem tratamento e um grupo controle SAM-R1. A dieta dos 3 grupos de tratamento foi suplementada por gavagem diária de ECD em doses de 1{136}}0 mg/kg, 500 mg/kg ou 2500 mg/kg. Após 4 semanas de tratamento, os animais foram fixados por 12 horas e então anestesiados com solução de pentobarbital sódico (50 mg/kg, injeção peritoneal, ip), e o sangue foi coletado e tratado com anticoagulante, citrato de sódio (2 mg/mL ). Os linfócitos do sangue foram coletados e analisados. Em seguida, os camundongos foram esfregados com álcool a 75 por cento e as cavidades abdominais foram abertas em um gabinete ultralimpo (coifa). Os baços foram lavados com PBS; depois moída e filtrada com um coador de células (70 𝜇m). A suspensão resultante de células esplênicas foi lavada e ressuspensa em meio PRMI 1640 na concentração de 2 × 106 /mL. As células esplênicas de cada camundongo foram divididas em 6 tubos para análise de citometria de fluxo. A concentração final de suspensão de células esplênicas em cada tubo foi de 2 × 105/100 𝜇L. Linfócitos de sangue periférico e linfócitos esplênicos foram incubados separadamente com FITC-CD4, PerceCD3, Perce-CD8a, PC-CD28, PE-CD44, FITC-CD45RB, PE CD49b/rosa e FITC-ly-6A/E ( Sca-1) (todos adquiridos da BD Biosciences, San Diego, CA, EUA) anticorpos monoclonais em temperatura ambiente por 30 min. A solução de lise, que se destina especificamente a lisar glóbulos vermelhos enquanto preserva os leucócitos, eliminando assim as células interferentes para análise de citometria de fluxo, foi incubada com sangue no escuro à temperatura ambiente por 5 min. Após centrifugação a 500 ×g por 5 min, o sobrenadante foi decantado. Em seguida, as células peletizadas foram lavadas 3 vezes com PBS, ressuspensas em solução salina tamponada com fosfato gelada (PBS, pH 7,4) contendo 0,01 por cento de azida de sódio e submetidas a FCM análise. As subpopulações de linfócitos foram analisadas por citometria de fluxo usando um citômetro de fluxo FACS Calibur (BD Biosciences, San Diego, CA, EUA) e software de análise BD CellQuest. 2.5. Avaliação da Viabilidade Celular de Linfócitos T Periféricos por Anexina V-FITC e PI Dupla Coloração e Análise FACS. Após a suplementação dietética de camundongos SAM P8 com três doses de ECD por 4 semanas, os animais foram presos por 12 horas e depois anestesiados, e o sangue foi coletado e analisado. Os linfócitos apoptóticos e necróticos viáveis ​​foram quantificados usando o kit Anexina V-FITC (Beijing Biosea Biotechnology Co., Ltd., Pequim, China). Os linfócitos foram submetidos a dupla coloração com anexina V marcada conjugada com isotiocianato de fluoresceína (Anexina V-FITC) e iodeto de propídio (PI). Resumidamente, suspensões de linfócitos contendo aproximadamente 106 células/mL foram lavadas duas vezes com PBS e suspensas em 200 𝜇L de tampão de ligação (10 mM HEPES/NaOH, pH 7,4, 140 mM NaCl, 2,5 mM CaCl2) e 10 𝜇L de Anexina V-FITC foi adicionado à suspensão de células. Após 15 min de incubação no escuro à temperatura ambiente, foram adicionados mais 300 𝜇L de tampão de ligação e 5 𝜇L PI. Imediatamente após mais 5 min de incubação no escuro, as amostras de linfócitos duplamente corados foram analisadas usando um citômetro de fluxo, FACS Calibur (BD Biosciences, San Diego, CA, EUA). 2.6. Determinação de Citocinas Plasmáticas por Imunoensaio Cytometric Bead Array (CBA). Os níveis de citocinas no plasma foram quantificados usando um kit de ensaio cytometric bead array (CBA) (BD Biosciences, San Diego, CA, EUA) capaz de detecção simultânea de IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL-6, IL{{96 }}, IL-10, GM-CSF e IL-3 em uma única amostra. Portanto, este imunoensaio multiplexado permitiu a detecção de citocinas imunoestimulantes (IL{101}}), citocinas pró-inflamatórias (IFN-𝛾, TNF- 𝛼 e IL{104}}), citocinas inibitórias inflamatórias (IL{{105 }}) e citocinas hematopoiéticas (IL{106}} e GM-CSF). Resumidamente, 50 𝜇L de