Respostas dicotômicas à hipóxia fetal crônica levam a um fenótipo de envelhecimento predeterminado Ⅱ
Nov 29, 2023
Hipóxico
Rins Fetais
Exibir um perfil de expressão de proteína desregulada Para elucidar as vias moleculares subjacentes à RCIU induzida por hipóxia, rins recém-isolados de fetos E18.5 hipóxicos ou normóxicos foram submetidos ao perfil de proteoma ascendente usando um sistema nano-LC (Dionex UltiMate 3{{9 }}00 RSLC) acoplado a um espectrômetro de massa orbitrap de alta resolução (Thermo QExactive). A análise de componentes principais mostrou diferenças marcantes entre os rins hipóxicos e normóxicos (Fig. 2A). No total, foram identificadas 6.307 proteínas (FDR <0,01, Tabela S2 suplementar), das quais 436 foram significativamente desreguladas (FDR <0,05); 284 com abundância aumentada e 152 com abundância diminuída. O agrupamento de anotações funcionais usando ontologia genética (18–20) revelou enriquecimento de proteínas específicas mitocondriais, lisossomais, de ligação a RNA e DNA, bem como proteínas envolvidas em processos metabólicos específicos ou respostas imunes inatas (Fig. 2, B-D) . Categorizamos essas proteínas em relação a (1) formação de néfrons, (2) adaptação metabólica e (3) envelhecimento acelerado, conforme apresentado e discutido nos parágrafos seguintes.
A replicação reprimida do DNA e a síntese de proteínas contribuem para a formação restrita de novos néfrons na hipóxia crônica
Eventos adversos durante o desenvolvimento, como hipóxia fetal crônica, têm sido frequentemente associados à redução do número de néfrons (27, 29–32). No entanto, raramente foi possível demonstrar um mecanismo subjacente que explicasse de forma convincente esta descoberta. Agrupando todas as 64 proteínas desreguladas pertencentes aos termos GO "ligação ao DNA" e "ligação ao RNA" (um mapa de calor é mostrado na Fig. S2 suplementar) usando o banco de dados STRING (22) revelou múltiplas sub-redes, incluindo reparo de DNA, replicação de DNA, Splicing de mRNA e proteínas ribossômicas (Fig. 3A). Uma lista mais abrangente de processos ou caminhos enriquecidos é mostrada na Figura 3B (FDR <0.05). Destes, "Ribossomo" e "replicação de DNA" estavam entre os principais termos de proteínas reprimidas, enquanto splicing de mRNA e "degradação de RNA" estavam entre os principais termos de proteínas induzidas. Os processos de reparo do DNA mostraram um padrão de expressão bipartido. Aqui, as proteínas envolvidas na excisão de nucleotídeos ou no reparo de incompatibilidade foram reprimidas, mas aquelas que medeiam o "reparo por excisão de base" foram induzidas. Além disso, o nível de abundância do inibidor do ciclo celular p27Kip1 foi aumentado duas vezes (Fig. 3C) e o do marcador de proliferação Ki67 foi 3,4- vezes reduzido (Fig. 3D), o que em conjunto indica uma desaceleração da atividade celular. processo de divisão. Em particular, o nível de expressão de ARNm de Mki67, o gene que codifica para Ki67, foi significativamente reprimido em células tubulares proximais primárias de ratinho cultivadas sob condições hipóxicas (Fig. 3E). Esta repressão foi mediada pela hipermetilação da região promotora Mki67 em rins fetais hipóxicos (Fig. 3F). Assim, em rins hipóxicos fetais, a síntese de DNA, a tradução de mRNA e a maioria dos processos de reparo de DNA parecem estar diminuídas, reduzindo a capacidade das células de crescer e proliferar. Em conjunto aqui, pela primeira vez, os dados de perfil do proteoma fornecem evidências moleculares que explicam potencialmente a formação diminuída de néfrons.
