Abstrato:O gênero Salvia L. (Lamiaceae) é amplamente utilizado na indústria farmacêutica e alimentícia. Várias espécies de relevância biológica são amplamente empregadas na medicina tradicional, incluindo Salvia aurea L. (syn. S. africana-lutea L.), que é usada como desinfetante tradicional da pele e em feridas como remédio cicatrizante; no entanto, essas propriedades ainda não foram validadas. O presente estudo visa caracterizar o óleo essencial (OE) de S. aureus, desvendando sua composição química e validando suas propriedades biológicas. O OE foi obtido por hidrodestilação e posteriormente analisado por GC-FID e GC-MS. Diferentes atividades biológicas foram avaliadas: o efeito antifúngico sobre dermatófitos e leveduras e o potencial anti-inflamatório avaliando a produção de óxido nítrico (NO) e os níveis de proteína COX-2 e iNOS. As propriedades cicatrizantes foram avaliadas por meio do teste de cicatrização por arranhões e a capacidade antienvelhecimento foi estimada por meio da atividade da beta-galactosidase associada à senescência. S. aurea EO é caracterizada principalmente por 1,8-cineol (16,7 por cento), -pineno (11,9 por cento), cis-tujona (10,5 por cento), cânfora (9,5 por cento) e (E)-cariofileno (9,3 por cento). Os resultados mostraram uma inibição eficaz do crescimento de dermatófitos. Além disso, reduziu significativamente os níveis de proteína de iNOS/COX-2 e simultaneamente a liberação de NO. Além disso, o OE exibiu potencial anti-senescência e melhorou a cicatrização de feridas. No geral, este estudo destaca as notáveis ​​propriedades farmacológicas da Salvia aurea EO, que devem ser mais exploradas para desenvolver produtos para a pele inovadores, sustentáveis ​​e ecologicamente corretos.

O glicosídeo de cistanche também pode aumentar a atividade de SOD nos tecidos do coração e do fígado e reduzir significativamente o conteúdo de lipofuscina e MDA em cada tecido, eliminando efetivamente vários radicais reativos de oxigênio (OH-, H₂O₂, etc.) e protegendo contra danos ao DNA causados por radicais OH. Os glicosídeos feniletanóides cistanche têm uma forte capacidade de eliminação de radicais livres, uma capacidade redutora maior do que a vitamina C, melhoram a atividade de SOD na suspensão de esperma, reduzem o conteúdo de MDA e têm um certo efeito protetor na função da membrana espermática. Os polissacarídeos Cistanche podem aumentar a atividade de SOD e GSH-Px em eritrócitos e tecidos pulmonares de camundongos experimentalmente senescentes causados ​​por D-galactose, bem como reduzir o conteúdo de MDA e colágeno no pulmão e no plasma e aumentar o conteúdo de elastina, têm um bom efeito de eliminação no DPPH, prolongar o tempo de hipóxia em camundongos senescentes, melhorar a atividade de SOD no soro e retardar a degeneração fisiológica do pulmão em camundongos experimentalmente senescentes Com degeneração morfológica celular, experimentos mostraram que Cistanche tem boa capacidade antioxidante e tem potencial para ser um medicamento para prevenir e tratar doenças de envelhecimento da pele. Ao mesmo tempo, o echinacoside em Cistanche tem uma capacidade significativa de eliminar os radicais livres DPPH e tem a capacidade de eliminar espécies reativas de oxigênio e prevenir a degradação do colágeno induzida por radicais livres, e também tem um bom efeito de reparo nos danos causados ​​pelos radicais livres da timina.