plasma foram misturados com 50 𝜇L de esferas de captura de citocinas conjugadas com PE que foram revestidas com anticorpos de captura específicos para IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL-6, IL-2, IL proteínas -10, GM-CSF e IL-3. Após 2 horas de incubação à temperatura ambiente, as amostras foram lavadas em solução salina tamponada com fosfato gelada (PBS, pH 7,4) contendo 0,01 por cento de azida de sódio, depois fixadas em 0,5 mL de paraformaldeído a 1 por cento em PBS e mantidas a 4∘ C em o escuro até a análise e, em seguida, analisado pelo citômetro de fluxo FACS Calibur (BD Biosciences, San Diego, CA, EUA). 2.7. Análise Estatística. Os dados são apresentados como valores médios ± DP As comparações entre os diferentes grupos foram feitas por ANOVA de uma via com um teste post hoc. No estudo de expectativa de vida, os dados foram submetidos à análise de sobrevida de Kaplan-Meier, que incluiu o uso dos testes Log-rank (Mantel-Cox) e Gehan-Breslow Wilcoxon. A análise estatística foi realizada usando o Statistical Package for Social Sciences for Windows (SPSS, Chicago, IL) e um valor 𝑃 inferior a 0,05 foi considerado significativo.

3. Resultados
3.1. Análise de Potenciais Componentes Ativos em Extratos de Cistanche deserticola (ECD). Conforme mostrado na Tabela 1, o ECD é composto principalmente por dois tipos de compostos, glicosídeos feniletanoides e oligossacarídeos. Nos glicosídeos feniletanoides foram identificados o equinacósido, acetonídeo e 8-ácido epilogânico, enquanto nos oligossacarídeos, apenas o galactitol foi identificado.

Figura 1: Os efeitos dos extratos de Cistanche deserticola (ECD) no tempo de vida de camundongos SAM-P8. Camundongos machos com 8 meses de idade acelerados por senescência/camundongos propensos 8 (SAM-P8) foram divididos aleatoriamente em 4 grupos (em cada grupo, 𝑛 {{10}}): 3 grupos de tratamento e um não -grupo controle de tratamento. A subcepa não senescente (SAM-R1) de camundongos foi usada como controle experimental. A ingestão alimentar de todos os animais foi monitorada durante todo o experimento em intervalos de 3-dias. Os 3 grupos de tratamento foram alimentados ad libitum em dietas suplementadas com doses baixas (50 mg/kg), médias (150 mg/kg) e altas (450 mg/kg) de Cistanche deserticola extrato (ECD). Os dois grupos de animais controle foram alimentados com a mesma dieta sem suplementação de ECD. (a) Curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier de camundongos SAM-P8 com dieta ECD ou controle de veículo. A análise de sobrevida de Kaplan-Meier foi realizada por meio dos testes Log-rank (Mantel-Cox) e Gehan-Breslow-Wilcoxon. (b) Histograma do tempo médio de vida dos grupos de camundongos. As barras de erro mostram que o desvio padrão da média e a significância estatística foram realizados usando análise ANOVA seguida de teste 𝑡 post hoc. ###𝑃 < 0,001="" sam-p8="" versus="" sam-r1;="" ∗∗𝑃="">< 0,01="" grupo="" tratado="" com="" alta="" dose="" versus="" sam-p8;="" ∗𝑃="">< 0,05="" grupo="" tratado="" com="" dose="" média="" versus="" sam-p8="" (em="" cada="" grupo,="" 𝑛="">

3.2. O Impacto dos Extratos de Cistanche deserticola na Vida Média de Camundongos SAM-P8. Para este e estudos subsequentes, camundongos SAM-P8 machos de oito meses de idade foram divididos em 4 grupos. Entre eles, um grupo de camundongos foi alimentado com dieta normal sem ECD, os outros 3 grupos ingeriram separadamente as dietas que contêm diferentes proporções de ECD. Camundongos da subcepa SAM-R1, que possuem processo de envelhecimento e tempo de vida normal, foram usados ​​como grupo controle em todos os experimentos. Em comparação com o grupo controle SAM-R1, o tempo de vida médio dos camundongos SAM-P8 foi significativamente reduzido (Figura 1(a); 𝑃 < 0.001).