O sistema imunológico inato e o estresse oxidativo são ativados em condições hipóxicas crônicas
Um dos termos mais enriquecidos que aparecem na análise de anotação funcional de todas as 436 proteínas e o mais importante para proteínas induzidas foi "desgranulação de neutrófilos" (Fig. 2, B e C), indicando uma ativação contínua do sistema imunológico inato emrins fetais hipóxicos. Das 34 proteínas associadas, 29 foram induzidas e cinco reprimidas (rosa na Fig. 4A). Entre as proteínas induzidas estavam muitas enzimas glicolíticas e relacionadas aos lisossomas, vários membros da família de proteínas S100A, a citocina inflamatória fator inibidor da migração de macrófagos (MIF), bem como as proteínas granulares primárias e secundárias, proteína granular neutrofílica (NGP), mieloperoxidase (MPO) , catelicidina (CAMP), proteína de reconhecimento de peptidoglicano 1 (PGLYRP1) e lactoferrina (LTF). Para verificar a invasão antecipada de neutrófilos em rins fetais hipóxicos e para descobrir a sua localização dentro do tecido, as secções renais foram coradas para MPO. Células positivas para MPO formaram aglomerados na zona nefrogênica do córtex renal, na proximidade dos vasos sanguíneos, adjacentes ao túbulo proximal, e ocasionalmente puderam ser encontradas em regiões medulares de amostras hipóxicas (Fig. 4D e Fig. S3 suplementar, A –C). Em contraste, os rins fetais normóxicos não apresentaram infiltração ou acúmulo de neutrófilos (fig. 4C). Foi demonstrado que a caveolina-1 (CAV1) aumenta a migração transcelular de células imunológicas (33). Consequentemente, o CAV1 foi induzido em rins fetais hipóxicos (Fig. S3D suplementar), mostrando coloração aumentada dos vasos sanguíneos renais, incluindo aqueles que atravessam a região cortical do rim fetal (Fig. 4, E e F). A desgranulação dos neutrófilos produz uma explosão local de espécies reativas de oxigênio, levando ao aumento do estresse oxidativo e danos aos tecidos, incluindo a oxidação do DNA. Um importante marcador de oxidação do DNA é a 8-hidroxi-2′ -desoxiguanosina (8-OHdG), que foi aumentada nos túbulos proximais e na zona nefrogênica dos rins fetais hipóxicos (Fig. 4, G e H), na vizinhança do agrupamento de neutrófilos. Este aumento no DNA danificado por 8-OHdG ocorreu apesar de uma indução simultânea de MGMT e OGG1 (Fig. 4, I e J), duas enzimas responsáveis pela remoção de 8-OHdG. Estes resultados demonstram uma activação contínua do sistema imunitário inato no rim em desenvolvimento, o que causa ainda mais danos nos tecidos, além do stress hipóxico. Juntamente com a reparação ineficaz destas lesões teciduais, pode ser iniciado um círculo vicioso que prejudica ainda mais a nefrogénese.
FIGO. 2. O perfil proteômico revela múltiplas alterações associadas à hipóxia. A, a análise dos componentes principais dos dados proteômicos mostrou uma separação clara entre rins fetais normóxicos e hipóxicos. B – D, agrupamento de anotação funcional de todas as proteínas significativamente desreguladas (B), proteínas induzidas (C) e proteínas reduzidas (D) A fração significativamente alterada de uma via (eixo x) é plotada em relação à sua importância de enriquecimento (y- eixo). O tamanho de cada ponto codifica o número total de membros nesse caminho. As proteínas induzidas mostraram enriquecimento de processos metabólicos (glicólise), proteínas mitocondriais ou lisossômicas e proteínas envolvidas na resposta do sistema imunológico (desgranulação de neutrófilos), enquanto proteínas reduzidas são enriquecidas para vias de ligação de DNA e RNA (um constituinte estrutural do ribossomo).
