Eficácia antienvelhecimento da pomada de extrato de casca de abacate (Persea Americana Mill.) Contra níveis de hidratação, colágeno e elasticidade em ratos Wistar Parte 1

ABSTRATO

A pele é um órgão complexo que protege o corpo do ambiente externo. A pele tem uma variedade de funções, como fornecer uma barreira de permeabilidade física, proteção contra agentes infecciosos, termorregulação, sensação, proteção contra raios ultravioleta (UV), regeneração e cicatrização de feridas. Clinicamente, o envelhecimento da pele é caracterizado por perda de hidratação, textura áspera, pigmentação irregular, descoloração amarelada, telangiectasia, rugas profundas ou rugas, adelgaçamento da pele e linhas finas. Uma das plantas que podem ser utilizadas como ingredientes naturais ricos em antioxidantes e interessantes de se estudar é o abacate (Persea americana Mill.) da família Lauraceae, que é uma planta que possui propriedades medicinais e contém uma variedade de nutrientes. Além de ser consumido como alimento, o abacate também é utilizado como mistura de produtos cosméticos. Este estudo tem como objetivo avaliar a eficácia antienvelhecimento do extrato de casca de abacate no aumento dos níveis de colágeno, elasticidade e hidratação em ratos machos. Um total de 25 ratos foi dividido em 5 grupos, cada grupo consistindo de 5 ratos brancos; grupo de controle (base de pomada), grupo de pomada de extrato de casca de abacate 2,5 por cento, 5 por cento, 7,5 por cento e 10 por cento. Todo o grupo de ratos será medido antes do tratamento com o Skin Analyzer EH 900 U, incluindo níveis de colágeno, elasticidade e hidratação. Após mensuração do estado inicial da pele, iniciou-se o tratamento aplicando pomada até sua distribuição uniforme sobre a área demarcada, a pomada foi aplicada de acordo com os grupos acima definidos e a aplicação foi realizada 2 vezes ao dia por 4 semanas. As alterações na condição da pele foram medidas semanalmente durante 4 semanas usando o analisador de pele EH 900 U. Os resultados deste estudo indicam que o extrato metanólico da casca do abacate contém fitoquímicos na forma de alcaloides, taninos, fenóis, flavonoides e glicosídeos. Em seguida, o teor de fenólicos, flavonoides e taninos do extrato metanol de casca de abacate foi de 59,55 GAE mg/grama de extrato, 2,96 QE mg/grama de extrato e 22,63 TAE mg/grama de extrato. Após 4 semanas de tratamento, houve uma mudança significativa no nível de hidratação, colágeno e elasticidade da pele (p<0.05) in all treatment groups, this can be seen from the  P-value <0.05, with the group of rats receiving the highest concentration of ointment (10%) showed the highest average, namely hydration 49.60%, collagen 40.20%, and elasticity 68.20%. Changes in hydration levels, collagen, and skin elasticity before and after treatment also showed significant changes (P-value < 0.05) with the highest changes found at a concentration of 10%, namely hydration 88.40%, collagen 60.0%, and elasticity 68.20%. In conclusion, the results of this study showed that administration of avocado peel extract ointment could increase hydration, collagen,   and skin elasticity levels compared to controls groups, positively correlated with the increase of the duration and the quantity of avocado peel extract ointment given. The best formulation that gives the most significant effect is 10% avocado peel extract ointment by increasing levels of hydration, collagen, and elasticity the most significantly. 

