Parâmetros de extração e métodos de secagem de Cistanche Deserticola

Cistanche é a Cistanche deserticola YC Ma ouCistanche tubulosa (Schenk) Wightcaule carnudo seco com folhas escamosas da planta OrobanchiaceaeCistanche deserticola YC Ma[1]. O principal ingrediente ativo da Cistanche deserticola são os glicosídeos feniletanol [2-4]. Estudos farmacológicos demonstraram que tem as funções deafrodisíaco, melhorando a imunidade, emelhorando a memória[4-9].

Nos últimos anos, a metodologia de superfície de resposta tem sido amplamente utilizada na extração da medicina tradicional chinesa [{{0}}]. O método de superfície de resposta tem as vantagens inerentes de alta precisão de detecção, menor número de experimentos necessários, previsão precisa de modelos de função e capacidade de refletir a relação entre fatores e valores previstos [15-17]. Portanto este experimento utiliza a pontuação abrangente do conteúdo dos cinco glicosídeos feniletanol como valor de resposta e utiliza o software Design-Expert 8.0.6.1 para projetar o experimento otimizar o processo de extração de Cistanche deserticola e fornecer informações para a identificação e estabelecimento de padrões de qualidade deCistanche deserticola.

Atualmente, o índicecomponentes equinaceasida e verbascosidasão tópicos de pesquisa importantes na tecnologia de extração e processamento deCistanche deserticola. A edição de 2015 da Farmacopeia Chinesa estipula que o método de processamento da Cistanche deserticola é “remover impurezas, lavar, umedecer, cortar em fatias grossas e secar”. [1], não existem regulamentações claras sobre o método de secagem. Portanto, este experimento utilizou oito métodos diferentes de secagem, incluindo secagem ao sol, secagem à sombra, secagem em forno (40, 60, 80, 100, 120 graus) e liofilização, para processar Cistanche deserticola [18], que forneceu base teórica para o processo de secagem de Cistanche deserticola.

Na orientação.

EXTRATO DE CISTANCHE COM 30% EQUINCAOSÍDEO

1 Materiais e instrumentos

Cistanche deserticola fresca foi colhida em outubro de 2018. O local de origem é Mitan Township, condado de Minqin, Baiyin, província de Gansu. O professor associado Guo Yehong, da Universidade Agrícola de Gansu, identificou-o como Cistanche deserticola YC Ma, um caule carnudo com folhas escamadas. Substâncias de referência equinaceasida (número de lote 82854-37-3, fração de massa maior ou igual a 98%), cistanqueasida A (número de lote 93236-42-1, fração de massa maior ou igual a 95%), verbascosídeo (número de lote { {5}}, fração de massa maior ou igual a 98%), isomurabasina (número de lote 61303-13-7, fração de massa maior ou igual a 98%), 2′-acetil verbascosídeo (número de lote 94492-24-7 , fração de massa maior ou igual a 95%) foram adquiridos de Chengdu Pu. Feide Biotecnologia Co., Ltd.; o ácido fórmico e o metanol são de qualidade cromatográfica, Merck Company of Germany; a água é água purificada e outros reagentes são de grau analítico.

Cromatógrafo líquido Waters Acquity, detector PDA, estação de trabalho de cromatografia Empower e sistema de gerenciamento de solvente quaternário; Limpador ultrassônico KQ-100E, Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.

Empresa; Balança analítica AL104, Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd.; Liofilizador LyoQuest-85, Telstar, Espanha.

2 Métodos e resultados

2.1 Preparação da solução de referência

Pesar com precisão as quantidades apropriadas deequinaceasida, cistanqueosídeo A, verbascosídeo, isorbascosídeo, e padrões de referência de 2'-acetil verbascosídeo, e adicionar 70% de metanol para fazer as concentrações de massa 1.04, 0,61, 0,63, 0,39 e 0,48 mg/mL de solução de referência mista.