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1. Introdução

As plantas medicinais possuem diversas características organolépticas que contribuem para seu alto valor nas indústrias farmacêutica, nutracêutica, cosmética e alimentícia. Seus metabólitos secundários estão emergindo como potenciais candidatos a novas drogas anti-inflamatórias e antifúngicas [1-3]. Entre outras, as espécies aromáticas da família Lamiaceae são bem conhecidas pela sua riqueza em óleos essenciais, demonstrando uma ampla gama de efeitos biológicos, incluindo, em particular, anti-inflamatórios e antifúngicos [4-8]. Um dos maiores e mais importantes gêneros desta família é o gênero Salvia L., que compreende cerca de 1000 espécies [9]. Alguns deles são cultivados em todo o mundo para uso culinário e também para fins medicinais; na verdade, eles são empregados há muito tempo na medicina popular [10,11]. Muitas espécies apresentam propriedades biológicas importantes, incluindo efeitos antibacterianos, antifúngicos, antioxidantes, antiinflamatórios, anticancerígenos, hipoglicêmicos e antidemência [12,13].

Embora este gênero tenha sido extensivamente estudado, ainda existe um grande interesse por aquelas espécies que podem ser cultivadas (domesticadas) e utilizadas para propriedades promotoras de saúde. É bem conhecido que os metabólitos secundários são o resultado de interações planta/ambiente. Portanto, estudos sobre a população domesticada podem fornecer informações relevantes sobre se os metabólitos secundários e suas propriedades biológicas relacionadas diferem da população nativa. Entre estes, Salvia aurea L. (syn. S. africana-lutea L.) é uma importante espécie aromática que é usada para fins medicinais no Cabo Ocidental (África do Sul) e é cultivada em muitas partes do mundo como um aromático/ planta medicinal e também ornamental (mobiliário urbano). Esta espécie é um arbusto aromático ramificado verde-acinzentado que cresce até cerca de 2 m, com folhas pecioladas que acumulam seu óleo essencial em tricomas glandulares e apresenta flores caracteristicamente grandes e marrom-douradas [14]. É nativo da África do Sul, onde sua distribuição geográfica se estende para o oeste da Península do Cabo em direção a Namaqualand, bem como para o leste do Cabo na direção de Port Alfred na Província do Cabo Oriental. Muitas vezes é chamado de "sálvia da praia, sandsalie", que é típico do ambiente de dunas, ou "sálvia marrom das dunas" pela cor característica de suas flores [15,16].

A S. aurea é conhecida por seus diversos usos na medicina tradicional, notadamente como antiinflamatório e esfoliante medicinal para o tratamento de feridas e afecções da pele. Além disso, esta espécie também é utilizada para a cura de bronquite e outras doenças respiratórias reforçando suas propriedades antimicrobianas [17,18].

Os dermatófitos, particularmente os de Trichophyton, Epidermophyton e Microsporum, são frequentemente associados a micoses superficiais [19]; no entanto, indivíduos imunocomprometidos podem ser acometidos por infecções invasivas [20].

Durante essas infecções, os epítopos fúngicos [21,22] ligam-se aos receptores Toll-like (TLRs), desencadeando a ativação de um estado pró-inflamatório. Uma das vias mais significativas associadas a esta condição é a via do fator nuclear kappa B (NF-κB), que envolve a secreção de citocinas inflamatórias e a síntese de enzimas pró-inflamatórias, por exemplo, a induzível óxido nítrico sintase (iNOS). e a Cicloxigenase- 2 (COX-2) [23]. Essas enzimas são responsáveis ​​pela produção de óxido nítrico (NO) e prostanóides, respectivamente [24,25].

Além disso, os dermatófitos geralmente levam a lesões cutâneas [26]. Portanto, a cicatrização de feridas é necessária para regenerar o tecido danificado; caso contrário, a ferida torna-se crônica [27].

As infecções fúngicas ainda são uma necessidade clínica não atendida, uma vez que os agentes etiológicos estão frequentemente associados à resistência à terapia e levam a recidivas, enquanto os medicamentos convencionais estão amplamente associados a efeitos adversos [28]. Além disso, várias cepas de fungos são conhecidas por serem resistentes aos agentes antifúngicos atuais [29,30]. Drogas anti-inflamatórias também têm sido associadas a vários efeitos adversos [31]. Portanto, é crucial desenvolver novas estratégias que, além de tratar infecções fúngicas, também possam inibir o estado pró-inflamatório que é evocado durante a infecção.