O glicosídeo de cistanche também pode aumentar a atividade de SOD nos tecidos do coração e do fígado e reduzir significativamente o conteúdo de lipofuscina e MDA em cada tecido, eliminando efetivamente vários radicais reativos de oxigênio (OH-, H₂O₂, etc.) e protegendo contra danos ao DNA causados por radicais OH. Os glicosídeos feniletanóides cistanche têm uma forte capacidade de eliminação de radicais livres, uma capacidade redutora maior do que a vitamina C, melhoram a atividade de SOD na suspensão de esperma, reduzem o conteúdo de MDA e têm um certo efeito protetor na função da membrana espermática. Os polissacarídeos Cistanche podem aumentar a atividade de SOD e GSH-Px em eritrócitos e tecidos pulmonares de camundongos experimentalmente senescentes causados ​​por D-galactose, bem como reduzir o conteúdo de MDA e colágeno no pulmão e no plasma e aumentar o conteúdo de elastina, têm um bom efeito de eliminação no DPPH, prolongar o tempo de hipóxia em camundongos senescentes, melhorar a atividade de SOD no soro e retardar a degeneração fisiológica do pulmão em camundongos experimentalmente senescentes Com degeneração morfológica celular, experimentos mostraram que Cistanche tem boa capacidade antioxidante e tem potencial para ser um medicamento para prevenir e tratar doenças de envelhecimento da pele. Ao mesmo tempo, o echinacoside em Cistanche tem uma capacidade significativa de eliminar os radicais livres DPPH e tem a capacidade de eliminar espécies reativas de oxigênio e prevenir a degradação do colágeno induzida por radicais livres, e também tem um bom efeito de reparo nos danos causados ​​pelos radicais livres da timina.

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Palavras-chave: Anti-envelhecimento; colágeno; elasticidade; hidratação; abacate

1. INTRODUÇÃO

A pele tem várias funções, como fornecer uma barreira de permeabilidade física, proteção contra agentes infecciosos, termorregulação, sensação, proteção contra raios ultravioleta (UV), regeneração e cicatrização de feridas [1]. Clinicamente, o envelhecimento da pele é caracterizado por perda de hidratação, textura áspera, pigmentação irregular, descoloração amarelada, telangiectasia, rugas profundas ou rugas, adelgaçamento da pele e linhas finas. A explicação existente para o surgimento dessa característica é que a radiação aumenta as espécies reativas de oxigênio (ROS), que em concentrações mais altas podem causar danos às moléculas de DNA, ácidos graxos, carboidratos e proteínas, incluindo colágeno e elastina. Em geral, a pele envelhecida apresenta um desequilíbrio entre a perda adequada e a reposição de componentes estruturais e funcionais. O esqueleto fibroso da pele é uma das estruturas mais severamente afetadas pelo envelhecimento, e sua degeneração leva a uma perda gradual da sustentação tecidual com consequente impacto estético [2].

Em condições normais, a pele produz enzimas como a elastase e a colagenase. O fator Espécies Reativas de Oxigênio (ROS) ou exposição excessiva à luz ultravioleta acelerará o processo de ativação da enzima elastase, que é a única enzima capaz de degradar a elastina. A elastina é um componente importante das fibras elásticas do tecido conjuntivo e dos tendões. As fibras de elastina da pele, juntamente com as fibras de colágeno, constituem o tecido subcutâneo da epiderme. Devido à ativação dessas enzimas, ele destrói todas as principais proteínas da matriz do tecido conjuntivo da pele, incluindo elastina, colágeno e proteoglicanos, onde o colágeno é responsável pela resistência à tração da matriz dérmica, a elastina é responsável por sua elasticidade e os proteoglicanos conferem viscosidade e hidratação à pele. pele, resultando na interrupção dessas funções. Devido à importância dos principais componentes da matriz do tecido conjuntivo da pele, como colágeno, elastina e proteoglicanos, eles têm sido objeto da maioria dos estudos antienvelhecimento da pele [3,4].

Como o órgão de maior volume do corpo, a pele mostra os sinais mais óbvios de envelhecimento à medida que a pessoa envelhece. Portanto, para muitas pessoas, principalmente mulheres, grande parte do gasto diário é gasto com cosméticos e medicamentos que visam prevenir ou reverter o envelhecimento da pele. Essa ampla necessidade cosmética continua a promover pesquisas sobre o envelhecimento da pele e seu tratamento com vários cremes que afirmam ter efeitos antienvelhecimento [4]. O conteúdo de colágeno é o parâmetro antienvelhecimento mais comumente usado [5]. Além disso, os parâmetros antienvelhecimento frequentemente utilizados são os níveis de elasticidade e hidratação [4].