(PGLYRP1) e lactoferrina (LTF). Para verificar a invasão antecipada de neutrófilos em rins fetais hipóxicos e para descobrir a sua localização dentro do tecido, as secções renais foram coradas para MPO. Células positivas para MPO formaram aglomerados na zona nefrogênica do córtex renal, na proximidade dos vasos sanguíneos, adjacentes ao túbulo proximal, e ocasionalmente puderam ser encontradas em regiões medulares de amostras hipóxicas (Fig. 4D e Fig. S3 suplementar, A –C). Em contraste, os rins fetais normóxicos não apresentaram infiltração ou acúmulo de neutrófilos (fig. 4C). Foi demonstrado que a caveolina-1 (CAV1) aumenta a migração transcelular de células imunológicas (33). Consequentemente, o CAV1 foi induzido em rins fetais hipóxicos (Fig. S3D suplementar), mostrando coloração aumentada dos vasos sanguíneos renais, incluindo aqueles que atravessam a região cortical do rim fetal (Fig. 4, E e F). A desgranulação dos neutrófilos produz uma explosão local de espécies reativas de oxigênio, levando ao aumento do estresse oxidativo e danos aos tecidos, incluindo a oxidação do DNA. Um importante marcador de oxidação do DNA é a 8-hidroxi-2′ -desoxiguanosina (8-OHdG), que foi aumentada nos túbulos proximais e na zona nefrogênica dos rins fetais hipóxicos (Fig. 4, G e H), na vizinhança do agrupamento de neutrófilos. Este aumento no DNA danificado por 8-OHdG ocorreu apesar de uma indução simultânea de MGMT e OGG1 (Fig. 4, I e J), duas enzimas responsáveis pela remoção de 8-OHdG. Estes resultados demonstram uma activação contínua do sistema imunitário inato no rim em desenvolvimento, o que causa ainda mais danos nos tecidos, além do stress hipóxico. Juntamente com a reparação ineficaz destas lesões teciduais, pode ser iniciado um círculo vicioso que prejudica ainda mais a nefrogénese.
Adaptações metabólicas à hipóxia resultam em glicólise pronunciada no rim fetal
A hipóxia crônica é uma condição grave à qual as células precisam se adaptar por meio de alterações metabólicas para sobreviver. O mais importante é a manutenção da produção celular de ATP que, na ausência de oxigenação suficiente, requer uma mudança da fosforilação oxidativa para a glicólise. De todos os termos resultantes da anotação funcional, “processo glicolítico” foi o mais significativo (Fig. 2B). Todas as dez enzimas (vermelho ①–⑩ na Fig. 5A) necessárias para a conversão de glicose em piruvato foram induzidas emrins hipóxicos fetaisem comparação com controles normóxicos (um mapa de calor é mostrado na Fig. 5C). Além disso, as expressões do transportador de glicose 1 (SLC2A1, laranja na Fig. 4A) e da lactato desidrogenase A (LDHA, vermelho escuro na Fig. 5A) também foram aumentadas, o que deve facilitar o aumento da captação de glicose na célula e a redução aumentada de piruvato para lactato, respectivamente. A utilização alternativa do piruvato no ciclo do ácido cítrico pareceu ser impedida (1) pela expressão aumentada da piruvato desidrogenase quinase 1 (PDK1, vermelho escuro na Fig. 5A), que inativa o complexo piruvato desidrogenase nas mitocôndrias e, portanto, a oxidação do piruvato a acetil-CoA; e (2) por níveis reduzidos de piruvato carboxilase (PC), que catalisa a conversão de piruvato em oxaloacetato. Por outro lado, a frutose-1,6-bifosfatase 1 (FBP1, azul na Fig. 5A) foi reduzida, aumentando ainda mais o fluxo potencial de glicose em direção ao piruvato. Todas essas alterações enzimáticas favorecem a produção de lactato e, de fato, a concentração de lactato foi aumentada em rins fetais hipóxicos (Fig. 5B). A produção aumentada de lactato pode levar a uma acidificação desfavorável. No entanto, encontramos entre as proteínas enriquecidas os transportadores de monocarboxilato SLC16A3 e SLC5A8 (laranja na Fig. 5A), que são conhecidos por excretar lactato no espaço extracelular para evitar efeitos tóxicos da acidificação citoplasmática. Assim nosso modelo demonstra a notável capacidade dos rins fetais de se adaptarem à hipóxia crônica aumentando a atividade glicolítica
