O óleo essencial de Camellia Japonica inibe a produção de melanina induzida por MSH e a atividade de tirosinase em células de melanoma B16F10

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Si Young Ha, Ji Young Jung e Jae-Kyung Yang

Os óleos essenciais são óleos aromáticos extraídos das folhas, caules, cascas, pétalas e raízes de plantas aromáticas cultivadas na natureza ou cultivadas em métodos orgânicos e têm vários efeitos medicinais como substâncias naturais. O óleo essencial extraído das sementes de Camelliajaponica apresenta várias propriedades funcionais; porém, suatirosinaseatividade inibitória não foi investigada extensivamente. -esse estudo é realizado para investigar a composição química e a atividade inibitória da tirosinase deÓleo essencial de camélia japonicas(CJS-EO). Hexametilciclotrisiloxano (42,36 por cento) e octametilciclotetrassiloxano (23,28 por cento) são os dois componentes primários do CJS-EO, identificados por cromatografia gasosa-espectrometria de massa.ºe atividades inibitórias deCJS-EOe arbutina de controle positivo são ainda avaliados contra a tirosinase de cogumelo.ºOs resultados mostram que CJS-EO e arbutina inibemtirosinaseatividade. Além disso, CJS-EO inibe significativamente a melanogênese no grupo tratado com hormônio estimulante de melanócitos, e uma quantidade significativa de melanina é suprimida. Para determinar a causa do CJS-EOtirosinaseefeito inibitório e efeito de redução da melanina, são realizadas análises genéticas e de proteínas. Com base em nossos resultados, concluímos provisoriamente queCJS-EOpode inibir melanócitos de fatores nocivos, como a proteína relacionada à tirosinase. Esses resultados demonstram que o CJS-EO possui atividade potencialtitrosinase e pode ser um bom tratamento para a pele.branqueamentoagente.

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Introdução

A cor da pele é afetada por pigmentos como melanina na epiderme, hemoglobina nos vasos sanguíneos da derme e caroteno no tecido subcutâneo. Entre eles, a cor externa da pele é determinada pela quantidade e distribuição do pigmento melanina [1]. As enzimas envolvidas na síntese de melanina são conhecidas comotirosinase, proteína relacionada à tirosinase-1 (TRP-1) e dopacromo tautomerase (DCT, TRP-2) [2]. Dentre elas, a tirosinase é uma enzima que atua na reação inicial, etapa determinante da velocidade de síntese da melanina, e oxida a tirosinase a DOPA quinona [3]. Portanto, substâncias que inibemtirosinase,TRP-1 e TRP-2 podem inibir a síntese de melanina e, portanto, ter uma pelebranqueamentofunção [4]. A melanina desempenha um papel importante na proteção da pele contra os raios UV e fatores nocivos externos na pele humana. Entretanto, quando produzida em excesso e acumulada na pele, pode causar melasma, sardas, manchas na pele, etc.

Ácido L-ascórbico, arbutina e ácido lático foram desenvolvidos como inibidores representativos da produção de melanina, mas seu uso é estritamente regulado devido à irritação da pele ou problemas de segurança. Portanto, pesquisas estão sendo conduzidas ativamente para encontrar um agente clareador natural que seja seguro e eficaz [8].

Os óleos essenciais vegetais são conhecidos por exibir várias propriedades funcionais, como forte atividade antibacteriana e efeitos antienvelhecimento e regeneração da pele [9, 10]. O óleo essencial de Cinnamomum cassia [4], o óleo essencial de Polygonum odoratum [11] e o óleo essencial de folha de Vitex negundo Linn [12] foram relatados como possuindotirosinaseatividades inibitórias.

