Efeitos do Cistanche na função antienvelhecimento e imunológica de ratos modelo de envelhecimento antes e após o processamento

Contato: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Abstrato: Objetivo: Explorar os diferentes produtos processados ​​deCistanchesherba na função antienvelhecimento da D - galactose em ratos e os efeitos da função do órgão imune. Métodos: Extraímos os diferentes produtos processados ​​de Cistanches herba. Os ratos SD foram divididos aleatoriamente em grupo controle em branco, grupo modelo de envelhecimento, grupo vitamina E, grupos de dose alta, média e baixa de cistanche, grupos de dose alta, média e baixa de cistanche. Com D - galactose o modelo de envelhecimento do rato foi estabelecido, após o tratamento, detectamos os teores de MDA, SOD e NO no soro de cada grupo de ratos e contamos o índice do baço e o índice do timo; e, em seguida, observou as alterações morfológicas patológicas dos tecidos do baço e mtDNA no cérebro. Resultados: O MDA e o NO no soro de ratos modelo de envelhecimento aumentaram significativamente (P<0. 01)="" and="" sod="" decreased="" significantly="" (fvo.="" 01).="" the="" model="" group="" had="" a="" tendency="" to="" decrease,="" thymus="" and="" spleen="" coefficient="" had="" obvious="" pathological="" spleen="" injury,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" was="" missing.="" different="" processed="" products="" of="">Cistanchesherba pode reduzir significativamente o MDA e NO(P<0. 01="" or="" p=""><0. 05).="" sod="" had="" a="" rising="" trend,="" improving="" the="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improving="" the="" pathological="" injury="" of="" the="" spleen.="" the="" mtdna="" in="" the="" brain="" of="" the="" high="" dose="" group="" and="" positive="" medicine="" group="" did="" not="" miss.="" and="" processing="" products="" were="" better="" than="" the="" raw="" cistanches="" herba.="" the="" high="" dose="" group="" was="" better="" than="" the="" low="" dose="" group.="" conclusion:="" different="" processing="" products="" of="" cistanches="" herbs="" have="" different="" anti-aging="" effects="" and="" immune="">

Palavras-chave: Cistanches herba; em processamento; envelhecimento; imune

A medicina tradicional chinesaCistanche deserticolaYC Ma ouCistanche deserticolaYC Ma ou C. tubulosa (Schenk) Wight é o caule carnoso seco e escamoso deCistanche deserticola(Schenk) Wight. É de natureza quente, sabor doce e salgado, e está no meridiano dos rins e do intestino grosso. É essencial para fortalecer o rim e fortalecer o yang A medicina é chamada de "ginseng do deserto" (2). Cistanche foi publicado pela primeira vez em "Materia Medica de Shen Nong". Ele está listado como o grau superior. Tem os efeitos de encher a essência e nutrir a medula, nutrir o rim e fortalecer o yang, cor agradável e prolongar a vida, nutrir sangue e secura hidratante, etc. . Doenças como dor, aprisionamento, colapso de sangue, etc.! 3_5]o A edição de 2010 de "A Farmacopeia da República Popular da China" contémCistanche tubulosaeCistanche E.

À medida que o corpo envelhece, haverá alguma degradação nas funções fisiológicas e na estrutura morfológica. Isso é o que muitas vezes chamamos de "envelhecimento". Suas manifestações são principalmente a deterioração de órgãos, tecidos e células, como a diminuição da elasticidade dos tecidos, a atrofia dos órgãos e a diminuição do número de células, o que fará com que as diversas funções do corpo declinam gradativamente. Experimentos confirmaram queCistanchetem efeitos antienvelhecimento "I", mas estudos comparativos sobre os efeitos antienvelhecimento deCistancheantes e depois do processamento ainda não foram relatados. Este experimento estuda principalmente aefeitos anti-envelhecimentodoCistancheantes e depois do processamento e fornece uma base científica para estudar o mecanismo do envelhecimento.

Echinacoside

1 material experimental

1.1 Animais experimentais

ratos SD, pesando 180-220 g. O SPF foi fornecido pela Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd., número de licença: SCXK (Liao) 2015-0001.

