Atividade antinociceptiva e anti-inflamatória causada por Cistanche Deserticola em roedores

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Li-Wei Lin, et al.

Abstrato

No presente estudo, os rizomas deCistanchedeserticola(Orobanchaceae, abreviado como CD) foram extraídos com 50 por cento de etanol e isolados ordenadamente por acetato de etila, n-butanol e água. O analgésico eanti-inflamatórioefeitos do extrato de CD e três camadas foram avaliados em vários modelos animais. CD(Cistanchedeserticola)Os extratos inibiram efetivamente a resposta de contorção induzida por 1% de ácido acético e as respostas de lambedura bifásica causadas por 1% de formalina, e também reduziram o edema induzido por 1% de carragenina, mas não zymosan. Além disso, as camadas butanóica e aquosa de CD(Cistanchedeserticola)extrato não só reduziu a dor induzida por ácido acético e formalina, mas também diminuiu o edema induzido por carragenina. Efeitos da camada butanóica de CD(Cistanchedeserticola)extrato são melhores do que a camada aquosa. Além disso, o efeito da camada butanóica de CD(Cistanchedeserticola)extrato não foi abolido pela naloxona. Esses resultados revelaram que tem ação analgésica eanti-inflamatórioefeitos, e as camadas butanóica e aquosa são principalmente constituintes ativos. Além disso, o analgésico eanti-inflamatórioefeitos da camada butanóica de CD(Cistanchedeserticola)extrato não foram relacionados aos receptores opióides e ao sistema imunológico.

Palavras-chave:Cistanche deserticola; Atividade analgésica; Atividade anti-inflamatória

1. Introdução

CistanchedeserticolaMãe (Orobanchaceae, abreviado como CD), uma erva nativa da China é amplamente utilizada na medicina tradicional para vários tratamentos terapêuticos, incluindo sedativos, analgésicos e indicações de reforço imunológico (Lee, 1986). Estudos farmacológicos modernos apontaram DC(Cistanchedeserticola)o extrato possuía imuno-impulsionador (Chin e Su, 1993), efeito de eliminação de radicais livres (Hsu et al., 1995), e o aumento da atividade de SOD (Chang et al., 1995). Em um estudo recente, a reação de radicais livres desempenhou um papel significativo nos processos inflamatórios (Arrigoni-Martelli, 1985). Portanto, o presente estudo tentou investigar os efeitos analgésicos putativos da DC(Cistanchedeserticola)extrato em camundongos com teste de contorção induzida por ácido acético (Taber et al., 1969) e teste de lambida induzida por formalina (Shibata et al., 1989). Em segundo lugar, estudamos também as possíveisanti-inflamatórioatividades do CD(Cistanchedeserticola)extrato sobre o processo inflamatório clássico com teste de edema induzido por carragenina (Winter et al., 1962) e processo inflamatório alternativo com teste de edema induzido por zimosan (Tarayre et al., 1989). Por fim, pesquisamos camadas ativas de extrato de CD separadas com diferentes solventes. '

2. Materiais e métodos

2.1. Material vegetal e extratos

Rizomas de CD(Cistanchedeserticola)foram adquiridos no mercado de Taiwan e confirmados pelo professor MT Hsieh. Uma amostra de comprovante (nº CMC-ICPS-000626) foi preservada no herbário do Instituto de Ciências Farmacêuticas Chinesas, Faculdade de Medicina da China para referência futura. Extração e isolamento de CD(Cistanchedeserticola)foram seguidos como os relatórios anteriores (Lu, 1998). CD(Cistanchedeserticola)extrato (o rendimento em 34,2 por cento) e três camadas*/camada de acetato de etila, camada butanólica e camada aquosa (seus rendimentos em 3,4, 10,2, 30,6 por cento) (abreviados como CDE, CDB e CDW, respectivamente)*/foram usados ​​para a preparação de extratos.

2.2. Preparação de extratos e drogas

CD(Cistanchedeserticola)extrato ({{0}},1, 0,3, 1 g/kg) e três camadas de CD(Cistanchedeserticola)extratos ({{0}}.03, 0.1, 0,3 g/kg) foram dissolvidos em 0,5 por cento de carboximetilcelulose e administrados oralmente 60 minutos antes à injeção de um indutor. Ácido acetilsalicílico (ASA) (100, 300 mg/kg) e indometacina (IN DOL) (10 mg/kg) foram preparados como uma suspensão com 0,5 por cento de carboximetilcelulose e administrados intraperitonealmente antes da injeção de um indutor. A naloxona (1 mg/kg) foi dissolvida com solução salina normal.