2.2 Condições cromatográficas de Cistanche deserticola

Simetria Waters C18 (250 mm×4,6 mm, 5 μm); temperatura da coluna 30 graus, fluxo de volume 1,0 mL/min; a fase móvel é metanol-0. Solução aquosa de ácido fórmico a 1%, gradiente de eluição: 0~12 min, 29%~34% metanol; 12-40 min, 34%-40% de metanol; 30-35 min, 40%-35% de metanol; 35-40 min, 30% de metanol;

1-equinacosídeo 2-cistanche A 3-verbascosídeo 4-isoacteosídeo 5-2′-acetillacteosídeo

Fig. 1 HPLC de referência mista (A) e amostra de C. deserticola (B)

2.3 Preparação da solução de teste

Pesar precisamente 1 g de pó seco de Cistanche deserticola em um frasco Erlenmeyer (passado por uma peneira de malha 65-), adicionar 50 mL de metanol a 50%, pesar a massa, ultrassônico a 40 kHz a 150 W, esfriar até a temperatura ambiente , e faça a massa para obtê-la.

2.4 Investigação da relação linear

Tome {{0}}.1, {{20}}.5, 1, 2, 4 e 8 mL da solução de referência mista acima em 10 mL balão volumétrico e adicione 70% de metanol até a marca. Desenhe com precisão 10 μL e meça de acordo com as condições cromatográficas de "2.2". A concentração de massa é a abcissa (X) e a área do pico é a ordenada (Y). Realize a regressão linear e as equações de regressão são: Echinacea Y=128 049 X -830 189, r=0.999 5, faixa linear 10,4~832,0 ug/mL; Cistancheside AY=87 980 -447 963, r＝0.999 8, faixa linear 6.3-504,0 ug/mL; Isomurabasina Y＝92 831 Glicosídeo Y=79 207 X-304 428, r=0.999 4, faixa linear 4,8~384,0 ug/mL.

2.5 Revisão metodológica

2.5.1 Inspeção de precisão

Pegue 20 μL da solução de referência mista no item "2.1" e injete 6 vezes continuamente para medir as áreas de pico de equinaceasídeo, cistancheasídeo A, verbascosídeo, isorebascosídeo e 2'-acetilverbascosídeo. Os RSDs são 0,23%, respectivamente. , {{10}},71%, 0,59%, 0,41%, 0,29%, indicando que o instrumento tem boa precisão.

2.5.2 Teste de repetibilidade

Tomar 6 porções da mesma amostra de Cistanche deserticola, preparar a solução teste conforme item “2.3”, injetar a amostra nas condições cromatográficas do item “2.2”, e medir a área do pico. Resultados As frações de massa médias de equinaceasídeo, cistanqueosídeo A, verbascosídeo, isorebascosídeo e 2′-acetil verbascosídeo foram 1,83%, 0,21%, 2,34%, 0,13% e {{15 }},68%, respectivamente, e os RSDs foram de 1,32, respectivamente. %, 0,83%, 1,24%, 2,19%,

0,78%, indicando que o método possui boa repetibilidade.

2.5.3 Teste de estabilidade

Determine a estabilidade da mesma solução de teste (preparada de acordo com "2.3") em 0, 2, 4, 8, 12, 24 e 48 horas para obter equinaceasídeo, cistanqueosídeo A, verbascosídeo e isolebascosídeo. , área de pico de 2′-acetil verbascosídeo, RSD foram 0,58%, 0,21%, 1,58%, 1,46%, 2,19% respectivamente, indicando que a solução de teste estava estável em 48 h.

2.5.4 Teste de recuperação de amostra

Pegue 1 g de 6 amostras de Cistanche deserticola com conteúdo conhecido e adicione com precisão uma certa quantidade de solução de referência mista (Echinaceaside 1.06 mg/mL, Cistancheoside A 0.86 mg /mL, Verbascósido 2,17 mg/mL, Isolebascósido 0,79 mg /mL, 2′-acetil verbascósido 0,91 mg/mL), adicionar metanol a 70% para perfazer até 50 mL, e injetar amostras de acordo com as condições cromatográficas de "2.2". As recuperações médias medidas são de 101,52%, 99,21% e 102,62%, respectivamente. , 98,62%, 97,36%, RSD são 1,64%, 1,95%, 0,87%, 1,59%, 1,13% respectivamente, e a taxa de recuperação da amostra é boa.

Cistanche é uma erva tônica bem conhecida que pode nutrir e proteger os rins. Na teoria da medicina tradicional chinesa, Cistanche é a melhor erva para os rins. Cistanche é rico em equinacosídeo, acteosídeo e flavonóides. Portanto, Cistanche é um suplemento natural para os rins.