1.2 Medicamentos e reagentes

Cistanchefoi comprado de cinzas de carne selvagem de Alashan na Mongólia Interior, e foi identificado como o caule carnudo seco com folhas de escama deCistanche deserticolaYC Ma pelo Professor Zhai Yanjun do nosso hospital; o método de preparação de cada grupo de substâncias de teste é o seguinte, cistanche cru: cru O cistanche é cozido no vapor por 2 horas, cortado em fatias de 6 mm de espessura e seco a 70P. Pegue as fatias de Cistanche e extraia 3 vezes em água, depois combine a decocção e concentre até uma certa concentração. Preparo do Cistanche: Pegue o Cistanche cru e deixe de molho no vinho amarelo por 8 horas, adicione 1:1, cozinhe no vapor por 16 horas, corte em fatias de 6 mm de espessura e seque a 70 T. Pegue as rodelas de Cistanche e extraia 3 vezes com água, em seguida, combine a decocção e concentre-a até uma certa concentração. Cápsulas moles de vitamina E (número de lote 1407061, Shenyang Hongqi Pharmaceutical Co., Ltd.); D-galactose (número do lote 710B055, Beijing Soleibao Technology Co., Ltd.); Kit de óxido nítrico (NO) (número do lote: BPE30262); Kit malondialdeído (número do lote: BPE30262) MDA) (número do lote BPE30527); kit de superóxido dismutase (SOD) (número do lote: BPE3O387); todos fornecidos pela Shanghai Langdon Biotechnology Co., Ltd.; kit de extração de DNA mitocondrial animal tipo coluna (adquirido da Beijing Lab Technology Co., Ltd.); kit de PCR (adquirido da TIANGEN Reagent Company); outros reagentes são domesticamente puros.

1.3 Equipamento experimental

Ciclador de genes (Hangzhou Longkey Scientific Instrument Co., Ltd.); Leitor de microplacas (Thermo Fisher Technology Co., Ltd., EUA); Câmara de temperatura e umidade constante (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.); O tipo TGL-16C informa a máquina centrífuga de bancada (Shanghai Anting Scientific Instrument Factory); Misturador Vortex (Fábrica de Instrumentos Xangai Qingpu Huxi); Balança Eletrônica (Shanghai Yousheng Weighing Apparatus Co., Ltd.); Misturador Vortex (Fábrica de Instrumentos Xangai Qingpu Huxi).

2 Método experimental

2.1 Modelo animal e agrupamento

Após 1 semana de alimentação adaptativa, os ratos foram divididos aleatoriamente em um grupo em branco, um grupo modelo, um grupo controle, umCistanchegrupo de alta, média e baixa dose, e B. striata: grupos de alta, média e baixa dose, cada um dos quais com 9 grupos de 8 peças. Com exceção do grupo branco, os outros grupos foram injetados com D-galactose 167,5 mg/kg por via subcutânea pela manhã; o grupo branco foi injetado com igual volume de solução salina normal; à tarde, as doses alta, média e baixa de cinzas de carne e vinho receberam 5,48 e 2, respectivamente. 74, 1,37 g/kg da solução do produto de teste, o grupo controle positivo recebeu 2,75 mg/mL de vitamina E, o grupo branco e o grupo modelo receberam um volume igual de solução salina normal por administração intragástrica. Por 6 semanas consecutivas, eles foram finalmente condenados à morte e vários indicadores foram medidos.

2.2 Determinação do teor de SOD, MDA e NO em soro de rato

O sangue foi coletado da aorta abdominal do rato, centrifugado a 3000 r/min por 15 minutos para separar o soro sanguíneo e armazenado em -20 Y para uso posterior. A determinação do conteúdo de MDA.SOD.NO é realizada de acordo com as instruções do kit de teste.

2.3 Efeito sobre o peso dos órgãos imunológicos em ratos modelo de envelhecimento

Os ratos em cada grupo foram pesados ​​e sacrificados após a coleta do sangue. O baço e o timo foram retirados, lavados com solução salina, secos e pesados, e os coeficientes do baço e do timo foram calculados.