="" embora="" a="" suplementação="" da="" dieta="" com="" a="" dose="" baixa="" (50="" mg/kg)="" de="" ecd="" não="" tenha="" produzido="" um="" aumento="" significativo="" no="" tempo="" de="" vida="" dos="" camundongos="" sam-p8,="" nas="" doses="" suplementares="" média="" (150="" mg/kg)="" e="" alta="" (450="" mg/ml)="" doses,="" houve="" um="" aumento="" dependente="" da="" dose="" na="" expectativa="" de="" vida="" (figuras="" 1(a)="" e="" 1(b);="" 𝑃="">< 0,05–0,01)="" que="" foi="" confirmado="" pela="" análise="" de="" sobrevida="" de="" kaplan-meier,="" que="" incluiu="" o="" uso="" do="" log-rank="" (="" mantel-cox)="" e="" gehan-breslow-wilcoxon.="" 3.3.="" reversão="" da="" imunosenescência="" em="" camundongos="" sam-p8="" por="" extratos="" de="" cistanche="" deserticola="" (ecd).="" uma="" diminuição="" de="" linfócitos="" t="" virgens="" periféricos="" e="" um="" aumento="" concomitante="" de="" linfócitos="" t="" de="" memória="" periférica="" são="" características="" proeminentes="" da="" imunossenescência="" que="" são="" amplamente="" consideradas="" como="" as="" principais="" razões="" subjacentes="" às="" anormalidades="" imunológicas="" relacionadas="" à="" idade.="" esta="" imunossenescência="" em="" sam-p8="" em="" relação="" a="" animais="" sam-r1="" foi="" claramente="" evidente="" quando="" a="" análise="" facs="" foi="" usada="" para="" enumerar="" linfócitos="" (cd3="" mais="" cd44low="" cd45rbhigh)="" como="" um="" indicador="" de="" células="" t="" virgens="" e="" linfócitos="" (cd3="" mais="" cd44high="" cd45brlow)="" como="" um="" indicador="" de="" memória="" t="" células.="" assim,="" tanto="" no="" sangue="" periférico="" (figura="" 2)="" quanto="" nas="" populações="" de="" células="" do="" baço="" (figura="" 3)="" foram="" observados="" níveis="" reduzidos="" de="" células="" t="" virgens="" e="" níveis="" aumentados="" de="" células="" t="" de="" memória="" em="" camundongos="" sam-p8.="" a="" suplementação="" da="" dieta="" de="" camundongos="" sam-p8="" com="" ecd="" foi="" capaz="" de="" reverter="" esses="" indicadores="" de="" imunossenescência="" de="" forma="" dose-dependente="" em="" populações="" de="" sangue="" periférico="" (figura="" 2)="" e="" de="" células="" do="" baço="" (figura="" 3).="" como="" um="" indicador="" adicional="" da="" reversão="" da="" imunossenescência="" pela="" suplementação="" da="" dieta="" com="" ecd,="" foi="" analisado="" o="" nível="" de="" células="" natural="" killer="" [18],="" um="" importante="" marcador="" celular="" do="" sistema="" imune="" inato.="" isso="" mostrou="" que="" a="" suplementação="" da="" dieta="" ecd="" resultou="" em="" um="" aumento="" dependente="" da="" dose="" nas="" células="" nk="" (cd3="" mais="" cd49="" mais)="" nas="" populações="" de="" linfócitos="" do="" sangue="" periférico="" (figura="" 4)="" e="" das="" células="" do="" baço="" (figura="" 5).="" 3.4.="" extratos="" de="" cistanche="" deserticola="" fortalecem="" a="" intensidade="" de="" fluorescência="" relativa="" de="" células="" positivas="" sca-1="" em="" camundongos="" sam-p8.="" o="" antígeno="" de="" células-tronco-1="" (sca-1)="" é="" um="" dos="" biomarcadores="" mais="" proeminentes="" de="" células-tronco="" hematopoiéticas="" (hsc)="" em="" populações="" de="" células="" da="" medula="" óssea.="" as="" células="" sca{73}}="" positivas="" também="" representam="" progenitores="" de="" linfócitos="" que="" foram="" recentemente="" exportados="" da="" medula="" óssea="" para="" o="" sangue="" periférico,="" onde="">

4. Discussão