FIGO. 3. A formação de novos néfrons na hipóxia está associada à replicação reprimida do DNA e à síntese de proteínas. A, rede de interação de proteínas de proteínas de ligação de DNA e RNA significativamente alteradas derivadas do banco de dados STRING mostra vários agrupamentos de proteínas: proteínas ribossômicas (azul), proteínas envolvidas na replicação de DNA (verde), reparo de DNA (roxo) e splicing de mRNA ( vermelho). O marcador de proliferação Ki67 (Mki67) está marcado em preto, destacando sua estreita relação com o reparo e replicação do DNA. B, uma seleção de vias de proteínas de ligação a DNA e RNA significativamente alteradas dos bancos de dados KEGG e Reactome que exibiram as alterações mais proeminentes emrins hipóxicos, representado em ordem decrescente de significância. Os processos de splicing de RNA e degradação de RNA foram enriquecidos (vermelho), enquanto a tradução de RNA, replicação de DNA e vias de reparo foram reprimidas (azul). Somente processos com um FDR<0.05 are shown. C and D, the cell cycle inhibitor p27Kip1 was enhanced (unpaired two-tailed t test, Welch's correction, p = 0.0095), whereas the expression of the proliferation marker Ki67 was reduced (unpaired two-tailed t test, Welch's correction, p = 0.0078) in hypoxic fetal kidneys. E, hypoxia reduced the mRNA expression level of Mki67 in mouse primary proximal tubular cells (unpaired two-tailed t test, p < 0.0001). F, this reduction was mediated by hypermethylation of the Mki67 promoter in hypoxic fetal kidneys. Open circle unmethylated, black circle methylated (Fisher's exact test, p = 0.0016; Mann–Whitney U-test, p = 0.0431)
FIGO. 4. As proteínas envolvidas na resposta inflamatória e no estresse oxidativo são enriquecidas nos néfrons recém-formados sob hipóxia. A, representação de todas as 34 proteínas alteradas significativamente para a anotação denominada degranulação de neutrófilos (círculos rosa) entre todas as proteínas significativas (círculos cinza maiores) e não significativas (círculos cinza menores) do nosso conjunto de dados. 29 tiveram maior nível de abundância, enquanto cinco foram reduzidos. B, um mapa térmico mostrando todas as proteínas rosa em (A) e sua indução ou repressão na hipóxia, representada em ordem decrescente de abundância de proteínas. C – H, imagens imuno-histoquímicas representativas de E18.5 normóxico ourins hipóxicosmostrando infiltração de neutrófilos e estresse oxidativo. C e D, a imuno-histoquímica para o marcador neutrófilo mieloperoxidase (MPO) revelou agrupamento dessas células na proximidade de néfrons recém-formados (asterisco) e adjacentes aos vasos sanguíneos renais (ponta de seta) de rins fetais hipóxicos (D). Nos controles normóxicos (C), as células positivas para MPO raramente estavam presentes. (Barras de escala 100 μm). E e F, imuno-histoquímica representando expressão aumentada de caveolina-1 (CAV1) em vasos sanguíneos renais de rins fetais hipóxicos (F) em comparação com controles (E) (barras de escala 200 μm). G e H, 8-hidroxi-2′ -desoxiguanosina (8-OHdG), um marcador de dano oxidativo ao DNA, foi proeminentemente aumentado em néfrons recém-formados (asterisco) no córtex renal e em células dos túbulos proximais (seta) de rins hipóxicos (H), enquanto apenas algumas células foram coradas em tecido normóxico (G) (barras de escala 200 μm). I e J, esse aumento no dano ao DNA ocorreu apesar de um aumento simultâneo na O-6-metilguanina-DNA metiltransferase (MGMT; teste t bicaudal não pareado, p=0.0002) (I) e {{ 15}}oxoguanina glicosilase (OGG1; teste t bicaudal não pareado, p=0 0,0063) (J), duas enzimas envolvidas no reparo de DNA oxidado.
o que garante produção suficiente de ATP e sobrevivência sob esta condição adversa.