Dados seus usos tradicionais, é provável que S. aurea possa ter atividades antifúngicas e antiinflamatórias concomitantes. No entanto, essas propriedades foram testadas por um número limitado de estudos em uma gama estreita de microrganismos [32-34]. Além disso, até onde sabemos, nenhum estudo relatou as propriedades de cicatrização de feridas do S. aureus até o momento. Portanto, este trabalho visa caracterizar o óleo essencial de S. aureus (sandsalie) quando domesticado em uma área costeira da ilha da Sardenha. Considerando a variação do óleo na estação e na localidade, este território foi escolhido por suas semelhanças com a ecorregião sul-africana de Fynbos, território nativo de S. aurea [35,36]. Além disso, validamos alguns dos usos tradicionais atribuídos a esta espécie, particularmente aqueles relacionados a usos antimicrobianos, anti-inflamatórios e cicatrizantes. Os efeitos anti-senescência também foram divulgados para promover ainda mais o interesse nesta planta.

2. Resultados

2.1. Composição Química do Óleo Essencial de S. aurea

Folhas de S. aurea foram submetidas à hidrodestilação, obtendo-se o óleo essencial (OE) com rendimento de 0,54 por cento (m/m). Na Tabela 1, os compostos identificados por EO e suas porcentagens relativas são listados por sua ordem de eluição. Trinta e seis compostos foram identificados, para um total de 98,8 por cento.

Além disso, 47,4 por cento dos compostos são monoterpenos oxigenados, 28,8 por cento de monoterpenos de hidrocarbonetos, 19,8 por cento de sesquiterpenos de hidrocarbonetos e 2,8 por cento de sesquiterpenos oxigenados.

A análise química revelou que os componentes mais representativos do óleo de S. aurea foram 1,8 cineol (16,7 por cento), -pineno (11,9 por cento), cis-tujona (10,5 por cento), cânfora (9,5 por cento), ( E)-cariofileno (9,3 por cento), trans-tujona (6,9 por cento), -pineno (4,7 por cento), canfeno (3,9 por cento) e -humuleno (3,0 por cento).

2.2. Efeito antifúngico da Salvia aurea

O método do caldo de microdiluição foi usado para avaliar a atividade antifúngica, conforme relatado na Tabela 2. Trichophyton mentagrophytes, T. rubrum e Epidermophyton floccosum são as cepas mais sensíveis à atividade de OE. Especificamente, o OE apresentou efeito fungicida para T. mentagrophytes e E. floccosum.

2.3. Potencial antiinflamatório de S. aurea

Para avaliar o potencial anti-inflamatório da S. aurea, recorremos ao modelo de macrófagos estimulados por lipopolissacarídeos (LPS). Como esperado, na presença de LPS, os macrófagos liberaram NO para o meio, onde foi detectado como um nitrato ([NO]=430,03 ± 7,74 µM). Curiosamente, S. aurea EO reduziu a liberação de NO evocada por LPS de forma dependente da dose (Figura 1A, IC50=10,07 µL/mL). A dose de 1,25 µL/mL foi selecionada para desvendar os mecanismos subjacentes, pois inibiu a produção de NO em mais de 50%, não apresentou toxicidade (Figura 1B) e foi uma dose que inibiu o crescimento de dermatófitos.

A ligação do LPS ao Toll-like receptor 4 (TLR4) desencadeia a translocação nuclear do NF-κB, que consequentemente causa a expressão de óxido nítrico sintase induzível (Nos2) e cicloxigenase-2 (Ptgs2) [39]. Em seguida, avaliamos se o OE poderia potencialmente regular os níveis dessas proteínas. Como esperado, em macrófagos tratados com LPS, foi observado um aumento nos níveis de proteína de iNOS e COX-2 (Figura 2A–C). A presença do óleo essencial de S. aurea na dose de 1,25 µL/mL poderia levar a uma diminuição significativa nos níveis proteicos de ambas as proteínas, principalmente da iNOS. Esses resultados sugerem que o óleo essencial pode modular a via NF-κB.