Camellia japonica (nome japonês de "tsubaki") é uma árvore popular como planta de jardim e fonte de óleo e medicina popular no Japão [13]. Na Coréia, C. japonica é uma árvore perene pertencente à família Theaceae e ao gênero Camellia. A semente de C. japonica tem uma longa história de uso como protetor cosmético para garantir a saúde da pele e do cabelo e como agente calmante [15]. O óleo de semente de C. japonicas tem sido relatado como exibindo várias atividades biológicas, incluindo atividade antioxidante [16], atividade antibacteriana [17], atividade anti-inflamatória [18] e função de barreira da pele [19]. Apesar de seu uso generalizado, poucos estudos examinaram os efeitos do óleo de semente de C. japonica na pelebranqueamento-associadotirosinaseatividade.

Portanto, neste estudo, a composição química de C. óleo essencial de semente de japonica (CJS-EO) foi investigado por cromatografia gasosa-espectrometria de massa (GC-MS), e atirosinaseatividade inibitória deste óleo essencial foi examinada. Para lidar com essa atividade inibitória, os efeitos daCJS-EOA melanogênese estimulada por -MSH e a inibição da tirosinase em células de melanoma B16F10 foram avaliadas.

2. Materiais e métodos

2.1. Materiais vegetais.

As sementes de C. japonica foram compradas em março de 2021 da Seohyeon Herbal Medicine Farming Association, Nonsan, Coréia do Sul. Os materiais vegetais foram identificados por Hee-Gon Kang, representante da floresta experimental da Universidade Nacional de Gyeongsang.

Cistanche é uma das medicinas tradicionais chinesas

2.2. Reagentes.

Cogumelotirosinasefoi adquirido de T-3824 (Sigma–Aldrich, EUA), e o camundongo B16F10 mela noma foi adquirido de CRL-6475 (AmericanType Culture Collection, Manassas, VA, EUA). Os meios e reagentes necessários para a cultura celular foram adquiridos da Invitrogen (EUA), Sigma (EUA) e Nunc (EUA). Para Western blotting, um kit de Western blot e um sistema de transferência semi-seco (Bio-Rad, EUA) foram usados, e os resultados foram confirmados por meio de um sistema de análise de imagens (Bio-Rad, EUA). Os anticorpos foram adquiridos da Santa Cruz Biotech (EUA). Dimetil o sulfóxido (DMSO) foi adquirido da Sigma-–Aldrich (St. Louis, MO, EUA).

2.3. Extração e Preparação de Amostras.

A extração foi realizada usando um método publicado anteriormente com pequenas modificações [4]. Resumidamente, sementes de C. japonica (500 g) foram colocadas em um recipiente e extraídas por destilação com 2000 mL de água por 4 h. -o vapor gerado foi resfriado por meio de um sistema de resfriamento fechado, e o líquido resultante foi coletado em um recipiente. - o óleo flutuou em direção ao topo do líquido destilado, enquanto a água se depositou na fase inferior do líquido; por isso,CJS-EOfoi obtido pela remoção da fase superior do líquido, que continha o óleo desejado, e então armazenado a -20 graus até o uso. Uma solução de estoque de 500 ppm de CJS-EO em DMSO foi usada para os experimentos com células.

2.4. Análise GC-MS.

Os componentes voláteis deCJS-EOforam analisados ​​usando GC-MS (Clarus 600 GC-MS, PerkinElmer, Shelton, CT, EUA). A coluna de análise utilizada foi PerkinElmer Elite-5 ms (3{{10}} mm × 0,3 mm × 0,25 μm). O gás hélio (1,0 mL/min) foi usado como fase móvel. A temperatura do forno foi aumentada de 40 graus para 100 graus a uma taxa de 10 graus/min e então mantida por 1,0 min. Em seguida, a temperatura foi aumentada para 230 graus a uma taxa de 10 graus/min e então mantida por 5 minutos. -a temperatura do injetor foi ajustada para 200 graus, e a temperatura do detector foi ajustada para 250 graus. -os resultados analisados ​​foram identificados usando o NIST Mass Spectral Search Program (Versão 2.0 g, National Institute of Standards and Technology, Gaithersburg, MD, EUA).