2.4 Observação da morfologia do tecido do baço

Os baços pesados ​​foram fixados com paraformaldeído a 4 por cento, incluídos em parafina, seccionados e corados com HE. As alterações nas secções patológicas do baço em cada grupo foram observadas ao microscópio.

2.5 Métodos estatísticos

Use o software SPSS para realizar uma análise de variância unidirecional e teste LSD-t para comparação de pares.

2.6 Detecção de mutações de mtDNA no cérebro

O tecido cerebral do rato foi colocado em um almofariz com nitrogênio líquido, rapidamente moído em pó, e então encaminhado para o método da literatura, conforme instruções do kit para extração de mtDNA de tecido cerebral.

A amplificação por PCR detecta a deleção do fragmento mtDNA4834: os primers referem-se à sequência completa do genoma do mtDNA de rato relatado por Gada-leta et al. (1898), e os iniciadores são sintetizados por Shanghai Shengang Industrial Co., Ltd. Pl: 5'-GCGAAGCTTAGAGCGTTAAC-3'P2: 5'AGTGAGATAAGGAAGCCTGC -3' P3: 5'-AG- GACTTAACCAGACCCAAAGACG{ {13}}, P4: 5'-CCTCTTTTCTGATAGGCGGG-3,

Sistema de reação de PCR: modelo de DNA 1 |xL, 2 x Taq PCR MasterMix 25 |xL, ddH2O 20 jiL, 2 primers cada. Condições de amplificação: primeira desnaturação de 95 Y por 5 min; desnaturação de 95 T por 30 s, recozimento de 56 T por 30 s, extensão de 72 T por 45 s, totalizando 35 ciclos; a última extensão de 72 T por 7 minutos. Os produtos amplificados foram submetidos a eletroforese em gel de agarose a 1,5 por cento.

Acteosídeo

3 Resultados e análise

3.1 O efeito deCistanchesobre os sinais físicos do envelhecimento de ratos

Em comparação com o grupo em branco, os ratos idosos mostraram pelagem escura e amarela, pele solta e sem brilho, pele solta, perda de cabelo, perda de apetite, atividade espontânea reduzida, lentidão de movimentos, protuberância da coluna, apatia, resposta lenta e outras manifestações do envelhecimento. Quanto maior o tempo de injeção, mais óbvios os sintomas. Comparado com o grupo de envelhecimento, o estado mental, a cor da pelagem, o apetite, a forma do corpo e a sensibilidade de reação dos ratos melhoraram com o aumento do tempo de administração em cada grupo de administração deCistanche. Entre eles, basicamente não houve diferença entre o grupo de produtos de alta dose e o grupo de controle.

3.2 O efeito deCistanchesobre o conteúdo de MDA, SOD e NO no soro de ratos modelo de envelhecimento

Os resultados são mostrados na Tabela I. Comparado com o grupo em branco, o grupo modelo mda.no aumentou significativamente (P<0.01), and="" sod="" was="" significantly="" reduced="" (p=""><0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" each="" treatment="" group="" mda.no="" was="" significantly="" lower=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" but="" it="" is="" not="" statistically="" significant;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="">Cistanche, o MDA.N0 dos grupos de dose média e baixa de Cistanche foi significativamente reduzido (F<0.05 ),="" sod="" tends="" to="" increase;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="" cistanche,="" the="" mda.no="" of="" the="" middle="" and="" low-dose="" groups="" of="" cistanche="" rose="" significantly="" (p=""><0.01 or="" p=""><0.05), and="" the="" sod="" tended="" to="" decrease;="" compared="" with="" the="" jiu="" nvrong="" gao="" dose="" group,="" the="" mda.no="" of="" the="" high-dose="" eggplant="" paste="" group="" increased="" significantly="" (p=""><0.01), and="" sod="" tended="" to="" decrease.="" this="" result="" shows="" that="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group="" compared="" with="" different="" dose="" groups,="" and="" the="" treatment="" effect="" of="" the="" product="" group="" is="" better="" than="" that="" of="" the="" raw="" product="" group="" compared="" with="" the="" same="" dose="" group.="">