Nos tempos modernos, muitos agentes antioxidantes são usados ​​como suplementos ou cremes tópicos, mas os agentes antioxidantes sintéticos são limitados por causa de seus efeitos colaterais. Os antioxidantes sintéticos também são mais propensos a causar irritação ou alergias na pele. Portanto, muitos estudos foram conduzidos para encontrar antioxidantes naturais de plantas herbáceas que tenham atividade antioxidante para que possam prevenir efeitos colaterais e reações alérgicas [6]. A Indonésia é um país que possui uma riqueza natural com vários tipos de plantas que podem ser eficazes como medicina tradicional e possuem vários ingredientes bons, como antioxidantes. Os medicamentos naturais derivados de plantas são cada vez mais procurados pelo público porque os ingredientes vegetais são fáceis de obter, fáceis de misturar e o preço também é mais acessível [7]

Uma das plantas que podem ser utilizadas como ingredientes naturais ricos em antioxidantes e interessante de se estudar é o abacate (Persea americana Mill.) da família Lauraceae, que é uma planta que possui propriedades medicinais, esta planta pode ser cultivada em climas tropicais e subtropicais áreas. O abacate é uma fruta muito apreciada pelo público porque tem um sabor delicioso e contém uma variedade de nutrientes. Além de ser consumido como alimento, o abacate também é utilizado como mistura de produtos cosméticos. No entanto, o uso de tantos abacates não é acompanhado pelo uso de sementes e cascas. Até agora, a casca e as sementes de abacate tendem a ser jogadas fora. O abacate é uma das plantas medicinais conhecidas por possuir propriedades antioxidantes, pois contém compostos antioxidantes como saponinas, alcalóides e flavonoides nas frutas, sementes e folhas. Além disso, as folhas também contêm polifenóis e a fruta contém taninos [8,9].

Segundo pesquisa de Rotta et al. [10], o extrato de casca de abacate em preparações de chá contém compostos antioxidantes na forma de fenóis e flavonoides que são mais elevados do que no chá de maçã [11]. Na pesquisa de Aminah et al (2017), o extrato de casca de abacate contém altos níveis de compostos flavonoides, onde os flavonoides têm atividades antioxidantes, antibacterianas, antivirais, antiinflamatórias, antialérgicas e anticancerígenas [7]. De acordo com o teste fitoquímico da pesquisa de Wulandari et al. [8], o extrato de casca de abacate contém alcalóides, flavonoides, saponinas, taninos, polifenóis, esteroides e compostos triterpenoides. Compostos de fenol e flavonoides podem reduzir o processo de formação e ligação de radicais livres no corpo humano [11]. Compostos de saponina também podem estimular a formação de colágeno por fibroblastos [12].

A utilização de extractos espessos na pele não é prática nem óptima, pelo que é necessário fazer preparações que possam aderir à pele por muito tempo, nomeadamente preparações semi-sólidas em forma de pomadas. A pomada é uma preparação semi-sólida que é macia, fácil de aplicar, fácil de limpar e é frequentemente usada como droga externa na pele e nas membranas mucosas [13]. A base da pomada geralmente é vaselina, mas também pode ser lanolina ou óleo. A vaselina tem efeito emoliente e oclusivo, podendo permanecer na superfície da pele por muito tempo sem ressecar. As propriedades dominantes do óleo na vaselina podem manter a umidade da pele e prolongar o contato do fármaco com a pele e podem aumentar a absorção da substância ativa do fármaco [14,15].