2.5. Cultura de células.

As células de melanoma de camundongo B16F10 foram compradas no Korea Cell Line Bank. A cultura celular foi realizada usando DMEM (WELGENE, Daegu, Coréia) suplementado com 10 por cento de FBS (soro fetal bovino, WEL GENE, Daegu, Coréia) e 1 por cento de penicilina-estreptomicina (Gibco BRL) a 37 graus e 5 por cento de CO2. Para solucionar o fenômeno de superdensidade causado pela proliferação do número de células, as células B16F10 cultivadas foram mantidas em número adequado utilizando tripsina (Hyclone, EUA).

2.6. Ensaio de Viabilidade Celular.

As células de melanoma B16F10 foram semeadas a 3 × 104/mL em uma 6-placa de poço para cultura de células.CJS-EOfoi tratado a uma concentração apropriada (31,25 ppm a 500 ppm) por poço. -e meio foi removido após 72 horas, e 200 μL de 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-solução de brometo de difeniltetrazólio (MTT) (Promega, Madison, WI, EUA) foi tratado. O reagente MTT foi removido de forma limpa após a incubação em uma incubadora de CO2 a 37 graus por 2 horas. Para as células coradas, 2 mL de DMSO foram tratados para dissolver todo o formazan gerado nos poços. A viabilidade celular foi medida por absorbância a 540 nm com um leitor de ELISA (SpectraMax190, Molecular Devices LLC, San Jose, CA, EUA).

2.7. Ensaio de Atividade da Tirosinase.

Tirosinasea atividade foi estimada medindo a taxa de oxidação de L-DOPA [20]. Células B16F10 (2 × 105 células/poço) foram tratadas com -hormônio estimulante de melanócitos (-MSH) eCJS-EOe cultivada por 3 dias. As células foram colhidas, tampão de lise (1 por cento Triton X-100, 0.1 M PMSF) foi adicionado e, em seguida, as células foram lisadas reagindo a 4 graus durante 1 hora. -e sobrenadante foi coletado por centrifugação a 12,000×g por 15 minutos. Após a quantificação da proteína no sobrenadante coletado, L-DOPA 10 mmol/mL foi adicionado. Em seguida, as células foram incubadas em uma incubadora de CO2 a 37 graus por 30 min e a absorbância a 490 nm foi registrada usando um leitor de microplacas de absorbância (SpectraMax 190, Molecular Devices LLC, San Jose, CA, EUA). -e os dados obtidos foram calculados usando a seguinte fórmula: atividade da tirosinase ( por cento ) � (OD 490 da amostra/OD490 do controle) × 100.

2.8. Ensaio de conteúdo de melanina.

Células B16F10 foram semeadas em uma placa de seis poços (2 × 105 células/poço) por 12 h após renovação do meio de cultura das células tratadas com diferentes concentrações de CJS-EO e -MSH por 48 h e lavagem com PBS duas vezes [21]. As células B16F10 foram tratadas com -MSH eCJS-EOjuntos, cultivados por 3 dias, e as células foram colhidas e lavadas duas vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS). Depois disso, foi tratado com 1N NaOH contendo 10 por cento de DMSO e reagiu a 80 graus por 1 hora. Para análise do conteúdo de melanina, a absorbância foi medida em 475 nmus usando um leitor de microplacas de absorbância (SpectraMax 190, Molecular Devices LLC, San Jose, CA, EUA). -o valor percentual das células tratadas com CJS-EO foi calculado em relação ao controle negativo. Em detalhe, o BCA Protein Assay Kit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, EUA) foi usado para determinar a concentração de proteína de cada amostra. - o teor de emelanina foi normalizado para a concentração de proteína celular (absorvância melanina/ug proteína).