A defesa imunológica contra microrganismos recém-invasivos ou células tumorais endógenas depende da diversidade do repertório de células T, que por sua vez depende da geração e manutenção de células T virgens [19]. Durante o processo de envelhecimento, a diversidade do repertório de células T diminuiu drasticamente devido à depleção progressiva de células T virgens no pool de reserva periférico. Acredita-se que essa escassez de células T virgens responsivas seja responsável pela suscetibilidade dos idosos à infecção, câncer e resultados ruins após a vacinação [20]. Várias intervenções, incluindo restrição calórica [7], exercício [21] e suplementação de vitamina E [8], foram usadas para repor com sucesso as células T virgens e, assim, prolongar a vida útil e reduzir o aparecimento de infecções e câncer entre os idosos. Neste estudo, demonstramos que o ECD é capaz de aumentar o nível de células T virgens no pool periférico e houve uma concomitante extensão do tempo de vida e redução na frequência de formação de tumores em camundongos acelerados por senescência (grupo terapêutico de ECD versus SAM-P8, 0 versus 1/6). Portanto, parece razoável concluir que a capacidade do ECD de reverter a depleção dependente da idade de células T virgens periféricas pode contribuir para seus efeitos conhecidos na redução de doenças relacionadas à idade que derivam de observações clínicas de longo prazo.

5. Materiais e Métodos

5.1. Materiais. Na resposta imune normal, após a contenção e eliminação de um antígeno estranho, a maioria das células T expandidas clonalmente sofre apoptose com apenas uma pequena fração sendo retida como células T de memória. Consequentemente, à medida que um organismo imunocompetente envelhece, as células T de memória periféricas se acumulam como resultado de uma vida inteira de exposição a antígenos estranhos, convertendo células T virgens em células de memória [22, 23]. Vários estudos sugeriram que defeitos de apoptose de linfócitos em animais mais velhos e humanos também contribuem para o aumento do compartimento de células T de memória [24, 25]. Além disso, um estudo recente mostrou que uma superabundância de células T de memória periférica pode inibir a proliferação homeostática de células T virgens [26]. Esses estudos recentes também sugeriram que as células T de memória podem secretar altos níveis de citocinas pró-inflamatórias que podem contribuir para inflamações persistentes em vários tecidos dos idosos. Consequentemente, a redução do nível de células T de memória deve ser benéfica tanto para a proliferação homeostática de células T virgens quanto para aliviar o excesso de estado inflamatório observado em organismos mais velhos. Neste estudo, a suplementação dietética com ECD mostrou ser capaz de reduzir o nível de células T periféricas de memória e aumentar os níveis de células T virgens. Além disso, a suplementação de ECD aumentou a apoptose em populações de linfócitos periféricos, potencialmente abrindo espaço para novos linfócitos virgens. A necrose em linfócitos periféricos, que é induzida principalmente pelo estresse oxidativo em animais senis, também foi inibida. Extensas evidências existem para indicar que o envelhecimento em um organismo não é apenas caracterizado por deficiência imunológica, mas também por um aumento na inflamação crônica [27]. O estado pró-inflamatório é mais claramente manifestado em níveis aumentados de citocinas pró-inflamatórias, incluindo IL-6, TNF- 𝛼 e IL-1𝛽, na circulação, juntamente com o aumento da frequência de doenças inflamatórias crônicas associadas ao envelhecimento, como Doença de Alzheimer, doença de Parkinson e aterosclerose. Uma das citocineses inflamatórias mais proeminentes IL-6 e sua concentração plasmática aumenta com o envelhecimento e doenças relacionadas à idade [18, 28, 29] e estudos epidemiológicos sugerem que IL-6 é um bom biomarcador de longevidade, pois está intimamente relacionado à mortalidade em coortes de pacientes idosos [30, 31]. Consistente com isso, várias intervenções terapêuticas que diminuem a concentração de IL{20}} são capazes de aliviar doenças relacionadas à idade [18]. Nesse contexto, foi significativo que, neste estudo, a suplementação dietética com ECD foi capaz de reduzir as concentrações periféricas de IL-6, com a implicação de que esse efeito pode contribuir para os mecanismos subjacentes de redução da frequência de doenças relacionadas à idade que foram obtidos através do uso a longo prazo do ECD na prática clínica. Juntamente com as mudanças na resposta imune adaptativa que ocorrem com a idade, há também grandes mudanças na imunidade inata à medida que o organismo envelhece. Entre estas, as mudanças nas células natural killer [18], a primeira linha de componentes celulares para fornecer lise citotóxica direta de células tumorais e células infectadas por vírus, têm sido extensas, uma vez que os idosos mostram maior suscetibilidade ao desenvolvimento de tumores e infecções por vírus. 