2.3. Animais

Ratos machos Sprague-Dawley (200-250 g) foram usados ​​para o estudo deanti-inflamatórioAtividades. Camundongos ICR machos (20-25 g) foram usados ​​para testar os efeitos analgésicos. Todos os animais foram utilizados nos experimentos de acordo com os Princípios Orientadores com o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. Eles foram alojados por pelo menos 1 semana antes de iniciar o experimento em um ambiente regulado com temperatura de 239/1 8C e 60% de umidade com acesso livre a alimentos padrão em pellets (fornecidos e projetados pela Fwusow Industry Co. LTD., Taiwan ) e água da torneira, onde foi mantido um ciclo claro/escuro 12-12 h (fase clara: 08:00-20:00 h). Em seguida, foram administrados medicamentos e os analgésicos eanti-inflamatórioos ensaios foram operados pelo método duplo-cego. Após a medição comportamental, todos os animais foram mortos por dióxido de carbono.

2.4. Estudo antinociceptivo

2.4.1. Resposta de contorções abdominais induzidas por ácido acético em camundongos

Os camundongos foram divididos aleatoriamente em vários grupos. Cada rato recebeu intraperitonealmente solução de ácido acético a 1 por cento (10 ml/kg de peso corporal). Os camundongos foram colocados nas caixas de observação individuais. Os sintomas de contorções abdominais induzidas por ácido acético foram semelhantes aos descritos por Taber et al. (1969). Os animais controle receberam soluções veiculares nos mesmos experimentos. Cinco minutos após a injeção de ácido acético, o número de respostas de contorções por camundongo foi contado por 10 minutos durante contorções abdominais induzidas por ácido acético. Finalmente, o número de respostas contorcidas permitiu-nos expressar a porcentagem de proteção usando a seguinte razão: (média de controle média tratada) /100/ média de controle.

2.4.2. Resposta de lambida induzida por formalina em camundongos

Este método representou uma modificação do descrito por Shibata et al. (1989). Cada camundongo foi colocado na câmara de observação em um piso de placa de acrílico transparente por 5 minutos antes da injeção de formalina. Abaixo do piso, um grande espelho foi inclinado em um ângulo de 458° para permitir a observação clara das patas do animal. Os animais receberam 25 ml de formalina a 1 por cento no subplantar direito. Em seguida, cada animal foi devolvido à câmara e os dois períodos distintos da resposta de lambida intensiva foram observados. O primeiro período (fase inicial) foi registrado 0/5 min após a injeção de formalina e o segundo período (fase tardia) foi registrado 10/35 min após a injeção. O(s) tempo(s) gasto(s) nas respostas de lamber da pata injetada foi medido como um indicador de resposta à dor.

2.5. Estudo anti-inflamatório em ratos

oanti-inflamatórioa atividade foi determinada em ratos medindo o aumento médio no volume da pata traseira após a injeção subplantar de agentes inflamatórios como carragenina (Winter et al., 1962) ou zymosan (Tarayre et al., 1989). Os animais foram injetados com 0,1 ml de carragenina a 1 por cento ou zimosana a 2 por cento na pata traseira direita sob a aponeurose plantar. A inflamação foi quantificada em mililitros usando um pletismômetro (7150 Ugo Basile), que registrou pequenas diferenças no nível de água causadas pelo deslocamento de volume. Antes de qualquer tratamento, foi determinado o volume médio das patas traseiras de cada animal (Vo) com três medidas que não diferiram de mais de 4 por cento (precisão do aparelho). Em seguida, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 min após a injeção dos agentes inflamatórios, foi determinado o volume médio das patas traseiras de cada animal (Vt) com três medidas que não diferiram de mais de 4 por cento.

As porcentagens de edema em cada registro foram calculadas comparando-se o volume médio das patas traseiras de cada animal (Vt) após a injeção dos agentes inflamatórios com o volume médio das patas traseiras de cada animal (Vo) antes de qualquer tratamento (Palanichamy e Nagarajan, 1990). As porcentagens de inibição foram obtidas para cada grupo usando a seguinte razão: [(Vt-Vo)controle/(Vt-Vo)tratado]-100/(Vt-Vo)controle.

2.6. Análise estatística

Todos os dados obtidos durante a analgesia eanti-inflamatórioa atividade foi expressa em termos de média e erros padrão e posteriormente analisada por meio de análise de variância ANOVA unidirecional, seguida pelo teste de Scheff. Quando a probabilidade (P) foi menor que 0.05, a diferença foi considerada significativa.