2.9. Investigação de Genes.

Células de melanoma B16F10 foram inoculadas em placa de 100 mm com densidade de 1 × 106 células em DMEM (GIBCO, EUA) suplementado com 10% de soro bovino e 1% de antibióticos; posteriormente, eles foram incubados em 5 por cento de CO2 a 37 graus. Depois de mudar para um novo DMEMmedium de 10 por cento,CJS-EOfoi adicionado a uma placa de cultura e cultivado por 3 d, e 1 por cento de Amisoft como surfactante foi adicionado em uma quantidade correspondente a 1/1,000 do volume médio. Após 3 d, 1 mL de TRIzol (Invitrogen, EUA ) foi adicionado às células para investigar o nível de expressão de mRNA debranqueamentogenes relacionados, e o RNA foi isolado usando o método de isolamento de RNA da Invitrogen. Após quantificar a quantidade de RNA em 260 nm utilizando um detector ultravioleta, foi realizada uma reação em cadeia da polimerase por transcrição reversa (RT-PCR). Para o RT-PCR foi utilizado um kit RT-PCR all-in-one (Super Bio, Korea), o experimento foi realizado de acordo com as instruções do fabricante, e os primers e condições de reação foram os seguintes: a sequência de actina foi 5'- GAG ACC TTC AAC ACC CCA GCC-3';antisense, 5'-GGC CAT CTC TTG CTC GAA GTC-3';transcrição reversa a 50 graus por 30 min; transcriptase reversa inativada a 96 graus por 3 min, 94 graus por 30 s e 62 graus por 1 min, seguido por 25 ciclos a 72 graus por 1 min. A sequência detirosinasefoi 5'-GGC CAG CTT TCA GGC AGA GGT 3'; antisense, 5'-TGG TGC TTC ATG GGC AAA ATC-3'; desnaturado a 90 graus por 30 s; transcrição reversa a 60 graus por 30 min; transcriptase reversa inativada a 94 graus por 1 min. Em seguida, foi realizada uma PCR por 30 ciclos a 94 graus por 30 segundos, 56 graus por 30 segundos e 72 graus por 1 minuto. -e sequência da proteína 1 relacionada à tirosinase (TRP-1) foi 5'-GCT GCA GGAGCC TTC TTT CTC-3'; anti-sentido, 5'-AAG ACG CTG CACTGC TGG TCT-3'; desnaturado a 90 graus por 30 s; transcrição reversa a 60 graus por 30 min; transcriptase reversa inativada a 94 graus por 1 min. Em seguida, foi realizada uma PCR por 30 ciclos a 94 graus por 30 segundos, 56 graus por 30 segundos e 72 graus por 1 minuto. -e sequência detirosinaseproteína 2 relacionada era 5'-TGA CCG TGA GCA ATG GCC-3'; anti-sentido, 5'-CGGTTG TGA CCA ATG GGT GCC-3'; transcrição reversa a 50 graus por 30 min; inativação da transcriptase reversa a 96 graus por 3 minutos, 94 graus por 1 minuto e 60 graus por 1 minuto. Subsequentemente, 72 reações de PCR foram realizadas em 25 ciclos por 1 min.

2.10. Investigação da Expressão de Proteínas.

Células de melanoma B16F10 de camundongo foram inoculadas em um prato de 100 mm com densidade de 5 × 105 células em DMEM suplementado com 10 por cento de FBS e 1 por cento de antibióticos e depois cultivadas em 5 por cento de CO2 a 37 graus por 1 d. Posteriormente, eles foram trocados por um novo meio, eCJS-EOfoi tratado em diferentes concentrações e cultivado por 3 dias. Uma solução aquosa de Amisoft a 1% como surfactante foi adicionada em um volume correspondente a 1/1{13}}00 do volume médio. -e células cultivadas foram lavadas com PBS e transferidas para um microtubo de 1,5 mL e depois para um tampão de ruptura celular (40 mM Tris-Cl [pH 7,4], 10 mM EDTA, 120 mM NaCl, 0,1 por cento NP-40, 1 mM PMSF e coquetel inibidor de protease). Após a destruição das células por adição, a centrifugação foi realizada a 15,{18}} rpm a 4 graus por 10 min, e o sobrenadante foi recuperado para separar as proteínas. -e proteínas isoladas foram quantificadas usando o método Sigma'sBCA, e SDS-PAGE foi realizado. Após a transferência do gel de SDS-PAGE para a membrana de PVDF, a proteína foi marcada com um anticorpo secundário conjugado com um anticorpo primário e peroxidase e, em seguida, exposta a um filme de raios X usando um kit de detecção de western blot (Intron, Coréia). Posteriormente, os níveis de expressão foram analisados.