A hipóxia fetal promove a importação compensatória de proteínas mitocondriais e a montagem da cadeia respiratória
Além do aumento da glicólise, encontramos múltiplas alterações nos níveis de abundância de proteínas mitocondriais (um mapa de calor é mostrado na Figura S4 suplementar). A geração de redes de proteínas usando STRING revelou vários clusters compreendendo proteínas envolvidas na translocação de proteínas para mitocôndrias, fosforilação oxidativa e proteínas ribossômicas mitocondriais (Fig. 5, D e E). É digno de nota que múltiplas proteínas ligadas à membrana mitocondrial interna foram induzidas, o local onde ocorre a fosforilação oxidativa (OXPHOS). OXPHOS abrange cinco complexos multiproteicos dispostos ao longo da membrana mitocondrial interna. Entre as proteínas induzidas estavam componentes dos complexos OXPHOS (NDUSF6), III (UQCR10), IV (COX6B1, COXC e COX7A2) e V (ATP5J, MTATP8), mas também UQCC3 e SCO2, que são necessários para a correta montagem e função do complexo e IV, respectivamente (Fig. 5D e Fig. S4 suplementar). SDHC e SDHD, subunidades do complexo II, também foram reguladas positivamente (1,6- e 2,5-vezes, respectivamente), mas não alcançaram significância estatística. Além disso, não apenas os componentes da cadeia respiratória foram enriquecidos emrins hipóxicos, mas também uma infinidade de proteínas que medeiam sua importação para as mitocôndrias. Isso incluiu membros da translocase da membrana externa (TOM - TOMM22) e do complexo de translocase da membrana interna TIM22 (TIMM22, TIMM9 e TIMM10 e o complexo TIMM8-TIMM13- associado (Fig. 5D e Fig. suplementar . S4). Entre as 21 proteínas mitocondriais com abundância reduzida estavam quatro proteínas ribossômicas mitocondriais, bem como proteínas envolvidas no catabolismo de aminoácidos, biossíntese de vitaminas ou beta-oxidação de ácidos graxos (Fig. 5, D e E, e Fig. suplementar S4) Estas descobertas apontam para uma potencial disfunção mitocondrial e esforços aparentes para regenerar proteínas danificadas (34), apesar do aumento da glicólise e da redução geral da síntese proteica.
Biogênese lisossômica e autofagia são aprimoradas emRins fetais hipóxicosO lisossoma foi a segunda organela que parece ser enriquecida em condições hipóxicas. No entanto, em comparação com as mitocôndrias, onde 36% das proteínas foram reduzidas, quase todas as proteínas relacionadas aos lisossomos foram reguladas positivamente (Fig. 6, A e B). Entre eles estavam nove hidrolases ácidas lisossômicas, representando quase 20% das hidrolases ácidas lisossômicas anotadas na via KEGG para lisossomos: quatro pró-teases (CTSA, CTSF, CTSZ, TPP1), três glicosidases (GAA, NAGA, NEU1), a lisossômica fosfatase ácida 2 (ACP2) e a lipase ácida lisossomal A (LIPA). Além disso, encontramos evidências de aumento da biogênese de lisossomos e organelas relacionadas. Três dos oito componentes BLOC1 (biogênese do complexo 1 de organelas relacionadas ao lisossomo) foram significativamente induzidos (Fig. 6, C – E), bem como o transportador de troca H / Cl 5 (CLCN5), que é um participante crucial no acidificação de endossomos (Fig. 6F). É digno de nota que o Snapin (subunidade 7 do BLOC1) também desempenha um papel na acidificação lisossomal e na maturação e função do autofagossomo. Outras proteínas induzidas conhecidas por desempenharem um papel na autofagia foram Atg7 e Bnip3 (Fig. 6, G e H). Outro requisito para o fluxo autofágico é o agrupamento perinuclear de lisossomos, mediado pelo complexo Ragulator lisossomal (35, 36) e duas famílias opostas de proteínas motoras. Surpreendentemente, quatro dos cinco membros das subunidades de andaime Regulador (LAMTOR1, 2, 3 e 5) foram significativamente induzidos (Fig. 6, A e B); LAMTOR4 também foi induzido 181- vezes, mas não alcançou significância estatística. Além disso, as cinesinas, que medeiam o movimento para fora das organelas, mostraram uma tendência a serem reprimidas, enquanto os membros da família das dineínas que facilitam o movimento para dentro foram induzidos, embora não estatisticamente significativos (suplementar Fig. S5). Coletivamente, essas descobertas fornecem fortes evidências de que a função doméstica dos lisossomos é melhorada emrins hipóxicos fetais, totalmente compatível com a necessidade prevista de renovação de mitocôndrias danificadas.