3.3 Oefeito de Cistanchesobre a função imunológica de ratos modelo de envelhecimento Chi

3.3.1 O efeito de Cistanche no índice do baço e índice do timo de ratos modelo de envelhecimento

Os resultados são mostrados na Tabela 2. Comparado com o grupo em branco, o coeficiente de timo e baço no grupo modelo é g

Há uma tendência decrescente, mas não é estatisticamente significativa. Comparado com o grupo modelo, os coeficientes de timo e baço de cada grupo de tratamento foram significativamente aumentados (F<0.05); compared="" with="" the="" high-dose="" cistanche="">

Comparação dos grupos, os coeficientes do timo e do baço dos grupos de dose média e baixa deCistanchetem tendência a diminuir

Potencial; em comparação com a alta doseCistanche deserticolagrupo de alta dose, o timo e o baço dos grupos de pasta de vinho de dose média e baixa

O coeficiente visceral tem tendência decrescente; em comparação com a alta doseCistanche deserticolagrupo de alta dose, os coeficientes de timo e baço do grupo de alta dosecistache deserticolagrupo de alta dose têm uma tendência decrescente. Este resultado mostra que o grupo de alta dose é melhor que o grupo de baixa dose em comparação com diferentes grupos de dose, e o efeito do tratamento do grupo de produto é melhor que o do grupo de produto bruto em comparação com o mesmo grupo de dose.

Tabela 1 Comparação do teor de SOD.MDA.NO no sangue de ratos em cada grupo (n. =8,x ±s)

Observação:. Comparado com o grupo modelo I, P<005.><001; j="" air-day="" group="" comparison.=""><[)01; tlilll="" high-dose="" ether="" group="" jqi="" [i_low-dose="" group="" comparison.=""><005.><(). ()1;="" the="" high-dose="" product="" group="" is="" compared="" with="" the="" product="" tl="" and="" ff="" [journal="" f="" group.="" })=""><0.05.1l><(1o1; product="" high="" yanlian="" group="" q.="" pindaoli="" {group="" comparison.=""><005.><>

3.3.2 O efeito de alterações patológicas no baço deCistancheratos modelo de envelhecimento. O grupo branco tem uma cápsula esplênica fina e uniforme, trabéculas esplênicas claras sem edema, separação clara da polpa vermelha e branca, mais nódulos esplênicos e do mesmo tamanho, no centro do baço O número de células na bainha linfática ao redor do baço arteríolas é densa. No grupo modelo, o baço estava espessado, as trabéculas e o córtex estavam inchados, a polpa vermelha e branca não estava clara, a polpa branca estava significativamente reduzida, o número de linfócitos estava reduzido, um grande número de células inflamatórias estava infiltrado e o estrutura morfológica foi danificada. Embora o tamanho dos nódulos do baço em cada grupo de tratamento fosse diferente, os limites da polpa branca e vermelha eram claros. O número de células na bainha linfática ao redor da pequena artéria central do baço era denso e a morfologia e a estrutura foram restauradas. Além disso, o grupo de destiladores de alta dose foi capaz de melhorar as alterações patológicas. É melhor que o grupo da vitamina E, no qual oCistancheproduto é melhor do que o grupo de produtos brutos, e o grupo de alta dose é melhor que o grupo de baixa dose. Consulte a inserção X-XI.1-10 é o mtDNA nos cérebros de ratos no grupo em branco, grupo modelo, grupo controle e grupo elevado. mtDNA Figura 3 Resultados de eletroforese de produtos de amplificação de mtDNA PCR em cérebro de rato (iniciador PI.P2)

3.4 Deleção e mutação do mtDNA no cérebro

De acordo com os primers P3 e P4, um fragmento de mtDNA conservador de cerca de 770bp pode ser obtido. Da Figura 2 podemos ver que os fragmentos alvo foram amplificados em todas as 9 pistas, indicando que todos os 9 grupos de mtDNA foram extraídos com sucesso.