3. Resultados

3.1. Composição Química do CJS-EO.

O CJS-EO foi obtido com um rendimento de 18 por cento p/p. -e composição química de CJS-EO foi analisada usando GC-MS (Tabela 1). -e picos foram separados em GC, e 17 compostos foram identificados via MS, que constituíram 90 por cento da área total do pico (Tabela 1). -sejam componentes químicos doCJS-EOforam hexametilciclotrisiloxano (42,36 por cento), octametilciclotetrassiloxano (23,28 por cento), decametilciclopentasiloxano (5,81 por cento), ácido hexanodióico (5,56 por cento) e vanilina (2,96 por cento). Em pesquisas anteriores, a análise de GC-MS detectou hexametilciclotrisiloxano em extratos de folhas e caule de Bauhinia acuminataLinn [22]. -e componentes voláteis em Moringa oleifera foram compostos principalmente de ésteres, ácidos, aldeídos e hidrocarbonetos, e os hidrocarbonetos são principalmente hexametilciclotrisiloxano [23]. Da mesma forma, em nosso estudo, o hexametilciclotrisiloxano foi confirmado como o principal componente químico do CJS-EO. Um dos principais componentes químicos do CJS-EO, a vanilina, foi detectado no óleo essencial de Eugenia caryophyllata e Ocimum basilicum[24], óleo essencial de Hyssopus officinalis L. (Lamiaceae) [25] e óleo essencial de Calea clematidea [26]. Em estudos anteriores, o efeito inibitório da vanilina sobre as atividades da monofenolase e difenolase contidas emtirosinasefoi relatado anteriormente [27]. Curiosamente, compostos de metilsiloxano volátil cíclico de baixo peso molecular, incluindo hexametilciclotrisiloxano, têm sido usados ​​em uma variedade de cosméticos e produtos de cuidados pessoais e muitos outros produtos de consumo [28]. Futuramente, o composto responsável por inibir a produção de melanina e a atividade da tirosinase será extraído e poderá ser utilizado em cosméticos naturais ou na medicina.

3.2. Viabilidade Celular de Células de Melanoma Induzidas por CJS-EO.

Nossos resultados mostraram que células B16F10 de melanoma murino tratadas com uma concentração de 31,25 a 500 ppm deCJS-EOpor 24 h não induziu nenhuma alteração na viabilidade celular. Em uma concentração de 31,25 a 500 ppm, a viabilidade celular foi de 90 por cento a 100 por cento, o que indicou baixa citotoxicidade (Figura 1).tirosinaseatividade e síntese de melanina em células B16F10.

3.3. Inibição da atividade da tirosinase intracelular de CJS-EO.

O efeito deCJS-EOna oxidação da L-DOPA catalisada pela tirosinase, bem como a da arbutina, um conhecidotirosinaseinibidor, foi investigado. Conforme mostrado na Figura 2, CJS-EO andarbutin exibiu efeitos inibitórios potentes na atividade da L-DOPA oxidase de uma maneira dependente da dose. -e resultados mostram que CJS-EO e arbutin exibiram atividades inibitórias da tirosinase semelhantes. Com base na análise estatística, a arbutina teve uma atividade inibitória da tirosinase significativamente maior do que a CJS-EO em 125 e 500 ppm. No entanto, a 31,25, 32,50 e 250 ppm, efeitos inibitórios semelhantes (não significativos) foram indicados na tirosinase quando comparados com a atividade inibitória da tirosinase do CJS-EO no conhecido inibidor da tirosinase arbutina.