2.4. Propriedades de cicatrização de feridas do óleo essencial de S. aurea

Considerando os usos de S. aurea para tratamento de feridas [18], levantamos a hipótese de que o óleo essencial pode melhorar a cicatrização de feridas. De fato, nossos resultados mostram que o OE promoveu a migração celular (Figura 3A, B) sem afetar a viabilidade celular (Figura 3C).

2.5. Potencial anti-senescência do óleo essencial de S. aurea

Tendo em mente que os usos tradicionais atribuídos a S. aurea estão associados ao tratamento de doenças relacionadas à idade [40], avaliamos o efeito na senescência celular. Recorrendo à senescência celular induzida pelo etoposídeo, observamos a atividade da -galactosidase associada à senescência (Figura 4A, B). Curiosamente, quando o óleo essencial foi adicionado na fase de recuperação, essa característica foi reduzida, sugerindo que o óleo essencial parece prevenir a senescência celular.

3. Discussão

Este estudo fornece o perfil do óleo essencial de S. aurea domesticado na ilha da Sardenha. Informamos que seu OE era caracterizado por 47,4% de monoterpenos oxigenados, principalmente 1,8-cineol, cis/trans-tujona e cânfora, 28,8% de monoterpenos de hidrocarbonetos, principalmente -pineno, e 19,8% de sesquiterpenos de hidrocarbonetos, com (E)-cariofileno e -humuleno, enquanto apenas 2,8 por cento de sesquiterpenos oxigenados.

Quando comparada com a literatura, surge uma clara diferença qualitativa e quantitativa na composição dos OEs de S. aurea nativa. Em particular, os principais componentes relatados foram -pineno, mirceno, o-cimeno, espatulenol e -eudesmol [32]. Além disso, essas alterações se refletem nas porcentagens relativas das principais classes de compostos. Aqui, encontramos uma diminuição substancial nos sesquiterpenos oxigenados (2,8 por cento), enquanto eles representavam 18,9 por cento e 41,7 por cento em dois estudos diferentes da região do Cabo Ocidental [33,41].

No entanto, essa diferença química não foi inesperada, pois, segundo alguns autores, no entanto, essa diferença química não foi inesperada, pois, segundo alguns autores, depende não apenas de características genéticas, mas também do ciclo de vida da planta, estação de crescimento, estação de colheita , propriedades do solo e agentes de estresse[32, 41]

Em particular, sobre S. aurea, uma diversidade química consistente foi encontrada de acordo com a sazonalidade e território de colheita [32,41]. Lim Ah Tock et al., 2020, considerou populações da área de Western Cape e evidenciou um alto grau de variabilidade intraespecífica, respondendo por 47,8 por cento [32,33,41]. Além disso, eles analisaram o dendrograma HCA dessas populações, onde uma clara separação de cluster apareceu em S. aurea, responsável pela variação química substancial [41].

Além dos fatores mencionados que impactam a composição química do OE, sabe-se que o tratamento pós-colheita, as condições de armazenamento e os métodos de extração também contribuem para a variabilidade química [42,43]. Pensando nisso, as diferenças aqui observadas podem ser atribuídas a algum desses fatores.

As atividades biológicas relatadas confirmam os atributos de usos tradicionais de S. aurea, particularmente aqueles associados a infecções inflamatórias e microbianas.