3 Resultados e discussão

Os animais de pré-tratamento com doses orais de CD(Cistanchedeserticola)extrato (0.1-1 g/kg) resultou em uma inibição significativa e dependente da dose da resposta de contorções induzidas por ácido acético (Tabela 1) e as fases bifásicas de respostas de lambidas induzidas por formalina em camundongos ( Fig. 1(A)). A inibição causada por CD(Cistanchedeserticola)extrato a 1 g/kg na resposta de contorção induzida por ácido acético e respostas de lambedura induzidas por formalina foram cerca de 54 e 45 por cento, respectivamente. O controle positivo de ácido acetilsalicílico em 0.1-0,3 g/kg também diminuiu a resposta de contorções induzidas por ácido acético com a inibição de 45-64 por cento (Tabela 1). No entanto, o outro controle positivo indometacina a 10 mg/kg apenas inibiu a fase tardia, mas não inicial da resposta de lambida induzida por formalina em camundongos com a inibição máxima de 32 por cento (Fig. 1(A)). Além disso, apenas camadas butanólicas e aquosas entre três camadas de CD(Cistanchedeserticola)extrato em 0.1-0.3 g/kg também produziu antinocicepção significativa, e esses efeitos analgésicos da camada butanólica foram melhores do que os da camada aquosa (Tabela 1 e Fig. 1(B)) . Em segundo lugar, avaliamos aanti-inflamatórioatividade de CD(Cistanchedeserticola)extrato e três camadas contra a formação de edema clássico (induzido por carragenina) e alternativo (induzido por zimosan). Encontramos esse CD(Cistanchedeserticola)extrato em 0.1-1g/kg também inibiu significativamente a formação de edema induzido por carragenina de uma maneira relacionada à dose e indometacina a 10 mg/kg também inibiu efetivamente a formação de edema induzido por carragenina em ratos (Fig. 2). No entanto, a formação de edema induzida por zymosan não foi inibida por CD(Cistanchedeserticola)extrair em 0.1-1 g/kg em ratos (dados não mostrados). Além disso, apenas a camada butanólica entre três camadas de CD(Cistanchedeserticola)extrato em 0.1-0.3 g/kg também inibiu significativamente a formação de edema induzido por carragenina em ratos (Fig. 2). De acordo com relatórios fitoquímicos, o acteosídeo e o ácido succínico, pertencentes aos ingredientes da camada butanólica do CD(Cistanchedeserticola)extrato (Hsu et al., 1994, 1995), possuía aanti-inflamatórioatividade na formação de edema induzido por produtos químicos (Murai et al., 1995; Kabachnyi et al., 1987). A partir de nossos dados atuais e outros relatórios anteriores, sugerimos rizomas de CD(Cistanchedeserticola)possuía analgésico eanti-inflamatórioatividade em roedores, e os constituintes ativos saem principalmente na camada butanólica de CD(Cistanchedeserticola)extrair. Se o acteosídeo e o ácido succínico são ingredientes ativos do CD(Cistanchedeserticola), vamos isolar e avaliar seus efeitos analgésicos eanti-inflamatórioatividade no futuro.

Fig. 1. Efeito do CD(Cistanchedeserticola)extrato ({{0}},1, 0,3 e 1 g/kg), acetato de etila, camadas butanólicas e aquosas de CD(Cistanchedeserticola)extrato (CDE, CDB e CDW) ({{0}}.03, 0,1 e 0,3 g/kg) e indometacina (INDOL, 10 mg/kg) na fase inicial (0/5 min) e tardia (10/35 min) da resposta de lambida induzida por formalina em camundongos. Cada valor é representado como média9/SE (N/7). *PB/0,05, ***PB/0,001, em comparação com o grupo VEH.

Fig. 2. Efeito do CD(Cistanchedeserticola)extrato ({{0}},1, 0,3 e 1 g/kg), acetato de etila, camadas butanólicas e aquosas de CD(Cistanchedeserticola)extrato (CDE, CDB e CDW) ({{0}}.03, {{10}},1 e 0,3 g/kg) e indometacina (INDOL, 10 mg/kg) no edema de pata induzido por carragenina em ratos. Cada valor é representado como média9/SE (N/6). *PB/0,05, **PB/0,01, em comparação com o grupo VEH

Além disso, Shibata et al. (1989) sugerem que a fase inicial da resposta de lambida induzida pela formalina estava relacionada à bradicinina e à substância P, e a fase tardia estava relacionada à bradicinina, autócrina e prostaglandina. Nossos dados atuais apontaram que a naloxona não aboliu aanti-inflamatórioatividade da camada butanol de CD(Cistanchedeserticola)extrato em ambas as fases da resposta de lambida induzida por formalina (Fig. 3) e o efeito analgésico na resposta de contorção induzida por ácido acético (Tabela 1). Assim, o analgésico eanti-inflamatórioos efeitos da camada de butanol do extrato de CD podem não estar relacionados aos receptores opióides. Além disso, CD(Cistanchedeserticola)extrato e sua camada butanólica apenas inibiram a formação de edema induzido por carragenina em ratos. O edema induzido por carragenina via infiltração de leucócitos polimorfonucleares e sistema de cinina ativado, especialmente bradicinina, é diferente do edema induzido por zimosano via influxo de monócitos e sistema imunológico ativado (Damas et al., 1990; Dawson et al., 1991). O ácido succínico, um ingrediente da camada butanólica do extrato de CD, inibiu a função dos leucócitos polimorfonucleares (Rotstein et al., 1985). Esses resultados revelaram que os analgésicos eanti-inflamatórioefeitos da camada de butanol de CD(Cistanchedeserticola)extrato pode estar relacionado ao sistema de cininas, mas não aos receptores opióides e sistemas imunológicos, embora o CD(Cistanchedeserticola)possuía o efeito imunoestimulante (Chin e Su, 1993). Para detalhar o mecanismo de analgésico eanti-inflamatórioatividade, investigaremos com camadas ativas ou ingredientes do extrato de CD.