3.4. Efeito de CJS-EO no conteúdo de melanina em células B16F10.

Para confirmar se CJS-EO contribuiu para a inibição da produção de melanina, a diferença na secreção de melanina após o tratamento com cada concentração de CJS-EO foi analisada em um ambiente que promove a produção de melanina por estimulação de -MSH.CJS-EOfoi tratado nas concentrações de 31,25, 62,5, 125, 250 e 500 ppm, da mesma forma que paratirosinaseatividade. O CJS-EO inibiu significativamente a melanogênese no grupo tratado com -MSH, e uma quantidade significativa de melanina foi suprimida (Figura 3(b)).-é semelhante à observação no controle positivo,arbutina (Figura 3(a)). Em particular, na concentração mais baixa de 32,25 ppm no grupo tratado, o teor de melanina reduziu significativamente em comparação com o grupo não tratado (0 ppm). Portanto, concluiu-se que o CJS EO inibiu efetivamente a síntese ou secreção de células de melaninina B16F10. Nos grupos tratados com 31,25, 62,5, 125, 250 e 500 ppm CJS-EO, o conteúdo de melanina diminuiu 1,1, 1,5, 2,6, 2,7 e 4,3 vezes, respectivamente, em comparação com o grupo não tratado, indicando uma inibição proeminente da secreção de melanina efeito. -e teste de citotoxicidade, teste de inibição de tirosinase e resultados do teste de teor de melanina indicam que CJS-EO é extremamente valioso como um material natural embranqueamentocosméticos.

3.5. Investigação Genética.

Para determinar o gene emCJS-EOque inibe a biossíntese de melanina por afetar a expressão de genes envolvidos na via de biossíntese de melanina, um experimento foi realizado pelo método RT-PCR, e os resultados são mostrados na Figura 4. -MSH foi usado como controle negativo e CJS-EO mostrou efeitos inibitórios sobre a expressão de tirosinase, TRP-1 e TRP-2 em todas as concentrações. Em particular, CJS-EO inibiu a expressão de tirosinase em mais de 50 por cento a 125 ppm ou superior. Descobrimos que a eficácia inibitória detirosinase, a expressão de TRP-1 e TRP-2 diminuiu à medida que a concentração de CJS EO aumentou. -Os resultados deste experimento sugerem que o efeito inibitório da melanogênese do CJS-EO contribuiu para a inibição da expressão da tirosinase, TRP-1 e TRP-2.

3.6. Investigação da Expressão de Proteínas.

O efeito de CJS-EO na expressão de proteínas envolvidas na biossíntese de melanina foi confirmado por western blotting, e os resultados são mostrados na Figura 5. Quando CJS-EO foi comparado com o grupo tratado com -MSH, que era um grupo controle negativo, foi confirmou queCJS-EOexibiu um efeito inibitório; de fato, CJS-EO exibiu o efeito inibitório mais proeminente sobre tirosinase e TRP-2. -e grau de inibição foi de 46,6 por cento e 40,7 por cento a 500 ppm de tirosinase e TRP-2, respectivamente, em comparação com o grupo tratado com -MSH. Embora o TRP-1indique o menor efeito inibitório, ele apresentou uma diminuição significativa em comparação com o grupo tratado com -MSH. Portanto, a análise de proteínas mostrou a mesma tendência que a análise gênica, e foi confirmado que o CJS-EO estimuloutirosinase, TRP-1 e TRP-2 para induzir a redução da melanina.