Relatamos que o OE inibiu o crescimento de dermatófitos, validando assim o uso prescrito para o tratamento de doenças de pele [18]. O óleo essencial de S. aurea é conhecido por ser eficaz contra Brevibacterium [44], Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Bacillus cereus e Escherichia coli [32,33]. Outros estudos relataram atividades antimicrobianas para extratos não voláteis [14,45,46]. Em relação aos compostos majoritários encontrados no OE de S. aurea, foi relatado que 1,8-cineol apresentou fraca atividade contra os dermatófitos testados [47]. A inibição de patógenos de plantas também foi relatada para 1,8-cineol [48–51]. O potencial antimicrobiano do -pineno também foi amplamente relatado contra várias leveduras e fungos filamentosos, incluindo Trichophyton spp. [52-56]. A cis-tujona, um composto relevante neste óleo essencial, também exerceu atividade antimicrobiana [57,58]. Por outro lado, uma fraca atividade antimicrobiana foi relatada para a cânfora [59-61]. O sesquiterpeno-cariofileno exerceu atividade antimicrobiana contra diferentes fungos e bactérias [3,62-64]. Esses resultados sugerem que -pineno, cis-tujona e -cariofileno podem ser os principais contribuintes para a atividade relatada para S. aurea.

Devido ao uso tradicional de S. aurea no tratamento de doenças relacionadas à inflamação [18], buscamos validar esses efeitos. De fato, nossos resultados mostram que o OE inibiu a produção de NO em macrófagos estimulados por LPS e concomitantemente reduziu os níveis proteicos de iNOS e COX-2: duas enzimas pró-inflamatórias relevantes para a resposta inflamatória. Até onde sabemos, apenas um estudo abordou o potencial anti-inflamatório de S. aurea, mostrando a capacidade inibitória da atividade da lipoxigenase -5 [33]. Em relação aos compostos isolados, vários estudos relataram a atividade antiinflamatória de 1,8-cineol [65–70], incluindo ensaios clínicos [71]. Além disso, sabe-se que este composto inibe a atividade da COX-2 [66] e previne a translocação nuclear do NF-κB [65,72]. -pineno diminuiu significativamente a produção de NO em ambos os macrófagos estimulados por LPS [73] e condrócitos ativados por IL -1 - [74]. Também mostrou uma inibição da quimiotaxia em neutrófilos [75]. O potencial anti-inflamatório da cânfora é amplamente relatado usando modelos in vivo e in vitro [76-78]. O -cariofileno também exerceu efeitos antiinflamatórios na colite [79], excisões de feridas cutâneas [80] e sepse [81] em modelos animais. Outras abordagens in vitro e in vivo destacam a ação antiinflamatória desse sesquiterpeno [82,83]. Os resultados sugerem que a atividade observada em S. aurea pode ser devida à presença desses compostos, que podem atuar sinergicamente.

Relatamos que o óleo essencial de S. aurea promoveu a cicatrização de feridas, o que validou seu uso para o tratamento de feridas abertas. Até onde sabemos, nenhum estudo relatou as propriedades cicatrizantes de S. aurea. Em relação aos compostos isolados, 1,8-cineol promove a migração celular em modelos de feridas in vivo e in vitro [70,84,85]. Além disso, foi relatado que o óleo essencial de Teucrium polium subsp. o capitalismo, rico em -pineno, aumentou a cicatrização de feridas [86]. O sesquiterpeno-cariofileno também promoveu a cicatrização de feridas em um modelo de excisão de feridas cutâneas [80]. No entanto, outros compostos encontrados em quantidades menores podem contribuir para a atividade relatada. De fato, o -pineno promove a cicatrização de feridas no modelo animal de uma ferida aberta [84]. Considerando que os óleos essenciais são misturas complexas, é concebível que as propriedades de cicatrização de feridas relatadas possam ser atribuídas aos efeitos sinérgicos de vários compostos.

Relatamos, pela primeira vez, um efeito anti-senescência do óleo essencial de S. aurea. De fato, as células tratadas com o óleo essencial apresentaram um número reduzido de células positivas para -galactosidase associadas à senescência. Em relação aos compostos isolados, o número de estudos relatando seu efeito foi escasso. De fato, a cânfora previne o aumento da atividade da -galactosidase associada à senescência [87]. Por outro lado, 1,8-cineol, o principal composto deste óleo essencial, induziu a senescência celular [88]. Considerando a escassez de estudos, podemos apenas supor que a atividade relatada pode ser devida principalmente ao composto de cânfora; no entanto, o efeito de compostos menores não pode ser descartado.

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