Também foram realizadas muitas pesquisas usando um analisador de pele, uma das quais é a pesquisa de Hanum & Laila (2018) sobre os efeitos antienvelhecimento e antiacne das máscaras peel-off de extrato de etanol de andaliman, examinando o teor de umidade, suavidade, tamanho dos poros, manchas pretas e rugas na pele [16]. Além disso, Choi et al (2016) também pesquisaram o efeito protetor da apigenina no envelhecimento da pele usando um creme contendo apigenina, examinando os níveis de elasticidade, rugas, suavidade e umidade da pele [17]. Em seguida, Prasetyo et al. [18] também pesquisaram a avaliação física e os efeitos antienvelhecimento de máscaras de gel peel-off de extrato de feijão vermelho, observando o aumento no teor de umidade, tamanho dos poros, finura e número de manchas escuras usando um analisador de pele.

Com base na descrição do histórico acima, o pesquisador está interessado em pesquisar o teste de atividade antienvelhecimento do extrato de casca de abacate. Suspeita-se que haja uma atividade antienvelhecimento do extrato de casca de abacate porque contém vários antioxidantes.d justificativa do trabalho realizado [1,2].

2. MÉTODOS

Este tipo de pesquisa é não experimental e experimental, usando um projeto de grupo de controle pré-teste e pós-teste. A pesquisa não experimental inclui a determinação de casca de abacate, extração e preparação de pomadas antienvelhecimento usando extrato de casca de abacate com concentrações de 2,5 por cento, 5 por cento, 7,5 por cento e 10 por cento. A pesquisa experimental inclui testar a atividade antienvelhecimento do extrato de casca de abacate.

Esta pesquisa foi realizada no Departamento de Farmacologia, Faculdade de Medicina, Indonésia Prima University, em dezembro-fevereiro e foi aprovada pelo Comitê de Ética em Pesquisa em Saúde da Universitas Prima Indonesia com o registro no. 007/KEPK/UNPRI/XI/2021.

2.1 Materiais

Casca de abacate, água destilada, parafina dura, lanolina, vaselina branca, papel de filtro, álcool cetoestearílico, papel de cera, etanol 96 por cento, FeCl3, NaOH 10 por cento, HCl 2N, ácido sulfúrico, clorofórmio, reagente de Mayer, reagente de dragendroff.

2.2 Instrumento

Evaporador rotativo, banho-maria, macerador, recipiente para pomada, faca, vareta, analisador de pele EH-900U, barbeador, papel oleoso, papel filtro, tubo de ensaio.

2.3 Coleta e Identificação de Plantas

A amostra de pesquisa, ou seja, abacate, foi obtida de Brastagi, norte de Sumatra, e identificada no Herbário de Medanese (MEDA), Laboratório de Taxonomia Vegetal, Departamento de Biologia, Faculdade de Matemática e Ciências Naturais, Universidade de North Sumatra, Medan.

2.4 Extração

A casca do abacate é cortada em pequenos pedaços e seca por alguns dias. Depois de seco, coloque-o em um recipiente de maceração. No vaso preenchido com etanol 96 por cento com uma proporção de 1:7,5 simplicial:solvente). Além disso, fecha-se a vasilha e deixa-se repousar por 5 dias em local protegido do sol e da umidade, mexendo de vez em quando. Depois de 5 dias, filtre e extraia os resíduos novamente, faça 1 vez para obter mais extrato. Em seguida, o extrato é concentrado em rotaevaporador e evaporado por meio de aquecimento até a secagem do extrato [19].

2.5 Exame Qualitativo de Alcaloide

2 mL da solução teste foram evaporados em um prato de porcelana até a obtenção de um resíduo, em seguida dissolvidos em 5 mL de HCl 2N. Uma vez resfriada, a solução é filtrada. A solução obtida é dividida em 3 tubos de ensaio. O primeiro tubo serve como controle. No segundo tubo foram adicionadas 3 gotas do reagente Dragendroff e no terceiro tubo foram adicionadas 3 gotas do reagente Mayer (através da parede do tubo). A formação de depósitos alaranjados no segundo tubo e depósitos amarelos no terceiro tubo indica a presença de alcaloides [20].