Determination of mtDNA4834 bp deletion mutation: If there is a rat mtDNA4834 bp deletion, primers P1 and P2 will amplify the 4834 bp loss and break the fusion gene fragment with a length of 597 bp. As shown in Figure 3, there is a clear DNA band between 500 l>pe 750 pb nas pistas 2, 4, 5, 7, 9 e 10. Os fragmentos foram recuperados e enviados para Hangzhou Baocheng Biotechnology Company para sequenciamento. Comparado com a sequência relatada por Gadateta et al. (1989), provou que há uma deleção de fragmentos de mtDNA de cerca de 4000-5000 bp. Portanto, mostra que há cerca de 4834 pb de deleção de mtDNA no cérebro do grupo modelo. As pistas 1, 3 e 8 não têm fragmentos, indicando que não há deleções de fragmentos mitocondriais em 1, 3 e 8. Os resultados mostraram que não havia fragmentos ausentes no grupo de levedura de destilaria de alta dose, o grupo de droga positivo, e o grupo branco, sugerindo que o grupo de levedura de destilaria de alta dose pode ter efeitos antienvelhecimento. Consulte a Figura 2~Figura 3.

1-10 é o mtDNA nos cérebros de ratos no grupo em branco, grupo modelo, grupo controle e grupo elevado. mtDNA Figura 3 Resultados de eletroforese de produtos de amplificação de mtDNA PCR em cérebro de rato (iniciador PI.P2)

Cistanche: anti-envelhecimento

4. Discussão

O modelo de envelhecimento causado pela administração intragástrica de D-galactose é atualmente um modelo de envelhecimento mais comumente usado. O modelo reduz principalmente a atividade de uma variedade de enzimas antioxidantes, de modo que um grande número de radicais livres é gerado durante o metabolismo do corpo, o que leva ao envelhecimento do corpo. As mudanças na morfologia do tecido são semelhantes às do envelhecimento natural ⑻. Um grande número de experimentos mostrou que o aumento anormal induzido por D-galactose no conteúdo de NO no cérebro e no córtex cerebelar e no sangue de camundongos idosos. Os resultados deste estudo confirmaram que o conteúdo sanguíneo de ratos idosos foi significativamente maior que o do grupo normal, o que foi semelhante aos resultados relatados na literatura “-m.

Neste experimento, o efeito antienvelhecimento do modelo de envelhecimento de ratos antes e após o processamento deCistanchefoi estudado. Os resultados mostraram o MDA e o N séricos nos ratos modelo de envelhecimento. Aumentou significativamente (P<0.01), sod="" significantly="" decreased="" (p=""><0.01), the="" model="" group="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" have="" a="" tendency="" to="" decrease,="" the="" spleen="" has="" obvious="" pathological="" damage,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" is="" also="" missing.="" different="" processed="" meat="" ash="" can="" significantly="" reduce="" the="" levels="" of="" mda="" and="" no="" (/=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" increase="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improve="" spleen="" pathological="" damage,="" and="" high="" mtdna="" in="" the="" brain="" the="" dose="" group="" and="" the="" positive="" drug="" group="" also="" did="" not="" appear="" to="" be="" missing.="" and="" the="" prepared="" meat="" puree="" is="" better="" than="" the="" raw="" meat="" puree,="" and="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group.="" research="" in="" recent="" years="" believes="" that="" aging="" is="" also="" related="" to="" the="" lipid="" peroxidation="" of="" biological="" membranes="" caused="" by="" free="" radicals.="" sod="" "'-e="" is="" an="" enzyme="" that="" scavenges="" superoxide="" free="" radicals.="" the="" older="" the="" body,="" the="" weaker="" the="" body's="" sod="" activity="" and="" the="" fewer="" antioxidants.="" this="" will="" increase="" the="" free="" radical="" damage="" factor="" mda,,4~,7],="" and="" eventually="" accelerate="" aging.="" in="" addition,="" the="" results="" of="" the="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" of="" aging="" model="" rats="" indicate="" that="" roujing="" rong="" can="" delay="" aging="" by="" improving="" the="" immune="" function="" of="" the="" body.="" the="" results="" of="" the="" study="" hope="" to="" provide="" a="" scientific="" basis="" for="" the="" clinical="" application="" of="">Cistanche.