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Referências

Arrigoni-Martelli, E., 1985. Farmacologia da eliminação de radicais livres na inflamação. International Journal of Tissue Reactions 7, 513/519.
Chang, Y., Wu, H., Wang, SN, Cheng, HC, 1995. Estudo sobre os fortes efeitos daCistanchedeserticolaMa., Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck e Cistanche tubulosa (Schenk) R Wight. China Journal of Chinese Materials and Medicine 26, 143/146.
Chin, HL, Su, YC, 1993. Estudo sobre os efeitos farmacológicos deCistanchedeserticolaMãe China Journal of Chinese Materials and Medicine 19, 143/146.
Damas, J., Bourdon, V., Remacle-Volon, G., Adam, A., 1990. Cininas e exsudatos peritoneais induzidos por carragenina e zimosan em ratos. British Journal of Pharmacology 101, 418/422.

Dawson, J., Sedgwick, AD, Edwards, JC, Lees, P., 1991. Um estudo comparativo das respostas celulares, exsudativas e histológicas a carragenina, dextrana e zimosana no camundongo. International Journal of Tissue Reactions 13, 171/185.

Hsu, WH, Chu, SH, Chao, CH, Hsu, Y., Yuan, KW, Yen, CH, Chi, CY, Chan, C., 1994. Estudo sobre os constituintes químicos deCistanchedeserticolaMãe China Journal of Chinese Materials and Medicine 25, 509/513.
Hsu, WH, Chu, SH, Sheng, LC, Yuan, KW, Mao, CN, 1995. Estudo sobre os constituintes químicos e efeitos farmacológicos deCistanchedeserticolaMãe e Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. Fármacos Tradicionais Chineses 26, 143/146.
Kabachnyi, VI, Chernykh, VP, Drogovoz, SM, Golubenko, Iu.A., Bogutskaia, EE, 1987. Pesquisaranti-inflamatóriopreparações entre os derivados de heterilamidas de ácido succínico. Farmakologiia e Toksikologiia 50, 94/97.
Lee, SL, 1986. Pen-Tsao-Kun-Mu. Instituto Nacional de Pesquisa de Publicações de Medicina Chinesa, Taipei, p. 20.
Lu, MC, 1998. Estudos sobre o efeito sedativo deCistanchedeserticola. Journal of Ethnopharmacology 59, 161/165.
Murai, M., Tamayama, Y., Nishibe, S., 1995. Feniletanoides na erva de Plantago lanceolata e efeito inibitório no edema de orelha de camundongo induzido por ácido araquidônico. Planta Medica 61, 479/480.
Palanichamy, S., Nagarajan, S., 1990. Atividade analgésica de Cassia alata leat extract e kemp Eerol 3-0-Sophoroside. Journal of Ethnopharmacology 29, 73/78.
Rotstein, OD, Pruett, TL, Fiegel, VD, Nelson, RD, Simmons, RL, 1985. O ácido succínico, um subproduto metabólico de espécies de Bacteroides, inibe a função de leucócitos polimorfonucleares. Infecção e Imunidade 48, 402/408.
Shibata, M., Ohkubo, T., Takahashi, H., Inoki, R., 1989. O teste de formalina modificado: resposta de dor bifásica característica. Dor 38, 347/352.
Taber, RI, Greenhouse, DD, Rendell, JK, Irwin, S., 1969. Interações agonistas e antagonistas de opióides no alongamento abdominal induzido por ácido acético em camundongos. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 169, 29/38.
Tarayre, JP, Delhon, A., Aliaga, M., Barbara, M., Bruniquel, F., Caillol, V., Puech, L., Consul, N., Tisne-Versailles, J., 1989.
Estudos farmacológicos sobre a inflamação zymosan em ratos e camundongos. 1: Edema de pata induzido por Zymosan em ratos e camundongos. Pesquisa Farmacológica 21, 375/384.
Winter, CA, Risley, EA, Nuss, GW, 1962. Edema induzido por carragenina na pata traseira do rato como um ensaio paraanti-inflamatóriodrogas. Proceedings Society of Experimental Biology and Medicine 111, 544/547.