2.6 Exame Qualitativo de Saponina

4 mL da solução de teste são adicionados a 5 mL de água destilada, agitar e verificar se há uma espuma estável. Um pouco de extrato é adicionado a 5 mL de água, agitado em um tubo de ensaio, e forma-se uma espuma estável (espuma de 1 cm de altura e estável por 30 minutos). 4 ml da solução de teste foi colocado no tubo de ensaio como controle [21].

2.7 Exame Qualitativo de Flavonóides

1 ml de cada solução de teste é inserido em 3 tubos de ensaio. Tubo 1 como controle, tubo 2 adicionado com 1 mL de solução de FeCl3 a 5 por cento, positivo para flavonóides se houver uma mudança de cor verde escuro/azul. O tubo 3 adicionado com algumas gotas de NaOH a 10% forma uma cor amarela se contiver flavonoides [22].

2.8 Exame Qualitativo do Triterpenoide

2 mL de extrato vegetal aquoso e 2 mL de clorofórmio são adicionados e isso é seguido pela adição de algumas gotas de ácido sulfúrico concentrado. A solução é bem agitada. A formação de um subpêlo amarelo indica a presença de terpenóides [23].

2.9 Exame Qualitativo de Tanino

2 mL da solução de teste são colocados em um tubo de ensaio adicionado de algumas gotas de solução de FeCl3 a 1 por cento, um sinal positivo de tanino se a cor formada for verde escuro/azul [24].

2.10 Exame Qualitativo de Fenóis

A solução de teste foi adicionada com FeCl3 (1 por cento em água/etanol) em uma placa de gotejamento, um sinal positivo de fenóis se houvesse uma mudança de cor verde/vermelho/roxo/azul/preto [24].

2.11 Determinação do Teor Total de Flavonóides

Um total de 1 ml de amostra foi adicionado a 1 ml de 50 por cento de etanol e, em seguida, adicionado 0,1 ml de solução de AlCl3 a 10 por cento. Após incubação por 30 minutos. As leituras de absorbância foram realizadas no comprimento de onda máximo. A determinação dos níveis totais de flavonóides é determinada pela seguinte fórmula [25]:

2.12 Determinação do Teor de Tanino Total

1 ml de solução de amostra e coloque em um balão de medição de 10 ml, adicione 0,5 ml de reagente fólico denis e 1 ml de solução saturada de carbonato de sódio (35 por cento) (Na2CO3), em seguida, adicione aqua dest para 10 ml. Aquadest foi usado como branco como substituto da amostra. O ácido tânico é usado como padrão em várias concentrações. Os níveis de taninos totais são expressos em unidades de mg de equivalente de ácido tânico / g de amostra (mg TAE / g). A determinação do teor total de taninos é determinada pela seguinte fórmula [26]:

2.13 Determinação do Teor Total de Fenol

{{0}}.1 mL do extrato foi adicionado com 0,5 mL do reagente de Folin-Ciocalteu. Mexa a solução e deixe repousar por 6 minutos. Adicione 2,5 ml da solução de carbonato de sódio a 5 por cento. Em seguida, a mistura foi incubada por 30 minutos em temperatura ambiente. As leituras de absorbância foram realizadas no comprimento de onda máximo. Aquadest foi usado como branco como substituto da amostra. O ácido gálico é usado como padrão em várias concentrações. Os níveis fenólicos são expressos em unidades de mg equivalente de ácido gálico/g amostra (mg GAE/g). A determinação dos níveis fenólicos totais é determinada pela seguinte fórmula [27]:

2.14 Formulação de Pomadas

Os vários materiais utilizados são aquecidos de acordo com o ponto de fusão de cada ingrediente. As formulações foram feitas com várias concentrações, conforme mostrado na Tabela 1 [28].