Prematuro
O envelhecimento exemplifica os aspectos da adaptação hipóxica face a Janus Em oposição aos mecanismos compensatórios de reparo e rejuvenescimento, encontramos 15 das proteínas desreguladas pertencentes ao termo GO "Envelhecimento" (Fig. 7A), representando a terceira categoria de adaptações hipóxicas: envelhecimento acelerado . Embora a maioria dessas proteínas desempenhe um papel em um dos processos descritos acima, desgranulação de neutrófilos e lisossomas (MIF, MPO, PSEN1), mitocôndrias (NDUFS6, FADS1, MTCO1, CYP27B1), glicólise (ALDOC) e reparo de DNA (OGG1) ; alguns foram descritos como afetando diretamente a vida dos ratos. Em particular, a abundância de proteínas tanto do klotho quanto da sirtuína 6 foi diminuída em E18.5 hipóxicarins fetais(Fig. 7, B e C). Sirtuína 6 é uma enzima expressa de forma ubíqua com atividade de proteína desacetilase e mono-ADP ribosil transferase envolvida na regulação de diversas funções celulares, incluindo inflamação, glicólise e reparo de DNA. Seu nocaute leva à progéria grave em camundongos com expectativa de vida reduzida de 1 a 3 meses (37, 38). O rim é o principal local de síntese de klotho (isto é, o túbulo contorcido distal – o DCT contribui com a maior parte da proteína com síntese adicional nos túbulos contorcidos proximais), onde atua localmente como uma beta-glicuronidase ligada à membrana. A abundância reduzida de klotho parece ser um processo específico, uma vez que outras proteínas do DCT incluindo CALB1 não foram alteradas. Klotho também é secretado na circulação por clivagem da parte extracelular da forma ligada à membrana ou pela tradução de uma variante de splicing alternativa. O nível de klotho circulante (sKL) diminui com a idade (39, 40), o que nos levou a avaliar sua concentração e a da sirtuína 6 no sangue do tronco de fetos E18.5 hipóxicos ou normóxicos. De fato, as concentrações de sKL e sirtuína 6 foram significativamente reduzidas em fetos E18.5 hipóxicos (Fig. 7, D e E). Além disso e mais importante, os níveis séricos de klotho e sirtuína 6 também foram significativamente reduzidos em camundongos idosos (Fig. 7, F e G), indicando uma redução permanente destas duas proteínas ao longo da vida. Para Klotho, isso parece ser devido à redução significativa dos níveis de expressão de mRNA nos rins de descendentes hipóxicos com 15- meses de idade (Fig. 7H). No entanto, os níveis de expressão de mRNA renal da sirtuína 6 permaneceram inalterados entre camundongos normóxicos e hipóxicos idosos (Fig. 7I). Além disso, as alterações na metilação do DNA demonstraram ser um dos mecanismos mais importantes não apenas para a renovação e diferenciação das células progenitoras do néfron (41), mas também para a expressão do klotho (42, 43). No entanto, em contraste com a hipermetilação de Mki67 (Fig. 3F), o promotor klotho foi hipometilado durante a hipóxia crônica (suplementar Fig. S6). O padrão de metilação do Sirt6 não pôde ser determinado. Até onde sabemos, nosso modelo IUGR é o primeiro a delinear um mecanismo que leva a um fenótipo de envelhecimento prematuro, através da sinergia de dano inflamatório, reparo ineficaz, metabolismo alterado e redução da abundância de proteínas antienvelhecimento que já ocorrem no nascimento.
A redução das proteínas antienvelhecimento em resposta à hipóxia crônica é conservada entre ratos e homens Em um último conjunto de experimentos, perguntamos se a interação entre a hipóxia crônica e a redução dos níveis séricos de proteínas antienvelhecimento é um fenômeno evolutivamente conservado. Para este fim, amostras de soro de um estudo controlado (10) de nove voluntários saudáveis (oito homens, uma mulher) foram coletadas 2 semanas antes (nível do mar, SL), em três momentos durante um 28-dia ininterrupto. permanência a 3.454 m (alta altitude, HA3, HA9, HA28) e 1, 7 e 14 dias após seu retorno ao SL (RSL1, RSL7, RSL14) foram analisadas para sKL e SIRT6 (Fig. 8). As amostras obtidas no SL serviram como controle para cada participante. Os níveis séricos de sKL e SIRT6 diminuíram em grandes altitudes e ambos alcançaram relevância estatística em H28. Ao retornar ao nível do mar, o sKL aumentou para níveis mais elevados do que antes da permanência em alta altitude no RSL7 e voltou ao normal no RSL14 (Fig. 8A). Por outro lado, a SIRT6 continuou a diminuir ao regressar ao nível do mar e só começou a inclinar-se novamente no RSL14 (Fig. 8B), sugerindo uma regulação diferencial destas duas proteínas anti-envelhecimento. Em resumo, esses achados sugerem que níveis séricos reduzidos de klotho e sirtuína 6 podem geralmente exigir exposição a condições hipóxicas crônicas e podem, portanto, representar um processo evolutivo altamente conservado.
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