4. Discussão

Tirosinaseé uma enzima envolvida na produção de melanina através de uma via oxidativa enzimática, que determina a cor da pele, cabelos e olhos, bem como o escurecimento de certos alimentos [29]. Agentes químicos que demonstram atividade antitirosinase têm sido usados ​​na medicina clínica para o tratamento de distúrbios dermatológicos associados à hiperpigmentação da melanina [30]. A produção de melanina pode contribuir para algumas das características histopatológicas exclusivas do câncer maligno [31]. Portanto, as substâncias antitirosinase podem facilitar o tratamento do câncer de pele. Nos últimos anos, o uso de produtos naturais ao invés de compostos químicos ou sintéticos tem ganhado cada vez mais interesse por serem mais econômicos, ecologicamente corretos e seguros [32]. na indústria, bem como para melhorar o uso dos recursos vegetais. Recentemente, a atividade antitirosinase de certas plantas tem sido relatada [33]. No entanto, os dados referentes aos óleos essenciais de plantas naturais são escassos. Portanto, a identificação de óleos essenciais de plantas que possuem alta atividade antitirosinase tem despertado interesse significativo. -e etiologia da pigmentação não é bem compreendida. A biossíntese de melanina é catalisada por enzimas específicas de melanócitos, como TRP-1 e TRP-2 [34].Tirosinaseé vital para a biossíntese de melanócitos de melanócitos e é conhecido há muitas décadas [34]. Portanto, a tirosinase é um índice importante para o tratamento da pigmentação. Em nosso estudo, a CJS-EO diminuiu a síntese de melanina e afetou a atividade da antitirosinase; portanto, concluímos que a antimelanogênese por CJS-EO pode estar associada a outras enzimas (TRP-1 e TRP-2). Substâncias voláteis foram relatadas como exibindo altas atividades antioxidantes [35]. Como voláteis, CJS-EO é caracterizado por odor pungente. É sintetizado pelas plantas como metabólitos secundários e tem sido amplamente utilizado devido às suas atividades bactericida, virucida, fungicida, anticancerígena, antioxidante e antidiabética. -e CJS-EO investigado neste estudo foi composto principalmente de hexametilciclotrisiloxano, que constituiu 42,36 por cento do conteúdo químico total. Toxicodendron vernicifluum contendo hexametilciclotrisiloxano mostrou exibir várias atividades biológicas e farmacológicas, incluindo atividades centrais, antimicrobianas e antitumorais [37]. Em nosso estudo, altas concentrações de CJS-EO indicaram apenas leves efeitos citotóxicos nos melanócitos. Portanto, o efeito inibitório de CJS-EO na propagação de células B16F10 induzida por -MSH foi observado. Os resultados mostraram que o pré-tratamento com CJS-EO reduziu a propagação celular induzida por -MSH de maneira dose-dependente (Figura 3), e esses resultados foram semelhantes com arbutina pura usada como controle positivo. Na maioria dos óleos essenciais naturais usados ​​na medicina tradicional, extratos contendo compostos complexos são usados ​​em vez de compostos puros. Esses óleos essenciais naturais geralmente não contêm compostos de volatilidade com bioatividades altamente específicas, mas compostos de volatilidade com interações mais amplas [38]. Portanto, é difícil para o CJS-EO, que contém muitos componentes, ter um efeito antimelanogênese maior do que a arbutina pura. No futuro, é necessário separar os componentes voláteis contidos emCJS-EOe estudar o efeito antimelanogênese no componente único separado. Com base em nossos resultados, concluímos provisoriamente que o CJS-EO pode inibir os melanócitos de fatores prejudiciais, como TRP-1 (Figuras 4 e 5).ºPortanto, assumimos que o hexametilciclotrisiloxano era o principal composto biologicamente ativo em CJS-EO. Estudos existentes sobre obranqueamentopropriedade do CJS-EO é insuficiente; portanto, pode ser utilizado como dado básico em futuros estudos referentes aos principais ingredientes que apresentam eficácia clareadora.

5. Conclusões

Até onde sabemos, este é o primeiro estudo a relatar a eficácia do CJS-EO na inibição da produção de melanina em células de melanoma B16F10. Nossas observações indicaram que CJS-EO inibiu a melanogênese induzida por MSH atravéstirosinaseinativação e supressão simultânea da expressão de proteínas envolvidas na biossíntese de melanina em células de melanoma B16F10.CJS-EOé conhecido por ser seguro, e confirmamos que não é citotóxico neste estudo.ºPortanto, o CJS-EO pode potencialmente ser empregado como um tratamento eficaz para a pele.branqueamentoagente para o desenvolvimento futuro da aromaterapia baseada em medicina complementar e alternativa.