2.15 Intervenção

Teste de atividade antienvelhecimento usando 25 amostras de ratos machos e divididos em 5 grupos. O grupo 1 foi tratado com F0 (controle), o grupo 2 foi tratado com F1 (pomada de extrato de casca de abacate a 2,5 por cento), o grupo 3 foi tratado com F2 (pomada de extrato de casca de abacate a 5 por cento), grupo 4 • Tratado com F3 (pomada de extrato de casca de abacate a 7,5%) e grupo 5 tratado com F4 (pomada de extrato de casca de abacate a 10%).

Os ratos foram colocados em uma gaiola com tamanho de 40 cm x 20 cm x 10 cm, com temperatura de 25- 27oC, com cascas de madeira que foram substituídas a cada dois dias. A luz vinha da janela durante o dia, ventilação cruzada no topo da gaiola. 1 gaiola cheia com 5 ratos. Todos os ratos foram aclimatados por 7 dias com o objetivo de que os animais de teste fossem capazes de se adaptar ao ambiente que seria ocupado durante o estudo.

Todo o grupo de ratos será depilado no dorso em uma área de 2x2 cm2 com auxílio de um depilador manual. Em seguida, mediu a condição dos animais de teste antes do tratamento com o Skin Analyzer EH 900 U, incluindo níveis de colágeno, elasticidade e hidratação. Após aferição do estado inicial da pele, iniciou-se o tratamento com aplicação de creme até sua distribuição uniforme sobre a área demarcada, o creme foi aplicado de acordo com os grupos definidos acima e a aplicação foi realizada 2 vezes ao dia por 4 semanas. As alterações na condição da pele foram medidas semanalmente durante 4 semanas usando o analisador de pele EH 900 U.

2.16 Análise de Dados

A análise dos dados neste estudo foi realizada por meio do software IBM SPSS 25. Os dados de colágeno, elasticidade e hidratação da pele foram analisados ​​estatisticamente por meio da análise estatística descritiva, avaliando-se a tendência central na forma de média, mediana e moda, seguida do valor da distribuição dos dados (dispersão). Em seguida, a análise estatística continuou com o teste de normalidade com o teste de Shapiro-Wilk. Se os dados forem distribuídos normalmente, a análise estatística continua com o teste One Way Anova e o teste Post Hoc. No entanto, se os dados neste estudo não forem normalmente distribuídos, os dados serão transformados para que sejam normalmente distribuídos. Se os dados permanecerem anormais, use o teste de Kruskal-Wallis.

3. RESULTADOS

3.1 Identificação da Amostra

Este estudo utilizou a casca de abacate de um mercado tradicional em Medan, norte de Sumatra. Antes da amostra ser extraída, a amostra foi identificada no Herbarium Medanese (MEDA) na University of North Sumatra. O resultado da identificação foi mostrado a seguir.

3.2 Triagem fitoquímica do extrato de metanol da casca de abacate

Com base nos resultados da triagem fitoquímica do extrato metanólico da casca de abacate realizada no laboratório de química orgânica da FMIPA, Universidade do Norte de Sumatra, constatou-se que o extrato metanólico da casca de abacate contém compostos químicos, que podem ser vistos na Tabela 2.

A triagem fitoquímica mostrou que o extrato de casca de abacate continha alcaloides, flavonoides, fenóis, taninos e glicosídeos.

3.3 Determinação dos níveis totais de fenóis, flavonoides e taninos

Além disso, a análise fitoquímica continuou para determinar o teor total de fenóis, taninos e flavonoides. O resultado desta análise foi mostrado pela seguinte Tabela 3.

Com base na Tabela 3, o total de fenol, tanino e flavonoide do extrato metanólico da casca de abacate continha, respectivamente, 59,55 GAE mg/grama de extrato, 22,63 TAE mg/grama de extrato e 2,96 QE mg/grama de extrato.

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