32]. Este estudo indicou que as células CD3 mais Ly49 mais NK estavam presentes em níveis significativamente mais baixos em camundongos senis SAM P8 em comparação com animais controle SAM-R1, o que pode ser outro fator subjacente responsável pelo aumento da suscetibilidade de camundongos idosos ao câncer e à infecção por vírus. O aumento no nível de células NK observado neste estudo após a suplementação dietética com ECD pode, portanto, ser benéfico para organismos idosos em termos de maior resistência ao desenvolvimento de tumores e infecção por vírus. No entanto, mais estudos são necessários para esclarecer o papel do efeito do ECD nas células NK em organismos envelhecidos. Em conclusão, este estudo mostrou que o tratamento da subcepa propensa a camundongos acelerada pela senescência, SAM P8, com ECD pode induzir uma reversão significativa das alterações de imunossenescência relacionadas à idade. As deficiências nas populações de células T periféricas e do baço de células T virgens e células NK foram reduzidas, enquanto os níveis de células T de memória redundantes também foram reduzidos. Além disso, a suplementação dietética com ECD foi capaz de suprimir tanto necroses em linfócitos periféricos quanto os níveis da citocina pró-inflamatória, IL-6. Finalmente, além de provocar mudanças no sistema imunológico senil, a suplementação dietética de ECD prolongou significativamente a vida útil dos camundongos senis SAM-P8.

Referências
[1] Y. Jiang e P.‑F. Tu, "Análise de constituintes químicos em espécies Cistanche," Journal of Chromatography A, vol. 1216, nº. 11, pp. 1970–1979, 2009.
[2] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba e S. Kadota, "Atividade hepatoprotetora de feniletanóides de Cistanche deserticola", Planta Medica, vol. 64, nº. 2, pp. 120-125, 1998.
[3] "Imunologia e envelhecimento na Europa. Anais da 2ª Conferência sobre Biologia Básica e Impacto Clínico da Imunosenescência. Março 22-26, 2001, Córdoba, Espanha," Experimental Gerontology, vol. 37, não. 2-3, pp. 183–473, 2002.
[4] G.-D. Xuan e C.-Q. Liu, "Pesquisa sobre o efeito dos glicosídeos feniletanoides (PEG) do Cistanche deserticola no antienvelhecimento em camundongos envelhecidos induzidos por D-galactose", Journal of Chinese Medicinal Materials, vol. 31, não. 9, pp. 1385–1388, 2008.
[5] D. Aw, AB Silva e DB Palmer, "Immunosenescence: emergentes desafios para uma população envelhecida," Immunology, vol. 120, não. 4, pp. 435-446, 2007.
[6] M. Alizadeh, H. Pohla, A. Rehbein e G. Pawelec, "Cultura a longo prazo de linfócitos T humanos monoclonais: modelos para imunossenescência?" Mecanismos de Envelhecimento e Desenvolvimento, vol. 83, nº. 3, pp. 171-183, 1995.
[7] EH Greeley, E. Spitznagel, DF Lawler, RD Kealy e M. Segre, "Modulação da imunossenescência canina por restrição calórica ao longo da vida", Imunologia Veterinária e Imunopatologia, vol. 111, pp. 287-299, 2006.
[8] SN Meydani, SN Han e D. Wu, "Vitamina E e resposta imune no idoso: mecanismos moleculares e implicações clínicas", Revisões imunológicas, vol. 205, pp. 269-284, 2005.
[9] SG Deeks, "Infecção por HIV, inflamação, imunossenescência e envelhecimento", Revisão Anual de Medicina, vol. 62, pp. 141-155, 2011.
[10] M. Capri, D. Monti, S. Salvioli et al., "Complexidade de estratégias anti-imunosenescência em humanos", Artificial Organs, vol. 30, não. 10, pp. 730-742, 2006.